Survivin基因和蛋白的分子生物学研究进展

Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族新成员,是迄今发现的作用最强的凋亡抑制因子,其结构在IAP家族中是非常独特的,含有单一的杆状病毒IAP重复序列(BIR),而末端不含有环状结构。Survivin在人类多种肿瘤组织中过表达,而在分化成熟的组织中不表达。它通过干扰有丝分裂仿锤体的形成而调节周期G₂/M,通过抑制caspase-3和caspase-7的活性而抑制细胞凋亡。在肿瘤的形成中,Survivin表达与细胞凋亡呈负相关,而与细胞增殖和血管生成呈正相关。Survivin通过抑制细胞凋亡使癌症患者预后差且生存率降低。因而Survivin有望成为肿瘤诊断和治疗的新靶点。     

三氧化二砷对乳腺癌细胞株的抑制作用及其机制探讨

目的 探讨三氧化二砷(arsenous oxide,As2O3)对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用及其机制.方法 对乳腺癌MCF-7细胞株进行培养传代.As2O3作用于细胞一定时间后利用流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测survivin基因的表达;电镜观察乳腺癌细胞凋亡情况.结果 As2O3对乳腺癌细胞的抑制作用是以促进细胞凋亡为主;凋亡抑制因子survivin基因在乳腺癌细胞中表达;乳腺癌细胞经As2O3作用后,能抑制survivin基因的表达.结论 As2O3可能通过抑制凋亡抑制因子survivin基因的表达,促进细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用.     

Bcl-2、Bax、Fas在大肠癌脾胃虚弱证患者舌苔脱落细胞表达及其相关性研究

目的：探讨舌苔脱落细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas表达水平与大肠癌脾胃虚弱证的关联性。方法：用免疫组化方法,检测舌苔脱落细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas的阳性表达率。结果：三组间Bcl-2、Bax蛋白阳性表达率有统计学意义,P＜0.05;Fas蛋白阳性表达率无统计学意义,P＞0.05。结论：Bcl-2蛋白高表达,抑制细胞凋亡,Bax蛋白低表达,使细胞凋亡能力减弱,共同作用使舌苔细胞的生存期延长,细胞凋亡速率减慢,这可能是导致肿瘤细胞增殖与凋亡失衡,引发细胞恶性增殖而发为癌症的主要原因。     

caspase－3和核因子－κB在细胞凋亡外途径中的双向作用研究进展

细胞凋亡又叫细胞程序性死亡,即当细胞核DNA的双链结构遭受破坏且不能及时修复时,细胞的增殖受到抑制,细胞走向死亡。在凋亡过程中,凋亡细胞在形态学上有特异性的改变,凋亡能损坏细胞核中的染色质,从而使染色质发生凝集,同时细胞骨架中核纤层蛋白和肌动蛋白丝断裂,细胞萎缩,经自我包装被巨噬细胞吞噬。凋亡在细胞生理性死亡过程中起着预调的作用,它使多细胞动物在细胞存亡上保持健康平衡,然而当正常的凋亡信号受到抑制时,将导致癌症或自身免疫性疾病,相反正常凋亡信号受到促进时会导致退行性病变。细胞凋亡与凋亡信号的传递密切相关,凋亡信号的传递是一个复杂的过程,该过程受凋亡抑亡,从而获得抵抗机体正常凋亡的因子,如通过表达抑制抗凋亡蛋白Bcl－2,下调或抑制抗凋亡蛋白Bax ,肿瘤细胞可获得抵御凋亡的能力［1］。人类的多种B淋巴细胞瘤均高表达Bcl－2,表明正常凋亡的抑制与癌症密切相关［2］。抗凋亡将使上皮细胞可不依附于细胞外基膜而悬浮存活,增强其转移能力［3］。此外,抗凋亡具有降低机体免疫系统的作用,使细胞毒性T细胞（ CTLs）以及自然杀伤细胞（ NK 细胞）不能攻击肿瘤细胞［4］。在临床上,由于肿瘤对化疗和放疗治疗有一定的抵抗作用［5］,非手术根除肿瘤细胞的方法,即诱导凋亡就成了肿瘤生物研究的重要方面。因此,更深入的探究凋亡的分子机制对开启有效的靶向治疗具有重要意义。     

