帕金森病黑质多巴胺能神经元铁死亡的机制研究

<正>卒中后认知障碍(post stroke cognitive impairment,PSCI)是卒中后的主要并发症之一^[1]。系统综述和meta分析的结果显示,卒中后第一年卒中后认知障碍非痴呆的患病率为38%^[2],卒中后痴呆的患病率为18.4%^[3]。免疫介导的炎症反应与急性卒中事件、先前存在的脑部病理之间存在复杂的相互作用^[4],因此本文就免疫介导的炎症反应与PSCI相关性研究作一综述,期望对PSCI风险预测、机制探究、预防治疗提供帮助。一、卒中后炎症和免疫反应PSCI是由缺血性卒中、脑出血或蛛网膜下腔出血引起的。卒中后损伤级联反应可能影响PSCI的发生与发展,如炎症反应、神经轴索损伤和神经退行性通路的激活^[5]。     

帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的氧化应激研究

目的　探索帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的氧化应激发病机制。方法　通过立体定位仪 ,将 6-OHDA注入大鼠一侧纹状体内制备 PD模型 ,2周后观察动物的行为学改变 ,2个月后观察黑质纹状体等的病理形态学变化 ,检测模型组、假手术组和正常对照组的超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,丙二醛 (MDA)、一氧化氮(NO)代谢产物 (NO x)的含量的变化。结果　成功 PD模型鼠有 2 2只。光镜下 HE染色示模型组右侧黑质的多巴胺神经元受损 ,数目减少。模型组右侧黑质的 SOD的含量下降 ,MDA及 NO x含量明显升高 ,与左侧、假手术组及正常对照组相比有显著差异 (P>0 .0 5)。结论　 6-OHDA纹状体内双靶点注射法是一种有效的制备 PD模型的方法。帕金森病大鼠模型黑质内 SOD活性下降 ,MDA、NO x含量升高 ,氧化应激在 PD的发病中起重要的作用     

帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡规律的实验研究

目的:探讨MPTP诱导小鼠黑质多巴胺能神经元凋亡的规律。方法:采用慢性MPTP处理(30mg/kg/d×7)的模式,建立小鼠帕金森病模型;应用酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色和TUNEL染色,观察黑质多巴胺能神经元数目改变和凋亡情况。结果:慢性MPTP处理过程中,小鼠黑质TH阳性细胞数逐渐减少;于MPTP注射第3天开始出现凋亡细胞,第8天达到高峰。结论:采用慢性MPTP处理的模式,可诱导小鼠黑质神经元凋亡;在这类模型中,细胞凋亡是MPTP发挥神经损害效应的主要形式。     

实验性帕金森病中脑黑质多巴胺能神经元继发性免疫组织化学改变

本研究旨在观察帕金森病 (ＰＤ)中脑黑质残存多巴胺(ＤＡ)能神经元ｂｃｌ 2、ｂａｘ和一氧化氮合成酶 (ｎＮＯＳ)的蛋白表达 ,探索ＰＤ中脑黑质残存ＤＡ能神经元继发性损伤的机制。材料方法 :将 6 羟多巴胺注入中脑右侧黑质部 ,建立右侧选择性偏侧大鼠ＰＤ动物模型。术后 2周 ,腹腔注射阿朴吗啡诱发大鼠旋转行为 ,旋转速度达到 6ｒ/ｍｉｎ(Φ 35ｃｍ/ｒ)视为成功ＰＤ选择性偏侧模型 ,实验分为正常对照组、ＰＤ组 ,每组 8例 ,正常对照组除不行ＰＤ造模手术外 ,其余处理方法与ＰＤ组相同。ＰＤ组于造模术后 2周断头处死 ,分离中脑 ,常规固定…     

