浙江地区原发性免疫缺陷病患儿永生化B淋巴细胞系的建立

目的 利用EB病毒转化人外周血B淋巴细胞,建立浙江地区原发性免疫缺陷病患儿永生化B淋巴细胞系.方法 利用B95-8细胞常规制备EB病毒上清,用环孢菌素A法转化外周血B淋巴细胞.结果 成功建立15例原发性免疫缺陷病患儿永生化B淋巴细胞系,转化后细胞增殖活跃.结论 EB病毒加环孢菌素A能成功转化外周血B淋巴细胞为永生化B淋巴细胞系,为进一步研究原发性免疫缺陷病的分子遗传机制和细胞遗传机制提供了实验材料.     

应用微量冻存法建立EB病毒转化脐带血淋巴母细胞系

目的 应用微量冻存法建立EB病毒(EBV)转化脐带血淋巴母细胞系(LCLs),为永久保存具遗传疾病的脐带血资源提供研究基础.方法 知情同意下收集妊娠中期至晚期终止妊娠的20例孕妇脐带血样本,采用微量冻存法,通过EBV转化获得脐带血LCLs,冻存复苏后,染色体G显带分析,检测建系前后的核型稳定性.结果 20例样本中19例成功进行微量冻存法转化,成功率95%,转化成功的脐带血LCLs冻存后复苏成功率达100%.除1例因胎儿为水肿胎失败外,19例脐带血样本均可在10 d左右观察到淋巴细胞增大呈母细胞化,增殖的淋巴母细胞凝聚成团,6~8周后可获得稳定生长的脐带血LCLs,转化前后的淋巴细胞染色体核型无明显差异.结论 应用微量冻存法可成功建立脐带血LCLs,EB病毒转化的脐带血LCLs细胞遗传学特性稳定,可用于进一步的遗传学研究.     

从急淋白血病病人建立的细胞系

Nilsson和Ponten报导,大多数建立的淋巴母细胞样细胞系的形态和生长特性相类似,有B细胞标志,并含有EB病毒或其基因。我们于1980年从一例急性淋巴细胞型白血病患儿外周血白细胞建立了一个细胞系,具B细胞标志,现报导于下。     

人B淋巴母细胞系体外培养方法的优化及其影响因素

目的探讨体外建立健康人外周血B淋巴母细胞样细胞系（B-LCLs）的优化方法及其影响因素。方法用EB病毒感染健康人外周血中分离的单个核细胞（PBMC）,加入CD40激发型抗体（5C11）、CpGDNA免疫调节基因序列以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A（CysA）抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察B-LCLs的形态特征,利用流式细胞术分析B-LCLs膜表面分子CD19的表达水平。结果PBMC经EBV感染3周后转化成永生化B-LCLs。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。CD40激发型抗体（5C11）及CpG免疫调节基因序列联合EBV感染人PBMC,明显地提高了转化效率,转化后的LCLs保持了成熟B淋巴细胞的生物学特征。结论CD40信号激发和CpG免疫调节基因序列联合运用能有效地促进EBV对人B淋巴细胞的转化及体外建系。     

肾综合征出血热患者B淋巴母细胞系的建立方法及意义

目的 :探讨EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞的最佳方法 ,为进一步研究肾综合征出血热 (HFRS)患者的细胞免疫功能奠定基础。　方法 :采用环孢素A(CsA)法、微量全血法和冻存全血法三种方法建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) ,比较建立细胞系成功率和所用时间。　结果 :EBV成功转化后的B LCL ,其体积增大并永生化 ,进而增生的淋巴细胞积聚成团。CsA法、微量全血法和冻存全血法转化的成功率分别为 73.3%、2 6 .7%和 4 6 .7%。　结论 :CsA法成功率高 ,建立细胞系所用时间短 ,是建立B LCL的最佳选择。     

肾综合征出血热患者永生化B淋巴母细胞系的建立

目的 建立肾综合征出血热患者永生化的B淋巴母细胞系，为进一步研究汉滩病毒感染者的细胞免疫功能奠定基础。方法 自HFRS患者血液中分离外周血单个核细胞(PBMC)，再用EB病毒感染PBMC，同时加入环胞素A(CysA)。结果 20例血样标本经EBV感染4周左右，形成了15例永生化B淋巴母细胞系。成功转化后的B淋巴母细胞系，其体积增大，进而增殖的淋巴细胞积聚成团。结论 永生化的B淋巴母细胞系可传代培养。冻存复苏后细胞增殖活性并无改变。     

人单克隆抗体的制备

制备人单克隆抗体(以下简称单抗)涉及EB病毒转化技术、抗原特异的B淋巴细胞的6一硫代鸟傈吟(6一TGr)抗性人浆细胞瘤或淋巴母细胞与免疫的人淋巴细胞融合技术,或两者相结合。 EB病毒转化抗原待异B细胞的方法最早由Steinitz等于1977年提出,EB病毒为多克隆刺激剂,可使少数抗原特异B细胞前体融合克懂扩增,带有EB病毒受体的小B淋巴细胞,体外经EB病毒感染     

贵州布依族淋巴母细胞永生细胞株的研究

目的建立和保存贵州布依族B淋巴母细胞株.方法采用EB病毒转化外周血B淋巴细胞,同时加环孢霉素A法.结果建立了7株永生细胞,供血者身体健康且三代均为布依族.结论建立永生细胞株可长期保存布依族独特的基因组,为民族起源、演进及遗传多样性等研究提供细胞资源.     

