基于RSM及PMP-HPLC特征图谱分析黄精炮制过程中多糖组分含量变化

目的探究单一酶法与复合酶法提取黄精Polygonati Rhizoma多糖的最优条件;分析黄精九蒸九晒过程中多糖组分含量的变化,为黄精和其他中药材的炮制方法提供相应理论依据。方法响应面(RSM)优化酶法提取黄精多糖,1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生法和HPLC法对九蒸九晒的姜形黄精、蒸出液中的多糖进行分析,建立黄精古法炮制以及蒸出液的多糖特征图谱。比较不同酶对黄精中多糖提取效率的影响。结果单一酶中纤维素酶提取效果最好,4种复合酶中纤维素酶与果胶酶结合提取效果最好;通过RSM优化得到最佳提取条件:纤维素酶在酶解温度为51℃、酶的添加量为2%、酶解pH值为5.40的情况下,精制黄精多糖提取物中多糖总量为(675.34±0.10)mg/g;PMP-HPLC检测炮制过的4种黄精,均含有甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖。其中鸡头黄精Polygonatumsibiricum、姜形黄精P.cyrtonema、竹节黄精P. odoratum多糖均以葡萄糖为主,马鞭黄精P. filipes多糖以甘露糖为主。随着姜形黄精被炮制次数的增加,各单糖含量先增加后下降再增加后趋于稳定,以甘露糖、半乳糖变化明显。蒸出液各单糖含量先升高后趋于稳定,其中甘露糖、葡萄糖的变化明显。结论研究表明纤维素酶参与的单一酶法和复合酶法提取黄精多糖,不仅可以提升黄精多糖的提取效率,也提高黄精多糖纯度;九蒸九晒会影响黄精中的多糖提取得率;PMP-HPLC特征图谱能够准确地表征黄精炮制过程中多糖含量的变化,可用于评价黄精及炮制药材的多糖组分的差异。     

酶法测定黄精含片中黄精多糖的研究

目的建立排除黄精片剂中辅料干扰多糖含量测定的方法。方法采用苯酚-硫酸比色法测定黄精多糖含量,糖化酶水解麦芽糊精,80%乙醇溶液进行醇沉分离,考察反应温度、p H、酶与底物比例及反应时间对酶解反应的影响,验证糖化酶能否水解黄精多糖。结果反应温度58℃、pH4.5、酶与底物比例1:5、反应时间28 min时麦芽糊精完全水解,80%醇沉后在490 nm处测定无明显吸收。采用酶水解法可以准确测定黄精片剂中多糖的含量,测定结果与加入量无差异(P>0.05)。结论糖化酶水解麦芽糊精,不水解黄精多糖,对黄精多糖含量的测定不存在干扰,可用于片剂中多糖含量测定。     

影响酶解去除薏苡仁淀粉过程的关键参数考察

目的:考察影响高温α-淀粉酶酶解去除薏苡仁中淀粉的关键参数,为薏苡仁总多糖的应用提供参考。方法:以还原糖含量及碘液检试样品颜色变化作为定量及定性指标,在单因素试验基础上,通过正交试验考察酶解温度、酶用量、酶解时间、酶解p H对薏苡仁中淀粉酶解程度的影响。结果:最佳酶解参数为酶用量600 U·g-1,酶解温度75℃,酶解p H 6.0,酶解时间120 min;薏苡仁总多糖水提液中还原糖质量分数约25%,且碘试液检测不变色,薏苡仁总多糖纯度达76.63%,较未去除淀粉的薏苡仁总多糖纯度54.41%显著提高。结论:高温α-淀粉酶可简单、快速的去除薏苡仁中淀粉,有利于高纯度薏苡仁总多糖的获得。     

