增液汤对2型糖尿病相关靶细胞治疗作用的拆方研究

目的 在细胞水平上对增液汤治疗2型糖尿病的药效作用进行拆方研究,分析其组方原理。方法 采用棕榈酸诱导建立HepG2肝癌细胞、C2C12骨骼肌细胞、3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗模型,给予增液汤及其拆方组处理后,通过测定2-NBDG的荧光强度来评价各组对细胞糖摄取的影响。借助胰岛素试剂盒来研究增液汤及其拆方组对葡萄糖刺激的MIN6胰岛细胞胰岛素分泌的影响。结果 增液汤中三味中药分别在不同的细胞模型上发挥促进糖摄取、胰岛素分泌的作用。在HepG2细胞上,三味药促进糖摄取的效果相差不大;在C2C12细胞上,君药玄参发挥显著促进糖摄取的作用;在3T3-L1细胞上,麦冬有显著的作用。在MIN6细胞上,君药玄参具有很好的促进胰岛素分泌的作用。结论 增液汤的整体药效通过方中三味药共同发挥,君药玄参相较于其他两味药做出的贡献更大,但臣药生地、麦冬的作用也不可或缺,说明增液汤的组方依据是合理的。     

降糖复方对脂性肝细胞损伤与高脂血症的保护作用

目的：研究降糖复方对脂肪酸诱导的HepG2细胞脂性损伤与鹌鹑高脂血症的保护作用。方法：采用高脂饲料诱导鹌鹑实验性高脂血症模型以及采用棕榈酸与油酸混合脂肪酸诱导HepG2细胞发生脂肪损伤变性,结合含药血清学,检测细胞与血清中TG、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力,以及血清中高密度脂蛋白胆固醇（HLD-C）含量;油红O染色,观察细胞内脂质聚集情况;检查鹌鹑动脉内膜病理变化。结果：降糖复方明显减少高血脂鹌鹑动脉内膜粥样硬化斑块和抑制内膜病变程度,降低HepG2细胞内脂质堆积,降低细胞与血清中TG、MDA的含量,并调节SOD活性。结论：降糖复方显著抑制细胞的脂质蓄积,减轻鹌鹑高脂血症和动脉粥样斑块的形成。     

基于网络药理学的“苍术-玄参”药对抗2型糖尿病作用机制研究

目的采用网络药理学方法研究苍术-玄参药对抗2型糖尿病的作用机制。方法通过检索中药系统药理数据分析平台(TCMSP),获得苍术、玄参主要活性成分和相关作用靶点,并借助Cytoscape 3.6.1软件构建苍术-玄参药对活性成分-靶点网络图。通过TTD数据库中检索抗2型糖尿病靶点,在STRING数据库进行蛋白质间相互作用分析,构建抗2型糖尿病靶点PPI网络图,利用Cytoscape 3.6.1软件中的Merge功能与活性成分-靶点融合,获得苍术-玄参药对抗2型糖尿病作用靶点。运用DAVID数据库对苍术-玄参药对抗2型糖尿病作用靶点进行KEGG通路富集,进一步研究苍术-玄参药对抗2型糖尿病作用机制。结果获得具有类药性、口服吸收良好的成分27个,苍术-玄参药对抗2型糖尿病作用靶点10个,包括PTGS2、DPP4、PTGS1、NR3C2等。KEGG分析得到与苍术-玄参药对抗2型糖尿病作用有关的通路6条,关键通路包括脂肪细胞脂解调控通路、PPAR信号通路、胰岛素抵抗、AMPK信号通路等。结论苍术-玄参中的活性物质主要通过作用于PTGS2、DPP4、PTGS1、NR3C2等靶点协同治疗2型糖尿病,为深入剖析苍术-玄参药对复杂体系,阐释其治疗2型糖尿病的潜在复杂作用机制提供了新方向。     

大蒜素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用

目的 观察大蒜素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用.方法 用不同浓度大蒜素处理对数生长期的人肝癌细胞HepG2.比色还原法检查4、8、16 h时HepG2细胞生长的抑制率;Hoechest荧光染色观察8 h时细胞形态的变化;JC-1检测40 mg/L大蒜素作用4 h后细胞线粒体跨膜电位的变化;免疫组化法检测经浓度为40 mg/L大蒜素作用4 h后其对细胞色素C的影响.结果 与无药阴性对照组比较,大蒜素能明显抑制HepG2细胞的增殖,且抑制率随浓度增加和作用时间延长而升高(P<0.01).Hoechst 33258荧光染色观察到细胞凋亡形态学特征.结论 大蒜素对人肝癌细胞株HepG2有明显的生长抑制作用,诱导人肝癌细胞株HepG2的凋亡.这可能与其通过线粒体途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放有关.     

