龟鹿二仙胶汤含药血清对兔骨髓基质干细胞增殖的影响

目的：观察龟鹿二仙胶汤对骨髓基质干细胞（BMSCs）增殖的影响,确定影响BMSCs增殖的最佳中药血清浓度。方法：经前期体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,运用不同浓度的龟鹿二仙胶汤中药含药血清对获得的兔BMSCs进行药物干预24、48、72h后,采用MTT、免疫组化、流式细胞仪等方法,研究龟鹿二仙胶汤对BMSCs增殖的影响。结果：MTT比色实验显示,龟鹿二仙胶各浓度组均能不同程度地促进BMSCs的能量代谢,促进BMSCs增殖,与空白对照组相比有显著差异（P〈0．01）,而且以15倍药物浓度组为最佳。免疫组化结果证实,龟鹿二仙胶汤含药血清可通过促进PCNA表达来控制DNA复制,以15倍龟鹿二仙胶汤药物浓度血清培养时BMSCs表达致密的棕褐色颗粒最多,其他浓度组及TGF—β3组较多,空白对照组则最少。FCM结果显示,二仙胶汤药物血清能显著提高BMSCs增殖指数,且以15倍药物浓度龟鹿血清培养时最明显。结论：龟鹿二仙胶汤刺激BMSCs增值与药物浓度有关,低浓度龟鹿二仙胶汤就能显著刺激BMSCs增殖,无论是48h、72h测验均为15倍药物浓度时具有显著的增值作用,而更高浓度龟鹿二仙胶汤则表现为促进BMSCs增殖作用减弱。     

桑葚多糖T3-3分离及秀丽隐杆线虫抗衰老活性研究

[目的]研究桑葚多糖T2提取工艺优化,并对其抗衰老活性进行分析。[方法]以秀丽隐杆线虫为模型,用寿命、移动力分析、吞咽频率、产卵量和肠脂褐质综合评价不同剂量范围的桑葚多糖(T3-3)抗衰老活性。通过正交和优化实验确定最优提取工艺条件为:提取温度100℃,提取时间2 h,提取次数3次,料液比1∶30,提取率最高达8.48%。[结果]抗衰老活性研究表明,150 mg/L的T3-3能增强秀丽隐杆线虫的抗衰老能力。[结论]该提取工艺1)延长了秀丽隐杆线虫的寿命,秀丽隐杆线虫平均寿命延长了10.38%(P0.05),最大寿命延长了28.57%(P0.05),50%存活率对应天数延长了0.91%。2)秀丽隐杆线虫吞咽频率增加,吞咽频率比对照组高18.78%。3)产卵量无统计学差异。4)减少秀丽隐杆线虫肠脂褐质的产生量,比对照组平均荧光强度低11.14%(P0.05),实验末期,对照组的平均荧光强度增大了12.47%。     

龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤的保护作用

目的 研究龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤的保护作用。方法 体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,传至第二代后分5组培养:正常组、地塞米松（10-8mol/L）组、骨化三醇含药血清组、龟鹿二仙胶含药血清低剂量组、龟鹿二仙胶含药血清高剂量组。MTT法检测骨髓间充质干细胞活力,检测细胞上清中的超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、炎症因子白介素-6（IL-6）、小鼠白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）。采用Western blot检测Nrf-2/HO-1/NF-κB信号通路蛋白表达。结果 龟鹿二仙胶能显著提高细胞活力,增加SOD水平、降低MDA水平、降低炎症因子水平,增加蛋白Nrf-2、HO-1蛋白表达水平,降低NF-κB信号蛋白表达。结论 龟鹿二仙胶对地塞米松诱导骨髓间充质干细胞损伤有保护作用,且作用与调控Nrf-2/HO-1/NF-κB信号相关。      

蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机制研究

目的 探讨蜜环菌菌索多糖（AMP）延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。方法 以模式生物秀丽隐杆线虫作为活体模型,测定其在正常培养条件下的生存期与后代平均数量,氧化应激条件下的存活率和热休克蛋白16.2（HSP-16.2）、超氧化物歧化酶-3（SOD-3）的表达。结果 在正常培养条件下,蜜环菌菌索多糖（AMP-1、AMP-2）显著延长秀丽隐杆线虫的生存期,对其生殖力没有损害;在氧化应激条件下,显著提高秀丽隐杆线虫HSP-16.2和SOD-3的表达。结论 提高秀丽隐杆线虫的氧化应激能力可能是AMP延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。     