滇黄精及其活性成分群对α-糖苷酶活性抑制作用研究

目的:探讨滇黄精及其活性成分群对α-葡萄糖苷酶活性的抑制。方法:以4-硝基酚α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物,研究滇黄精不同提取成分对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。结果:滇黄精及其不同提取物对α-葡萄糖苷酶都具有一定的抑制作用,其中小剂量的滇黄精总皂苷抑制率最明显,抑制率为34.2%;滇黄精生水提液次之,抑制率为27.7%;而其制水提液及其总多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用不明显。结论:滇黄精总皂苷具有明显的α-葡萄糖苷酶抑制活性,可能为滇黄精降糖活性的主要物质基础。     

黄精、多花黄精、滇黄精的多糖组分及其抗炎、抗氧化作用比较

目的 比较黄精、多花黄精、滇黄精多糖组分及其体内外抗氧化、抗炎活性。方法 采用水提醇沉法提取,琼脂凝胶层析柱分离纯化,得到不同多糖组分,比较得率及分子量。采用RT-qPCR法检测不同纯化多糖对猪小肠上皮细胞IPEC-J2的细胞活性,IL-6、SOD1 mRNA表达的影响;采用ELISA检测不同多糖灌胃给药后对小鼠急性肺损伤模型的肺泡灌洗液TNF-α、MDA水平。结果 在相同提取方法下,黄精得率最高,为3.70%,其多糖水平为65.83%。黄精粗多糖以中性多糖(PSP-NP)为主,占比70.50%;多花黄精粗多糖以酸性多糖(PCP-AP)为主,占比64.67%;滇黄精粗多糖中中性多糖(PKP-NP)和酸性多糖(PKP-AP)水平差别不大,分别占比41.75%、58.25%。各纯化多糖均能增强细胞活性,PSP-NP、PSP-AP能升高SOD1 mRNA表达(P<0.01),PCP-AP、PKP-AP能降低IL-6 mRNA表达(P<0.01)。3种黄精粗多糖都能降低肺泡灌洗液TNF-α、MDA水平(P<0.05),其中黄精多糖效果最为显著。结论 黄精、多花黄精、滇黄精多糖...     

中药配方颗粒辅料麦芽糊精的HPLC定量检测与中红外光谱半定量检测

目的 建立中药配方颗粒辅料麦芽糊精的检测方法,为中药配方颗粒质量评价提供分析技术支持。方法 建立配方颗粒中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的HPLC定量检测方法,根据样品经糖化酶水解后的葡萄糖增加量换算出麦芽糊精含量。基于中药浸膏与麦芽糊精不同比例混合物的中红外光谱（mid-infrared spectroscopy,MIRS）特征峰差异,建立配方颗粒中麦芽糊精的半定量检测方法。结果 所建立的HPLC方法可以准确定量检测配方颗粒中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖。如果中药浸膏自身含有较多可经糖化酶水解产生葡萄糖的成分（淀粉、蔗糖等）,HPLC检测配方颗粒中麦芽糊精时存在系统性正误差,可通过中药浸膏酶解后葡萄糖增加量、待测样品酶解后蔗糖减小量等部分修正正误差。如果中药浸膏自身少含或不含淀粉、蔗糖等可经糖化酶水解产生葡萄糖的成分,HPLC检测配方颗粒中麦芽糊精时存在系统性负误差,换算公式偏差、麦芽糊精纯度、样品处理损失等导致根据样品酶解后葡萄糖增加量计算的麦芽糊精“检测含量”预期低于根据生产投料计算的麦芽糊精“名义含量”。麦芽糊精含量越高,配方颗粒MIRS中1200～900 cm-1区域的...     

