外源性胶质细胞源性神经营养因子对慢传输型便秘大鼠肠道传输功能的影响

背景：慢传输型便秘（STC）是一种以结肠动力障碍为主要特点的顽固性便秘,与肠神经系统功能紊乱密切相关。目的：探讨外源性胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对STC大鼠结肠组织中的GDNF表达及其肠道传输功能的影响。方法：以大黄灌胃建立STC大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组、GDNF对照组、STC模型组和模型GDNF组。GDNF对照组和模型GDNF组经尾静脉注射重组人GDNF,正常对照组和STC模型组经尾静脉注射0．9％NaCl溶液。1周后,以墨汁推进实验测定肠道传输功能,以免疫组化法检测结肠组织GDNF表达。结果：STC模型组肠道推进率与正常对照组和GDNF对照组相比显著降低（P〈0．叭）;模型GDNF组肠道推进率与STC模型组相比显著升高（P〈0．01）,与正常对照组和GDNF对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。STC模型组结肠组织GDNF阳性面积和积分光密度（IOD）值与正常对照组和GDNF对照组相比显著降低（P〈0．01）;模型GDNF组GDNF阳性面积和IOD值与STC模型组相比显著升高（P〈0．01）,与正常对照组和GDNF对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：长期使用大黄会导致大鼠肠壁组织中的GDNF表达减少,而给予外源性GDNF可提高其表达,从而改善肠道传输功能。     

慢传输型便秘大鼠结肠组织GFRα1、RET、NCAM的表达以及外源性GDNF的影响

背景：研究证实胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）既可抗神经元凋亡．又可阻止神经细胞胞体萎缩．从而改善肠道动力,但其具体机制目前仍未完全明了。目的：研究慢传输型便秘（STC）大鼠结肠组织中GFRα1、RET、NCAM的表达以及外源性GDNF对其的影响,从而探讨GDNF保护STC大鼠结肠神经元的途径及其信号转导机制。方法：44只大鼠随机分为对照组和模型组,以大黄灌胃建立STC模型。造模成功后．对照组进一步分为正常对照组和GDNF组,模型组分为STC组和STC＋GDNF组。GDNF组和STC＋GDNF组大鼠尾静脉注射rhGDNF．其余两组注射O．9％NaCl溶液。1周后处死大鼠,采用免疫组化法检测结肠组织中GFRα1、RET、NCAM表达。结果：STC组GFRα1、NCAM表达较正常对照组显著减弱（P〈0．05）;STC组大鼠以GDNF干预后,GFRα1、NCAM表达较STC组显著增强（P〈0．05）;GDNF组GFRα1、NCAM表达亦较STC组、正常对照组显著增强（P〈0．05）。RET仅在正常对照组结肠组织少量表达,其余各组均无表达。结论：长期使用大黄可减弱结肠组织中GFRα1、NCAM的表达,外源性GDNF可能通过GDNF—GFRα1—NCAM途径而非GDNF—GFRα1—RET途径进行信号转导．从而保护结肠神经元。     

胶质细胞源性神经营养因子在慢传输型便秘大鼠结肠的表达及其对肠道传输功能的影响

C模型组与STC模型加GDNF组(2.21)相比(P=0.017),GDNFmRNA相对表达水平差异有统计学意义;正常组与STC模型加GDNF组的差异无统计学意义.结论 STC大鼠结肠GDNF的表达下调,在STC发病中起一定作用;STC模型组肠道传输明显减慢,外源性GDNF对肠道传输功能有明显促进作用.     