基于中药血清化学与网络药理学筛选玄参质量标志物

目的：基于中药质量标志物（quality marker,Q-Marker） "五原则" ,结合中药血清化学与网络药理学,分析和预测玄参质量标志物。方法：采用液质联用技术鉴定玄参水煎液中化合物以及灌胃给药后大鼠血清中原型成分,经网络药理学预测原型成分主要作用靶点、通路,依据靶点、通路与玄参传统功效关联性,筛选出与传统功效密切相关的活性成分,并基于原型成分生源关系确定其特异性,综合研究结果确定玄参Q-Marker。结果：在玄参水煎液以及大鼠血清中分别鉴定出50个化合物和5个原型成分;网络药理学预测哈巴苷、哈巴俄苷和安格洛苷C调节糖脂代谢、保护血管的药理作用与传统功效联系更为密切。结论：哈巴苷、哈巴俄苷和安格洛苷C可作为玄参Q-Marker用于质量控制。     

鄂药挨姆末的化学成分及细胞毒作用研究

目的 研究鄂伦春族民族药挨姆末叶（Lonicera caerulea var.edulis）的化学成分及细胞毒作用。方法 用正相柱色谱、反相柱色谱、SephadexLH-20柱色谱、HPLC等现代色谱技术对挨姆末叶的提取物进行分离纯化,通过各种波谱技术结合理化性质鉴定化合物的结构,用HepG2细胞模型评价样品的细胞毒作用。结果 从鄂药挨姆末叶中分离得到12个化合物,分别鉴定为ferna-7,9(11)-diene-3α,16α-diol(1);3β,23-dihydroxy-olean-12-en-28-oic acid(2);2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)-propane-1,3-diol(3);nicotinic acid(4);4-hydroxy-5-methoxy-benzoic acid(5);3,7-dihydro-1,3,7-trimethyl-1H-purine-2,6-dione(6);caffeic acid methyl ester(7);(2E)-2,6-dimethyl-6-hydroxy-2,7-octadienoic acid(...     

山奈酚对HepG2细胞增殖的影响及诱导其凋亡的机制研究

目的研究山奈酚对人肝癌细胞(HepG2细胞)增殖与凋亡的影响及其机制。方法将HepG2细胞分为空白组和实验组,实验组以CCK-8法检测10个不同浓度的(10,20,30,40,50,60,70,80,90,100μmol·L^-1)山奈酚处理HepG2细胞24 h后的存活率。最终以3个浓度(20,40,50μmol·L^-1)山奈酚作为低、中、高3个浓度实验组。以免疫印迹法检测核苷酸结合寡聚化域样受体蛋白3(NLRP3)和死骨片-1(P62)蛋白表达水平(灰度值)。结果山奈酚处理HepG2细胞24 h后,空白组与低、中、高3个浓度实验组HepG2细胞的存活率分别为(100.00±0.00)%,(87.92±3.13)%,(77.92±4.40)%和(70.53±4.19)%;上述这4组的NLRP3表达水平分别为0.27±0.05,0.50±0.03,0.71±0.08和0.93±0.10;上述这4组的P62表达水平分别为0.54±0.06,0.76±0.05, 0.87±0.04和1.09±0.10。上述指标:3个浓度实验组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论山奈酚可有效抑制HepG2细胞增殖、抑制其自噬并诱导其凋亡,其机制可能为有效促进P62的沉积,同时能诱导凋亡经典途径中NLRP3的合成,从而抑制HepG2细胞自噬并促进其凋亡。     