龟鹿二仙膏助阳药理作用研究

目的 :观察龟鹿二仙膏助阳的药理作用。方法 :测定去势大鼠性腺器官指数及皮质激素阳虚模型小鼠的自主活动增加及常压耐寒冷环境中的存活时间。结果 :龟鹿二仙膏能显著增加去势大鼠前列腺及精囊腺指数 ,使腺细胞增生、扩大、萎缩明显改善 ;龟鹿二仙膏还能明显提高肾阳虚小鼠自主活动 ,显著延长在寒冷状态下存活时间。结论 :龟鹿二仙膏有较好助阳作用     

龟鹿二仙胶汤治疗膝骨性关节炎的临床研究

观察龟鹿二仙胶汤对膝骨性关节炎的临床疗效.选择符合中西医诊断标准的临床患者120例,按就诊顺序随机分为2组,以龟鹿二仙胶汤和壮骨关节丸对照治疗.结果治疗组总有效率为98.3%,对照组为88.3%,治疗组的疼痛缓解、活动范围、步行能力、日常动作等指标明显优于对照组,2组比较有显著性差异（P＜0.01）.说明龟鹿二仙胶汤能有效的改善膝骨性关节炎的临床症状.     

白藜芦醇对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其初步机制研究

目的：探讨不同浓度白藜芦醇对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其机制。方法：观察25、50、100 µmol·L-1白藜芦醇处理的秀丽隐杆线虫野生型N2与daf-2、daf-16突变体的寿命变化。结果：与对照组比较,25、50、100 µmol·L-1白藜芦醇处理均可以显著延长三种秀丽隐杆线虫的寿命。结论：白藜芦醇可以显著延长秀丽隐杆线虫的寿命,其对寿命的影响不依赖于DAF-2/胰岛素样信号传导通路。     

寒冷胁迫可降低秀丽隐杆线虫的寿命和活动能力：通过介导脂代谢紊乱和应激反应异常

目的 探究秀丽隐杆线虫成虫在低温环境下的脂代谢、应激反应变化。方法 将同步化后的野生型及基因修饰型秀丽隐杆线虫成虫随机分为对照组和实验组,分别在20℃适宜条件和4℃低温暴露培养,观察其生存率、活动能力,评估非冷冻性极端低温对秀丽隐杆线虫成虫的寿命和活动能力影响;通过油红O染色和脂代谢相关基因表达检测,评价低温状态下秀丽隐杆线虫成虫脂代谢变化;通过线粒体荧光染色,应激相关基因、蛋白,抗氧化相关基因、蛋白的表达水平变化评估低温对秀丽隐杆线虫应激水平的影响。结果 4℃低温环境显著降低秀丽隐杆线虫成虫寿命（P<0.0001）和活动能力（P<0.0001）;同时,降低虫体脂质累积（P<0.05）,降低脂肪酸合成和代谢相关基因fat-5,fat-6,fat-7,fasn-1,nhr-49,acs-2,aco-1表达(P<0.01）;低温增强了热休克蛋白hsp-70,hsp-16.2表达(P<0.05）,但是降低了线虫线粒体数目（P<0.0001）和线粒体未折叠蛋白反应相关蛋白atfs-1的表达(P<0.05）,降低了抗氧化酶sod-2,sod-3,gpx-...     

三卤甲烷对秀丽隐杆线虫生殖细胞及子代数的影响

目的 探讨3种三卤甲烷类饮用水消毒副产物对秀丽隐杆线虫生殖细胞发育与繁殖能力的影响。方法 以3种三卤甲烷(三溴甲烷、三氯甲烷、三碘甲烷)为研究对象,在秀丽隐杆线虫模型中检测不同浓度三卤甲烷暴露后生殖腺细胞凋亡和卵母细胞数,及最终产生的子代数目。结果 生殖腺细胞凋亡结果显示,50μmol/L处理组中三氯甲烷和三碘甲烷的暴露造成线虫生殖腺凋亡水平升高,且存在一定剂量依赖效应。卵母细胞数结果显示,在50μmol/L浓度暴露下,3种THMs的暴露均显著降低了线虫体内的卵母细胞数。子代数结果显示,仅有50μmol/L处理组的三碘甲烷暴露会显著降低线虫的子代数。结论 THMs会造成秀丽隐杆线虫的生殖毒性,且毒性与其携带的卤族元素有关。     

