白血病细胞系WT1的表达及反义核苷酸对其的抑制作用

目的:探讨RT-PCR方法测定白血病细胞系WT1基因的表达以及WT1反义寡核苷酸对白血病细胞系增殖的抑制作用。方法:应用RT-PCR方法测定K562、HL-60、TF-1及U937 4株白血病细胞系WT1基因的表达,然后应用针对WT1翻译起始位点的反义寡核苷酸(WT1 ASO)处理K562细胞系、U937细胞系,采用锥虫蓝拒染法确定白血病细胞的增殖。结果:K562、HL-60及TF-1 3株白血病细胞系均高度表达WT1,而U937细胞系未测到WT1。WT1 ASO能够抑制WT1表达阳性的K562细胞的生长,对WT1表达阴性的U937则无抑制作用;而WT1有义寡核苷酸对K562细胞系、U937细胞系均无抑制作用。结论:RT-PCR测定方法可以检测WT1基因在白血病细胞系表达,WT1反义寡核苷酸对白血病细胞有特异的抑制作用。WT1基因在白血病细胞增殖过程中起一定作用。     

LncRNA-H19对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的探索长链非编码RNA-H19对急性髓系白血病细胞增殖和细胞凋亡的调控作用。方法采用RAN干扰技术对急性髓系白血病细胞系HL-60、THP-1和U937的LncRNA-H19进行表达沉默,用实时荧光定量PCR(qPCR)检测LncRNA-H19在细胞中的表达情况。用MTT检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果三种白血病细胞系分别被3条si-RNA干扰后,LncRNA-H19表达均明显下调。MTT结果显示,RNA干扰后,LncRNA-H19干扰细胞组的细胞增殖明显低于阴性对照组,而流式细胞术显示,siH19干扰细胞组的细胞凋亡明显高于阴性对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论急性髓系白血病细胞中,LncRNA-H19具有调控急性髓系白血病细胞增殖和细胞凋亡的功能。     

基质金属蛋白酶-9基因在白血病细胞株中的表达及紫杉醇对其表达的影响

目的：研究明胶酶B(MMP-9)基因在白血病细胞株中的表达及紫杉醇(Pac)对MMP-9mRNA表达的影响。方法：采用细胞培养及半定量RT-PCR法检测MMP-9mRNA在两株白血病细胞K562和HL-60中的表达以及Pac作用于K562细胞对MMP-9mRNA表达的影响。结果：MMP-9mRNA在两株白血病细胞K562和HL-60中均有表达，Pac可下调MMP-9mRNA的表达，其作用呈剂量依赖性增强。结论：MMP-9基因在白血病发病机制中可能起一定作用，Pac可抑制MMP-9mRNA的表达，可能对白血病的治疗有一定作用。     

多克隆抗胸腺细胞球蛋白对白血病细胞增殖抑制及凋亡诱导作用

目的:探讨多克隆兔抗人胸腺细胞球蛋白(ATG)对白血病细胞的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法:体外培养Jurkat、Raji、HL-60、NB4、K562、U937细胞株以及15例患者原代白血病细胞。用50、100、150、200、250μg/mL终浓度的ATG在不同时间分别作用于以上细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)比色法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:ATG对Jurkat、Raji、HL-60细胞有明显的增殖抑制以及诱导凋亡作用,且高浓度ATG抑制作用更强。ATG对NB4、K562、U937细胞增殖抑制与诱导凋亡作用均不明显。15例初发白血病患者中7例的原代细胞经ATG作用后明显凋亡,凋亡率均>30%。结论:ATG具有广谱抗白血病作用,尤其是对淋巴细胞白血病作用较强,为其在异基因造血干细胞移植中的应用提供了实验依据。     

凋亡抑制因子Livin在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达

分别采用RT-PCR与westem blot的方法,在Raji、Jurkat等7种白血病和淋巴瘤细胞株中检测Livinα、β两种剪接体mRNA与蛋白的表达水平.发现7株细胞中Raji、MOLT-4、、HL-60和K562细胞在mRNA和蛋白水平均高表达Livin,Jurkat细胞可能因为Livin mRNA表达较弱,蛋白水平检测不到,Hut78和KG-1两细胞株中未检测到Livin的表达.认为Livin在大多数白血病和淋巴瘤细胞株中表达,说明Livin可能与血液系统恶性肿瘤的发生机制有一定关联.     

