放线菌素D诱导V79细胞凋亡模型的建立

目的确定RNA合成抑制剂——放线菌素D(actinomycin D,ACTD)诱发V79细胞凋亡的最适作用浓度和时间,建立细胞凋亡模型。方法采用不同剂量(0～8.0 mg/L)的ACTD染毒V79细胞不同时间(0.5～4 h)。采用MTT法检测细胞活力;采用流式细胞仪法分析细胞凋亡和坏死率。结果各剂量ACTD染毒不同时间后V79细胞活力均下降(P<0.05)。与染毒0.5 h比较,在染毒1 h后仅0.25、1、2、8 mg/L ACTD染毒V79细胞活力下降,在染毒2 h后0.25、1、2、4、8 mg/L ACTD染毒V79细胞活力下降(P<0.05),在染毒4 h后各剂量ACTD染毒V79细胞活力均下降(P<0.05)。各剂量ACTD染毒不同时间后V79细胞凋亡率均升高(P<0.05);与染毒0.5 h比较,各剂量ACTD染毒1 h以及0.25、0.5、1、2 mg/L ACTD染毒2、4 h后V79细胞凋亡率均升高(P<0.05),4 mg/L ACTD染毒4 h后V79细胞凋亡率下降(P<0.05)。与对照组比较,0.25、2mg/L ACTD染毒0.5 h,1、2、4 mg/L ACTD染毒2 h以及各剂量ACTD染毒4 h后V79细胞坏死率均升高(P<0.05);与染毒0.5 h比较,2 mg/L ACTD染毒1 h后V79细胞坏死率下降(P<0.05),1、4 mg/L ACTD染毒2 h以及0.5、1、2、4 mg/L ACTD染毒4 h后V79细胞坏死率均升高(P>0.05)。结论 ACTD诱发V79细胞凋亡的最适剂量为4 mg/L,最佳作用时间为1 h。     

PM_(2.5)中的矿物粉尘对V79细胞毒性研究

目的研究4种PM2.5中的矿物粉尘对V79细胞的毒性作用。方法将不同浓度的4种矿物粉尘分别作用V79细胞24h后,用噻唑蓝(MTT)试验测定细胞的存活率,检测上清液中白细胞介素-6(IL-6)含量,彗星试验(SCGE)检测细胞DNA的损伤程度。结果 4种矿物粉尘均对V79细胞存活率产生影响,随矿物浓度的增高,细胞存活率逐渐降低;4种矿物粉尘均能使V79细胞培养液上清液中的IL-6含量升高。4种矿物粉尘对V79细胞的DNA损伤呈现剂量—效应关系,矿物粉尘浓度越高,DNA损伤越明显。结论 4种PM2.5中的矿物粉尘对V79细胞均能产生细胞毒性,且能够引起V79细胞IL-6分泌的增加,对细胞DNA产生明显的损伤效应,PM2.5中的矿物粉尘可能通过炎症因子的释放和DNA的损伤等机制对细胞产生毒性作用。     

不同产地的温石棉对V79细胞的毒性对比研究

[目的]评价我国青海茫崖、甘肃阿克塞、陕西陕南和四川新康的温石棉对V79细胞的毒性。[方法]采集我国四大矿区的4种温石棉,红外光谱分析其表面主要活性基团,X光荧光衍射分析仪分析主要化学成分。4种粉尘与V79细胞相互作用,比较4种石棉细胞存活率,测定培养液乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力、葡萄糖浓度及钙（Ca）、镁（Mg）、铁（Fe）、铝（Al）、硅（Si）元素含量。[结果]除四川新康温石棉无外羟基,其余3种温石棉的表面主要活性基团基本一致,化学组成主要是二氧化硅（SiO2）及氧化镁（MgO）,但含量不同。细胞存活率以陕南温石棉最高,茫崖温石棉最低,4种温石棉的LDH、葡萄糖及Mg含量比较,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）,仅茫崖与阿克塞矿区温石棉Si含量差异有统计学意义（P〈0.01）;4种温石棉Ca、Mg、Fe、Al含量差异均无统计学意义。[结论]不同矿床所产的温石棉,因生成条件不尽相同,表现活性基团不同,则细胞的毒性亦不同。     

