乳腺癌中雌激素诱导的细胞增殖与有丝分裂素激活蛋白激酶活性的关系

目的探讨雌二醇与有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系以及MAPK在乳腺癌细胞系中的表达情况。方法分别用上皮生长因子(EGF)和不同浓度的雌二醇诱导人类乳腺癌细胞系MCF-7细胞,诱导不同时间后用Western blot方法检测磷酸化ERK1／2的表达;用抗雌激素物质ICI182780和MAPK抑制剂PD98059作用于雌二醇诱导的MCF-7细胞,检测磷酸化ERK1／2的表达;用流式细胞仪检测雌二醇对MCF-7细胞周期的影响。结果MAPK信号通路的诱导剂EGF可以明显诱导磷酸化MAPK的表达;雌二醇也可以诱导磷酸化MAPK的表达。PD98059可以完全抑制雌二醇诱导的磷酸化ERK1／2水平,而ICI182780只能减少雌二醇诱导的磷酸化ERK1／2的表达。随着作用时间的延长,雌二醇可以使MCF-7细胞G2／M期的细胞数增加。结论雌二醇、雌激素受体与MAPK信号途径关系较为密切,MAPK是乳腺癌中重要的调节信号。     

丝裂原活化蛋白激酶类和蛋白激酶C在转化生长因子β1诱导肾小管细胞结缔组织生长因子表达中的作用

目的了解转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肾小管细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达的机制，特别是蛋白激酶C（PKC）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）在CTGF基因表达中的作用及其对Smad磷酸化的影响。方法分别应用PKC抑制剂G06850以及MAPK的3个组成成分ERK、JNK和p38MAPK的抑制剂PD98059、U0126、SP600125和SB203580阻断相应通路，观察其对TGF．131诱导的CTGF表达以及Smad2／Smad3磷酸化的影响。结果TGF-β1（5μg／L）以时间依赖方式诱导HK-2细胞中Smad2／Smad3的磷酸化，从基础值0．87±0．09上升至2h时高峰2．350±0.11。PKC抑制剂G06850（5μmol／L）和ERK抑制剂PD98059（10μmol／L）、U0126（10μmol／L）可部分抑制TGF-β1诱导的CTGF表达，而p38MAPK抑制剂SB203580（20μmol／L）和JNK抑制剂SP600125（10μmol／L）对TGF-β1诱导的CTGF的表达无影响。PKC抑制剂G06850（5μmol／L）可减少TGF-β1诱导的Smad2／Smad3磷酸化，而ERK抑制剂PD98059（10μmol／L）和U0126（10μmol／L）对Smad2／Smad3的磷酸化没有影响。结论在肾小管上皮细胞中，TGF-β1诱导CTGF的表达需要PKC和Ras／MEK／ERK的参与。PKC以Smad依赖的方式参与肾小管上皮细胞中TGF-β1诱导的CTGF的表达，而Ras／MEK／ERK对CTGF表达的调节不依赖于Smads。     

血管紧张素Ⅱ对增生性瘢痕成纤维细胞细胞外信号调节激酶活性的影响

目的：本研究硼察血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）对增生性瘢痕成纤维细胞细胞外信号调节激酶（extracellular　signal-regulated kinase，ERK）活性的影响，旨在探讨其影响增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为的信号机制。方法：取自愿捐献的增生性瘢痕组织标本，采用胶原酶法行成纤维细胞培养。用免疫荧光组织化学法检测细胞AT1和AT2受体的表达。取第3～4代细胞，并按实验设计，分别加入10^-2mol／L Ang Ⅱ，10^-7mol／L Ang Ⅱ＋10μmol／L Valsartan，10^-7mol／L Ang Ⅱ＋10μmol／L PD123319，10μmol／L Valsartan，10μmol／LPD123319共5组：对照组仅加入等量DMEM。以Western Blot法检测培养的细胞细胞外信号调节激酶（extracellular Signal-regulated kinases，ERK）活性变化，观察在阻断AT1或AT2受体情况下AngⅡ对培养的瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化的影响。结果：免疫荧光组织化学染色结果显示培养的增生性瘢痕成纤维细胞同表达AT1和AT2受体。AngⅡ可增加培养的增生性瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化。在一定剂量范围内，AngⅡ浓度增加，细胞ERK磷酸化程度增加。与对照组比较10^-7mol／L Ang Ⅱ显著增加瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化，且差异有统计学意义（P〈0．05）。10μmol/L AT2受体拮抗剂PD1233191可显著增强AngⅡ诱导的细胞ERK磷酸化（P〈0．05）：10μmol／L的AT1受体拮抗剂Valsattan可显著抑制AngⅡ诱导的细胞ERK磷酸化；Valsattan或PD1233191单独刺激细胞并未明显影响ERK磷酸化（P〉0．05）。应用抗ERK抗体显示各组ERK含量一致。结论：AngⅡ通过其受体AT1和AT2可调控增生性瘢痕成纤维细胞ERK磷酸化，AngⅡ对增生性瘢痕成纤维细胞ERK活性的影响可能是AngⅡ调控增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为可能的信号机制之一。     

