细胞周期调节负控蛋白P27在肾小球系膜细胞增殖中的调控作用

目的探讨lL-13,ET-1,甲基强的松龙及肝素钠对肾小球系膜细胞膜表达细胞周期负控p27的变化.方法不同浓度IL-13(10ng/ml,100ng/ml),ET-1(10-7mol/L),甲基强的松龙0.5μg/ml,肝素钠100mg/L和200mg/L,作用于培养的系膜细胞.流式细胞仪检测p27表达水平.结果IL-13 10 ng/ml组和100ng/ml浓度组p27表达为(46.74±3.25)和(23.8±2.56),与对照组比较有明显差异(P＜0.001,P＜0.05),两浓度组之间有显著差异(P＜0.01).ET-1刺激14h和18h后p27的表达分别为(14.76±1.49)和(12.18±1.30),与对照组比较均有明显差异(P＜0.05,P＜0.05).甲基强的松龙48h及72 h p27表达为(9.9±1.01)和(9.12±0.93),与对照组比较明显降低,P＜0.001.肝素钠100mg/L和200 mg/L浓度p27的表达分别为(26.94±1.23)和(28.04±0.99),较对照组明显升高(P＜0.05),不同浓度组间比较无明显差异.结论肾小球系膜细胞受不同因素作用后细胞周期调节负控蛋白p27表达水平不同.p27在调节系膜细胞增殖过程中起重要作用.     

白细胞介素-13对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 观察白细胞介素-13(IL-13)对肾小球系膜细胞增殖的影响。方法 应用流式细胞仪检测加入不同浓度的IL-13作用后对肾小球系膜细胞DNA含量的变化。结果 各实验组的DNA合成前期细胞(G1期)数增加,而合成期细胞(S期)数降低,各种浓度组与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论IL-13具有抑制肾小球系膜细胞增殖及其炎症因子产生等重要作用。     

IL-13对肾小球系膜细胞的IL-12表达的影响

目的探讨白细胞介素13（IL-13）对肾小球系膜细胞分泌白细胞介素12（IL-12）的调节作用。方法用酶联免疫吸附（ELISA）法和逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测系膜细胞的IL-12蛋白水平和IL-12p40 mRNA的表达。结果未受刺激的系膜细胞无IL-12mRNA的表达及其蛋白分泌。LPS诱导系膜细胞的IL-12p40mRNA的表达及其蛋白分泌。IL-13在1～100ng／ml的浓度范围内呈剂量依赖性抑制LPS诱导的系膜细胞的IL-12分泌及其mRNA的表达。结论LPS诱导系膜细胞分泌IL-12，而IL-13则抑制LPS诱导的系膜细胞IL-12的表达；IL-13可能通过抑制IL-12的产生，调整了体内Th1／Th2细胞因子的平衡，作为抗炎性细胞因子在肾小球肾炎发病机制中发挥一定的作用。     

白细胞介素—13对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 :观察白细胞介素 - 1 3(IL - 1 3)对肾小球系膜细胞增殖的影响。方法 :应用流式细胞仪检测加入不同浓度 IL - 1 3作用后对肾小球系膜细胞 DNA含量的变化。结果 :各实验组的 DNA合成前期 (G1期 )细胞数增加 ,而合成期 (S期 )细胞数降低 ,各实验组与对照组比较 ,差异均有显著性 (P<0 .0 1 )。结论 :IL - 1 3具有抑制肾小球系膜细胞增殖作用     

IL—1和IL—6对肾小球系膜细胞炎症效应的作用

应用＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法和四甲基偶氮唑ＭＴＴ比色法探讨了人重组白细胞介素１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１，ＩＬ－１）和白细胞介素６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）对成人肾小球系膜细胞增殖的影响。结果发现，在无血清培养条件下，γＩＬ－１（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＩＬ－１）和γＩＬ－６（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＩＬ－６）均不能刺激系膜细胞的繁殖；而在有少量胎牛血清存在的条件下     

高糖对神经小胶质细胞IL-1β、IL-6蛋白及其基因表达的影响

目的 探讨不同浓度葡萄糖对神经小胶质细胞IL-1 β、IL-6蛋白及其基因表达水平的影响.方法 将体外培养的小鼠小胶质细胞随机分为:正常对照组(NC组)和葡萄糖浓度为30mmol/L组(G1组)、35 mmol/L组(G2组)、45mmol/L组(G3组),并观察各组细胞形态变化,同时测定细胞培养上清液中IL-1 β、IL-6蛋白和小胶质细胞IL-1 β、IL-6mRNA水平.结果 G2组和G3组培养24h后与NC组比较,神经小胶质细胞易于聚集,胞体、胞核变大,枝状突起明显,胞质内颗粒物增多,且随着葡萄糖浓度升高其作用更为明显;G1组培养上清液中IL-1 β、IL-6蛋白水平和NC组的差异均无统计学意义(均P>0.05),G2组和G3组培养上清液中IL-1 β、IL-6蛋白水平均较NC组明显增高(均P<0.01);高浓度葡萄糖各组IL-1 β和IL-6mRNA的表达水平均较NC组明显增加(均P<0.01),且G2组和G3组的基因表达水平均较G1组显著增高(均P<0.01).结论 高糖可上调神经小胶质细胞IL-1 β、IL-6的蛋白及mRNA表达水平.     