氢醌致V79细胞DNA损伤的体外实验研究

目的研究苯的主要代谢产物氢醌(HQ)对V79细胞DNA的损伤作用。方法分别用0.15,0.30,0.60,1.20,2.40mmol/L的HQ染毒V79细胞2h,用单细胞凝胶电泳方法检测DNA损伤情况。结果在本研究所用剂量范围内,HQ可引起V79细胞DNA的明显损伤,低剂量组(0.15mmol/L)彗星细胞率为69%,彗星尾长(42.20±3.18)μm,高剂量组(2.40mmol/L)彗星细胞率为91%,彗星尾长(49.05±4.31)μm,但无明显的剂量-效应关系。结论HQ可致V79细胞DNA损伤,产生遗传毒性作用。     

氯化腐殖酸对V79细胞DNA损伤与修复效应的研究

以氯化的商品腐殖酸溶液为实验模型,用单细胞凝胶电泳技术检测了氯化腐殖酸引起的Ｖ７９细胞ＤＮＡ损伤与修复作用。结果显示：氯化腐殖酸溶液在５０μｇ／ｍｌ至８００μｇ／ｍｌ范围内可引起Ｖ７９细胞ＤＮＡ损伤,平均尾长与氯化腐殖酸溶液的浓度存在着剂量反应关系;修复试验显示：孵育３０分钟ＤＮＡ已开始修复,２小时几乎完全修复。该研究说明：以氯化的商品腐殖酸溶液为实验模型,研究饮水氯化消毒副产物的ＤＮＡ损伤与修复效应是简便易行的。     

彗星试验检测甲醛对V79细胞的DNA交联作用

目的研究甲醛对V79细胞DNA的交联作用,探讨甲醛的遗传毒性及机制.方法以紫外线照射作为标准断裂剂,用彗星试验检测不同浓度、不同暴露时间甲醛诱导的V79细胞DNA的交联作用.结果除75 μmol/L组外,在其它4个浓度组、3个染毒时间点,甲醛均可引起显著的DNA交联作用,彗星尾长和彗星细胞率显著低于仅紫外线照射的对照组(P<0.01),且彗星尾长具有明显剂量-反应关系(P<0.01).细胞暴露在甲醛中2、4 h,150、300、600 μmol/L浓度组彗星尾长和彗星细胞率显著低于暴露在1 h的(P<0.01).结论甲醛是一种DNA交联剂,具有诱导V79细胞DNA交联的作用,DNA交联的作用可作为甲醛致机体影响的生物标志物.     

高氟茶浸泡液致V79细胞毒性及DNA损伤的研究

[目的]探讨含氟茶浸泡液对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79细胞）的毒性及DNA损伤的作用。[方法]用氟离子选择电极法测定绿茶A、绿茶B和对照茶浸泡液中氟化物的含量。3种茶浸泡液分别设立5个茶汤浓度组（0.63、1.25、2.50、5.00、10.00mg/mL）对V79细胞进行4h、24h染毒,采用台盼蓝拒染法检测茶浸泡液对V79细胞的毒性。另将上述3种茶浸泡液分别设0.32、0.63和1.25mg/mL3个浓度组,均对V79细胞染毒4h,采用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）检测茶浸泡液对V79的细胞DNA损伤作用。同时设立阴性和紫外线对照组。[结果]绿茶A、绿茶B及对照茶浸泡液中氟化物的含量分别为2330、1390、7.53mg/kg。绿茶A、绿茶B的氟含量高于农业行业标准。在台盼蓝拒染实验中,绿茶A和绿茶B浸泡液对V79细胞活性有抑制作用,并具有明显的剂量-效应关系。在作用4h（2.50～10.00mg/mL剂量范围）和24h（0.63～10.00mg/mL）时,绿茶A和绿茶B的细胞存活率明显低于对照茶（P〈0.05）,且绿茶A的细胞存活率低于绿茶B（P〈0.05）。在作用4h时,绿茶A、绿茶B和对照茶对V79细胞的DNA损伤,其中绿茶A的DNA损伤作用较大,可能与它含氟量最高有关,而对照茶对V79细胞无DNA损伤作用。     

