内质网甘露糖甙酶-I样蛋白的研究进展

内质网甘露糖苷酶-I样蛋白（EDEM）是受内质网应激诱导之后，启动内质网相关糖蛋白降解（GERAD）途径发生的一种有酶结构域但无酶活性的蛋白。现就EDEM编码基因及其蛋白质的结构与功能解析、EDEM参与的GERAD途径，特别是EDEM的作用机制及诱导调控等诸方面予以综述。     

内质网应激干预与神经系统疾病治疗前景

内环境稳定是内质网生理功能实现的基础,氧化应激反应、同型半胱氨酸增加、Ca~(2+)稳态失衡引发内质网应激(ERS)。ERS包括未折叠蛋白反应、内质网超负荷反应、胆固醇调节级联反应。目前发现经内质网途径引发的细胞凋亡与多种疾病的发生发展均存在关系。近年来,ERS途径引发细胞凋亡成为医学科研热点,研究ERS、细胞凋亡可以为疾病治疗提供新的思路。     

顺铂诱导人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激差异的研究

目的研究顺铂诱导人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞内质网应激的差异。方法顺铂分别作用SKOV3组、SKOV3/DDP组细胞0 h、12 h、24 h。MTT检测两种细胞对顺铂敏感性差异;Western blot方法检测并比较内质网应激相关蛋白表达;RT-PCR方法检测顺铂对各时间点细胞的XBP-1表达。结果顺铂诱导两种细胞内质网应激存在显著差异。顺铂引起SKOV3细胞中内质网应激相关蛋白明显活化;而对SKOV3/DDP细胞中内质网应激相关蛋白没有明显影响;顺铂诱导SKOV3/DDP中XBP-1明显表达上调。结论顺铂诱导的内质网应激相关基因的表达差异可能是卵巢癌细胞耐药机制之一。     

内质网应激凋亡信号途径在脓毒症脾淋巴细胞凋亡中的作用研究

目的 研究内质网应激凋亡信号途径在脓毒症脾淋巴细胞凋亡中的作用.方法 24只C57BL/6小鼠被随机分为模型组和假手术(sham)组,每组12只.用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症动物模型,术后24 h处死动物后取脾脏,用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测脾淋巴细胞凋亡,用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的mRNA和蛋白表达.结果 CLP组脾淋巴细胞凋亡指数较sham组明显增加(52±17比5±3,P＜0.01);且CLP组GRP78和CHOP的mRNA和蛋白表达亦较sham组明显增加(GRP78 mRNA:0.807±0.122比0.314±0.107,CHOP mRNA:0.923±0.085比0.221±0.074;GRP78蛋白:5.216±1.351比2.733±0.421,CHOP蛋白:3.170±1.227比0.403±0.142,P均＜0.01).结论 脓毒症时脾淋巴细胞中存在内质网应激反应,并通过上调CHOP表达的机制诱导凋亡.     

NADPH氧化酶抑制剂对高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞中内质网应激的作用机制探讨

目的探讨在有或无还原型烟酰胺腺嘌呤核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂存在的条件下,高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞中内质网应激蛋白GRP78及凋亡蛋白caspase-12表达的变化,从细胞和分子水平探讨糖尿病肾病中氧化应激和内质网应激的相互作用机制。方法大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)培养,使用高糖(30mmol/L)DMEM培养基刺激NRK52E细胞24 h,荧光显微镜检测细胞内活性氧ROX的产生量,Western-blot检测细胞内内质网应激蛋白GRP78及凋亡蛋白Caspase12的表达;并且使用NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μM)预处理细胞,并观察其对细胞内ROX产生及GRP78和Caspase12蛋白的表达影响。结果高糖刺激24 h可明显增加细胞内ROS的产生,为正常对照组的2.5倍(P<0.05)。NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μΜ)预处理后,高糖诱导的细胞内ROS产生明显受到抑制,较高糖刺激刺激组降低了43.69%(P<0.05)。高糖刺激NRK52E细胞24 h后可,细胞内内质网应激蛋白GRP78蛋白表达显著上调,为正常对照组的5倍(P<0.05)。与正常对照组相比,高糖刺激组NRK52E细胞凋亡相关蛋白caspase12的表达也显著增加(P<0.05)。NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μΜ)预处理后并高糖刺激NRK52E细胞24 h,与高糖刺激组相比,DPI处理组NRK52E细胞内质网应激蛋白GRP78表达显著下调(P<0.05),凋亡相关蛋白caspase12的表达显著下调(P<0.05)。结论高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞后,细胞内发生氧化应激与内质网应激反应,并且氧化应激可能作为上游信号诱导细胞内内质网应激反应的发生,并最终导致细胞凋亡的发生。     