环氧合酶-2选择性抑制剂对乳腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2(COX-2)的特异性抑制剂NS-398对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡作用,及其对阿霉素(ADM)诱导的MCF-7细胞凋亡作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析NS-398对MCF-7细胞的生长抑制作用,进一步用NS-398和ADM单独及联合作用于MCF-7细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Pax的表达。结果40μg／ml的NS-398就可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,下调Bcl-2蛋白表达;和ADM联用凋亡率显著增高。结论NS-398可抑制MCF-7细胞生长、诱导其凋亡,并且和阿霉素有协同作用,其诱导凋亡与Bcl-2表达下调有关。     

隐丹参酮对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨隐丹参酮(CPT)对人胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞凋亡的变化;Real Time RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21 mRNA表达的变化;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、p53和p21表达的变化。结果 CPT作用于人胃癌细胞SGC-7901 24 h后,可明显抑制细胞生长,诱导细胞发生凋亡;在转录水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53 mRNA的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2 mRNA的表达;在翻译水平上调促细胞凋亡蛋白Bax和p53的表达,下调抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 CPT对人胃癌细胞SGC-7901具有诱导凋亡的作用,其机制可能与线粒体途径相关。     

胃癌c-Fos蛋白缺失的预后意义

目的:评估625例胃癌患者c-fos癌(基因)蛋白表达,并分析了它与临床病理因素和生存的关系.方法:625例经手术证实病人,采用组织化学分析方法测定c-fos癌(基因)蛋白.结果:c-fos表达缺失与癌症进展、淋巴结转移、淋巴浸润和较短的生存相关联,提示胃癌细胞c-fos表达缺失可能与癌症和不良预后有关.结论:缺乏c-fos表达提示肿瘤抑制作用下降,这种抑制活性可能与c-fos促凋亡作用相关.     

bcl-XL与survivin在地塞米松拮抗紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡中的表达

目的 探讨bcl-XL与存活蛋白(survivin)在地塞米松拮抗紫杉醇诱导的卵巢癌细胞凋亡过程中的表达及地塞米松在抗凋亡中的作用.方法 应用MTT比色法检测地塞米松对紫杉醇抑制细胞增殖的影响,TUNEL法形态学观察细胞凋亡,RT-PCR检测抗凋亡相关基因survivin、bcl-2和bcl-XLLmRNA的表达.结果 浓度为0.001,0.01,0.1,μmol/L的地塞米松对紫杉醇抑制的SKOV-3细胞增殖有不同程度的拮抗作用,浓度越高拮抗作用越强.TUNEL结果表明地塞米松预处理能抑制紫杉醇诱导的SKOV-3细胞凋亡.半定量RT-PCR结果表明地塞米松预处理后再用紫杉醇组与单用紫杉醇组比较survivin和μmRNA的表达升高(P<0.01),而bcl-2mRNA的表达无显著差异(P>0.05).结论 地塞米松对紫杉醇抑制的人卵巢癌细胞株SKOV-3细胞增殖有拮抗作用,其作用机制可能与上调抗凋亡基因survivin和bcl-XL的表达有关.     

ARID1A下调促进甲状腺癌细胞增殖和凋亡的作用机制

目的 ARID1A是SWI/SNF染色质复合体的关键成员,该基因已成为人类各种癌症的肿瘤抑制基因。分析了ARID1A在甲状腺癌中的表达情况和临床意义。方法 利用免疫组化技术对甲状腺癌患者组织与癌旁组织进行检测,并结合聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)技术了解ARID1A基因在甲状腺癌中的mRNA表达情况。此外,本研究还通过蛋白质印迹技术、MTT增殖试验、集落形成试验以及细胞凋亡检测技术探究ARID1A在甲状腺癌发生、发展中对肿瘤细胞增殖和凋亡影响的作用机制。结果 与正常腺上皮比较,甲状腺癌组织中ARID1A表达降低,并且与淋巴结转移、TNM分期和分化差具有显著的相关性,并且ARID1A在甲状腺癌细胞系中的表达低于正常腺上皮TEC细胞系。本研究还进一步探讨了ARID1A在甲状腺癌细胞系生物学行为中的作用,FTC133和BCPAP细胞系中转染小干扰RNA(siRNA)的ARID1A缺失促进增殖、集落形成能力,并抑制细胞凋亡。结论 ARID1A可能是甲状腺癌中的重要肿瘤抑制因子,该基因的下调能够促进甲状腺癌细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