川芎嗪对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭和细胞骨架的影响

目的通过研究川芎嗪(tetramethypyrazine,TMP)对肝癌HepG2细胞迁移能力、侵袭能力和细胞骨架的影响,探讨TMP抑制肝癌细胞侵袭转移的作用及机制。方法以肝癌HepG2细胞为靶细胞,通过细胞迁移划痕实验观察不同浓度的TMP对肝癌HepG2细胞迁移的影响及其时效关系;采用细胞侵袭实验,检测TMP对HepG2细胞侵袭能力的影响;应用高内涵细胞分析系统(HCS)免疫荧光法检测TMP对HepG2细胞骨架的影响。结果 TMP对HepG2细胞的迁移能力有抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;TMP能够明显抑制HepG2细胞的侵袭(P<0.01),并呈现一定的时间依赖性;TMP可减少HepG2细胞微丝数量,降低细胞骨架的面积,差异有显著性(P<0.01),有剂量相关性。结论 TMP能抑制肝癌HepG2细胞迁移及侵袭,具有潜在的抗肿瘤转移作用,其机制可能与TMP能明显降低细胞骨架微丝数量和面积,抑制骨架微丝重排相关。     

一种肝癌多药耐药细胞系的建立及鉴定

目的 建立肝癌细胞系HepG2的多药耐药细胞系HepG2／ADM，为研究肝癌细胞多药耐药创造前提奈件。方法 用0．01～2μg／mL的阿霉素（ADM）分级诱导HepG2细胞的多药耐药性，使其在含高浓度的ADM（2μg／mL）的DMEM培养基中保持90％的存活率，并能正常地传代、冻存和复苏；用MTT法分析ADM、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、丝裂霉素（MMC）和氨甲蝶呤（MTX）四种药物在其1Cmax,10Cmax，20Cmax和30Cmax。时分别作用于HepG2和HepG2／ADM时的细胞生长抑制率；用免疫组化法观察细胞膜P-糖蛋白（P—gP）170的表达；用流式细胞仪（FCM）分析细胞膜P—gP170对进入细胞内药物罗丹明-123的泵出效果。结果 HepG2／ADM细胞系表现了较强抗药活性；免疫组化法观察到HepG2／ADM细胞膜有较强P—gP170表达；FCM检测到HepG2／ADM细胞能有效泵出罗丹明-123．而HepG2细胞则不能有效泵出罗丹明一-123。结论 用ADM梯度诱导耐受法成功诱导出了HepG2细胞的多药耐药细胞系HepG2／ADM。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用

目的 研究Rho激酶特异性抑制剂Y-27632对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用.方法 体外培养人肝癌HepG2细胞,分为正常对照组(C组)以及不同浓度Y-27632 2.5、5、10、25、50μmol/L处理组(分别为A1组、A2组、A3组、A4组、A5组).镜下观察HepG2细胞的生长变化,MTT法检测各组HepG2细胞增殖情况.结果 在Y-27632作用下,HepG2细胞失去原有“铺路石”样排列,细胞间连接减少,细胞间隙增大,细胞胞体皱缩、变圆,细胞黏附性下降,有倾向凋亡趋势.与C组相比,不同浓度Y-27632作用后的HepG2细胞光密度值减少,细胞活力相对下降,且呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 Rho激酶抑制剂Y-27632能有效抑制人肝癌HepG2细胞增殖.     

磁性纳米Fe3O4颗粒对藤黄酸诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的研究磁性纳米Fe3O4颗粒(MNP-Fe3O4)对藤黄酸(GA)诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用。方法将HepG2细胞分为GA 0.5μmol/L单药组(A组)、GA 0.5μmol/L和MNP-Fe3O420μg/ml两药联合组(B组)及空白对照组(C组)。采用MTT法检测HepG2细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)及半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达。结果 GA对HepG2细胞生长的抑制作用呈剂量依赖性。与C组相比,A、B组HepG2细胞凋亡率、Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05),且B组各指标变化更为显著(P<0.05)。结论 MNP-Fe3O4能增强GA对肝癌HepG2细胞的凋亡诱导作用;其机制可能与Bcl-2表达下调及Caspase-3表达上调有关。     