腺苷对人胃癌MGC-803细胞增殖与凋亡的影响

目的观察腺苷(adenosine)对人胃癌MGC-803细胞的增殖、凋亡的影响。方法 CCK-8法检测不同浓度腺苷(0.01~10 mmol/L)对胃癌MGC-803细胞增殖的影响。流式细胞仪检测腺苷(0.25、0.5、1 mmol/L)对细胞凋亡的影响。Western blot检测腺苷处理后细胞内凋亡相关蛋白和内质网应激相关蛋白的表达量。结果腺苷能抑制胃癌MGC-803细胞的活力,并且呈现浓度和时间依赖性(P0.05)。腺苷(0.25、0.5、1 mmol/L)处理24 h后,细胞的总凋亡率显著升高(P0.01)。腺苷可以引起凋亡相关蛋白Caspase-3活化片段的蛋白表达量上调(P0.01)。腺苷能诱导内质网应激(ERS)相关蛋白Caspase-4活化片段、p-JNK、CHOP、GRP78的表达量上调(P0.05)。结论腺苷可以抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,并且促进凋亡,而内质网应激可能参与了腺苷引起的凋亡。     

糖尿病发病与内质网应激

目的:内质网应激与多种疾病相关,越来越多证据表明,内质网应激及其信号通路参与糖尿病的发病。资料来源:应用计算机检索1997/2004NCBIPubmed(www.ncbi.nlm.nih.gov)和中国期刊网数据库(www.cnki.net),选择检索对象为动物及人,检索词分别为endoplasmicreticulumstress(内质网应激)anddiabetes(糖尿病)。资料选择:根据检索词从两大数据库中检索中文、英文相关文献。资料提炼:检索到相关外文文献35篇,排除其中3篇日文综述;内质网应激中文文献6篇,未查及内质网应激与糖尿病关系的中文文献。32篇探讨内质网应激与糖尿病关系的英文文献中12篇为综述,余为论著;6篇中文文献均为关于内质网应激的综述。资料综合:对选取的文献进行阅读、归纳和分析。①内质网应激在多种疾病中起重要作用。低氧、低血糖、毒物等能干扰内质网功能,引起内质网蛋白合成增加而致蛋白过度负荷或错误折叠。②一定程度的内质网应激如分子伴侣表达能保护细胞免于损伤;若应激过强,保护机制不能与损伤相抗衡,则激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶及生长静止/DNA损伤诱导蛋白-153等而诱致细胞发生凋亡。③内质网的稳态与胰岛β细胞功能状态相关,内质网应激既是细胞抵抗应激的生理反应,又是应激造成细胞损伤的重要机制。结论:胰岛β细胞含有丰富的内质网,是胰岛素的合成部位。分泌胰岛素的胰岛β细胞对内质网应激尤为敏感,胰腺内质网激酶-磷酸化细胞外信号调节激酶及其下游的真核细胞启动因子-2能调控胰岛β细胞的形成及其功能。     

内质网应激与肿瘤细胞的凋亡

内质网（endoplasmic reticulum,ER）是重要的细胞器,是蛋白质合成、折叠、组装和钙离子储存等的场所。多种生理和病理条件下,如缺氧、氧化还原状态的改变等可干扰内质网的功能,并引起未折叠蛋白在ER中堆积,产生内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）。虽然ERS可诱导细胞的生存,然而长时间过强的ERS可诱导细胞凋亡,即内质网应激反应性凋亡。     