复方血尿停经肝微粒体代谢后对肾小球系膜细胞的影响

目的探讨复方血尿停治疗以系膜增生为主要病理改变的肾小球疾病的作用机制。方法将复方血尿停与大鼠肝微粒体共同孵育后加入到肾小球系膜细胞(GMC)体外培养体系中,MTT法观察细胞增殖情况,放射免疫法测定白细胞介素-6(IL-6)、内皮素-1(ET-1)水平,速率法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果经肝微粒体代谢后,复方血尿停2、4、8mg/mL均抑制GMC的增殖及IL-6、ET-1的产生,且呈剂量依赖方式。结论复方血尿停能抑制IL-6、ET-1的分泌和GMC的增殖,此作用可能是其治疗系膜增生性肾小球疾病的作用机制之一。     

高糖环境对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞IL-18、TGF-β1表达的影响

目的:观察高糖环境下肾小球系膜细胞白细胞介素18(IL-18)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的变化及其相互关系。方法:将HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常葡萄糖(NG组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)和高糖浓度(HG组:葡萄糖浓度为25 mmol/L)环境中,荧光定量PCR检测各组IL-18和TGF-β1 mRNA的表达量,而后分组加入不同浓度的IL-18(浓度分别为1、10、50、100 ng/dL)和IL-18抗体(浓度为100μg/dL),荧光定量检测TGF-β1 mRNA的表达量。结果:与NG组比较,HG组细胞IL-18、TGF-β1表达增加,TGF-β1表达水平随IL-18浓度增高而增加,用IL-18抗体阻断IL-18后TGF-β1的表达受到抑制。结论:高糖可导致IL-18、TGF-β1表达升高;TGF-β1表达升高依赖于IL-18,且有剂量依赖性;阻断IL-18可抑制TGF-β1的升高。     

肌肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖的影响及机制

目的探讨肌肽(carnosine)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs)增殖的影响及作用机制。方法以RMCs为研究对象,分别采用MTT法和BrdU-ELISA法观察肌肽对高糖诱导的RMCs增殖的影响;乳酸脱氢酶(LDH)法检测肌肽对细胞的毒性作用;酶生化法测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)含量及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性等。结果肌肽可显著抑制高糖诱导的RMCs增殖,在5～30 mmol/L范围内呈一定的浓度依赖效应,且与其抗氧化作用密切相关。结论肌肽通过抗氧化作用抑制高糖诱导的RMCs增殖,且有浓度依赖趋势。     

高糖对肾小球系膜细胞Smurf2表达的影响

目的观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾小球系膜细胞胞内Smad泛素调节因子2(Smurf2)的表达,探讨泛素化降解在糖尿病肾病中的作用。方法将体外培养的大鼠肾系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、20 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖组、甘露醇组。分别用real ti me quantitative PCR法和细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞Smurf2的mRNA和蛋白的表达。结果(1)正常对照组系膜细胞Smurf2的mRNA和蛋白表达较弱。(2)高糖组Smurf2的mRNA和蛋白表达较正常对照组增强(P<0.05),呈浓度依赖性。结论高糖可诱导肾系膜细胞Smurf2表达增强。提示泛素-蛋白酶体途径可能参与了糖尿病肾病的病理进程。     

甘草酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤的影响

目的 探讨甘草酸(GA)对高糖诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤的影响.方法 将HBZY-1细胞分为:正常对照组(NG组)、高糖组(HG组)、高糖+GA组(HG+GA组).采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性.用紫外分光光度法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,用激光共聚焦检测活性氧(ROS)变化.采用免疫组织化学和Westernblot检测锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)蛋白的表达,用Q-PCR检测Mn-SOD mRNA.结果 (1)各组HBZY-1细胞形态变化:HBZY-1细胞为菱形,NG组细胞形态正常,结构清晰可辨;HG+GA组细胞数量略增多,个别细胞胞体略肥大;HG组细胞结构不甚清晰,细胞扁平,数量明显增多,胞体略肥大.(2)各组HBZY-1细胞的增殖效应:与NG组相比,HG组OD值明显升高(P＜0.05),HG+ GA组与HG组相比OD值降低(P＜0.05).(3)RDS含量:HG组RDS相对含量较NG组有所上升,HG+GA组ROS相对含量下降(P＜0.05).(4)各组细胞中Mn-SOD的表达:与NG组相比,HG组Mn-SOD相对表达减少(P＜0.05),HG+GA组与HG组相比Mn-SOD表达升高(P＜0.05).结论 GA对高糖诱导的HBZY-1细胞异常增殖有一定的抑制作用,GA可通过氧化应激保护高糖诱导肾小球系膜细胞所致的细胞肥大和细胞损伤,GA能调节高糖诱导下Mn-SOD的表达.     