HIV-1协同受体及其抑制剂研究进展

协同受体CCR5和CXCR4分别是嗜巨噬细胞性HIV-1和嗜T细胞性TIV-1侵入靶细胞的主要受体。CCR5抑制剂如TAK-779、SCH—C等，和CXCR4抑制剂如AMD3100、T22等，能分别与CCR5和CXCR4结合，从而阻断HIV-1侵入靶细胞。本文综述了HIV-1与CCR5和CXCR4的结合机制及其抑制剂的研究进展。     

骆驼蓬总碱体外抗肿瘤实验研究

目的研究骆驼蓬总碱对体外培养肿瘤细胞的抑制作用。方法采用MTT法检测不同质量浓度骆驼蓬总碱分别在给药24,48和72h时对鼠源S180肉瘤细胞、H22肝癌细胞及人源HepG2肝癌细胞体外增殖的抑制情况,倒置显微镜下观察HepG2肝癌细胞形态的变化。结果骆驼蓬总碱各质量浓度对体外培养的S180,H22和HepG2肝癌细胞均有较好的抑制作用,且以72h抑制作用相对较好,半数抑制质量浓度(IC50)分别为299.99,306.34和28.21μg.mL-1。结论骆驼蓬总碱对体外培养肿瘤细胞有较好的抑制作用。     

外翻肠囊法研究金芪降糖片的肠吸收特性

目的:研究金芪降糖片中主要化学成分的肠吸收特性。方法:采用大鼠离体外翻肠囊模型,收集金芪降糖片3种剂量在肠道不同部位给药后不同时间的肠囊液样品,用HPLC对有效成分进行检测分析,计算各有效成分的累积吸收量(Q)及吸收速率常数(K_a)以分析它们在肠道的吸收特征。结果:可检测到金芪降糖片中的9个成分吸收进入肠囊,分别为新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、咖啡酸、表小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马汀、小檗碱。金芪降糖片中的9个成分在不同肠段不同浓度下的吸收均为线性吸收,其回归相关系数(R²)均大于0.9,符合零级吸收,且9个成分的K_a值在不同肠段均随药物剂量的增加而增加(P<0.05),表明其为被动吸收。肠道不同部位的吸收实验表明,以金芪降糖片高剂量中绿原酸和小檗碱在120 min的累积吸收量为例,绿原酸在各肠段的累积吸收量分别为:十二指肠,626.9 μg;空肠,1 116.8 μg;回肠,516.9 μg;结肠,215.8 μg,小檗碱在各肠段的累积吸收量分别为:十二指肠,178.6 μg;空肠,208.6 μg;回肠,97.5 μg;结肠,66.8 μg。说明空肠对各成分的吸收最为明显,其次是回肠,且有机酸类成分的在肠吸收优于生物碱类成分。结论:金芪降糖片中4个有机酸类成分及5个生物碱类成分可吸收进入肠囊,各成分的吸收形式可能为被动吸收。     

基于HPLC-DAD结合HPLC-Q-TOF/MS的黄连活性成分筛选

目的：建立黄连活性成分筛选的分析方法,探讨黄连发挥药效的物质基础。方法：采用血清药化结合HPLC-DAD结合HPLC-Q-TOF/MS的方法,建立黄连及黄连含药血清HPLC指纹图谱及总离子流图,分析比较2组样品的差异,然后采用HPLC-DAD结合HPLC-Q-TOF/MS技术初步鉴定黄连的活性成分。结果：综合分析各活性成分的碎片、保留时间等信息,并结合与对照品、文献数据对比,初步鉴定出5个来源于黄连的活性成分和2个代谢产物。结论：建立了一种有效、可靠的中药活性成分快速筛选分析方法,为黄连的药理作用和活性机制研究提供依据。     