黄精药材及其饮片的红外光谱研究

目的:考察黄精药材粉末及饮片(蒸黄精、酒黄精)的红外光谱特征,评价炮制前后黄精化学成分的变化及不同炮制方法对其化学成分的影响。方法:利用红外光谱法测定黄精药材及其不同炮制品的红外图谱,获取红外图谱指纹区,进行光谱特征解析。结果:黄精药材红外图谱指纹特征明显,谱图中位于1050.69cm-1的四氢吡喃环上C-O-C伸缩振动峰可作为葡萄糖在黄精药材及不同炮制品中含量高低的主要判定依据。结论:红外光谱法简便、可靠、快速、准确,可作为黄精药材及其炮制品质量评价的有效方法。     

基于PMP-HPLC和化学计量学的黄精基原物种多糖差异分析

目的:建立2015年版《中国药典》中3种基原黄精的多糖指纹图谱,探讨黄精基原物种多糖的差异,为黄精药材质量评价和临床应用提供参考。方法:采用水提醇沉法提取黄精药材中的多糖,经三氟乙酸(TFA)水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生后,采用HPLC建立3种黄精的色谱指纹图谱;并利用相似度(SA)分析,聚类分析(HCA)和主成分分析方法(PCA)对指纹图谱进行分析,研究3种基原黄精物种多糖的差异。结果:3种基原黄精的多糖PMP-HPLC指纹图谱存在差异,3个物种中均未检测到D-甘露糖,L-鼠李糖和L-岩藻糖,但均含有D-半乳糖醛酸,D-盐酸氨基葡萄糖,D-半乳糖,D-葡萄糖,D-木糖。PCA和HCA分析表明,黄精与多花黄精的多糖色谱指纹较为接近,而滇黄精与二者差异明显。结论:3种法定基原黄精物种的多糖组成存在差异,在临床应用中,应考虑物种对临床应用可能产生的影响。所建立PMP-HPLC方法简便、准确、重复性好,可用于3种黄精药材的多糖的差异研究。     

黄精多糖提取工艺及调节糖代谢活性机制研究进展

通过知网文献搜索发现,多花黄精为黄精属研究的热门品种,黄精多糖是黄精的主要药效成分.目前黄精多糖的提取工艺在水提醇沉法、闪式提取法等方面取得了新的进展,黄精多糖调节糖代谢机制研究主要集中在抑制α-葡萄糖苷酶、增加胰岛素分泌、抗炎抗氧化等.本文综述了黄精多糖提取技术的研究进展及调节糖代谢活性的机理,为相关研究提供参考.     

基于糖谱法的半夏及其炮制品多糖结构特征分析及水/酶解前后抗氧化活性评价

目的：采用糖谱法,通过部分酸水解和特异性糖苷酶酶解结合高效薄层色谱法（HPTLC）和荧光辅助凝胶电泳法（PACE）,分析半夏及其炮制品多糖的糖苷键结构特征,以及其水/酶解前后的抗氧化活性变化。方法：半夏及其炮制品多糖加入淀粉酶除淀粉后,超滤法除去3 000 Da以下的小分子成分;精制后的多糖以酸水解和5种特异性糖苷酶酶解制备样品,采用HPTLC和PACE进行分析;以2,2′-联氮-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）和2,2-联苯基-1-苦基肼基（DPPH）自由基清除实验评价多糖水/酶解前后抗氧化活性的变化。结果：通过HPTLC和PACE分析发现,半夏及其炮制品多糖能被β-半乳糖苷酶、β-甘露糖酶、纤维素酶和果胶酶水解,而几乎不能被葡聚糖酶水解,表明半夏及其炮制品的多糖含有β-吡喃半乳糖苷键、β-1,4-甘露糖苷键、β-1,4-葡萄糖苷键和α-1,4-半乳糖醛酸苷键。通过体外抗氧化实验发现,半夏及其炮制品多糖经酸水解和果胶酶酶解后清除ABTS自由基能力减弱,而经纤维素酶,β-半乳糖苷酶和β-甘露糖酶酶解后,清除ABTS自由基能力增强;而半夏及其炮制品多糖经不同水/酶解后...     