内质网应激相关蛋白1对衣霉素诱导HepG2细胞内质网应激的影响

目的研究过表达内质网应激相关蛋白1(SERP1)对衣霉素诱导肝癌HepG2细胞内质网应激的影响。 方法以衣霉素诱导HepG2细胞发生内质网应激,将细胞分为以下5组：正常对照组、衣霉素组、衣霉素＋0.25μg SERP1转染组、衣霉素＋0. 5μg SERP1转染组和衣霉素＋1.0μg SERP1转染组,每组实验重复3次;采用MTT法检测不同浓度与作用时间的衣霉素对HepG2细胞存活率的影响,以吸光度(A)值表示。Western blot法检测各组细胞内内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)以及钙联蛋白的表达水平。采用SPSS 15.0统计软件进行统计学分析,比较蛋白表达水平。 结果与对照组相比,衣霉素处理组HepG2细胞中内质网应激标志性蛋白GRP78、CHOP及Calnexin蛋白表达量显著升高,分别为对照处理组的3.8倍(t＝11.5,P<0.05)、1.3倍(t＝3.498,P<0.05)和1.4倍(t＝4.1,P<0.05),差异均有统计学意义;随着SERP1过表达量的逐渐升高,变化呈现剂量依赖性。随着SERP1转染剂量的增加,各组GRP78蛋白的表达较单独衣霉素处理组分别下降了12%[(1.83±0.29)A值,(1.61±0.13)A值,t＝2.36,P>0.05]、24%和30%[(1.83±0.29)A值,(1.40±0.11)A值,(1.27±0.21)A值;F＝50.56,P<0.05],CHOP蛋白的表达水平分别下降了23%, 29%和34%[(1.0±0.15)A值,(0.79±0.07)A值,(0.72±0.55)A值,(0.67±0.14)A值;F＝9.532,P<0.05],Calnexin蛋白的表达水平分别下降了5%[(1.20±0.18)A值,(1.15±0.13)A值;P>0.05]、24%和28%[(1.20±0.18)A值,(0.92±0.07)A值,(0.87±0.18)A值;F＝8.116,P<0.05]。 结论外源性过表达SERP1蛋白通过下调内质网应激蛋白的表达,降低HepG2细胞内质网应激水平,缓解内质网应激介导的细胞损伤。     

糖尿病发病与内质网应激

目的内质网应激与多种疾病相关,越来越多证据表明,内质网应激及其信号通路参与糖尿病的发病. 资料来源应用计算机检索1997/2004NCBI Pubmed(www.ncbi.nlm.nih.gov)和中国期刊网数据库(www.cnki.net),选择检索对象为动物及人,检索词分别为endoplasmic reticulum stress(内质网应激)and diabetes(糖尿病). 资料选择根据检索词从两大数据库中检索中文、英文相关文献. 资料提炼检索到相关外文文献35篇,排除其中3篇日文综述;内质网应激中文文献6篇,未查及内质网应激与糖尿病关系的中文文献.32篇探讨内质网应激与糖尿病关系的英文文献中12篇为综述,余为论著;6篇中文文献均为关于内质网应激的综述. 资料综合对选取的文献进行阅读、归纳和分析.①内质网应激在多种疾病中起重要作用.低氧、低血糖、毒物等能干扰内质网功能,引起内质网蛋白合成增加而致蛋白过度负荷或错误折叠.②一定程度的内质网应激如分子伴侣表达能保护细胞免于损伤;若应激过强,保护机制不能与损伤相抗衡,则激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶及生长静止/DNA损伤诱导蛋白-153等而诱致细胞发生凋亡.③内质网的稳态与胰岛β细胞功能状态相关,内质网应激既是细胞抵抗应激的生理反应,又是应激造成细胞损伤的重要机制. 结论胰岛β细胞含有丰富的内质网,是胰岛素的合成部位.分泌胰岛素的胰岛β细胞对内质网应激尤为敏感,胰腺内质网激酶-磷酸化细胞外信号调节激酶及其下游的真核细胞启动因子-2能调控胰岛β细胞的形成及其功能.     

糖尿病发病与内质网应激

目的：内质网应激与多种疾病相关，越来越多证据表明，内质网应激及其信号通路参与糖尿病的发病。资料来源：应用计算机检索1997／2004NCBI Pubmed（www．ncbi．nlm．nih．gov）和中国期刊网数据库（www．enki．net），选择检索对象为动物及人．检索词分别为endoplasmic reticulum stress（内质网应激）and diabetes（糖尿病）。资料选择：根据检索词从两大数据库中检索中文、英文相关文献。资料提炼：检索到相关外文文献35篇，排除其中3篇13文综述；内质网应激中文文献6篇，未查及内质网应激与糖尿病关系的中文文献。32篇探讨内质网应激与糖尿病关系的英文文献中12篇为综述，余为论著；6篇中文文献均为关于内质网应激的综述。资料综合：对选取的文献进行阅读、归纳和分析。①内质网应激在多种疾病中起重要作用。低氧、低血糖、毒物等能干扰内质网功能，引起内质网蛋白合成增加而致蛋白过度负荷或错误折叠。②一定程度的内质网应激如分子伴侣表达能保护细胞免于损伤；若应激过强，保护机制不能与损伤相抗衡，则激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶及生长静止／DNA损伤诱导蛋白-153等而诱致细胞发生凋亡。③内质网的稳态与胰岛β细胞功能状态相关，内质网应激既是细胞抵抗应激的生理反应，又是应激造成细胞损伤的重要机制。结论：胰岛β细胞含有丰富的内质网，是胰岛素的合成部位。分泌胰岛素的胰岛β细胞对内质网应激尤为敏感，胰腺内质网激酶-磷酸化细胞外信号调节激酶及其下游的真核细胞启动因子-2能调控胰岛β细胞的形成及其功能。     

