电感耦合等离子质谱法测定肺腺癌细胞内顺铂浓度及其在耐药研究中的应用

目的：检测肺腺癌细胞内顺铂浓度，从而研究肺腺癌对顺铂的耐药与细胞内顺铂浓度的关系。方法：用四甲基偶氮唑蓝（methyhhiazolyl tetrazolium，MTT）法测定A549／DDP细胞的耐药倍数，用ICP—MS测定细胞内顺铂（diammine dichloroplatinuln，DDP）含量。结果：铂浓度在0．5～50μg·L^-1范围内线性关系良好，铂最低检出限为0．029μg·L^-1，RSD为0．41％～4．7％，回收率为98．2％～99．7％。耐药细胞A549／DDP内顺铂的浓度显著低于A549细胞？结论：首次建立了ICP—MS测定细胞内顺铂浓度的方法。本方法准确、灵敏、简便，可用于测定细胞内顺铂浓度及肿瘤细胞耐顺铂的研究。     

不同方法建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株对临床用药方案的启发

目的：用不同的诱导耐药方法培养紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol），A2780／Taxol-1，以进一步探讨卵巢癌耐药机理，为临床逆转耐药研究提供模型依据。方法：采用逐步增加药物浓度和大剂量冲击两种方法处理细胞，直至细胞能在2．5μg·ml^-1紫杉醇中稳定生长。用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定其耐药性及紫杉醇对各组细胞的抑制率，并在冻存3个月后再次检测耐药性。结果：MTT法检测A2780，A2780／DDP细胞对紫杉醇的药物半数抑制浓度（IC50）分别为（0．23±0．04）μg·ml^-1和（0．26±0．02）μg·ml^-1，采用逐步增加药物浓度诱导法历经九个月时间建立A2780的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol-l，对紫杉醇的Ic50为（6．63±0．31）μg·ml^-1，耐药倍数为28．83。采用大剂量冲击法以A2780和A2780／DDP为对象建立各自的紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol、A2780／（DDP＋Taxol），检测大剂量冲击法建立的A2780／Taxol，A2780／（DDP＋Taxol）耐药性，发现它们对紫杉醇的耐药倍数分别为19．65，17．96，两者比较无统计学差异（P〉0．05），而两种方法建立的紫杉醇耐药细胞株A2780／Taxol、A2780／Taxol-1的耐药性有统计学差异（P〈0．05）。同时检测A2780／DDP和A2780／（DDP＋Taxol）对顺铂的IC50差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：通过逐步诱导法建立的耐药细胞株比通过大剂量冲击法建立的耐药细胞株耐药性稳定，耐药性显著增高，提示临床用药中应足剂量用药。紫杉醇与顺铂无交叉耐药。在A2780／DDP细胞基础上使用紫杉醇建立双耐药细胞株时，紫杉醇对细胞的顺铂耐药性无影响，不能逆转其顺铂耐药性，所以对顺铂耐药患者多药合用意义不大，单用紫杉醇可能为佳。     

异钩藤碱逆转人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂耐药性

目的 研究异钩藤碱(IR)在体外对耐药人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的耐药性.方法 采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度.结果 IR无细胞毒浓度组(3.0μg·mL-1)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg·L-1降至3.36 mg·L-1;低细胞毒浓度(8.0μg·mL-1)组的IC50降至2.34 mg·L-1;2组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度.结论 研究表明IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,并可增加肿瘤细胞内DDP药物浓度.     

双氢青蒿素通过PI3K/Akt通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制

摘要：目的:研究双氢青蒿素通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制。方法:体外培养人肺癌耐顺铂株（A549/DDP）,给予不同浓度双氢青蒿素(20,40,80,160,200,250,300μmol·L-1)处理48 h后,通过MTT法检测双氢青蒿素对A549/DDP细胞增殖影响,选取双氢青蒿素最佳实验浓度及在不同浓度DDP(0,20,40,60,80,100μmol·L-1)作用下观察并计算顺铂对A549/DDP细胞IC50和双氢青蒿素对A549/DDP逆转倍数;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）及PI3K/Akt通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达。结果:随双氢青蒿素浓度升高,细胞增殖抑制率依次升高（P<0.05）,且具有浓度依赖性,IC10（32.07±1.04）μmol·L-1是双氢青蒿素为最佳逆转耐药浓度;随DDP浓度的升高,双氢青蒿素A549/DDP细胞增殖抑制率随之升高（P<0.05）,DDP+双氢青蒿素组顺铂对A549/DDP的IC50为（26.42±1.23）μmol·L-1,顺铂组为（58.16±1.32）μmol·L-1,双氢青蒿素的逆转耐药倍数为2.21;与对照组相比,DDP组、双氢青蒿素组、DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）;与DDP组、双氢青蒿素组相比,DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）。结论:双氢青蒿素通过抑制PI3K/Akt通路促进A549/DDP细胞凋亡,在一定程度上可逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂的耐药性。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