大鼠泻剂结肠肠壁神经生长因子受体p75的表达及其意义

背景：神经生长因子（NGF）及其受体与肠神经系统关系密切，演剂结肠有肠壁神经丛损害，但NGF受体p75在泻剂结肠中的表达和作用尚不明确。目的：研究NGF受体p75在正常大鼠和泻剂结肠大鼠中的表达及其在泻剂结肠形成中的意义。方法：采用大黄和酚酞建立泻剂结肠大鼠模型，以墨汁推进试验测定其传输功能：采用免疫组化法对正常大鼠和泻剂结肠大鼠的结肠肠壁进行p75检测。观察其在肠壁中的分布和表达情况。结果：与对照组相比，模型组肠道传输功能明显减慢，大黄组和酚酞组黑染肠管长度和百分比（黑染肠管长度／肠管总长度）均较对照组显著减低（P〈0．01，P〈0．05）。p75存正常大鼠结肠黏膜下神经丛中呈阳性表达，在肌间神经丛中多呈弱阳性表达。大黄组中p75表达明显增强，黏膜下神经丛亦呈强阳性表达，与对照组相比有显著差异（P〈0．01）；肌间神经从中多呈阳性表达（P〈0．05）。酚酞组黏膜下神经丛呈阳性表达，肌间神绎丛3只呈阳性表达，余表现为弱阳性或阴性，与对照组相比无明显差异。结论：p75在泻剂结肠中的异常表达可能参与肠神经丛冲经元细胞的退化变性或凋亡．从而引起泻剂结肠的肠神经系统病理变化，进一步导致结肠动力异常。这种损害与长期应用刺激性泻剂有关。     

GDNF在慢传输型便秘大鼠胃壁中的表达以及外源性GDNF影响的研究

背景:慢传输型便秘(STC)主要以结肠传输功能障碍为特点,外源性胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)可改善其结肠动力。已有多项研究显示STC存在胃动力障碍,但胃壁GDNF异常表达以及外源性GDNF对胃动力障碍的作用目前尚无相关报道。目的:探讨GDNF在STC大鼠胃壁中的表达以及外源性GDNF的影响。方法:以大黄灌胃建立STC大鼠模型。将大鼠随机分为正常组、GDNF组、STC模型组和STC模型GDNF组,GDNF组和STC模型GDNF组大鼠尾静脉注射重组人GDNF,其余两组注射0.9%NaCl溶液。1周后处死大鼠,分别以RT-PCR和免疫组化法检测胃壁GDNF mRNA和蛋白表达。结果:STC模型GDNF组胃壁GDNF mRNA表达明显高于STC模型组(P0.05),STC模型组GDNF mRNA表达显著低于GDNF组(P0.05);STC模型GDNF组GDNF阳性表达与STC模型组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:长期使用大黄可减弱GDNF在STC大鼠胃壁组织中的表达;外源性GDNF可提高GDNF在STC大鼠胃壁组织中的表达。     

不同分型功能性便秘患者结肠传输功能、胃肠激素以及一氧化氮合酶的研究

背景：功能性便秘（FC）是一种常见的功能性胃肠病。其病因和发病机制目前尚不明确。目的：探讨不同分型FC患者结肠传输功能、胃肠激素以及一氧化氮合酶（NOS）的变化。方法：56例符合罗马Ⅲ标准的FC患者和20名健康志愿者纳入本研究。采用不透X线标记物法行结肠传输试验．放射免疫法测定降结肠、直肠黏膜促胃动素（MTL）、P物质（SP）、生长抑素（SS）、血管活性肠肽（VIP）和NOS水平。结果：56例FC患者中,传输时间正常者19例,传输时间延长者37例,其中结肠慢传输型（STC）21例,出口梗阻型（OOC）9例,混合型（MC）7例。与正常对照组相比,传输时间正常组降结肠、直肠黏膜MTL、SP、SS、VIP和NOS水平无明显差异;STC组降结肠、直肠黏膜MTL水平显著降低（P〈0．05）：STC、MC组降结肠、直肠黏膜SP水平显著降低而NOS水平显著升高（P〈0．05）;STC、MC组降结肠黏膜SS水平显著升高（P〈0．05）;STC、OOC组降结肠、直肠黏膜VIP水平显著降低（P〈0．05）。结论：各型FC降结肠、直肠黏膜胃肠激素和NOS水平改变不同．其异常导致胃肠平滑肌功能紊乱．可能与FC的发病有关。     