左旋多巴对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元及纹状体多巴胺递质的影响

目的　研究长期应用左旋多巴对帕金森病 (PD)大鼠黑质多巴胺 (DA)能神经元和DA递质的影响。方法　采用 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)制备部分损毁和严重损毁的PD大鼠模型 ,给两种模型口服不同剂量左旋多巴 /苄丝肼 3个月 ,通过观察大鼠旋转行为、酪氨酸羟化酶 (TH)免疫组化染色和高效液相色谱 电化学检测仪 (HPLC ECD)检测纹状体单胺类递质 ,研究左旋多巴对PD大鼠残存的黑质DA能神经元的影响。结果　 (1)左旋多巴对PD大鼠的旋转行为无明显影响 ;(2 )TH阳性细胞数损毁侧 /非损毁侧比值在左旋多巴喂药组和不喂药对照组的差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ;(3)在严重损毁组 ,大剂量左旋多巴使PD大鼠损毁侧DA和 3,4二羟基苯乙酸 (DOPAC)水平明显升高(P <0 0 1)。结论　长期使用左旋多巴对 6 OHDA单侧损毁的PD大鼠残存的黑质DA能神经元无毒性作用。     

多巴胺诱导SD鼠黑质多巴胺能神经元凋亡

目前帕金森病的病因尚未清楚，一般认为是由氧自由基、线粒体功能障碍等多种因素所致的中脑黑质多巴胺能神经元死亡，而细胞凋亡可能是这种细胞死亡的主要方式。由于病人死后脑标本难以获得，因此建立帕金森病的动物模型是研究该病发病机制和治疗方法的重要手段。     

镁对帕金森病大鼠黑质多巴胺神经元的影响

目的观察镁对帕金森病(PD)大鼠黑质多巴胺神经元影响及其作用机制。方法应用6-羟基多巴胺(6-OHDA)制备偏侧PD大鼠模型后分为硫酸镁组、美多巴组、混合组(硫酸镁+美多巴)和对照组(生理盐水),并给予相应药物灌胃治疗28d。观察治疗后各组大鼠旋转行为的变化;免疫组化法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量;生化法测定损毁侧纹状体超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;逆转录聚合酶链反应检测损毁侧黑质caspase-3 mRNA表达;Western Blot法检测核因子(NF)-кBP65水平。结果治疗后仅混合组出现较稳定的向对侧的旋转行为;TH阳性神经元数混合组较其他各组明显增加(均P<0.05);与对照组和美多巴组比较,硫酸镁组和混合组SOD、GSH-Px活性显著增高,MDA、caspase-3 mRNA、NF-кBP65水平显著降低(均P<0.05);硫酸镁组与混合组间差异无统计学意义。结论镁及美多巴联合治疗可提高PD模型脑内多巴胺神经元存活、降低氧化应激损伤、减少神经元凋亡,改善PD大鼠症状。     

石菖蒲挥发油对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元自噬的影响及其机制

目的 探讨石菖蒲挥发油对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能(Dopamine,DA)神经元自噬的影响及其可能机制。方法 取45只C57BL/6小鼠,随机选取10只设为正常组,其余小鼠建立帕金森病模型,成功30只,随机分为帕金森病组、石菖蒲组、石菖蒲+激活剂组,每组各10只; 石菖蒲+激活剂组灌胃石菖蒲挥发油90 mg/kg,腹腔注射蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路激活剂MHY1485(10 mg/kg); 石菖蒲组灌胃石菖蒲挥发油90 mg/kg,腹腔注射等体积二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide,DMSO); 正常组、帕金森病组灌胃等体积生理盐水,腹腔注射等体积DMSO; 转棒实验检测运动协调能力; Western Blotting法检测黑质微管相关蛋白轻链3B(Light chain 3B,LC3B)、Bcl-2同源结构域蛋白(Bcl-2 homeodomain protein,Beclin1)蛋白表达水平; 免疫组织化学染色检测黑质酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性表达水平; Western Blotting法检测黑质AKT、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylation protein kinase B,p-AKT)、mTOR、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Phosphorylation mammalian target of rapamycin,p-mTOR)蛋白表达水平。结果 与帕金森病组比较,石菖蒲组小鼠坚持运动时间延长,LC3B,Beclin1蛋白表达水平、TH阳性细胞占比升高(P<0.05); 与石菖蒲组比较,石菖蒲+激活剂组小鼠坚持运动时间缩短,LC3B、Beclin1蛋白表达水平、TH阳性细胞占比降低(P<0.05); 与帕金森病组比较,石菖蒲组黑质p-AKT/AKT,p-mTOR/mTOR降低(P<0.05); 与石菖蒲组比较,石菖蒲+激活剂组黑质p-AKT/AKT,p-mTOR/mTOR升高(P<0.05)。结论 石菖蒲挥发油可提升帕金森病(Parkison’s disease,PD)模型小鼠运动协调能力,促进黑质多巴胺能神经元自噬,提升多巴胺水平,抑制AKT/mTOR通路可能是其发挥作用的机制之一。     