Fas/FasL途径在柔红霉素诱导HL-60及U937细胞凋亡中作用的研究

目的；研究柔红霉素（DNR）诱导白血病细胞凋亡的机制，进一步探讨Fas/FasL 途径在DNR诱导白血病细胞凋亡中的作用。并评价sFAsL与DNR联用的致凋亡效应。方法：将DNR作用于白血病细胞系HL－60，K562，U937细胞，并用流式细胞术（FCM）检测其Fas抗原表达的改变。sFasL,DNR诱导白血病细胞凋亡，以抗Fas单抗（IgG1)阻断Fas/FasL 途径，借助原位末端标记法（TUNEL）和FCM检测白血病细胞凋亡率。结果：DNR处理HL－60，K562，U937细胞18h后，Fas表达阳性率无明显变化（P＞0．05），与sFasL联合作用后显示出协同效应，。IgG1不能阻断DNA致白血病细胞凋亡的作用，但可阻断sFasL致白血病细胞凋亡的作用。结果：DNR致白血病细胞株U937，HL－60凋亡的作用不依赖于Fas/FasL 途径，但sFasL与DNR联合应用可协同增强抗肿瘤效应。     

急性髓性白血病患者CD87的表达及其意义

目的探讨急性髓性白血病患者中CD87的表达及意义。方法选择48例急性髓性白血病患者为观察组,36例急性淋巴细胞白血病患者为对照组,观察两组患者CD87表达情况以及白血病细胞株在(PMA)作用下诱导分化过程中CD87表达的改变情况。结果观察组中患者CD87的阳性率为54.17%,而对照组未见阳性表达,差异具显著统计学意义(P<0.01);与阴性者比较,CD87阳性者的髓外浸润比例与外周血幼稚细胞均升高明显(P<0.01),CR比例降低明显(P<0.05);白血病细胞株的CD87表达,随着时间的增加,其表达均呈现增加的趋势,其中U937在作用前其阳性表达率即已达到(92.3±4.4)%,故而其作用主要表现为荧光强度的改变;PMA作用前,U937中CD87 mRNA含量明显高于HL-60、K562(P<0.01);经PMA作用后,三组细胞株中的CD87含量mRNA均明显增加(P<0.05)。结论 CD87可用于急性髓性白血病的诊断及预后判断之中,具有较好的应用价值。     

可溶性CD40配体对白血病THP-1细胞的影响及机制

目的分析可溶性CD40配体(sCD40L)对人白血病急性单核细胞白血病细胞(THP)-1细胞凋亡、周期的作用及B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、半胱天冬酶(caspase)-3表达的影响。方法流式细胞术(FCM)检测白血病HL-60细胞凋亡、周期,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测sCD40L处理THP-1细胞后Bcl-2及caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果sCD40L处理THP-1细胞48 h后,Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著降低,caspase-3 mRNA和蛋白表达显著增高(P0.05)。诱导细胞的凋亡,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 sCD40L在体外能够诱导细胞凋亡,阻滞THP-1细胞在G0/G1期,其可能机制是通过下调Bcl-2及激活caspase-3而实现。     

CpG-ODN诱导Daudi细胞CD80、CD86分子的mRNA表达上调

目的:观察CpG-ODN对Daudi细胞株共刺激分子CD80、CD86 mRNA表达水平的影响.方法:1 μmol/L浓度的CpG-ODN(M362)、对照GpC-ODN(M383)体外孵育Daudi细胞4、12、24 h后实时荧光RT-PCR检测CD80、CD86 mRNA的水平.结果:①Daudi细胞能够表达TLR-9;②M362能够上调Daudi细胞CD80、CD86分子的mRNA的表达,且其作用是时间依赖性的;③M362的对照序列M383不具备上调Daudi细胞CD80、CD86分子的mRNA的表达的作用.结论:CpG-ODN中起免疫刺激作用的基序是CpG,刺激性CpG-ODN能够诱导Daudi白血病细胞共刺激分子CD80、CD86表达上调.     

氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡及其对p53、p21和Bcl-2表达的影响

为研究单核细胞源性泡沫细胞凋亡机制 ,以氧化型低密度脂蛋白诱导人髓系白血病细胞U937凋亡 ,观察p5 3、p2 1和Bcl- 2的表达。用流式细胞术和DNA断裂分析检测细胞凋亡 ;用细胞免疫荧光标记结合流式细胞术检测p5 3、p2 1和Bcl- 2蛋白表达 ,反转录聚合酶链反应显示p5 3、p2 1和Bcl- 2mRNA表达水平。结果表明氧化型低密度脂蛋白可致U937细胞凋亡 ,其作用具有浓度效应 ;氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡过程中 ,p5 3、p2 1mRNA和蛋白表达增加 ,Bcl- 2mRNA和蛋白表达减少。提示氧化型低密度脂蛋白可能通过上调p5 3、p2 1基因表达 ,下调Bcl- 2基因 ,导致U937细胞凋亡。