不同分子量锁阳多糖体外抗氧化活性的研究

目的研究不同提取方法对锁阳多糖提取效果的影响及不同分子量锁阳多糖体外抗氧化活性。方法全面考察锁阳多糖的提取方法,对比不同提取方法对多糖得率的影响。应用膜分离技术对精制后的锁阳多糖进行分离,分别得到分子量CP1(MW100k Da)、CP2(MW:50k Da~100k Da)、CP3(MW:10k Da~50k Da)三种多糖,进行体外抗氧化研究。结果相较于其他提取方法,酶解协同超声法提取锁阳多糖得率最高,可达29.4%。不同分子量的锁阳多糖均具有一定的总还原力,对超氧阴离子、DPPH自由基都具有较好的清除作用。在一定浓度范围内,其清除能力随着多糖浓度增加而增强,呈现量效关系;综合比较不同分子量锁阳多糖抗氧化能力,CP2分子段多糖抗氧化能力强于CP1和CP3。结论酶解协同超声法可作为锁阳多糖提取的新方法,在锁阳总多糖中,分子量在50k Da~100k Da的多糖开发利用价值较大。     

黄精多糖水解物柱前衍生HPLC指纹图谱

目的:建立黄精多糖柱前衍生HPLC指纹图谱。方法:以三氟乙酸(TFA)水解黄精多糖,水解产物加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生化,采用HPLC测定单糖的衍生物。采用ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相0.1 mol·L-1磷酸缓冲液(p H 6.7)-乙腈(84.5∶15.5),检测波长250 nm,柱温30℃,流速0.8 m L·min-1。结果:黄精多糖柱前衍生指纹图谱标示出10个共有峰,鉴别了7个共有峰(D-甘露糖,D-半乳糖醛酸,L-鼠李糖,D-半乳糖,D-葡萄糖,D-木糖,D-阿拉伯糖)。10批黄精药材指纹图谱相似度0.99。结论:该方法简便,分离度高,重复性及稳定性良好,可有效控制黄精多糖的质量。     

毛细管区带电泳法测定黄精和玉竹多糖的含量及其单糖组成

目的:建立毛细管区带电泳(CZE)法测定黄精和玉竹多糖含量的方法,并用CZE法测定其单糖组成,为探讨这两种功效相近中药材的药效物质基础提供参考。方法:通过正交试验对黄精和玉竹多糖降解条件进行优化。以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为单糖的柱前衍生化试剂,用CZE法测定黄精和玉竹多糖的含量及其单糖组成。同时与采用苯酚-硫酸法测定黄精和玉竹多糖含量的结果进行比较。结果:黄精和玉竹多糖均由木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸等组成,但组成比例差异显著。结论:CZE法用于测定黄精和玉竹多糖的含量及单糖组成准确、可靠,结果满意。其单糖组成的异同一定程度上佐证了两者功效的相近和区别,提示两者临床上不能混淆使用。     

胡芦巴生品、酒制品抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性的有效部位筛选及其酶动力学分析

目的:比较胡芦巴生品和酒制品对α-葡萄糖苷酶,α-淀粉酶抑制活性作用的差别,筛选抑制活性的有效部位,并研究其酶反应动力学。方法:利用萃取法获得胡芦巴生品和酒制品80%甲醇提取物的石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层、水层4个不同极性部位,采用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型和α-淀粉酶抑制模型,测定生胡芦巴和酒胡芦巴4个不同极性部位对α-葡萄糖苷酶,α-淀粉酶活性的抑制作用。通过酶促动力学与Lineweaver-Burk曲线推断各有效部位对α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶抑制类型。结果:生胡芦巴和酒胡芦巴只有水层对α-葡萄糖苷酶有抑制作用,酒制品对α-葡萄糖苷酶的抑制作用优于生品,生胡芦巴和酒胡芦巴水层萃取物对α-葡萄糖苷酶作用为非竞争可逆。生胡芦巴和酒胡芦巴的乙酸乙酯层和正丁醇层对α-淀粉酶有抑制作用,酒制品的抑制作用优于生品,且均为非竞争可逆。结论:胡芦巴经酒制后可在一定程度上增加对α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶活性的抑制作用,酒胡芦巴水层萃取物有开发成α-葡萄糖苷酶抑制剂的价值,酒胡芦巴的乙酸乙酯和正丁醇提取物具有开发成α-淀粉酶抑制剂的价值。     