高糖对培养的肾小球系膜细胞产生t-PA及与其结合的影响

目的 观察高糖状态下系膜细胞与组织型纤溶酶原激活物（Tissue plasminogen,t-PA）结合力及系膜细胞产生t-PA活性改变与纤维连接蛋白（Fibromectin,FN）产生的影响。方法 采用体外人肾小球系膜细胞培养，放射性核素标记法测定系模细胞与t-PA结合力，纤维蛋白酶谱法检测t-PA活性，酶联免疫分析检测FN。结果 高糖可抑制系膜细胞与t-PA结合力，同时t-PA活性增加，FN产生明显增多，并随着培养时间的延长，葡萄糖愈高，作用愈明显。结论 高糖致系膜细胞与t-PA结合力下降，t-PA活性增加，同时可能其抑制物明显增多，导致细胞外基质积聚，可能是糖尿病肾小球坚硬是化发生的重要原因之一。     

罗格列酮对高糖培养的大鼠系膜细胞增生及p27表达的影响

目的:探讨罗格列酮对糖尿病肾病保护作用的机制。方法:体外培养的大鼠系膜细胞分为正常对照组(NG,含5.6mmol/L D-葡萄糖),NG+甘露醇(25 mmol/L)组,高糖组(HG,含30mmol/L D-葡萄糖),HG+罗格列酮(5μmol/L)组,HG+罗格列酮(10μmol/L)组,HG+罗格列酮(20μmol/L)组。用MTT法测定细胞增生,免疫细胞化学法测定p27Kip1表达。结果:(1)培养72小时后,在模拟高血糖的高糖培养基中,各浓度罗格列酮均可抑制大鼠系膜细胞增生,且此作用与渗透压改变无关。(2)与NG组相比,HG组培养24小时p27表达降低(P<0.05),与其增生活跃相一致,随时间延长,p27表达量逐渐增加,48、72小时无明显差异。与HG组相比,5μmol/L罗格列酮组作用24、48小时无明显差异,作用72小时p27表达增加(P<0.05);10μmol/L、20μmol/L罗格列酮组在各时间点均增加p27表达,有统计学意义。随着罗格列酮剂量增加,p27表达也明显增加。结论:在高糖环境下罗格列酮至少部分通过增加p27表达引起系膜细胞增生抑制,从而对糖尿病肾病起保护作用。     

Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响

目的:探讨Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L)?Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L)?高糖组(HG组,葡萄糖浓度30mmol/L)和高糖+Resveratrol组(HG+Res组,葡萄糖浓度30 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L),各组细胞分别培养72 h,用比色法测定细胞上清液丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,蛋白含量/细胞数比值评估系膜细胞大小,Western blot法检测细胞内p27蛋白表达的变化?结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均明显上调(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均降低(P < 0.05)?②与NC组相比,HG刺激72 h后,大鼠肾小球系膜细胞肥大?p27蛋白表达明显增加(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞细胞肥大减轻?p27蛋白表达减少(P < 0.05)?Res组和NC组之间p27蛋白表达无统计学意义(P > 0.05)?结论:Resveratrol可能通过缓解高糖诱导系膜细胞的氧化应激?抑制p27蛋白高表达,减轻糖尿病肾脏疾病早期的肾脏肥大?     

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响

目的:观察雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响.方法:在高糖状态下培养系膜细胞,予以不同剂量雷帕霉素进行干预,采用MTT的方法观察细胞增生能力,并用流式细胞仪检测各组系膜细胞体积,以前向角散射光平均强度表示细胞大小,Western印迹法检测细胞中纤维连接蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达变化.结果:同正常糖及甘露醇组比较,高糖可使肾小球系膜细胞增生且发生肥大,同时高糖环境下系膜细胞分泌的FN及ColⅣ显著增加(P＜0.05),而雷帕霉素能显著抑制高糖的上述作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论:雷帕霉素可以抑制高糖状态下系膜细胞的增生、肥大及细胞外基质的合成,且呈剂量依赖性,有望用于糖尿病肾病的防治.