高糖、高同型半胱氨酸致足细胞内质网应激时白藜芦醇对CHOP通路的影响

目的观察体外高糖、高同型半胱氨酸(high homocysteine,hHcy)以及高糖和hHcy共同环境下,小鼠肾小球足细胞内质网应激相关蛋白:葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)、转录因子CHOP/GADD153(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153)的表达,探讨高糖、hHcy及hHcy和高糖共同诱导足细胞凋亡的内质网应激相关机制,观察抗氧化剂白藜芦醇(Resveratrol,RES)对足细胞的保护作用。方法分化后的条件永生化小鼠足细胞分组:正常对照组、高渗组(glucose 5 mmol/L+甘露醇15 mmol/L)、高糖组(glucose 20 mmol/L)、hHcy组(hHcy 200μmol/L)、hHcy+高糖组(hHcy 200μmol/L+glucose 20 mmol/L)、混合+RES组(RES20μmol/L预干预半小时+hHcy 200μmol/L+glucose 20 mmol/L),作用24 h。流式细胞术AnnexinV-FITC/PI测定各组细胞凋亡率。real-time PCR、Western blot分析各组细胞GRP78、CHOP的表达。结果高糖组与hHcy组的凋亡率、GRP78、CHOP的mRNA及蛋白表达均高于正常组(P<0.05);hHcy+高糖组的上述指标分别与高糖组、hHcy组比较均显著升高(P<0.05);混合+RES组较hHcy+高糖组上述指标显著下降(P<0.05),差异均有统计学意义。结论高糖、hHcy体外能诱导足细胞凋亡,hHcy和高糖共同环境下对足细胞损伤及致凋亡作用更明显,提示两者有协同作用,内质网应激参与其凋亡机制之中,抗氧化剂白藜芦醇能抵抗高糖和hHcy诱导的足细胞凋亡,阻断内质网应激CHOP通路为其机制之一。     

硫化氢对急性肺损伤大鼠肺泡上皮细胞内质网应激的调节

目的 探索内源性硫化氢对于油酸诱导的急性肺损伤大鼠肺泡上皮细胞内质网应激的调节作用.方法 雄性Sprague Dawley大鼠随机(随机数字法)被分入正常对照组、油酸组、油酸+硫氢化钠组及硫氢化钠对照组.每个组进一步分为2、4和6h3个时间点.对肺组织进行肺组织损伤半定量评分,检测肺组织湿、干质量比和匀浆硫化氢含量.通过免疫组化染色和蛋白印迹法检测内质网应激的标志蛋白(GRP78和elF2α)的表达.结果 肺损伤大鼠肺组织损伤半定量评分及湿、干质量比明显升高,而肺组织硫化氢含量,肺泡上皮细胞GRP78及eIF2α的表达明显降低.在硫氢化钠预处理的大鼠中,肺损伤半定量评分及肺组织湿、干质量比明显降低,而肺组织硫化氢含量,肺泡上皮细胞GRP78及eIF2α的表达明显升高.结论 内源性硫化氢可以通过促进肺泡上皮细胞内质网应激反应进而在肺损伤过程中起到保护作用.     

内质网与细胞凋亡

内质网是细胞重要的细胞器,参与蛋白质合成、折叠和寡聚化,还参与脂质代谢、类固醇激素的合成、钙的储存等。内质网应激与细胞凋亡密切相关,现就内质网应激反应、内质网Ca^2＋水平的调节、内质网与Bcl-2家族蛋白及其与疾病的关系等方面进行综述。     

内毒素诱导肝细胞非经典途径分泌HMGB1

目的 探讨内毒素诱导肝细胞释放高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的胞内途径.方法 采用正常大鼠肝细胞BRL-3A培养,观察不同浓度的内质网-高尔基体途径抑制剂布雷菲德菌素A和核转录因子-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷对100μg/L脂多糖诱导后肝细胞培养上清液中HMGB1含量的影响.HMGB1含量采用酶联免疫吸附试验检测.结果 脂多糖诱导后肝细胞培养上清液中HMGB1含量明显升高(P＜0.01),2,10,50μmol/L布雷菲德菌素A处理对HMGB1含量没有影响,而10,50μmol/L二硫代氨基甲酸吡咯烷显著抑制HMGB1的胞外释放(P＜0.05).结论 内毒素诱导肝细胞HMGB1释放与核转录因子-κB通路有关,但不通过经典的内质网-高尔基体途径分泌.     