内脏高敏感大鼠肠道5-羟色胺转运体的变化以及中药肠吉安治疗的研究

目前认为肠易激综合征（IBS）的主要病理机制之一是内脏高敏感，5-羟色胺（5-HT）在内脏高敏感的发生中起重要作用，而5-HT主要通过5-HT转运体（SERT）调节。目的：研究内脏高敏感大鼠结肠黏膜5-HT和SERT的表达，并评估中药肠吉安对内脏高敏感的疗效。方法：18只Sprague-Dawley新生大鼠随机分为对照组、模型组、肠吉安治疗组，后两组制备内脏高敏感模型。对照组和模型组予0．9％NaCl溶液，肠吉安治疗组予0．9％NaCl溶液和中药肠吉安。比较各组腹壁回撤反射（AWR）评分，并取结肠组织行5．HT、SERT免疫组化染色。结果：与对照组相比，在10、20和40mmHg（1mm Hg=0．133kPa）压力结直肠扩张时，模型组大鼠AWR评分显著升高（P〈0.05），结肠黏膜5-HT表达显著增高（P〈0．05），SERT表达则降低（P〈0．05）。肠吉安治疗后，在较低压力下，AWR评分较模型组显著降低（P〈0．05），5-HT表达显著降低（P〈0．05），SERT表达则显著升高（P〈0．05）。结论：肠道SERT表达降低导致5-HT表达增高，可能是IBS大鼠内脏高敏感的重要机制之一，中药肠吉安可使两者在肠道的表达趋向正常，从而改善大鼠内脏高敏感。     

慢性束缚及夹尾刺激致大鼠肠易激综合征模型的建立及其内脏敏感性评价

[目的]探讨建立肠易激综合征（IBS）动物模型的方法，并评价其内脏敏感性变化。[方法]采用慢性束缚、夹尾刺激作为应激原诱导IBS大鼠模型，检测其肠道运动（结肠排便时间、排便颗粒）和感觉（腹壁收缩反射、腹壁肌电活动），并以逍遥散及匹维溴胺进行药物反证。[结果]与正常对照（对照）组比较，慢性束缚、夹尾刺激诱导IBS大鼠结肠转运效应明显增高（P〈0．01），在1．0、1．5、2．0ml不同扩张容量下腹壁收缩反射评分及腹壁肌电活动明显增高（P〈0．05，〈0．01）。而经药物治疗后，可明显降低大鼠结肠转运功能及内脏高敏感性（P〈0．05，〈0．01）。[结论]慢性束缚、夹尾刺激可以引起大鼠肠道运动增强，内脏敏感性增高，而肠黏膜未见异常病理改变，符合IBS的基本特征，可用于实验研究。     

不同类型一氧化氮合酶在慢传输型便秘大鼠结肠中的表达

目的探讨不同类型一氧化氮合酶在慢传输型便秘（STC）大鼠结肠的表达。方法健康Wistar大鼠32只,随机分为STC组、对照组,每组16只。采用复方苯乙哌啶灌胃法制备STC大鼠模型,饲养100天后,采用活性炭灌胃法测定肠道传输速度确定模型建立。用免疫组织化学方法分别检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、神经型一氧化氮合酶（nNOS）及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）在大鼠结肠的表达情况。结果 STC组大鼠肠道传输速度与对照组相比明显减慢,首粒黑便排出时间为（686±57）min,较对照组大鼠（608±46）min显著延长（P〈0.05）。免疫组化结果显示,iNOS在STC大鼠结肠的表达明显强于对照组（P〈0.05）;eNOS、nNOS的表达与对照组比较均无明显差异（P〉0.05）。结论 iNOS在STC大鼠结肠的表达异常,表明iNOS在慢传输型便秘发病机制中可能起重要作用。     