HFRS患者汉滩病毒特异性CTL克隆靶细胞的建立及意义

目的:建立肾综合征出血热(HFRS)患者汉滩病毒(HTNV)核衣壳蛋白(NP)特异性CTL克隆的靶细胞.方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞(PBMC),并用EB病毒(EBV)转化B淋巴细胞,建立B淋巴母细胞样细胞系(B-LCL).然后,用含HTNVS基因的重组痘苗病毒(rVV)转染B-LCL,间接免疫荧光(IFA)检测NP的表达,并用HTNV特异性T细胞克隆对转染rVV的B-LCL进行细胞毒杀伤实验.结果:B淋巴细胞经EBV感染4wk左右,可形成B-LCL.HTNV-S基因在B-LCL中能有效表达NP,且能被HTNV特异性T细胞克隆识别.结论:成功建立了HFRS患者永生化B-LCL.含HTNVS的基因重组痘苗病毒转染的B-LCL可用作HTNV特异性CTL克隆的靶细胞.     

糖尿病B淋巴细胞株超微形态

电镜观察了8例 EB 病毒转化的糖尿病患者 B 淋巴细胞株和2例正常人 B 淋巴细胞。见糖尿病 B 淋巴细胞株的细胞与 PHA 刺激转化的淋巴母细胞以及 EB 病毒引起的 Burkitt 淋巴瘤细胞明显不同.而与文献报道的携带 EB 病毒的二倍体 B 淋巴细胞类似。但糖尿病 B 淋巴细胞株的细胞明显呈多形性.而且分裂增殖和运动更活跃,并具有吞噬活性.     

不同转移倾向肿瘤亚株细胞内的微核观察

为了探讨恶性肿瘤转移与微核现象间的关系,本实验首次运用微核试验(MT)检测了小鼠腹水型肝癌(N_(22))及其肺转移倾向亚株(H_(22)SP_(10))、淋巴结转移倾向亚株(N_(22)SL_(10))。小鼠子宫颈癌(U_(14))及其肺转移倾向亚株(U_(14)AP_(11))瘤细胞内的微核。比较了经活体筛选的上述亚株与未经筛选的原瘤株的微核细胞率(MNF)、总微核率,结果上述两项指标H_(22)SP_(10)及H_(22)SL_(10)均显著高于H_(22)(P值分别为<0.002、<0.005;<0.005、<0.001);U_(14)AP_(11)也显著高于U_(14)(P分别为<0.001、<0.001),而H_(22)SL_(10)与H_(22)SP_(10)(P>0.05、>0.05)。它表明在异质性N_(22)及U_(14)细胞群体中具有器官倾向性转移的细胞染色体畸变较重,可能为肿瘤演进的结果。     

双胸蚯蚓溶栓酶对沙鼠缺血额叶皮质超微结构及离子的影响

采用结扎沙土鼠双颈总动脉20分钟后恢复血流制做脑缺血再灌注模型。应用透射电镜对额叶皮质超微结构进行观察,并采用电镜能谱技术对神经元随机检测Na~十Ca~卄等离子含量。结果表明,缺血的对照组神经元Na~十明显增高达16.43,而缺血后腹腔注入双胸蚯蚓溶栓酶的实验组显著下降为13.02,接近正常组的11.47;Ca~卄正常组为1.03,对照组增高达3.81,而实验组下降为2.44。同时实验组超微结构的损伤性改变明显轻于对照组。     

大豆皂甙和人参茎叶皂甙对糖尿病大鼠血SOD和LPO的影响

本实验取雄性Wistar大鼠,分四组,即正常组,糖尿病组(DM组),人参茎叶皂甙(GS)+DM组(简称GS组),大豆皂甙(SS)+DM组(简称SS组)。观察其血糖、SOD、LPO的变化,结果,DM组血糖明显升高,GS组和SS组,血糖明显下降。DM组SOD含量明显减少,GS和SS使DM大鼠的SOD含量明显增加。DM组LPO含量增高,而GS组和SS组的LPO含量均明显降低。提示了GS和SS能通过自身调节增加DM大鼠SOD的含量,降低LPO,清除自由基,减轻了自由基的损伤作用,对DM大鼠有一定的防治作用。     