维生素E琥珀酸酯诱导MCF 7乳腺癌细胞的凋亡

目的检测维生素E琥珀酸酯（VES）对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用，并分析凋亡诱导分子Fas表达的变化。方法人乳腺癌细胞株MCF-7[雌激素受体阳性，ER（＋）]以VES刺激12，24h和48h，VES浓度为5μg／mL，10μg／mL和20μg／mL，用MTT法测定VES对细胞增殖的抑制作用；以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas的表达；Western蛋白印迹法检测VES作用后Fas蛋白水平的变化。结果VES对MCF-7乳腺癌细胞具有显著的抑制作用，并表现为时间和剂量依赖关系。MCF-7乳腺癌细胞的自然凋亡率为1．2％；5μg／mL，10μg／mL和20μg／mL的VES作用48h后凋亡率分别升高至11．2％，16．4％和41．2％。VES作用后乳腺癌细胞Fas蛋白水平和细胞表面Fas表达升高。结论VES对ER（＋）乳腺癌细胞具有显著的增殖抑制作用，并诱导细胞凋亡，其机制与细胞表面Fas表达上调有关。     

丝裂酶原活化蛋白激酶激酶1/2抑制对家兔关节软骨保护作用的研究

目的评价丝裂酶原活化蛋白激酶（mitogen—activated protein kinase，MAPK）信号转导通路中MAPK激酶1／2（MEKI／2）在骨关节炎发病过程中的作用。方法新西兰家兔30只，制作OA模型，随机分成3组，每组10只。从造模术后第4天开始，第1组和第2组分别注射100μmol／L和40μmol／L的PD98059，第3组注射PBS液体作为安慰剂对照组，每周2次。另取10只家兔，正常关节内注射PBS液体作为正常对照组。8周后处死动物，进行股骨髁关节软骨退变的大体评分。用Western Blot印记杂交法测定软骨组织中ERK1／2以及磷酸化ERK1／2的表达。用实时定量PCR方法测定基质金属蛋白酶-1／13（MMp-1／13）的mRNA表达水平。结果与使用PBS的安慰剂对照组相比，使用PD98059的关节软骨破坏明显减轻。磷酸化的ERK1／2在100μmol／LPD98059干预组明显低于40μmol／L干预组和安慰剂对照组。而MMP-1／13的mRNA表达在不同浓度的干预组均低于安慰剂对照组。结论MAPK信号转导通路参与了骨关节炎关节软骨破坏的病理过程。MEK1／2选择性阻滞剂PD98059可以在关节炎动物活体内有效抑制关节炎软骨破坏的程度，该作用可能与其有效抑制ERK1／2的磷酸化激活有关。     