姜黄素对帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元损伤的保护作用

目的研究姜黄素对由MPTP诱发的帕金森病小鼠模型的脑保护作用及其可能机制。方法应用免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法(Western blotting)分别观察姜黄素干预前后帕金森病小鼠中脑黑质-纹状体系统中酪氨酸羟化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性神经元数目的变化,以及酪氨酸羟化酶、诱导型一氧化氮合酶和胶质纤维酸性蛋白表达水平的变化。结果MPTP组小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性神经元数目明显减少,与正常对照组及治疗组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。经不同剂量(5mg/kg、50mg/kg和150mg/kg)的姜黄素干预治疗后,小鼠中脑纹状体中的酪氨酸羟化酶蛋白表达水平(相对灰度值)明显升高,而黑质中诱导型一氧化氮合酶和胶质纤维酸性蛋白表达水平明显降低,与MPTP组比较差异均有统计学意义(P<0.05);MPTP组与溶剂对照组(MPTP DMSO)之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论姜黄素可以有效地拮抗MPTP诱导的帕金森病小鼠模型黑质多巴胺能神经元的丢失,其机制可能与姜黄素降低黑质多巴胺能神经元活性氧含量以及抑制炎症反应等作用有关。     

帕金森病IgG诱导多巴胺能神经元损伤机制的初步研究

目的采用帕金森病(PD)患者的血清IgG建立PD的细胞模型,探讨其诱导中脑多巴胺(DA)能神经元损伤的机制.方法采用四唑盐(MTF)检测、免疫细胞化学染色和液闪测定法评价DA能细胞数目、形态和功能的变化,并检测一些毒性物质的作用,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)用酶联免疫吸附试验(ELISA法);NO用Griess法;O-2用细胞色素C还原法.结果PD IgG在补体参与时,可诱导原代中脑神经元-胶质细胞培养体系的DA能神经元出现选择性损伤(DA摄取力由1012.3 cpm下降至670.5 cpm,P＜0.01).疾病对照组和健康对照组的IgG即使在补体存在时对DA能细胞的数目、形态和功能也无明显影响(P＞0.05).原代培养如抑制胶质细胞,则PD IgG即使在补体存在时对DA能细胞也无明显的毒性作用(P＞0.05).来源于毒性物质的检测、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)、抗TNF-α、抗IL-Iβ、L-硝基-精氨酸甲酯的数据表明,PD IgG诱导的DA能神经元的损伤受O-2(4.65 nmoL/106细胞)的介导.结论PD IgG可诱导原代培养的中脑DA能神经元的选择性损伤,受补体、胶质细胞和活性氧自由基的介导,提示PD的发病可能涉及免疫机制.     

高频刺激底丘脑核阻止帕金森病黑质多巴胺能神经元变性的实验研究

目的评价电刺激底丘脑核（ＳＴＮ）对帕金森病黑质多巴胺能神经元变性的影响。方法　实验用大鼠随机分为四组：第１组　纹状体仅注射６－羟基多巴（６－ＯＨＤＡ）;第２组　底丘脑核区插入电极进行刺激组;第３组　底丘脑核刺激后６－ＯＨＤＡ再注射纹状体组;第４组　假刺激底丘脑核后再注射６－ＯＨＤＡ入纹状体组。手术后６周,分别观察各组大鼠阿朴吗啡（ＡＰＯ）诱发旋转行为及黑质多巴胺能神经元改变情况。结果第１、４组出现明显的ＡＰＯ诱发对侧旋转行为,第２、３组出现同侧旋转;酪氨酸羟化酶（ＴＨ）免疫组织化学染色显示,黑质区ＴＨ免疫反应（ＴＨ－ＩＲ）神经元数目在２、３组双侧无明显不同,而１、４组注射侧ＴＨ－ＩＲ神经元数目显著降低（Ｐ＜０．０１）。结论我们的结果表明,ＳＴＮ电刺激可以保护黑质多巴胺能神经元免受６－ＯＨＤＡ的毒性损害,提示这种治疗方法可以阻止或延缓帕金森病的继续发展和恶化。     