半枝莲总黄酮对延缓秀丽隐杆线虫和人脐静脉内皮细胞衰老的影响

目的 研究半枝莲总黄酮(HF)对延缓秀丽隐杆线虫和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老的影响,并探讨可能的作用机制.方法 将不同浓度的HF(30、50 mg/L)分别放于NGM和DMEM培养基中,研究对线虫的寿命、生殖能力、氧化应激、抗氧化酶活力、相关基因表达以及对HUVECs的抗氧化酶活力和相关基因表达的影响.结果 HF能显著延长线虫的平均寿命和最大寿命,对其生殖能力没有损害,子代数目无统计学差异,35℃急性热应激下的平均生存时间显著延长;同时,HF均能提高秀丽线虫和人HUVECs中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的活性,并上调两种细胞中抗衰老基因daf-16、sir-2.1的表达.结论 HF可能通过提高抗氧化酶活力和抗氧化基因的表达水平,能够延缓线虫衰老及急性热应激下的应激能力同时不损害生殖能力,并保护内皮细胞免受损伤.     

龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍模型大鼠行为学及海马GR、5-HT受体表达的影响

目的:观察龟鹿二仙胶对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠行为学,海马糖皮质激素受体(glucocorticoid receptors,GR)及5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)受体1A亚型(5-HT1A)、2A亚型(5-HT2A)表达的影响。方法:采用单一延长刺激方法制作大鼠PTSD模型,通过旷场实验、拒俘反应实验以及Morris水迷宫实验观察大鼠的情感行为和学习记忆能力的改变。采用RT-PCR法检测海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达。结果:PTSD大鼠表现出多种情感行为障碍,学习能力显著降低(P0.01)。海马GR表达增强(P0.01),5-HT1A受体表达下降(P0.05),5-HT2A受体表达则升高(P0.05)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))能显著改善PTSD大鼠的情感行为障碍,提高学习记忆能力(P0.05或P0.01)。龟鹿二仙胶(2.025 g·kg~(-1))和淫羊藿总黄酮(0.06 g·kg~(-1))可以明显降低PTSD大鼠海马GR的表达水平,升高5-HT1A受体表达水平和降低5-HT2A受体表达水平(P0.05或P0.01)。结论:龟鹿二仙胶对PTSD具有良好的干预治疗作用,其作用机理与改善情感行为和认知功能以及调节海马GR、5-HT1A和5-HT2A受体表达有关。     

龟鹿二仙胶加味方联合泼尼松片治疗Duchenne型肌营养不良的疗效观察

目的 观察龟鹿二仙胶加味方联合泼尼松片治疗Duchenne型肌营养不良（Duchenne muscular dystrophy，DMD）的疗效。方法 将49例DMD患者随机分为观察组（19例）、对照组（30例）。观察组采用龟鹿二仙胶加味方联合泼尼松片的中西医结合治疗方案，对照组仅用泼尼松片治疗。治疗前及连续治疗3个月后，分别观察自汗盗汗、步行异常等临床症状的改善情况，并检测血清肌酸激酶（creatine kinase, CK）、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶同工酶（creatine kinase-MB, CK-MB）水平。结果 连续治疗3个月后，观察组自汗盗汗、步行异常评分显著升高（P<0.05），两组治疗前后自汗盗汗、步行异常、睡眠质量异常、乏力懒言评分差值的差异具有统计学意义（P<0.05）。观察组治疗后CK、CK-MB水平均显著下降（P<0.05），两组治疗前后LDH、CK-MB差值的差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 龟鹿二仙胶加味方联合泼尼松片不仅改善DMD患者的临床症状，而且修复其血清CK、CK-MB的异常。     