雷帕霉素抑制结缔组织生长因子诱导的成肌纤维细胞增殖及细胞外基质蛋白的分泌

目的 探讨雷帕霉素（RAPA）对于结缔组织生长因子（CTGF）生物学作用的影响及可能机制。 方法 分别用RAPA 20 μg/L 和40 μg/L预处理成肌纤维细胞（MyoF）30 min后再加入CTGF 100 μg/L,与单独加入CTGF（CTGF组）和未加任何刺激的MyoF（对照组）进行比较。采用BrdU掺入法检测细胞的增殖反应;用Western印迹法检测细胞上清中纤连蛋白（FN）的水平及细胞ERK1/2信号的磷酸化。 结果 与对照组相比,CTGF（100 μg/L）显著促进MyoF增殖（P < 0.01）,增加上清中FN的蛋白水平（P < 0.05）。与CTGF组相比,RAPA 20 μg/L及 40 μg/L 预处理可使细胞增殖率显著下降,分别下降了62% 和70%（均P < 0.05）,但两个剂量之间差异无统计学意义;使细胞上清中FN的蛋白水平分别下降了15%和44%,后者与CTGF组的差异有统计学意义（P < 0.05）。CTGF（100 μg/L ）刺激10 min可致MyoF的ERK1/2发生磷酸化,RAPA 40 μg/L预处理细胞30 min可显著降低CTGF诱导的ERK1/2磷酸化。以ERK1/2活化特异抑制剂PD98059（50 μmol/L）预处理30 min后,可以抑制CTGF诱导的细胞增殖效应（7%±5%比85%±7%,P < 0.01）和FN的分泌效应（1.0±0.1比1.6±0.3,P < 0.05）。 结论 RAPA具有部分抑制CTGF的促增殖和促细胞外基质分泌的作用,其作用可能通过抑制ERK1/2信号通路实现。     

抑制信号转导和转录激活因子-3活化对恶性胶质瘤细胞LN229运动能力的影响

目的 观察抑制信号转导和转录激活因子-3( STAT3)的活化对调控人恶性胶质瘤LN229细胞运动能力的影响.方法 应用JAK/STAT3信号通路抑制剂AG490处理LN229细胞株,Westem blot检测STAT3、磷酸化STAT3( p-STAT3)的表达.噻唑蓝(MTr)比色法筛选能够阻断LN229细胞STAT3活化的最适AG490浓度;划痕实验和趋化实验检测AG490给药后,LN229细胞运动能力的变化;F-肌动蛋白( F-actin)实验检测AG490对LN229细胞肌动蛋白聚合能力的影响.结果 AG490可有效抑制LN229细胞STAT3的持续活化.50 μmol/L浓度的AG490在不影响LN229细胞存活时(t=1.862,P＞0.05),能够有效抑制STAT3的磷酸化,对照组和50μmol/L AG490处理组的p-STAT3/STAT3的密度比值分别为0.530±0.040和0.291±0.036(t =4.821,P＜0.01).伤口愈合实验可见50μmol/L AG490处理的LN229细胞非定向运动能力降低,24h时对照组运动的距离为(0.290±0.049) mm;实验组为(0.150±0.054) mm(P ＜0.05).体外趋化实验显示50 μmol/LAG490处理的LN229细胞定向运动能力降低(P＜0.01),表皮细胞生长因子(EGF)浓度为10 μg/L时对照组穿过膜的细胞数为93.92±9.52;实验组为24.52±3.04.50μmol/L浓度的AG490抑制LN229细胞肌动蛋白聚合能力(P＜0.05).结论 STAT3信号转导通路参与调控胶质母细胞瘤LN229的细胞运动过程,阻断STAT3的活化可以抑制恶性胶质瘤的运动能力.     

ERK1／2MAPK通路在甲羟戊酸促进人类肾小球系膜细胞增殖中的作用

目的探讨甲羟戊酸（MVA）促进人类肾小球系膜细胞（HMC）增殖中，细胞外信号调控蛋白激酶1／2（ERK1／2）丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）通路的作用及机制。方法将体外培养的HMC根据不同的处理因素分为正常对照组、MVA组（100nmol／L）、MVA（100nmol／L）加PD98059（50μmol／L）组即MVA加PD组，以不含干预因素正常培养细胞为对照组，分别于干预后12、24h收集各组细胞，应用Western blot法检测P-ERK1／2、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果①p-ERK1／2蛋白的表达：MVA组在各个时间点的表达均明显上调，且随时间延长，蛋白表达增加（P〈0．05）；而MVA加PD组在各个时间点的表达均无明显变化（P〉0．05）。②Bcl-2与Bax蛋白的表达：MVA组与MVA加PD组在各个时间点Bcl-2蛋白表达均明显上调，且随时间延长表达增加（P〈0．05）；而各个时间点Bax蛋白的表达均明显下调（P〈0．05）；但随时间延长，MVA组表达下降（P〈0．05），而MVA加PD组表达下降不明显（P〉0．05）；③Bcl-2／Bax：MVA组与MVA加PD组在各个时间点均升高，且随时间延长Bcl-2／Bax升高（P〈0．05）；而在各个时间点，MVA加PD组较MVA组Bcl-2／Bax明显下降（P〈0．05）。结论MVA可通过Ⅱ水1／2信号转导通路促进HMC增殖；ERK1／2信号转导通路促进HMC增殖可通过上调Bcl-2及下调Bax的表达，并最终通过上调Bcl-2／Bax而实现。     

JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路对结肠癌细胞增殖迁移的影响

目的探讨JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路在结肠癌细胞增殖迁移中的作用。方法应用JAK2抑制剂AG490处理人结肠癌Lovo细胞株。采用MTT法进行细胞增殖实验：采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力;用免疫荧光染色和Western blot检测Lovo细胞中波形蛋白和磷酸化STAT3（P—STAT3）的表达水平。结果AG490处理后,Lovo细胞增殖明显受到抑制．且呈剂量依赖性和时间依赖性（P〈0．05）。细胞划痕后24h,AG490处理组（实验组）的细胞划痕宽度恢复20％,而对照组划痕宽度恢复60％（P〈0．05）。实验组Lovo细胞中P—STAT3和波形蛋白蛋白表达明显降低（P〈0．05）。结论JAK2-STAT3-波形蛋白信号通路参与调控人结肠癌细胞的增殖和迁移。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对糖尿病大鼠肾脏细胞外调节蛋白激酶活性的影响

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对糖尿病大鼠肾脏细胞外调节蛋白激酶（ERK）活性的影响。方法 采用链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病大鼠模型，实验分3组：正常对照组、糖尿病模型组和EGCG干预组。EGCG干预组于模型成功后1周给予EGCG5mg·kg^-1·d^-1腹腔注射。以免疫组织化学方法检测肾组织磷酸化ERK（p-ERK）的表达。大鼠肾系膜细胞株分组：正常对照组（NG，葡萄糖5mmol／L），高糖组（HG，葡萄糖30mmol／L），HG＋EGCG1组（100μg／L），HG＋EGCG2组（200μg／L），HG＋EGCG4组（400μg／L），甘露醇组（5mmol／L葡萄糖＋25mmol／L甘露醇）。用四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖活性；常规生化分析系膜细胞氧化应激状态；Western印迹检测ERK、p-ERK和p27蛋白表达水平。结果 EGCG呈剂量和时间依赖方式抑制高糖时系膜细胞的增殖活性及抗氧化作用。EGCG干预后糖尿病大鼠肾脏p-ERK蛋白免疫组化染色明显减弱。高糖时系膜细胞p-ERK及p27蛋白表达上调，EGCG呈剂量和时间依赖方式下调高糖时p-ERK蛋白的表达；呈剂量依赖方式下调p27蛋白的表达。结论 EGCG能有效改善糖尿病肾损伤程度，其作用机制可能是通过调节ERK活性，抑制p27蛋白表达而减少糖尿病肾病损害。     

Presenteeism and Absenteeism Before and After Total Hip and Knee Arthroplasty

BackgroundAbsenteeism is costly, yet evidence suggests that presenteeism—illness-related reduced productivity at work—is costlier. We quantified employed patients’ presenteeism and absenteeism before and after total joint arthroplasty (TJA).MethodsWe measured presenteeism (0-100 scale, 100 full performance) and absenteeism using the World Health Organization’s Health and Work Performance Questionnaire before and after TJA among a convenience sample of employed patients. We captured detailed information about employment and job characteristics and evaluated how and among whom presenteeism and absenteeism improved.ResultsIn total, 636 primary, unilateral TJA patients responded to an enrollment email, confirmed employment, and completed a preoperative survey (mean age: 62.1 years, 55.3% women). Full at-work performance was reported by 19.7%. Among 520 (81.8%) who responded to a 1-year follow-up, 473 (91.0%) were still employed, and 461 (88.7%) had resumed working. Among patients reporting at baseline and 1 year, average at-work performance improved from 80.7 to 89.4. A Wilcoxon signed-rank test indicated that postoperative performance was significantly higher than preoperative performance (P < .0001). The percentage of patients who reported full at-work performance increased from 20.9% to 36.8% (delta = 15.9%, 95% confidence interval = [10.0%, 21.9%], P < .0001). Presenteeism gains were concentrated among patients who reported declining work performance leading up to surgery. Average changes in absences were relatively small. Combined, the average monthly value lost by employers to presenteeism declined from 15.3% to 8.3% and to absenteeism from 16.9% to 15.5% (ie, mitigated loss of 8.4% of monthly value).ConclusionAmong employed patients before TJA, presenteeism and absenteeism were similarly costly. After, employed patients reported increased performance, concentrated among those with declining performance leading up to surgery.     