二甲基甲酰胺对V79细胞的毒性作用

[目的]了解二甲基甲酰胺(DMF)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的细胞毒性及DNA损伤作用.[方法]以体外培养V79细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色分析法(MTT法)和单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分别检测5个浓度(0.5、2.0、8.0、32.0、128.0 mmol/L) DMF在3个时间段(6、12、24h)染毒后对V79细胞的毒性作用和DNA损伤情况.[结果]同一时间组V79细胞存活率随染毒浓度的增加而下降,与阴性对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),存在明显的剂量-效应关系(6h:b=-0.002,P＜0.05; 12h:b=-0.003,P＜0.05; 24h:b=-0.003,P＜0.05).各染毒浓度组的彗星拖尾率、尾长、Olive尾距、尾部DNA百分含量,与同一时间阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).[结论]本实验条件下,DMF能够明显抑制V79细胞增殖,存在正向的剂量-效应关系,并能引起DNA损伤.     

苯酚致V79细胞毒性及DNA损伤效应的研究

目的 了解苯酚(PH)对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79细胞)的细胞毒性以及DNA损伤.方法 采用甲基四唑蓝(MTT)法检测不同浓度(25、50、100、200、400 mg/L)苯酚在不同时间染毒(12、24、48h)后对V79细胞的毒性;采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测不同浓度(5、10、20、40、80 mg/...     

超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法鉴定α-鹅膏毒肽在大鼠体内的代谢产物

目的 检测和鉴定大鼠尿中α-鹅膏毒肽的主要代谢产物,探讨α-鹅膏毒肽在大鼠体内的主要代谢途径。方法 大鼠以0.5mg/kg的剂量口饲α-鹅膏毒肽,分别采集实验组与对照组的尿液样品,尿液样品经简单处理后采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱仪检测,利用碰撞能量梯度(MSE) 、质量亏损过滤(MDF) 和离子色谱峰提取等技术处理数据。结果 在大鼠尿中共检测到8种代谢产物,其中,Ⅰ相代谢产物5种,Ⅱ相代谢产物3种,同时鉴定了代谢产物的结构,推测α-鹅膏毒肽在大鼠体内可能的主要代谢途径有氧化、脱氢、脱羧、甲基化反应。尿中主要代谢产物为原形、氧化代谢产物、脱氢代谢产物、脱羧代谢产物、甲基化结合物,α-鹅膏毒肽原形是尿液中的主要代谢产物,明显高于所有代谢产物的含量。结论 本研究将为确定α-鹅膏毒肽在动物体内的残留标志物及应用于α-鹅膏毒肽中毒应急检测与鉴定提供科学依据。     

硒和维生素E对丙烯酰胺致V79细胞毒性的拮抗作用

目的研究不同浓度的维生素E和（或）硒对丙烯酰胺（AA）染毒V79细胞的拮抗作用。方法利用细胞毒性实验（MTT法）计算细胞相对存活率，用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤，并对实验数据进行统计学分析。结果0．5～10．0μmol／L的硒和（或）2．5-40．0mmol／L维生素E与1．5mmol／L的丙烯酰胺作用于体外培养的V79细胞，实验结果表明，低浓度的硒与维生素E均可降低丙烯酰胺所致的细胞毒性和基因毒性，0．75mmol／L的AA已显示明显的细胞毒性，V79细胞的相对存活率（77．36％）明显低于阴性对照组，AA对V79细胞的毒性作用有明显的剂量-反应关系。高浓度的硒则起相反的作用；硒和维生素E共同作用，其拮抗效果明显优于硒、维生素E单独作用。结论在体外细胞培养条件下，一定浓度的维生素E和硒对AA染毒V79细胞的细胞毒性、遗传毒性有拮抗作用，且具有协同效应。     