乌索酸通过抑制miR-21表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡的机制

探讨乌索酸通过调控miR-21表达从而诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制。采用MTT方法检测乌索酸对肝癌细胞增殖的抑制作用;qPCR检测肝癌细胞中miR-21的表达水平及乌索酸对HepG2细胞中miR-21表达的调控作用;转染miR-21 mimics进HepG2细胞中上调miR-21的表达后,MTT、流式细胞检测法、RT-PCR方法分别分析miR-21在乌索酸对细胞的增殖、凋亡以及对凋亡相关基因的调控过程中的作用。结果显示,与肝正常细胞L-02以及肝癌SMCC-7721、Bel-7402细胞相比较,乌索酸对肝癌HepG2细胞的增殖抑制效果最强,且HepG2细胞中miR-21的表达水平最高。乌索酸可下调HepG2细胞中miR-21的表达,且在24 h的下调作用最强。miR-21的表达上调可以部分抵消乌索酸对HepG2细胞的抑制增殖及促进凋亡,部分抵消下调凋亡抑制基因Bcl-2、survivin表达和上调促凋亡基因Bax表达的作用。结果提示,乌索酸通过抑制miR-21的表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡。     

可替宁对穿孔素/粒酶B诱导的NCI-H460肺癌细胞凋亡的抑制作用

目的探讨可替宁对穿孔素/粒酶B(perforin/granzyme B)诱导的NCI-H460非小细胞肺癌细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法以人肺癌细胞株NCI-H460为研究对象,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色检测细胞生长增殖活性,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染荧光显微镜下观察细胞凋亡形态学变化,异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色后流式细胞仪定量检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot法检测凋亡抑制蛋白XIAP及Survivin的表达量。结果 (1)不同浓度可替宁单独作用NCI-H460细胞时未见明显诱导凋亡现象,可显著抑制细胞生长,其抑制率与作用时间和剂量呈正相关。(2)0.25μg/ml浓度穿孔素作用NCI-H460细胞(1×106个)时,PI染核率可达到90%以上。而当加入1.5μl粒酶B(1μg/ml)孵育6h时,穿孔素/粒酶B组细胞可呈现90%以上的凋亡现象。(3)166ng/ml浓度可替宁作用穿孔素/粒酶B预处理的细胞6h时可见明显凋亡抑制现象,当检测其凋亡抑制蛋白XIAP、survivin表达量时,发现穿孔素/粒酶B组表达量明显降低,可替宁组表达量较高,而当可替宁联合穿孔素/粒酶B时表达量最高。结论可替宁可明显抑制穿孔素/粒酶B诱导的NCI-H460肺癌细胞凋亡现象,这种作用可能与凋亡抑制蛋白XIAP、survivin的表达上调有关。     

人巨细胞病毒vMIA蛋白抑制肿瘤坏死因子-α诱导人胚肺成纤维细胞凋亡

目的观察人巨细胞病毒(HCMV)vMIA蛋白抑制宿主细胞凋亡的作用机制。方法构建HCMV UL37xl真核表达质粒并转染人胚肺成纤维细胞(HEL)，经G418筛选，免疫荧光鉴定vMIA的表达。用流式细胞术检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 环己酰亚胺(CHO)攻击后细胞凋亡指数，Western blot方法检测Caspase 8与细胞色素C的表达变化。结果转染pcDNA3．1-UL37xl的HEL细胞可以抑制TNF-α CHO所诱导的细胞凋亡，vMIA的表达可以阻止细胞色素C的释放及Caspase 8的激活。结论vMIA参与巨细胞病毒抑制细胞凋亡的作用。vMIA作用于凋亡信号途径中Caspase 8的下游、细胞色素C的上游。它通过阻止细胞色素C的释放发挥作用。     

抗癌药莪棱舌草Ⅰ号诱导人肝癌细胞凋亡的研究

用流式细胞光度术检测细胞凋亡 ,运用细胞化学方法检测凋亡相关基因蛋白的表达 ,以及用Westernblot ting分析研究抗癌药莪棱舌草Ⅰ号对人肝癌细胞 (772 1细胞 )凋亡的诱导作用。结果表明药物能够诱导 772 1细胞发生凋亡 ,凋亡率可达 4 0 % ;药物作用可以使细胞中凋亡抑制基因bc1 2表达减少 ,凋亡促进基因Bax表达增加。提示诱导肿瘤细胞凋亡可能是莪棱舌草Ⅰ号抑制肝癌细胞的机制之一     

儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用。方法形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平。结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡。EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强。EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响。结论EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强。     

