卡介菌多糖核酸免疫治疗结核病小鼠的实验研究

目的 观察卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫保护作用及其免疫学机制。方法 将BALB／c小鼠48只随机分成BCG—PSN免疫治疗组和结核菌感染对照组,每组24只。两组小鼠制成结核分枝杆菌感染模型。感染后1周,每天分别腹腔内注射BCG—PSN（10mg／kg）或生理盐水（10mL／kg）,连续7d。感染后3周和4周每组处死12只小鼠,检测小鼠体重以及肺、脾脏湿重,观察肺脏病理改变,取肺、脾组织进行结核菌培养和菌落计数,用real—time PCR法测定肺、脾组织IFN-γmRNA、IL-10mRNA和IL-4mRNA的表达。结果 感染后4周,治疗组小鼠体重和脾脏重量高于对照组,肺脏重量低于对照组,且肺部病变较轻。感染后3周和4周,治疗组小鼠肺、脾组织结核菌落均低于对照组,小鼠肺组织IFN-γmRNA表达与对照组无差别,IL-10mRNA和IL-4mRNA的表达低于对照组。感染后3周,治疗组小鼠脾组织IFN-γmRNA表达与对照组相似;感染后4周,脾组织治疗组脾组织IFN-γmRNA的表达高于对照组。感染后3周和4周,IL-10mRNA和IL-4mRNA的表达低于对照组。结论 BCG—PSN可减轻结核病小鼠体重下降,减少结核病小鼠肺和脾脏结核菌数量,并增强Th1型免疫反应。     

icl mRNA特异性10-23DRz在小鼠体内抗结核分枝杆菌感染的实验研究

目的探讨iclmRNA特异性10-23脱氧核酶(deoxyribozyme,DRz)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)在小鼠体内感染的影响,及其单独或与异烟肼(isoniazidum,INH)联合应用治疗小鼠结核病的效果。方法分别用DZ4、INH、INH+DZ4-S或INH+DZ4对Mtb进行预处理,再用上述经过预处理的Mtb感染BALB/c小鼠,一定时间后进行小鼠肺组织Mtb培养及病理学改变观察。利用DZ4-FITC溶液对BALB/c小鼠进行滴鼻处理,检测滴鼻途径给药的效果。采用尾静脉注射法建立小鼠结核病模型,将模型小鼠随机分为5组(n=10),分别给予生理盐水、DZ4、INH、INH+DZ4、INH+DZ4-polyG治疗,于治疗完成2周后进行小鼠肺组织Mtb荷菌量检测和病理学改变观察。结果Mtb感染后2周,各组小鼠的肺组织荷菌量均无显著性差异(P>0.05)。感染进行至4～12周时,INH+DZ4预处理组Mtb感染小鼠的肺组织荷菌量较其它各组均显著偏低(P<0.05),肺组织的病理改变较其他各组也明显轻微。经滴鼻途径给予DZ4-FITC溶液4h后,小鼠肺组织冰...     

Ipr1重组卡介苗对小鼠结核病的治疗效果

目的 评估携带小鼠胞内病原体抗性基因1(intracellular pathogen resistance 1,Ipr1)质粒(pBOGI)的重组卡介苗(BCG)对结核分枝杆菌(Mtb)感染的治疗效果.方法 BALB/c小鼠30只,随机分为3组:分别滴鼻给予磷酸盐缓冲液(PBS)、BCG和重组BCG,2周后用人型Mtb H_(37),Rv标准株感染所有小鼠;感染后分别用PBS、BCG和重组BCG治疗7次;末次治疗后处死小鼠,检测肺脾荷菌量,肺脾脏器指数,血清IFN-γ、IL-10及TNF-α分泌水平和肺脾组织中Ipr1的表达,同时观察小鼠肺脾组织病理改变情况.结果 重组BCG组肺脾荷菌量比PBS组和BCG组显著降低(P<0.01);重组BCG组肺脾脏器指数比PBS组和BCG组显著降低(P<0.05);重组BCG组血清IFN-γ分泌水平比PBS组和BCG组显著升高(P<0.01).用免疫组化检测到小鼠肺睥组织中有Ipr1表达.PBS组肺组织病理改变以渗出为主,病变广泛;重组BCG组肺部病变最轻,肺泡结构基本正常;BCG组病变范围局限,病变程度界于PBS组与重组BCG组之间;各组间比较脾脏病理改变不明显.结论 携带小鼠Ipr1基因的重组BCG对结核分枝杆菌感染有一定的治疗作用.     