三苯氧胺对肺癌A549/DDP细胞多药耐药性的逆转作用及机制

目的探讨三苯氧胺（TAM）逆转肺癌A549/DDP细胞多药耐药性（MDR）的作用及可能机制。方法以噻唑蓝（MTT）比色法测定TAM对A549/DDP细胞的生长抑制率,流式细胞术检测TAM对A549/DDP细胞内Rho123表达的影响,选取最佳的TAM实验浓度。以MTT法检测TAM对阿霉素（ADM）、吉西他滨（GEM）、顺铂（DDP）的逆转效率,即时聚合酶链反应法检测TAM对A549/DDP细胞多药耐药基因1（MDR1）mRNA水平的变化,蛋白质印迹法检测P糖蛋白（P-gp）表达水平的变化。结果 TAM剂量在10.0μmol/L时对A549/DDP细胞毒性小且可增加细胞内Rho123的蓄积,10.0μmol/L的TAM能增加化疗药物的敏感性,对ADM、GEM、DDP的逆转倍数分别为3.0、7.2、2.0倍,使MDR1 mRNA的表达率较用药前下降35%,并可显著抑制P-gp的表达水平。结论 TAM体外可逆转A549/DDP细胞MDR,提高A549/DDP细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与抑制MDR1表达、减少细胞内药物外排有关。     

PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨第3代选择性PARP-1抑制剂PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响。方法使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、PJ34单药或联合作用于A549/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平。结果PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的PJ34可明显增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,诱导细胞凋亡,使细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显降低。结论 A549/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内PARP-1蛋白的过度表达有关,PJ34有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低细胞内LRP、GST-π的蛋白表达水平有关。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

东北地区患儿口服卡马西平后血药浓度与临床疗效分析

目的：监测服用卡马西平患儿血浆中卡马西平浓度，根据血药浓度数据，分析其与临床疗效的关系。方法：采用荧光偏振免疫法（FPIA）测定卡马西平血浆药物浓度；依据癫痫病的疗效评价标准对卡马西平的疗效进行评定；分析血药浓度、每日剂量（mg&#183;kg^-1&#183;d^-1）、日总剂量（mg&#183;d^-1）与临床疗效关系。结果：卡马西平的血药质量浓度在4．0-12．0mg&#183;L^-1。范围时，疗效较好。结论：临床用药时宜控制卡马西平的血药浓度最佳治疗范围为4．0～12．0mg&#183;L^-1，临床疗效与血药浓度的相关性大于剂量（按公斤体质量计算）与血药浓度的相关性。     

去甲斑蝥素通过下调c-met基因逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的研究

目的 本研究通过去甲斑蝥素（NCTD）作用于肺癌顺铂（DDP）耐药细胞A549/DDP,探讨其对DDP耐药的逆转作用及其相关机制。方法 应用CCK-8法检测NCTD对A549和A549/DDP细胞活力的影响、DDP对A549细胞和A549/DDP的半数抑制浓度（IC₅₀）、NCTD联合不同浓度DDP对A549/DDP细胞DDP耐药性的影响;细胞克隆形成实验检测NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞克隆形成率的影响;Western blotting法检测A549/DDP和A549细胞中c-met表达,以及NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞内c-met蛋白表达的影响。结果 NCTD剂量相关性地抑制A549和A549/DDP细胞的活力,选择抑制率小于10%的最大NCTD浓度即10 μmol/L作为逆转浓度;DDP作用于A549/DDP和A549细胞的IC₅₀分别为15.11和5.04 μmol/L,差异有统计学意义（P<0.01）;A549/DDP细胞中c-met表达明显高于A549细胞;用NCTD（10 μmol/L）处理后,DDP对A549/DDP细胞的IC₅₀从15.11 μmol/L减少到8.06 μmol/L,差异显著（P<0.01）;与DDP单给药组比较,NCTD联合DDP作用明显降低A549/DDP细胞克隆形成率（P<0.01）;Westernblotting结果显示,NCTD联合DDP作用明显抑制顺铂耐药细胞A549/DDP细胞中c-met蛋白的表达,单用DDP或NCTD与对照组比较差异不明显。结论 NCTD与DDP联用可逆转A549/DDP细胞对DDP耐药,其机制可能与抑制c-met蛋白表达有关。