X连锁凋亡抑制蛋白与消化系肿瘤关系的研究进展

细胞凋亡程度的降低是肿瘤发生的主要机制,凋亡抑制蛋白在抑制细胞凋亡中起非常重要的作用。X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）是凋亡抑制蛋白（1AP）家族中的重要一员,XIAP通过抑制半胱天冬酶途径及参与其他细胞凋亡途径抑制细胞的凋亡。该文对XIAP的分子结构、表达调控、作用机制及其与消化系肿瘤的关系等方面的研究进展进行综述。     

卵巢癌细胞凋亡中核因子кB、半胱酰氨天冬氨酸特异性蛋白酶3、survivin的调控

核因子кB是一种多极性转录因子,参与免疫反应、细胞凋亡、肿瘤发生和转移等多种生理病理过程;参与多种基因的表达与调控.半胱酰氨天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-3是凋亡效应蛋白酶家族中主要的效应蛋白,在细胞凋亡过程中发挥极其关键的作用.Survivin是凋亡抑制蛋白家族中较活跃的一员,具有抑制细胞凋亡的作用.本文主要综述核因子кB、caspase-3、survivin在凋亡中的作用,以及三者在卵巢癌的表达和影响.     

凋亡抑制因子Livin在妇科疾病中的研究进展

细胞凋亡是指有核细胞在各种凋亡信号的刺激下启动细胞内的死亡程序,经过一系列信号转导途径,最终达到细胞程序性死亡的过程.Livin,又叫黑素瘤凋亡抑制蛋白(ML-IAP)或肾凋亡抑制蛋白(KIAP),是2000年新被发现的凋亡抑制蛋白(IAP)家族中的成员,具有较强的抗凋亡活性[1].Livin 在肿瘤中的高表达直接或间接抑制细胞凋亡,而凋亡在妇科疾病中的生物学作用已被普遍关注.     

土槿皮乙酸作用PI3K/Akt通路诱导HeLa细胞凋亡

 【目的】探讨土槿皮乙酸对宫颈癌HeLa细胞凋亡和增殖的作用。【方法】通过Hoechst 33342荧光染色等观察细胞核固缩和染色体碎片等形态学变化，MTT法测定土槿皮乙酸对HeLa细胞的生长抑制作用，采用流式细胞仪和免疫印迹实验检测MTT法测定HeLa细胞的生长凋亡情况及其相关蛋白的表达变化。【结果】 土槿皮乙酸对宫颈癌HeLa细胞具有明显的生长抑制作用，并能诱导细胞发生凋亡，随着药物浓度的增加和作用时间的延长，细胞的生长抑制率及细胞凋亡率均明显升高。土槿皮乙酸抑制细胞生长及诱导细胞发生凋亡的过程中，细胞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、蛋白激酶B (Akt)、糖原合酶激酶3（GSK3）、FKHRL (Forkhea like family)表达水平及活性显著降低，导致抑制凋亡抑制因子bcl-2受到表达抑制，同时Bax表达增加。【结论】土槿皮乙酸能够通过多条信号途径促进人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡，通过抑制PI3K/Akt的活性是其体外诱导人子宫颈癌HeLa细胞发生凋亡和抑制增值的重要作用机制。     

TrkB在结肠癌中的表达及其对LoVo细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨tropomysin相关激酶B(TrkB)在结肠癌中的表达及其对LoVo细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 采用western blot方法检测TrkB在30例结肠癌和相应癌旁组织中的表达水平.分别采用MTT、流式和Transwell小室研究转染TrkB-siRNA对结肠癌细胞LoVo增殖、凋亡和侵袭的作用.结果 TrkB在结肠癌组织中表达上调,特异性siRNA干扰TrkB表达后,转染细胞凋亡率增加,但细胞增殖和侵袭受到抑制.结论 结肠癌中TrkB过表达可能通过抑制细胞凋亡,促进细胞增殖和侵袭,从而对结肠癌的发生发展具有重要作用.     

HIC-1基因及其甲基化在肿瘤中的研究

肿瘤高甲基化-1(HIC-1)基因是一种转录抑制因子,研究发现HIC-1基因具有转录抑制、诱导细胞凋亡、阻滞细胞生长等多种功能。HIC-1基因在大部分正常组织中表达,在多种肿瘤细胞中由于其高甲基化而表达低下,并且其甲基化在某些肿瘤的早期阶段,大部分肿瘤的发展及预后中起重要作用。通过逆转基因的甲基化可能为癌症治疗提供一种新的途径。深入研究HIC-1基因及其作用,将为肿瘤的早期诊断和治疗提供帮助。