高效液相 (HPLC) 荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度

 目的  建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)。方法  血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2-羧乙基)膦盐酸盐［tris-(2-carboxyethyl)-phosphine hydrochloride,TCEP］还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7-氟苯呋咱-4-硫酸铵盐(7-fluorobenzofurazan-4-sulfonic acid ammonium salt,SBD-F)进行衍生化反应,荧光检测器检测。色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温29 ℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5∶96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱。激发波长385 nm,发射波长515 nm。采用外标法定量。结果  Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50~800 μmol/L、4~64 μmol/L、10~160 μmol/L和2.5~40 μmol/L。Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L。各组分日内、日间精密度RSD均<12 %。平均回收率为95.01 %~116.17 %。结论  该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测。     

高效液相色谱法检测人血浆中咖啡因及其3种去甲基代谢产物

以８－氯茶碱作为内标，利用高效液相色谱同时测定人血浆中咖啡及其３种去甲基代谢产物－－副黄嘌呤、可可碱和茶碱的方法。这４种物质可以在一个固定相柱子上被同时分离；流动相为甲；０．１ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠（３０：７０）（Ｖ／Ｖ）；流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ；紫外检测器，波长２７４ｎｍ。实验表明这４种物质的最小检出量均在７５ｎｇ／ｍｌ，并具有较好的线性、重复性及较高回收率。     

5种生物碱胃癌多药耐药逆转剂的筛选及机制研究

目的 研究骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱对肿瘤细胞多药耐药性（MDR）的逆转作用及机制。方法 以胃癌亲本细胞系SGC-7901和MDR细胞系SGC-7901/VCR为细胞模型,采用MTT法检测上述5种生物碱的细胞毒活性及对MDR的逆转效果;用流式细胞仪检测MDR逆转效果最好的贝母素乙对肿瘤细胞内阿霉素（ADR）蓄积的影响;Western blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）的表达;Hoechst荧光染色和细胞免疫荧光法检测贝母素乙诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡情况。结果 骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱、贝母素甲、贝母素乙和氧化苦参碱均能不同程度地抑制SGC-7901和SGC-7901/VCR细胞的增殖,在非毒剂量下贝母素乙能够显著提高SGC-7901/VCR细胞对ADR的敏感性及细胞内ADR的浓度,降低P-gp表达。贝母素乙联合5-氟尿嘧啶（5-FU）给药可诱导SGC-7901/VCR细胞凋亡,凋亡细胞cleaved caspase-3呈高表达。结论 贝母素乙具有作为胃癌MDR逆转剂的潜力,其逆转耐药的机制可能与下调P-gp表达和诱导细胞凋亡有关。     

不同转移倾向小鼠肝癌瘤株与冰切组织体外作用的实验研究

本实验利用小鼠腹水型肝癌(H_(22))的肺转移倾向亚株(H_(22)SP_(10))与淋巴结转移倾向亚株(H_(22)SL_(10))和小鼠的心、肺、肝、肾、淋巴结冰切组织于体外混合培养,观察了不同转移能力的肿瘤细胞与正常组织间的相互作用。于混合培养24、48h后,计数冰切组织上粘附的肿瘤细胞,肝、肾、淋巴结上粘附的H_(22)细胞多于其它脏器。H_(22)SP_(10)主要粘附于肝、肾、肺,而H_(22)SL_(10)则主要粘附于淋巴结,几乎不粘附于肺组织。混合培养后的生长曲线表明加入的正常组织对三种瘤细胞生长具有不同作用,加入的五种组织对H_(22)生长均有促进作用,加入心、肝、肾组织使H_(22)SP_(10)细胞于培养48h之前呈递增趋势,而加入肺、淋巴结组织使H_(22)SP_(10)细胞生长数低于对照组,加入心脏组织96h后H_(22)SL_(10)细胞数开始高于对照组,而加入其它组织均使H_(22)SL_(10)细胞数低于对照组。该结果表明在活体中呈器官倾向性转移的瘤细胞在体外具有与相应组织特异性粘附的能力,而且这些细胞与不同宿主组织间存在不同相互作用。     

反相高压液相色谱与荧光分光光度计朕机检测儿茶酚胺类物质

本文就高效液相与荧光分光光度计联机检测多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素的方法加以论述。     

孕周与母儿血甲状腺激素含量的关系

目的：观察不同孕周与母儿血甲状腺激素的关系。方法：应用放射免疫分析法对67例中、晚期妊娠要求引产患者，10例早产及78例孕足月自然分娩患者进行了母血及胎儿脐静脉、脐动脉血中TSH、T3、T4的测定。结果：TSH值在母血及胎儿血中随着孕周的增加而增加．T3值在胎儿血中与母血中比较，显示低T3血症，T4值接近正常母体水平。结论：测定母血中的甲状腺激素，可动态观察不同孕周甲状腺激素变化，可及时发现胎儿低甲血症。     

胰岛素降糖反应延迟机理的初步探讨

本文对10例IDDM病人皮下注射胰岛素后作了7.5小时动态观察,测定了BG、FI、G、F和GH。基础BG高者,胰岛素最大降糖作用延迟,降糖过程中,GH的升糖效应最敏感,G和F升高与血糖回升时间相一致,在BG高者,呈延迟反应。这种延迟反应可能是由于血糖高,使到达刺激后二种升糖激素分泌阈值所需的时间延长有关。