帕金森病多巴胺能神经元模型的建立

帕金森病是一种常见的中枢神经系统进行性退行性病变，其病因机制尚未明确，且缺乏令人满意的治疗方法。因此，建立有效的帕金森病模型对其病凶机制的进一步探讨有着重要的意义。Berger等人于1982年建立腹侧中脑原代细胞培养方法，通常应用小鼠或大鼠胚胎(13～15d胎龄)中脑组织进行培养。多巴胺能神经元可存体外存活长达数月，因此，可为多巴胺能神经元急性或慢性损伤的病因机制的研究提供实验手段。多巴胺能神经元在体外可通过免疫化学、放射自显影及荧光组织化学等方法确认。故其形态学及数量上的改变在体外较容易被检测，凶而这种实验模型的建立对于帕金森病病凶机制及新的治疗方法的探讨将起着重要的作用。     

谷胱甘肽对黑质多巴胺能神经元保护作用的研究

目的　探讨谷胱甘肽对多巴胺能神经元保护作用。方法　用还原型谷胱甘肽和 6 羟多巴胺孵育大鼠脑片 1小时 ,用抗酪氨酸羟化酶免疫组织化学法观察黑质阳性神经元胞体及突起的变化。结果　 6 羟多巴胺使脑片黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元突起明显减少 ,而胞体不变 ;谷胱甘肽单独不影响多巴胺能神经元 ,但却阻止 6 羟多巴胺引起的神经元突起减少。结论　谷胱甘肽能阻止 6 羟多巴胺导致的多巴胺能神经元的变性 ,对多巴胺能神经元具有保护作用     

高频刺激底丘脑核阻止帕金森病黑质多巴胺能神经元变性的 …

目的 评价电刺激底丘脑核（ＳＴＮ）对帕金森病黑质多巴胺能神经元变性的影响。方法 实验用大鼠随机分为四组：第１组 纹状体仅注射６－羟基多巴（６－０ＨＤＡ）;第２组 底丘脑核区插入电极进行刺激组;第３组 底丘脑核刺激后６－ＯＨＤＡ再注射纹状体组;第４组 假刺激 丘脑核后再注射６－ＯＨＤＡ入纹状体组。手术后６周,分别观察各组大鼠阿朴吗啡诱发旋转行为及黑质多巴胺能神经地改变情况。     

脑源性神经营养因子对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元 …

目的 观察脑源性神经营养因子对帕金森病大鼠模型黑质多巴胺能神经元的影响。方法 将６－羟基多巴胺用立体定向注入大鼠一侧中脑黑质制作ＰＤ大鼠模型,并在注入６－羟基多巴胺之间每天向预伤侧壳核区定位注入ＢＤＮＦ,采用酪氨酸羟化酶免疫组化方法及透视电镜等观察ＢＤＮＦ对黑质多巴胺能神经元的显微超微结构影响。结果 ＢＤＮＦ能改善６－羟基多巴胺造成的ＰＤ大鼠黑质多巴胺能神经元数目减少及超微结构影响。结论 ＢＤＮＦ     

氯化锂对MPTP致帕金森病小鼠模型行为学及黑质多巴胺能神经元影响的研究

目的 探讨氯化锂对MPTP致帕金森病小鼠模型行为学及黑质多巴胺能神经元保护作用的影响.方法 实验小鼠随机分为MPTP组、NS(生理盐水)组、LM(LiCl +MPTP)组、PM(PBS+ MPTP)组;通过行为学观察各组震颤麻痹、移动格子数、站立次数、滚轴次数、游泳能力;免疫组织化学染色与免疫印迹技术观察各组酪氨酸羟化酶(TH)和钙结合蛋白(CB)的表达变化.结果 行为学检测LM组震颤麻痹评分、移动格子数、站立次数、滚轴实验、游泳能力都显著高于PM组(P＜0.05);免疫组织化学染色结果显示LM组黑质致密部TH与CB阳性神经元数量显著多于PM组;Western blot免疫印迹结果显示LM组TH、CB蛋白含量表达水平显著高于PM组(P＜0.01或0.05).结论 氯化锂可明显改善MPTP所致小鼠PD模型的运动障碍,且对其引起的DA神经元损伤起到保护作用,这种保护作用与细胞内CB表达增加有关;PD模型行为学与多巴胺能神经元的变化具有一致性.     