硫酸铟对V79细胞DNA损伤作用的彗星实验

目的 观察硫酸铟对中国仓鼠肺成纤维细胞(V79)的DNA损伤作用.方法以体外培养的V79细胞为研究对象,四氮唑蓝比色分析法(MTT法)观察不同染毒浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L硫酸铟)和不同染毒时间(2、6、12、24 h)的细胞毒性;应用彗星实验(单细胞凝胶电泳技术)检测经不同浓度的硫酸铟...     

基于单细胞凝胶电泳技术快速检测食品添加剂对V79细胞DNA损伤作用的研究

目的快速检测啤酒花浸膏、溴酸钾和焦磷酸钠等3种食品添加剂对V79细胞DNA的损伤作用。方法采用V79细胞培养和单细胞凝胶电泳技术,借鉴单细胞凝胶电泳技术（SCGE）图像分析系统IM11．0对彗星图像进行分析,观察指标有尾长、尾重心、olive尾矩、尾惯量、尾分布矩、尾长／头长比、尾DNA含量（％）等7个计量指标。结果实验结果表明,溴酸钾和焦磷酸钠的剂量分别在75～300ug／ml和25．100umol／ml范围内,均对V79细胞DNA有明显的损伤作用,存在剂量-反应关系;啤酒花浸膏的剂量在25～100ug／ml范围内,不引起V79细胞DNA的损伤作用。结论本研究方法与传统的彗星实验相比,具有分析指标多,操作方便等优点,可应用于快速检测食品添加剂诱变性的筛选试验。     

微囊藻毒素-LR对人肝癌HT17细胞周期及细胞凋亡的影响

目的 研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对人肝癌HT17细胞周期、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 调整HT17细胞密度为1×104/孔,分别设终浓度为0(溶剂对照,0.1%DMSO)、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、2.0、5.0μmol/L的MC-LR染毒组和去铁敏(DFO,1 mmol/L)染毒组以及...     

微囊藻毒素-LR对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)致中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的凋亡作用。方法调整CHO细胞密度约为1×105/ml,分别用终浓度为0(对照)、1、5、10、15μg/ml的MC-LR染毒24 h后,采用噻唑兰(MTT),法测细胞活性,计算半致死效应浓度(EC50)。分别用终浓度为0(对照)、2.5μg/m(l1/4 EC50)、5μg/m(l 1/2 EC50)、10μg/m(lEC50)的MC-LR染毒24 h后,测定活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的活力和细胞凋亡率。结果与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均较高,线粒体膜电位降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着MC-LR染毒浓度的升高,CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均呈上升趋势,线粒体膜电位呈下降趋势。结论 MC-LR暴露可诱导体外培养的CHO细胞发生凋亡。     

微囊藻毒素对大鼠睾丸支持细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的 利用体外培养的大鼠睾丸支持细胞研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对细胞中凋亡相关蛋白表达水平的影响.方法 大鼠睾丸细胞分别染毒0(对照)、0.5、1、10、20 μg/ml MC-LR溶液后培养24和48 h,采用MTT法检测细胞活性.调整细胞密度为4×106～5×106/ml,分别染毒含0(对照)、1、10 μ...     