重组耻垢分枝杆菌经鼻粘膜免疫在小鼠体内的分布与表达

目的：探讨携带编码人天然颗粒溶素（GLS）和小鼠IL-12基因质粒（pZM03）的重组耻垢分枝杆菌经鼻粘膜免疫在小鼠体内的分布与表达。方法：将携带绿色荧光蛋白（GFP）基因质粒（pUV15）的重组耻垢分枝杆菌滴鼻BALB／c小鼠后2周，处死小鼠，观察肺、脾组织中荧光蛋白和耻垢分枝杆菌的分布；将携带GLS和IL-12质粒（pZM03）的重组耻垢分枝杆菌滴鼻免疫BALB／C小鼠3次，第1次免疫后4周，处死小鼠，用免疫组化检测肺、脾组织中GLS表达，用ELISA检测血清IL-12和肺泡灌洗液特异性SIgA的水平。结果：在BALB／c小鼠肺、脾组织中均检测到绿色荧光蛋白和耻垢分枝杆菌的分布，以及GLS的表达，并有血清IL-12水平升高和粘膜特异性SIgA的产生。结论：携带GFP的重组耻垢分枝杆菌可在肺和脾组织分布；携带GLS和IL-12的重组耻垢分枝杆菌经鼻粘膜免疫小鼠后，可引起呼吸道粘膜特异性抗菌免疫，以及GLS和IL-12的体内表达，为新型疫苗的研究奠定了基础.     

MPT64 DNA疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

目的:研究MPT64 DNA疫苗对鼠结核杆菌感染的免疫保护效果.方法:C57BL/6小鼠36只,随机分为4 组.A组(PBS)、B组(pcDNA3.1)、C组(BCG)、D组(pcDNA/MPT64);分别于胫前肌注射质粒DNA免疫,70 μg/次,1次/2 wk,共3次.末次免疫后5 wk用106 CFU H37Rv经尾静脉攻击,攻击后6 wk处死小鼠,测血清总IgG,特异性脾淋巴细胞增殖实验、IFN-γ及IL-4分泌水平.作脾、肺组织荷菌量和病理学检查以及观察小鼠存活时间.结果:MPT64基因疫苗诱导小鼠特异性IgG的产生、脾淋巴细胞增殖以及IFN-γ的分泌.MPT64 DNA免疫组肺、脾组织荷菌量,病理学改变和小鼠存活时间明显优于阴性对照组.结论:MPT64 DNA疫苗在抗结核分枝杆菌(Mtb)感染过程中具有一定免疫保护作用.     

融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌诱导小鼠的免疫应答及其保护力

目的研究融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌诱导的小鼠体液和细胞免疫应答水平。方法以106CFU/0.1 mL重组M.S通过尾静脉途径免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原,用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。取部分免疫小鼠脾淋巴细胞,体外用ESAT6-CFP10融合蛋白刺激后,以MTT比色法检测淋巴细胞增殖反应,同时检测免疫小鼠IFN-γ和IL-2水平及脾细胞杀伤效应。结果融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶6 400。淋巴细胞刺激增殖指数为2.8,明显高于生理盐水组(0.90);IFN-γ和IL-2的含量分别为2230±11 pg/mL和221±17 pg/mL,显著高于生理盐水对照组,但不及BCG免疫组;同时重组耻垢分枝杆菌诱导的脾细胞杀伤率为45%。结论融合表达ESAT6-CFP10蛋白的重组耻垢分枝杆菌能诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答,可作为结核新型疫苗使用。     

靶向递送人颗粒溶素与小鼠单链IL-12真核共表达质粒耻垢分枝杆菌的构建及鉴定

目的:构建携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠单链IL-12基因的真核共表达载体pZM03,并构建可将其靶向递送入巨噬细胞中进行表达的重组耻垢分枝杆菌菌苗.方法:将人GLS,小鼠单链IL-12基因和分枝杆菌复制子OriM同时克隆进多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中,得到穿梭质粒pZM03.以pZM03电转化耻垢分枝杆菌mc2-155,通过PCR方法检测重组菌中携带的真核共表达质粒;通过与小鼠巨噬细胞株RAW264.7共孵育检测重组菌的靶向性.结果:成功得到了可靶向递送GLS/IL-12真核共表达质粒pZM03进入巨噬细胞的新型重组菌.结论:利用耻垢分枝杆菌作为减毒生物体载体向巨噬细胞中靶向递送真核表达质粒是可能的.     

克拉霉素联合地塞米松对肺炎支原体感染小鼠干扰素-γ、白介素-4表达的影响

目的：研究克拉霉素联合地塞米松对肺炎支原体（MP）感染小鼠干扰素-γ（IFN-γ）和白介素-4（IL-4）的影响.方法：用MP菌液建立肺炎支原体小鼠模型,将造模成功的小鼠分为模型对照组、克拉霉素组、联合干预组和地塞米松组,每组18只,分别注射5％生理盐水、克拉霉素、克拉霉素联合地塞米松以及地塞米松进行干预;测定并比较各组小鼠肺组织病理评分以及干预后第3、5及8天肺泡灌洗液IFN-γ、IL-4的含量.结果：联合干预组各时点肺组织病理学评分均较低,差异无统计学意义（P＞0.05）;克拉霉素组第3天肺组织病理学评分较高,第5天后明显下降;不同组别各时间点肺泡灌洗液IFN-γ、IL-4比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;第3天联合干预组IFN-γ含量最低,第5和第8天各治疗组IFN-γ含量均升高,联合干预组与克拉霉素组、模型对照组IFN-γ比较,差异具有统计学意义（P＜0.05）;联合干预组IL-4含量降低,与模型对照组及地塞米松组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：克拉霉素联合地塞米松治疗可降低MP感染小鼠IL-4的水平,升高IFN-γ水平,调节免疫反应.     