3，4- 二羟基苯甲酸甲酯延缓秀丽线虫衰老的作用及作用机制研究

目的：本实验室前期工作发现3,4- 二羟基苯甲酸甲酯（methyl 3,4-dihydroxybenzoate,MDHB）具有神经保护、抗细胞氧化损伤及延长秀丽线虫寿命的作用。本论文以秀丽线虫（Caenorhabditis elegans,C.elegans）为模型动物,研究MDHB 给药前后对秀丽线虫寿命、应激能力等相关指标的影响,旨在进一步探明MDHB 延缓线虫衰老的作用及相关机制。方法：本文以秀丽线虫为模型动物测定MDHB 对秀丽线虫寿命、运动能力、生殖能力及抗压能力的影响。本实验主要考察了抑菌性、热量限制途径和daf-2/daf-16 参与的胰岛素/ 胰岛素样生长因子信号通路,通过CRISPR-CAS 9、特定基因突变、荧光显微镜分析、荧光酶标仪及Real-Time PCR 等方法进一步研究MDHB 延缓秀丽线虫衰老的作用及分子机制。结果：首先,本论文观察MDHB 对秀丽线虫寿命的影响,结果表明160 mg·L-1 MDHB 能显著延长野生型秀丽线虫寿命19%,高于阳性药白藜芦醇。此外,MDHB 给药后延长eat-2 突变株寿命,对于daf-2 和daf-2;daf-16 缺失突变体MDHB给药后抗衰老作用消失,对于daf-16 缺失突变株,MDHB 给药后寿命仍延长,但低于MDHB 对野生型秀丽线虫的延寿作用。表明热量限制并非MDHB 抗衰老的首要机制,MDHB 可能主要通过daf-2/daf-16 参与的胰岛素/ 胰岛素样生长因子通路延缓线虫衰老。其次,本文考察了压力胁迫下,MDHB 对野生型线虫和突变株线虫的影响,MDHB 给药后提高野生型线虫生存率,对daf-16缺失突变株线虫无延寿作用;MDHB 还能降低线虫体内活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平,提高超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,表明MDHB 可提高抗氧化损伤能力从而延长线虫寿命。最后,Real-Time PCR 结果显示 MDHB 处理后线虫体内daf-2 下调,daf-16 转录活性上调;使用GFP 融合共表达株线虫观察MDHB 对daf-16 入核状态和sod-3 及hsp-16.2 表达水平的影响,结果显示MDHB 促进线虫daf-16 入核,影响一系列与压力应激和寿命相关的生理活动,如活化daf-16 靶基因sod-3 和hsp-16.2。表明MDHB 激活daf-16/FOXO 信号通路及其下游靶基因,提高线虫抗氧化损伤和抗热压能力,从而延缓线虫衰老。结论：MDHB 可能通过调控daf-2/daf-16 参与的胰岛素/ 胰岛素样生长因子通路提高线虫抗压能力从而延长秀丽线虫寿命。     

龟鹿二仙膏提高耐力作用研究

目的：研究龟鹿二仙膏的温肾益精、补气养血作用。方法：采用负荷游泳时间及常压密闭环境存活时间试验方法。结果：龟鹿二仙膏可明显延长小鼠贞荷游泳时间及在密闭环境中的存活时间。结论：龟鹿二仙膏有较好提高耐力作用。     

化湿补肾法对膝骨关节炎大鼠软骨修复机制的研究

目的 探讨化湿补肾法治疗膝骨关节炎(KOA)的机制.方法 将48只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、化湿定痛汤组、龟鹿二仙胶组、化湿补肾法组,采用木瓜蛋白酶关节腔注射建立膝骨关节炎模型,造模成功后各组大鼠灌胃相应药物,化湿定痛汤组灌胃化湿定痛汤4.68 g/(kg·d),龟鹿二仙胶组灌胃龟鹿二仙胶汤2.7 g/(...     

基于网络药理学探讨龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的作用机制

目的:通过网络药理学的方法研究龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的相关作用机制。方法:基于TCMSP数据库、ETCM数据库、化学专业数据库、DrugBank数据库获取龟鹿二仙胶的潜在活性成分及相关靶点,从OMIM、Genecards数据库获取骨质疏松症的已知治疗靶点,运用STRING数据库建立活性成分-疾病靶点的蛋白相互作用网络(PPI),利用Cytoscape3.8.0软件对该网络进行拓扑参数分析得到关键活性成分及其靶点。并在R4.0.2中利用Bioconductor数据包对关键靶点进行GO生物学功能分析和KEGG通路分析,得到龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的有效成分和作用靶点。结果:龟鹿二仙胶共有87个活性成分和2 305个靶点,骨质疏松症共有4141个已知治疗靶点,二者共同作用靶点共71个,获得PPI核心基因69个,GO生物学过程分析得出95个条目,KEGG通路分析得出115条通路。结论:龟鹿二仙胶可能通过抑制炎症因子、调节成骨及破骨细胞分化、改善微循环、促进破骨细胞凋亡等途径起到抗骨质疏松的作用,涉及的通路包括TNF信号通路、IL-17信号通路、NF-kB信号通路、HIF-1信号通路、MAPK...     

龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制

目的观察龟鹿二仙胶对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎骨强度的影响及机制。方法 72只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(OVX组)、雷奈酸锶组(SrR组)、龟鹿二仙胶低剂量组(GL组)、中剂量组(GM组)和高剂量组(GH组),除S组外,其余各组切除卵巢,给药6、12周检测大鼠腰椎骨强度、骨密度、骨小梁面积、平均骨小梁宽度、血清骨钙素、尿脱氧吡啶酚的变化。结果①6周时OVX组腰椎承受最大载荷低于其余各组,12周时GM组明显高于其它2个剂量组(P0.01)。②12周时龟鹿二仙胶3个剂量组骨密度高于OVX组(P0.05),低于S组、SrR组(P0.05);GM组骨小梁面积、平均骨小梁宽度高于其余2个剂量组(P0.05)。结论龟鹿二仙胶能显著提高去卵巢大鼠腰椎骨强度,以GM组最明显,其作用机制为早期提高骨小梁宽度和骨小梁面积,后期提高骨密度和改善骨显微结构。     

龟鹿二仙胶汤含药血清对兔体外BMSCs向软骨细胞分化的干预作用

目的:探讨龟鹿二仙胶汤含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨细胞分化的干预作用。方法:抽取兔骨髓液,经体外分离、纯化、培养获得兔BMSCs,将第2代兔BMSCs分为龟鹿二仙胶汤中药含药血清组、软骨细胞组、单纯诱导剂组及空白对照组,进行培养1、2、3周后,通过细胞染色、透射电子显微镜、免疫组化等实验技术,观察各组对BMSCs诱导成软骨细胞的影响。结果:在转化生长因子-β(3TGF-β3)等诱导下龟鹿二仙胶汤中药血清可以明显促进软骨表型化BMSCs的GAG分泌及Ⅱ型胶原mRNA的表达,与软骨细胞组和单纯诱导剂组有显著性差异(P<0.01)。结论:龟鹿二仙胶汤含药血清可促进BMSCs向软骨细胞转化,优化骨组织工程的种子细胞体系,改善软骨组织的质量,延缓软骨的退化过程。     

龟鹿二仙胶的现代运用

<正>龟鹿二仙胶为中医传统名方,明代(1569年)王三才所著的《医便》就有详细记载,该方由鹿角胶、龟板、人参、枸杞子组成。方中龟板、鹿角胶"二仙"为主药,均归肾经。《古今名医方论·龟鹿二仙膏》云"龟得天地之阴气最厚,善通任脉",其腹甲为胶,能滋阴潜阳、补血。"鹿得天地之阳气最全,善通督脉",其角为胶,能补肾阳、生精血。人参大补元气而生津。枸杞子益精生血。《医方考·虚损劳瘵门》云人参"善于固气"     

acs-20；acs-22双突变线虫对低渗溶液及小分子药物的敏感性研究

目的分析acs-20;acs-22双突变线虫是否适合经皮肤渗透吸收的小分子化合物的体内效应研究,为建立药物筛选的生物新模型提供线索。方法野生型秀丽隐杆线虫N2作为对照,PCR验证acs-20;acs-22双突变线虫2个突变基因（acs-20和acs-22）的缺失。将2种线虫浸泡于低渗溶液（双蒸水）中,记录2种线虫浸后20、40、60min时间点的生存率,对比2种线虫对液体渗透压的敏感性。分别用10、20μg／mL的阿霉素（DOX）处理线虫,记录2种线虫在药物处理后12、24、48h时间点的生存率,对比2种线虫对毒性药物的敏感性。结果PCR结果显示：与野生型秀丽隐杆线虫N2相比,在acs-20;acs-22双突变线虫DNA序列中确实存在acs-20和acs-22基因缺失,acs-20;acs-22双突变线虫对低渗液体环境和DOX更为敏感。结论与野生型秀丽隐杆线虫相比,acs-20;acs-22双突变线虫更适合观察经皮肤渗透吸收的小分子化合物的体内效应,可以发展成为一种新的药物筛选生物模型。