外源性胶质细胞源性神经营养因子对慢传输型便秘大鼠胃、结肠Akt、MAPK表达的影响

目的 研究慢传输型便秘(STC)大鼠胃、结肠中Akt、MAPK的表达及外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对其的影响,并探讨GDNF对STC大鼠的作用途径及其信号传导机制.方法 成年SD大鼠44只,随机分为对照组和模型组.对照组用生理盐水灌胃;模型组用大黄灌胃,共3.5个月,建立STC大鼠模型.建模成功后,对照组分为正常对照亚组和GDNF亚组,模型组分为STC亚组和STC+GDNF亚组,GDNF亚组和STC+GDNF亚组给予外源性GDNF 1周.采用免疫组化法检测大鼠胃、结肠组织中Akt和MAPK的表达情况.结果 (1)胃组织中,STC亚组的Akt表达水平较正常对照亚组有减弱趋势(P＞0.05);STC+GDNF亚组较STC亚组增强(P＜0.05);STC+GDNF亚组与正常对照亚组、GDNF亚组比较,Akt表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05).(2)结肠组织中,STC组的Akt、MAPK表达水平均较正常对照亚组减弱(P＜0.05),而在STC+GDNF亚组表达均增强(P＜0.05).(3)胃组织中,STC亚组的MAPK表达水平较正常对照亚组减弱(P＜0.05);STC+GDNF亚组较STC亚组表达增强(P＜0.01);STC+GDNF亚组与正常对照亚组、GDNF亚组比较,MAPK表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 长期使用大黄可使大鼠的胃和结肠组织中的Akt和MAPK表达减少,这可能是STC的发病机制之一.外源性GDNF有可能通过提高STC大鼠胃和结肠组织中Akt和MAPK的表达而保护消化道中的神经元.

Abstract：

Objective To study the expression of Akt and MAPK in the stomach and colon of slow transit constipation (STC) in rats, as well as the effect of exogenous glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF) on it. Methods Forty-four SD rats were divided into control group and model group randomly. The STC model group was established by gastric irrigation of rhubarb for 3.5 months. The control group was received normal saline. After model building, each group was equally divided into 2 subgroup randomly, administrated with exogenous GDNF and normal saline by vein injection for one week respectively. The expression of Akt and MAPK in stomach and colon was detected by immunohistochemistry.Results ( 1 ) The expression of Akt in the stomach tended to weaker in STC rats comparing with the normal rats ( P ＞ 0. 05 ), but it was stronger in STC plus GDNF group than in STC group ( P ＜ 0. 05 ). ( 2 ) The expression of Akt and MAPK in the colon was weaker in STC group than in the normal group ( all P ＜0. 05 ), and was stronger in STC plus GDNF group than in STC group ( all P ＜ 0. 05 ). ( 3 ) The expression of MAPK in the stomach in STC group was weaker than in normal group (P ＜ 0.05 ), and was stronger in STC plus GDNF group than in STC group (P ＜0.01 ). There was no significant difference among STC plus GDNF group, normal group and GDNF group (P ＞ 0. 05 ). Conclusions Long term consumption of rhubarb could induce STC by down-regulating the expression of Akt and MAPK in digestive tract. Exogenous GDNF may have a potential role on the etiology of STC.     

增液汤对大鼠泻剂结肠治疗机制的研究

[目的]探讨增液汤对大黄总蒽醌引起大鼠"泻剂结肠"的治疗机制。[方法]实验分2期:第1期建立大鼠泻剂结肠模型;第2期增液汤对大鼠泻剂结肠的治疗作用;分别采用活性炭推进法检测肠道的推进功能、PGP9.5免疫组织化学染色法观察肌间神经元数量的变化和苏木精-伊红染色观察肠道病理改变,依此作为泻剂结肠模型的鉴定和增液汤疗效的观察。[结果]给予大黄总蒽醌灌胃3个月后,大鼠出现肠道推进功能明显减弱(P<0.01)、肌间神经元数目减少(P<0.05)以及黏膜下炎症细胞浸润,模型建立成功;模型治疗组加灌增液汤30d后,各项指标均有明显改善。[结论]增液汤能有效改善长期应用大黄总蒽醌引起的泻剂结肠模型大鼠的肠道传输功能,对肌间神经丛神经元的损伤具有一定的保护作用。增液汤对大黄总蒽醌引起的大鼠泻剂结肠具有治疗作用。     

内吗啡肽对泻剂结肠大鼠结肠肌电活动的影响

目的研究内吗啡肽对泻剂结肠大鼠结肠肌电活动的影响,探讨慢传输性便秘的发病机制。方法建立泻剂结肠动物模型,测定内吗啡肽1和内吗啡肽2对大鼠结肠肌电活动的影响。结果泻剂组大鼠结肠慢波频率和振幅分别为(28.19±7.51)次/min和(0.076±0.018)mV,与对照组比较[(36.05±8.94次/min)和(0.600±0.310)mV]明显降低;内吗啡肽1、内吗啡肽2以浓度依赖方式抑制泻剂结肠的慢波肌电活动,振幅明显降低,频率[(2 8.18±7.51)次/min3无明显变化,内吗啡肽1的作用强于内吗啡肽2。注射内吗啡肽不能阻断乙酰胆碱对结肠的兴奋作用。阿片受体拮抗剂纳洛酮(naloxone)能逆转内吗啡肽的抑制作用。结论内吗啡肽参与了泻剂结肠大鼠结肠肌电活动和结肠动力的调控,可能是慢传输性便秘发病的重要因素之一。     