Ag85B-MPT64融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护作用

目的 研究Ag85B-MPT64(AM)融合基因疫苗对鼠结核分枝杆菌感染的保护效果。方法C57BL／6小鼠63只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)、空质粒、卡介苗(BCG)、pcDNA／Ag85B、pcDNA／MPT64、pcDNA／Ag85B pcDNA／MPT64、pcDNA／AM组,采用肌肉注射法免疫小鼠,0、3、6周各1次,BCG组只在0周予皮内注射卡介苗1次。末次免疫后第5周用H37Rv经尾静脉注射实施攻击,攻击后6周处死部分小鼠,测血清总IgG,特异性脾淋巴细胞增殖、IFN-γ及IL4分泌水平;观测脾、肺组织荷菌量和病理学检查以及剩余小鼠的存活时间。结果 AM基因疫苗组诱导的特异性的IgG、脾淋巴细胞增殖和IFN-γ的分泌以及肺、脾组织荷菌量、病理学改变和小鼠存活时间明显优于其他DNA疫苗单独免疫组。结论 AM DNA疫苗在抗结核分枝杆菌感染过程中具有明显的免疫保护作用。     

黄葵素对结核分枝杆菌的抑杀作用研究

目的评价黄葵素(huangkuisu,HKS)抗结核分枝杆菌的活性。方法①采用人型结核分枝杆菌标准菌株(H37RV)、多药耐药结核菌株,分别接种于含有不同浓度黄葵素、空白对照和阳性药物的结核菌培养基,观察结核分枝杆菌的生长情况,评价其体外抗菌活性。②尾静脉注射一定数量的结核分枝杆菌标准株H37Rv和耐药株菌液,建立小鼠结核分枝杆菌感染模型。随机将模型小鼠分成利福平治疗组、黄葵素治疗组,持续治疗6周,对照组给予生理盐水治疗。以各组小鼠的肺组织和脾组织病理变化、组织荷菌量,比较各组治疗效果,评价其体内抗菌活性。结果①模型组菌落生长情况正常,黄葵素(100 mg/mL)、利福平(5 mg/mL)组结核分枝杆菌(H37RV)培养终止期未见菌落生长;恢复培养40 d仍无结核菌生长。黄葵素在100 mg/mL时显示出对临床多耐药株的较好的抑杀作用,与利福平组比较,各时间点均显示出统计学意义(P<0.05)。②结核杆菌H37Rv感染小鼠,各治疗组肺组织和脾组织的病理变化较轻,肺和脾组织荷菌量明显降低,与模型对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结核杆菌耐药株感染小鼠黄葵素治疗组小鼠组织器官的病理变化较轻,肺组织和脾组织的荷菌量明显减少,与利福平组、模型对照组比较有统计学意义(P<0.05)。结论黄葵素在体内外对结核杆菌有抑杀作用,可以作为治疗耐药株感染的候选药物进一步研究。     

笑肌、颧大肌、颧小肌的测量

目的探讨与笑相关的笑肌、颧大肌、颧小肌的解剖学规律 ,为颜面部整形美容提供解剖学依据。方法选取正常成年尸体 3 0例 ,解剖观察笑肌、颧大肌、颧小肌的形态 ,并测量其长度与夹角。结果颧大肌起自颧骨前面 ,止于口角皮肤 ,颧小肌起自颧骨 ,止于鼻唇沟下部附近皮肤 ,笑肌起自腮腺咬肌筋膜 ,止于口角皮肤 ;颧大肌、颧小肌、笑肌长依次为 5 5 .2± 2 .3mm、5 2 .3± 1 .8mm、5 0 .1± 1 .6mm ;笑肌、颧大肌、颧小肌长径与口裂间以及笑肌与颧大肌间的夹角依次为 8.9± 1 .1、3 2 .6± 1 .8、40 .1± 2 .5、2 4.6±2 .7度。结论为临床颜面部整形美容提供了解剖学依据     

气滞血瘀证与血浆中分子物质关系的初步观察 附:54例观察报告

采用第一军医大学改进的紫外吸收法,对照观察了气滞血瘀证和健康受试者血浆中分子物质的含量。结果表明:两组血浆中分子物质含量之差异,具有高度统计学意义(P<0.01),提示气滞血瘀组M.M.S含量高于健康正常组,认为:经过进一步研究,有可能将M.M.S的测定,作为气滞血瘀证的诊断指标。