The German emergency and disaster medicine and management systemdhistory and present

As well for optimized emergency management in individual cases as for optimized mass medicine in disaster management, the principle of the medical doctors approaching the patient directly and timely, even close to the site of the incident, is a long-standing marker for quality of care and patient survival in Germany. Professional rescue and emergency forces, including medical services, are the “Golden Standard” of emergency management systems. Regulative laws, proper organization of resources, equipment, training and adequate delivery of medical measures are key factors in systematic approaches to manage emergencies and disasters alike and thus save lives. During disasters command, communication, coordination and cooperation are essential to cope with extreme situations, even more so in a globalized world. In this article, we describe the major historical milestones, the current state of the German system in emergency and disaster management and its integration into the broader European approach.     

Differences in Osteocyte Density and Bone Histomorphometry Between Men and Women and Between Healthy and Osteoporotic Subjects

Bone defects related to osteoporosis develop with increasing age and differ between males and females. It is currently thought that the bone remodeling process is supervised by osteocytes in a strain-dependent manner. We have shown an altered response of osteocytes from osteoporotic patients to mechanical loading, and osteocyte density is reduced in osteoporotic patients, which might relate to imperfect bone remodeling, leading to lack of bone mass and strength. Hence, information on osteocyte density will contribute to a better understanding of bone biology in males and females and to the assessment of osteoporosis. Osteocyte density as well as conventional histomorphometric parameters of trabecular bone were determined in cancellous iliac crest bone of healthy postmenopausal women and men and of osteoporotic women and men. Osteocyte density was higher in healthy females than in healthy males and lower in osteoporotic females than in healthy females. Bone mass was reduced in osteoporotic patients, both male and female. In females, trabecular number was reduced, whereas in males, trabecular thickness was reduced and eroded surface was increased. There were no correlations between the parameter groups bone architecture, bone formation, bone resorption, and osteocyte density. These results are consistent with impaired osteoblast function in osteoporotic patients and with a different mechanism of bone loss between men and women, in which osteocyte density might play a role. The reduced osteocyte numbers in female osteoporotic patients might relate to imperfect bone remodeling leading to lack of bone mass and strength. M. G. Mullender and S. D. Tan contributed equally to this work.     

肝内胆管囊腺瘤和囊腺癌的CT、MRI及病理表现

目的探讨肝内胆管囊腺瘤和囊腺癌的CT、MRI和病理特点。方法回顾性分析经手术病理证实的6例肝内胆管囊腺瘤和2例肝内胆管囊腺癌的影像及临床病理资料，将病变的影像表现与其病理大体形态及组织学表现作对照分析。结果6例肝内胆管囊腺瘤，女4例、男2例；2例肝内胆管囊腺癌均为女性病人；8例病人平均年龄55岁。所有病灶均表现为多房囊性肿块，肿瘤囊腔各分房内常为多种液体成分，在CT上可表现为不同密度、在MRI上可表现为不同信号强度。囊内出现多发大小不等的壁结节在胆管囊腺癌内更常见，囊内有分隔但无壁结节只见于胆管囊腺瘤。在7例CT扫描中，4例胆管囊腺瘤和1例胆管囊腺癌可见囊壁或分隔上钙化，囊壁、囊内分隔及囊内结节均为轻、中度延迟增强。肿瘤中出现卵巢样间质见于3例胆管囊腺瘤和1例胆管囊腺癌，且均为女性病人。结论肝内胆管囊腺瘤和囊腺癌是肝脏不常见的囊性肿瘤，影像上多房、囊内有分隔且各分房囊内密度或信号不一致，高度提示肝内胆管囊腺瘤或囊腺癌的诊断，如囊内伴有多发大小不等的结节，则进一步提示囊腺癌的可能。但影像学表现不能区分肿瘤中有无卵巢样间质。