猪皮胶原肽的抗氧化活性研究

目的:研究不同分子量猪皮胶原肽的抗氧化特性,筛选出抗氧化活性较强的组分。方法:采用仿生酶解技术酶解新鲜猪皮得到酶解原液,酶解原液经超滤得到M1 k Da、1 k DaM3 k Da、M3 k Da 3个不同分子量肽段,猪皮经水提取得到猪皮水提液,上述5组分分别冻干,得到冻干粉。对不同分子量范围的猪皮胶原肽5组分进行肽含量测定和抗氧化性研究,包括对DPPH·自由基、O2-·自由基及·OH自由基的清除实验。结果:各组分的肽含量分别为酶解原液组分64.62%、1~3 k Da组分62.63%、大于3 k Da组分62.13%、水提液组分60.57%、小于1 k Da组分59.75%。各组分清除DPPH·自由基能力顺序为:小于1 k Da组分1~3k Da组分酶解原液组分水提液组分大于3 k Da组分;各组分清除O2-·自由基能力顺序为:小于1 k Da组分酶解原液组分1~3 k Da组分大于3 k Da组分水提液组分;各组分清除·OH自由基能力顺序为:小于1 k Da组分1~3 k Da组分酶解原液组分大于3 k Da组分水提液组分。结论:不同分子量的猪皮胶原肽组分均有一定的抗氧化活性,其中M1 k Da组分具有较强的自由基清除能力。     

药食同源药材黄精 玉竹营养及生物活性成分分析

目的 为深入挖掘药食同源药材黄精、玉竹的营养价值,推动其食品产业化进程,对滇黄精、黄精、多花黄精、玉竹4个基原物种的营养和生物活性成分进行测定。方法 参照《食品安全国家标准》,测定样品中碳水化合物、淀粉、可溶性膳食纤维、蛋白质、氨基酸、维生素和矿物质元素等多个营养指标含量,分别通过苯酚-硫酸法、香草醛比色法、NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH比色法和Folin-Ciocalteu比色法对多糖、甾体皂苷、黄酮和酚酸总含量进行测定;以《中国居民膳食营养素参考摄入量》为分析依据,对黄精、玉竹的营养价值进行分析。结果 黄精、玉竹中碳水化合物营养价值高（淀粉质量分数为8.33%~10.89%、可溶性膳食纤维质量分数为3.41%~9.53%）,氨基酸种类丰富（黄精、多花黄精、玉竹含18种,滇黄精含17种）,具高谷氨酸、高维生素B₆、高铁、高锰和高钼等特点,且含有多糖、甾体皂苷、酚酸、黄酮等生物活性成分。结论 药食同源药材黄精、玉竹符合现代人的健康饮食需求,可作为优质膳食原料推广使用,测定结果将为其食品产业化发展提供参考。     

酒萸肉配方颗粒HPLC指纹图谱研究

目的建立酒萸肉配方颗粒的HPLC指纹图谱。方法以莫诺苷、马钱苷为参照物,利用高效液相色谱法梯度洗脱,测定了10批酒萸肉配方颗粒样品;色谱柱为Agilent Zorbax C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.1%的磷酸水溶液(B)梯度洗脱,检测波长为240 nm,柱温30℃,流速1.0 m L/min。结果通过HPLC指纹图谱分析,标示出酒萸肉配方颗粒有23个共有色谱峰,相似度均大于0.95,并确认2个已知峰为莫诺苷和马钱苷。结论建立的酒萸肉配方颗粒的HPLC指纹图谱,稳定可靠,操作简便,可为其配方颗粒质量控制提供科学依据。     