丹参素对缺氧/复氧诱导H9C2心肌细胞损伤和内质网应激的改善作用

目的观察丹参素(DLA)通过抑制内质网应激和凋亡对H9C2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后损伤的保护作用。方法将离体培养的H9C2心肌细胞随机分为3组:对照组、缺氧/复氧组(H/R组)、DLA+H/R组(DLA组)。H/R组先缺氧6h后复氧24h;DLA组于缺氧时给予DLA(10-6M)培养6h,再复氧24h。对照组心肌细胞正常培养至实验结束。ELISA测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)和丙二醛(MDA)的含量;Western blot检测细胞中内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Caspase-12、Bax、Bcl-2和SOD的蛋白含量。结果与对照组比较,H/R组细胞LDH、CK-MB和MDA的含量显著升高(P<0.05),GRP78、Caspase-12和Bax蛋白表达明显增加(P<0.05),而Bcl-2和SOD的蛋白含量明显降低(P<0.05);给予DLA可明显改善上述指标的变化。结论H/R可诱导H9C2心肌细胞发生凋亡、氧化应激和内质网应激,引起细胞损伤和凋亡;DLA可以通过抑制凋亡、氧化应激和内质网应激,减少细胞损伤,发挥保护细胞的作用。     

内质网应激与心肌缺血再灌注损伤

<正>内质网(ER)是胞质参与蛋白质折叠、加工、分泌及调节Ca2+储存、转运的多功能细胞器。内外环境改变可导致ER功能错乱,使其未折叠蛋白聚集、钙稳态破坏,导致内质网应激(ERS),它本身是一种自我保护机制,但过强或过久均会导致细胞死亡,从而对心肌缺血再灌注损伤(I/R)过程中多种反应起调节作用。本文就近年ERS在I/R中的研究进行综述,现报告如下。1内质网应激     

JNK通路在AngⅡ所致肾小球足细胞内质网应激性凋亡中的作用

目的研究内质网应激（ERS）在AngⅡ所致肾小球足细胞损伤中的作用及c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路在AngⅡ所致肾小球足细胞凋亡中的促进作用及其特异性抑制剂SP600125的保护。方法足细胞诱导分化,随机分为对照组（N组）;AngⅡ组（A组）;AngⅡ＋SP600125组（A＋S组）,作用48h后,倒置显微镜下观察足细胞形态变化,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量PCR测定GRP78mRNA、p-JNK mRNA表达,Western blot测定GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达。结果经统计学分析后,A组与N组比较,细胞凋亡率增加,GRP78mRNA、p-JNK mRNA的表达增多,且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达较N组增多,差异有统计学意义（P〈0.05）;A＋S组足细胞凋亡率、p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达较A组均有减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高AngⅡ可以在体外诱导足细胞发生凋亡。高AngⅡ诱导足细胞凋亡是由ERS途径所介导的,并通过了JNK途径引起细胞凋亡。JNK途径特异性抑制剂SP600125通过抑制c-Jun氨基末端激酶通路的激活抑制了足细胞的凋亡。     

内质网应激和肾损伤

内质网应激指大量未折叠蛋白在内质网聚集引发的一系列病理生理反应。内质网应激在肾脏病的发生机制研究中是一个相对较新的领域。越来越多的证据表明内质网应激参与了肾小球和肾小管损伤。这些研究表明内质网应激可能是肾脏病进展的重要机制之一,针对内质网应激的治疗方案也可能是一个突破性进展。文章以内质网应激为切入点,对内质网应激与肾损伤之间的联系进行综述。     

同型半胱氨酸对PC12细胞的作用及其机制研究

目的:研究同型半胱氨酸能否通过内质网应激的途径诱导多巴胺能神经元凋亡。方法:用不同浓度的同型半胱氨酸作用于经神经生长因子诱导的PC12细胞,以及同一浓度不同时间点的同型半胱氨酸干预PC12细胞,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR分析caspase-12表达的变化。结果:PC12细胞经同型半胱氨酸处理后发生凋亡,24h检测凋亡率呈浓度依赖性增高,经5mmol/L同型半胱氨酸处理的PC12细胞活力呈时间依赖性下降。随PC12细胞凋亡率增高和活力的下降,caspase-12表达同步增强。结论:同型半胱氨酸可以通过内质网应激途径诱导体外多巴胺能神经元细胞凋亡。