铁在大鼠黑质多巴胺能神经元损伤中作用研究

目的：观察铁在多巴胺能神经元损伤过程中的作用，并探讨铁在帕金森病Parkinson disease，PD)起病阶段的作用。方法：通过PD大鼠模型，采用生化、TUNEL方法观察6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑立体定向注射1、7、14、21d PD黑质铁浓度、自由基以及黑质细胞凋亡数变化。结果：1～21d PD大鼠黑质铁浓度、自由基及凋亡细胞数随时间增加而增加，并显著高于对照组。结论：铁在PD发病中具有重要作用。     

骨化三醇对脂多糖诱导帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元的保护作用

目的探讨骨化三醇对多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法用骨化三醇腹腔注射治疗脂多糖(LPS)偏侧帕金森病(PD)模型大鼠。成年雄性SD大鼠60只随机分为4组1对照组:右侧黑质致密部立体定向注射2μL生理盐水;2 LPS模型组:右侧黑质致密部立体定向注射LPS 2μL(5μg·μL-1);3骨化三醇高剂量组:LPS造模前7 d和造模后14 d,分别腹腔注射骨化三醇0.1μg·kg-1;4骨化三醇低剂量组:LPS造模前7 d和造模后14 d,分别腹腔注射骨化三醇0.05μg·kg-1。每组大鼠均n=15。观察阿扑吗啡诱导的PD大鼠旋转行为变化,免疫荧光组化学法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)的表达,ELISA法测定黑质区炎性因子(IL-1β和TNF-α)的变化。结果骨化三醇干预组大鼠旋转圈数相对于LPS模型组明显降低,其黑质TH阳性神经元存活比率显著高于LPS模型组,且能明显减少黑质中IL-1β和TNF-α的释放量。结论骨化三醇能够减轻LPS引起的大鼠多巴胺能神经元的损害,其机制与减少免疫炎症因子的释放有关。     

脑源性神经营养因子对帕金森病大鼠黑质多巴胺能神经元的影响

目的 观察脑源性神经营养因子（Ｂｒａｉｎ ｄｅｒｉｖｅｄ－ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ,ＢＤＮＦ）对帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ,ＰＤ）大鼠模型黑质多巴胺能神经元的影响。方法将６－羟基多巴胺用立体定向法注入大鼠一侧中脑黑质制作 ＰＤ大鼠模型,并在注入６－羟基多巴胺之间每天向预伤侧壳核区定位注入ＢＤＮＦ,采用酪氨酸羟化酶免疫组化方法及透射电镜等观察ＢＤＮＦ对黑质多巴胺能神经元的显微超微结构影响。结果　ＢＤＮＦ能改善６－羟基多巴胺造成的ＰＤ大鼠黑质多巴胺能神经元数目减少及超微结构影响。结论　ＢＤＮＦ可减轻６－羟基多巴胺对黑质多巴胺能神经元的毒性作用。     

大鼠行为学改变与黑质多巴胺能神经元的相关性研究

目的　观察毁损黑质多巴胺能神经元大鼠行为学及其形态学变化特点 ,探讨两者之间的相关性。方法　利用 6 -羟基多巴胺 (6 - OHDA)单侧一点注射大鼠黑质致密区 (SNc) ,特异毁损多巴胺 (DA )能神经元 ,采用开野实验观察术后 1d、3d、5 d、7d、14 d、2 1d行为学变化 ;利用 Nissl染色、HE染色、免疫组织化学方法和电镜的方法 ,观察各时间点黑质形态学变化。结果　毁损侧 DA能神经元逐渐减少 ,超微结构损伤逐渐加重 ;开野实验中旋转、探究、后肢站立和穿梭行为在术后 1d即有显著改变 (与对照组比较 P<0 .0 5 ) ,其中 ,旋转行为与毁损程度呈正相关 (r=0 .4 71,P <0 .0 1) ,探究、后肢站立和穿梭行为与毁损程度呈负相关 (r分别为 - 0 .719、- 0 .5 89、- 0 .5 94 ,P <0 .0 1) ,修饰行为与毁损程度无相关性 (r=- 0 .2 2 7,P>0 .0 5 )。结论　黑质 DA能神经元丢失是毁损大鼠行为改变的病理学基础 ,开野实验可作为丢失程度的敏感行为学观察指标。