广东紫珠超临界提取物的GC-MS成分分析及体外抗菌活性

采用超临界CO2萃取法提取广东紫珠低极性成分,应用气相色谱-质谱法分析提取物的化学组成,结合计算机检索技术初步鉴定所分离的化合物,应用色谱峰面积归一化法计算各成分的相对百分含量,并考察各分离釜提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌的体外抗菌活性。结果从超临界CO2流体萃取分离釜Ⅰ提取物中初步鉴定了27个化合物,占总离子流图峰面积的81.12%;超临界CO2流体萃取分离釜Ⅱ提取物初步鉴定了20个化合物,占总离子流图峰面积的74.60%。广东紫珠超临界CO2萃取分离釜Ⅰ、Ⅱ提取物及二者1︰1混合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白色念珠菌显示出抗菌活性。     

新化合物C333H降脂降糖作用的研究

目的研究新化合物C333H的降糖降脂作用。方法灌胃给药,观察C333H对正常小鼠的糖耐量以及急性高血脂小鼠和2型糖尿病小鼠的降糖降脂作用。提取2型糖尿病小鼠肝脏、脂肪和骨骼肌组织中的mRNA,采用RT-PCR方法研究C333H的作用机制。结果C333H对正常小鼠的糖耐量没有明显影响,但能够降低高脂小鼠的血脂水平,对2型糖尿病小鼠有明显的降糖降脂作用,同时能够增加肝脏、脂肪和骨骼肌组织中LPL、aP2和G luT4mRNA的表达。结论C333H具有良好的降糖降脂作用,其作用机制符合PPARα/γ双重激动剂的特点,具有成为预防和治疗2型糖尿病药物的潜力。     

2型糖尿病应用胰岛素治疗时间与β细胞的关系

目的探讨2型糖尿病的治疗中应用胰岛素时间与β细胞的关系。方法完全随机选择2型糖尿病患者165例，按照是否应用胰岛素治疗及治疗时间（6～36个月）不同分为4个试验组和1个对照组。试验组用胰岛素治疗，对照组应用其他降糖药物治疗。分别观察各组在治疗前后空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、空腹C肽、餐后2h C肽，并用统计学方法比较。结果试验组在治疗前后的HbA1C、空腹C肽、餐后2h C与对照组比较，差异有统计学意义，而4个试验组间差异无统计学意义。结论应用胰岛素治疗2型糖尿病对恢复13细胞功能是有限度的，随着治疗时间延长，作用并不增加；早期应用胰岛素治疗2型糖尿病对恢复8细胞功能是必要的。     

基于靶细胞萃取的延胡索药效成分的筛选和含量测定

目的 建立靶细胞萃取延胡索Corydalis Rhizoma中的药效成分并采用HPLC法进行定量分析的方法。方法 选用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）作为靶细胞,萃取延胡索中的药效成分。在细胞对数生长期加入延胡索冻干粉,孵育2 h收集细胞并用液氮裂解,得到萃取药物后的细胞样品。采用UPLC/Q-TOF-MS对其进行检测,分析萃取进入细胞内的物质,即延胡索中进入细胞进一步发挥药效的有效成分。最后,用HPLC法对进入细胞中的有效成分进行定量分析。结果 HUVEC萃取到5个药效成分,分别为延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素、盐酸小檗碱、去氢延胡索甲素。同时建立5个成分的含量测定方法。结论 靶细胞萃取的分析方法可以通过化合物与细胞之间的相互作用,反映出药物中发挥药效的活性物质,在中药复杂体系的研究中起到重要的作用。     

三批C群脑膜炎球菌结合疫苗(MenC)对2、3、4月龄婴儿的安全性与免疫原性

C群脑膜炎球菌多糖 (PS)疫苗在两岁以下儿童中的免疫原性较弱。将多糖抗原与载体蛋白共价结合制成结合疫苗 ,可使多糖抗原转变成胸腺依赖性抗原而克服这一难题。　　 32 2名健康婴儿分别于 2、3、4月龄接种0 .5 ml Men C疫苗各 1剂 ,两剂之间间隔 4～6周 ,同时按免疫程序在不同部位接种全细胞百日咳疫苗 DTP- b型流感杆菌结合疫苗(DTw P- Hib)及口服脊髓灰质炎疫苗。试验所用的 Men C疫苗来自 3个独立批 ,分别为试验批及来自不同生产地的第 1生产批和第2生产批 ,各 Men C疫苗均含 10μg C群脑膜炎球菌 PS和 1 5μg白喉杆菌 CRM1 97…