基于转录组的黄精多糖代谢关键酶基因的筛选与验证

目的 通过湖北黄精、滇黄精、多花黄精根茎的转录组学分析,对影响不同品种黄精多糖含量的关键酶基因进行筛选和验证,并进行氨基酸序列的深入分析,丰富黄精属植物的转录组数据并为其多糖生物合成机制和遗传改良提供参考。方法 使用了Illumina NovaSeq高通量测序平台对黄精转录组进行测序分析,根据Nr、基因本体（GO）、京都基因与基因组百科全书（KEGG）数据库的注释分析比较3种黄精转录组的差异,筛选出多糖代谢途径中的关键酶,对关键酶基因表达量进行聚类分析并与多糖含量进行相关性分析,然后对筛选出的8个关键酶基因进行实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）验证,结合测序结果进一步筛选出多糖生物合成关键酶基因进行同源基因序列分析,构建系统进化树,预测模体（motif）、保守结构域、蛋白序列等电点与相对分子质量,并使用同源建模法构建三维蛋白结构。结果 通过Nr数据库的注释发现3种黄精与芦笋的基因同源性最高,GO数据库注释结果表明这3种黄精在结合功能、催化活性、代谢过程和细胞组分上差异显著,而KEGG通路注释结果说明这3种黄精在淀粉与蔗糖代谢通路和半乳糖代谢通路上差异显著,根据聚类分析、相关性分析、Real-time PCR验证实验、表达量情况与氨基酸序列的结构与功能预测推测出显著影响不同品种黄精多糖含量的关键酶为β-果糖苷酶（sacA）。结论 sacA可能是黄精多糖含量差异的主要影响因素,也是黄精多糖主要为果聚糖的重要原因。     

基于正交试验及AHP-综合评分法优选酒黄精炮制工艺及调节免疫作用研究北大核心CSCD

基于正交试验及AHP-综合评分法优选酒黄精现代炮制工艺,并对其调节免疫作用进行研究。以外观性状、浸出物、多糖含量为指标,基于单因素考察结果建立正交试验,研究炮制过程中润制时间、蒸制时间、干燥温度等关键因素对酒黄精质量的影响,结合层次分析法(analytic hierarchy process,AHP)和综合评分法,优选酒黄精最佳炮制工艺参数。通过腹腔注射环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,比较炮制前后、现代与传统炮制工艺下小鼠的体质量、免疫脏器指数及外周血中血白细胞(white blood cell,WBC)、血红细胞(red blood cell,RBC)的变化情况,并采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)。研究表明,酒黄精最佳炮制工艺为:药材中加入黄酒闷润10 h,隔水蒸制20 h,切厚片,60℃干燥。此外,经与传统蒸制酒黄精进行比较研究后认为,该法所得酒黄精饮片与传统蒸制酒黄精均能够显著增强免疫作用,且等效性良好。该研究优化所得的酒黄精炮制工艺稳定、可行;按此工艺所制酒黄精有明显的增强免疫作用,为其质量标准的制定和现代研究提供了依据。     

陕西产黄精产地加工与炮制一体化工艺质量研究

目的:对不同炮制方法的黄精饮片质量相关指标进行分析,为今后黄精的加工炮制工作提出可供参考的根据。方法:采用硅胶G薄层板对不同炮制工艺的黄精饮片进行定性鉴别;对不同炮制工艺的黄精饮片浸出物、灰分、水分以及多糖含量进行测定;采用甲状腺素片诱导小鼠阴虚模型并评价不同黄精饮片滋阴效果。结果:黄精不同炮制品在薄层色谱系统中的行为特征和薯蓣皂苷元对照品的在色谱系统中的行为特征一致,检查项和含量测定结果均符合《中国药典》(2015年版)和《陕西省中药饮片标准》相关规定;酒蒸后黄精滋阴作用有所增强,且以先切的酒黄精饮片强于先蒸的酒黄精饮片。结论:不同炮制工艺的黄精饮片在质量上存在着一定的差异,为后续黄精产地加工与炮制一体化工艺研究提供借鉴。