回直肠吻合分流术对慢传输型便秘大鼠血浆SP及VIP的影响

目的:完成STC大鼠回肠直肠吻合分流手术,观察该术式对STC大鼠血浆SP、VIP的影响.方法:72只SD大鼠,随机取10只作为正常对照组,其余62只用大黄小剂量递增灌胃造模.造模过程中死亡5只,剩余57只,手术前处死12只作为模型对照组.剩余的45只大鼠,随机35只手术组,10只自然恢复组,测定并比较各组大鼠血浆中SP及VIP的含量.结果:SP水平:与正常对照组相比,模型组大鼠血浆SP水平显著降低(63.364±4.211vs81.032±4.237,P<0.01);恢复组对比模型组SP水平降低显著(50.138±5.283vs63.364±4.211,P<0.01);术后1mo,手术组对比恢复组数值增高(58.165±6.592vs50.138±5.283,P<0.05);但仍然低于模型组(58.165±6.592vs63.364±4.211,P<0.05).VIP水平:与正常对照组相比,模型组大鼠血浆VIP水平显著升高(32.152±6.204vs25.469±4.523,P<0.01);恢复组较模型组下降(25.217±3.517vs32.152±6.204,P<0.05),且与正常对照组无显著差异.手术组对比恢复组无显著差异.结论:回直肠吻合分流术明显改善STC大鼠的便秘症状,减轻结肠负担后能减轻结肠功能的进一步恶化,但能否促进大鼠结肠功能恢复尚待进一步研究.     

Expression and significance of nerve growth factor receptor p75 in rats’ cathartic colonic wall

OBJECTIVE: To investigate the expression of nerve growth factor receptor p75 in a normal and cathartic colon and its significance in the formation of the cathartic colon in rats. METHODS: Sixty Sprague–Dawley rats were equally divided into normal control group, rhubarb group and phenolphthalein group. A model of the cathartic colon was constructed by gastric infusion with rhubarb or phenolphthalein in rats. The first dose of rhubarb and phenolphthalein was both 200 mg/kg/d and was increased by 200 mg/kg/d with each passing day. The last dose of rhubarb and phenolphthalein was 3200 mg/kg/d and 4200 mg/kg/d, respectively. The transit function of colon was measured by the Chinese ink expulsion test; the p75 in colon wall was determined by the immunohistochemical method. RESULTS: The transit speed was much slower in the cathartic colon group than that in the control group. The imprinted Chinese ink length and the ratio of imprinted length/total colon length in the rhubarb‐induced cathartic colon was significantly shorter than that of the control group (77.38 ± 8.42 vs 94.25 ± 7.07 cm, P < 0.01). Those in the phenolphthalein‐induced group (83.38 ± 9.75 cm) were also significantly shorter than those of the control group but to a lesser degree (P < 0.05). p75 was abundantly expressed in the submucosal nerve plexus and weakly expressed in the myenteric plexus. The expression of p75 was much higher in the rhubarb‐induced group. The expression was strongly positive in the submucosal nerve plexus, significantly higher than that in the controls (P < 0.01). In the myenteric plexus, p75 was also highly expressed (P < 0.05). In the case of the phenolphthalein‐induced group, the expression of p75 was positive in the submucosal nerve plexus but was positive in the myenteric plexus of three rats only. The remaining rats were negative or weakly positive. This was not significantly different from that of the control group. CONCLUSIONS: The abnormal expression of p75 in cathartic colon probably has some effect on the degeneration or apoptosis of neuronal cells in the enteric nerve plexus, with a subsequent pathological change of the enteric nervous system, and thus leads to abnormalities in colonic dynamics. The kind of lesion is probably associated with long‐term use of irritative cathartics.