α-生育酚琥珀酸酯诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其作用的分子形式

目的　探讨α- 生育酚琥珀酸酯 (α TOS)诱导人胃癌SGC -790 1细胞凋亡时发挥作用的分子形式。方法　在体外培养的SGC 790 1细胞中 ,分别加入 5、10和 2 0 μg ml的α- TOS ,以 2 0 μg mlα 生育酚 (α- TOH)和1μl/ ml乙醇为对照培养 4 8小时后采用联咪二苯吲哚 (DAPI)染色 ,荧光显微镜下观察细胞形态 ,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解片段 ,并用HPLC法检测细胞内和培养液中α TOS和α- TOH含量。结果　细胞经DAPI染色发现 ,10 μg ml和 2 0 μg mlα TOS处理组细胞核染色体浓集 ,伴有细胞核固缩和核碎片形成。琼脂糖凝胶电泳检测发现 ,上述 2组细胞DNA出现梯形分子条带。在α -TOS处理的细胞内和培养液中HPLC仅检测到α- TOS ,未发现其分解产物α- TOH。结论　α TOS能诱导SGC 790 1细胞凋亡 ,且是以不分解的整体分子形式发挥其诱导凋亡作用 ,与α- TOH的作用无关。     

5-羟色胺对人胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的 探讨5-羟色胺对胎盘滋养细胞凋亡的影响.方法 将正常妊娠37～40周经剖宫产术获取的无菌胎盘滋养细胞分离、纯化、低糖型德氏改良基础培养基培养传代,将第2代培养的细胞分成4组,对照组和低(0.1μmol/L)、中(1.0μmol/L)、高(10.0μmol/L)浓度5-羟色胺组,分别培养4、8、12及24小时后,采用流式细胞术检测各组胎盘滋养细胞凋亡率,采用电镜观察各组滋养细胞的超微结构.结果 低浓度5-羟色胺组胎盘滋养细胞凋亡率与对照组比较,无显著性差异(P>0.05);中浓度5-羟色胺组培养12、24小时后胎盘滋养细胞凋亡率分别为(16.42±4.25)%及(22.66±9.47)%,与对照组比较有显著性差异(X2分别为5.41、4.22,均P<0.01);高浓度5-羟色胺组培养4、8、12及24小时后胎盘滋养细胞凋亡率分别为(9.21±3.66)%、(17.60±6.32)%、(28.74±8.77)%和(46.31±13.21)%,与对照组比较均有显著性差异(X2分别为6.56、7.01、6.59、5.87,均P<0.01).透射电镜下可见中、高浓度5-羟色胺组发生凋亡的胎盘滋养细胞有特征性凋亡细胞改变.结论 高浓度的5-羟色胺可促进胎盘滋养细胞凋亡.     

重组促凋亡蛋白TFAR19对CNE-1细胞凋亡影响的初步研究

目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应。方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应。结果不同浓度TFAR19蛋白均可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30 mg/L的TFAR19蛋白后,鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是:15.26%、29.48%、37.11%、54.20%、72.36%。阴性对照组的细胞凋亡率为12.40%。结论TFAR19蛋白可直接进入CNE-1细胞并明显促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。     

镰刀菌T-2毒素对人急性早幼粒白血病细胞HL60增殖与凋亡的影响

目的研究镰刀菌属真菌产生的倍半萜烯类化合物T-2毒素对体外培养急性早幼粒白血病细胞HL60生长抑制与凋亡诱导的作用。方法体外培养的HL60细胞经0、4、8、16和32μg/ml的T-2毒素处理48h,以MTT法检测T-2毒素对HL60细胞的生长抑制作用;吉姆萨染色观察细胞凋亡形态;流式细胞术(FCM)检测凋亡率;FCM及Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达情况。结果 MTT显示T-2毒素对HL60细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。形态学观察显示早幼粒白血病细胞出现明显凋亡形态特征。FCM定量检测表明,T-2毒素各处理组细胞凋亡率均高于对照组,并随T-2毒素浓度升高而增加。FCM和Western blot结果显示,T-2毒素处理后HL60细胞Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降。结论T-2毒素可剂量依赖地抑制体外培养的HL60细胞增殖并诱导凋亡。