β_1-整合素与纤维粘连蛋白联合促进卵巢癌细胞侵袭转移

目的:探讨β1-整合素及纤维粘连蛋白对卵巢癌细胞粘附侵袭能力的影响和作用机制。方法:流式细胞仪间接免疫荧光染色检测人卵巢癌SKOV3-S1细胞β1-整合素表达。用人工基底膜粘附实验和体外侵袭实验观察经β1-整合素抗体处理的SKOV3-S1细胞粘附侵袭能力的变化。逆转录PCR检测β1-整合素处理及与纤维粘连蛋白结合后SKOV3-S1细胞基质金属蛋白酶基因表达的变化,同时用酶谱法分析细胞上清MMPs活性变化。结果:SKOV3细胞高侵袭克隆SKOV3-S1均表达β1-整合素,β1-整合素抗体对其粘附及侵袭人工基底膜能力的抑制率分别为69·8%和65·7%。纤维粘连蛋白能诱导癌细胞MMP2基因表达并分泌蛋白酶,β1-整合素抗体能减弱这种诱导作用。结论:β1-整合素与纤粘维连蛋白结合能诱导卵巢癌细胞粘附并表达MMP2基因,分泌蛋白酶降解ECM,从而促进肿瘤侵袭转移。     

αvβ6整合素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响

目的　探讨αvβ6整合素介导的细胞与细胞外基质的黏附 ,及其对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响。方法　采用流式细胞仪测定卵巢癌细胞株SKOV3、AO、3AO细胞表面αvβ6整合素的表达 ,并利用酶联免疫吸附实验、吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色法分析顺铂诱导的细胞凋亡及αvβ6整合素对细胞凋亡的影响。结果　SKOV3、AO、3AO细胞均表达αvβ6整合素 ,其相对荧光指数 (FI)均为 1 0 3± 0 0 1。顺铂可以诱导SKOV3、AO、3AO细胞凋亡 ,经顺铂 (10 μg/ml)作用 4 8h后 ,酶联免疫吸附实验结果显示 ,生长于αvβ6整合素配体———纤维粘连蛋白 (FN)上的细胞的富集系数 (EF)分别为 2 11± 0 0 4、2 15± 0 0 6、2 11± 0 0 4 ,明显低于生长于非整合素配体———多聚赖氨酸 (polylisin)上的细胞 (分别为 3 5 1± 0 0 3、3 5 5± 0 0 4、3 6 6± 0 0 4 ,P <0 0 1) ;吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色法结果显示 ,生长于FN上的细胞凋亡率分别为 (5 0± 0 7) %、(5 0± 0 7) %、(6 0± 0 7) % ,明显低于生长于polylisin上的细胞凋亡率[分别为 (2 8 0± 0 7) %、(2 8 0± 0 7) %、(2 9 0± 0 7) % ,P <0 0 0 1],用αvβ6整合素的特异性阻断抗体封闭过的细胞再次生长于FN上时 ,细胞凋亡率 [分别为 (15 0± 0     

整合素β1与FN黏附对卵巢癌A2780细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察整合素β1介导的细胞与纤维粘连蛋白(FN)黏附对卵巢癌A2780细胞增殖及凋亡的影响,初步探索整合素β1的信号传导机制。方法:体外培养卵巢癌A2780细胞。实验分组:对照组(多聚赖氨酸铺板)、实验A组(整合素β1的配体FN铺板)、实验B组(FN铺板+整合素β1单克隆抗体)。CCK-8检测3组细胞的增殖率;PI单染技术检测细胞周期;Anexin-V/PI双染检测顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡率;实时定量RT-PCR检测Aurora B及Survivin基因mRNA水平的变化。结果:实验A组与对照组、实验B组比较,细胞增殖率升高,凋亡率下降,S+G2/M期细胞比例增加,Aurora B及Sur-vivin mRNA表达水平升高,均有显著差异(P<0.05)。结论:整合素β1介导的A2780细胞与FN黏附可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,其作用机制可能与诱导Aurora B及Sur-vivin的表达有关。     

纤维连接蛋白在卵巢癌多细胞团簇中的作用和顺铂对团簇的影响

目的:探讨纤维连接蛋白(FN)对卵巢癌多细胞团簇(MCA)的影响和涉及的整合素受体的调节作用,以及顺铂(DDP)对MCA的影响。方法:用液体重叠技术培养SKOV3和OVCAR-3两种卵巢癌细胞株,获得MCA后用不同浓度的FN进行干预,观察FN对MCA的作用并研究DDP对两种MCA的影响;运用流式细胞术和RT-PCR检测整合素受体α3β1、α4β1、α5β1的表达情况。裸鼠建立人卵巢癌腹水瘤模型后用FN及DDP进行干预,分析两者对裸鼠体内肿瘤和腹水形成的影响,进一步证实MCA形成的相关因素。结果:(1)培养SKOV3和OVCAR-3两种MCA的最佳FN浓度分别为10μg/ml和20μg/ml。(2) SKOV3的MCA和单层细胞DDP的半数抑制浓度(IC50)为20.29μmol/L和29.80μmol/L,OVCAR-3的MCA和单层细胞DDP的IC50为33.11μmol/L和41.69μmol/L; DDP处理前两种卵巢癌细胞株的单层细胞和MCA各细胞周期差异均有统计学意义(P0.05),DDP作用后MCA凋亡率均明显增加(P0.05)。(3)流式细胞术、RT-PCR检测显示两种细胞主要表达α4β1(P0.05),MCA组各整合素均高于单层细胞组(P0.05)。加入FN后,各整合素表达量均明显增加(P0.05)。(4)裸鼠干预结果显示,FN组的肿瘤总数和腹水量均超过0.9%氯化纳液组和DDP组(P0.05),而DDP能有效抑制肿瘤生长和腹水形成(P0.05)。结论:体外实验说明FN对卵巢癌MCA的形成有明显的促进作用,两种细胞株表面均有整合素受体α3β1、α4β1、α5β1的表达,以α4β1为主,FN可促进它们表达。动物实验证实FN对体内种植的肿瘤细胞也具有明显的促生长作用,而DDP能有效抑制肿瘤生长和腹水形成。     

阿司匹林对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡的影响以及对凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的作用。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法分析阿司匹林对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用,用流式细胞术分析方法定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化。用RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的表达。结果:阿司匹林对SK-OV3细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈量效和时效的关系;1、5、10mmol/L3个浓度的阿司匹林处理细胞48h后,细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,而且G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高,细胞被阻滞在G2/M期,细胞周期也发生明显改变;阿司匹林可抑制卵巢癌细胞的bcl-2mRNA表达,而上调bax mRNA的表达。结论:阿司匹林能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡。此作用可能与阿司匹林抑制细胞bcl-2mRNA的表达和上调bax mRNA表达有关。     

miR-101对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用研究

目的:探讨miRNA-101(miR-101)对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用,以及在失巢凋亡过程中可能的作用机制。方法:构建失巢凋亡模型模拟卵巢癌细胞转移的生长状态;用脂质体Lipofectamine 2000将miR-101 mimics及miR-NC转染SKOV3细胞,随机分为阴性对照组、miR-空白质粒组(miR-NC组)和miR-101质粒组。RTPCR法检测细胞内miR-101 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell侵袭实验及划痕实验检测细胞的侵袭及迁移能力;RT-PCR及Western blot法检测c-fos基因mRNA和蛋白表达水平。结果:失巢凋亡模型构建成功,模型中SKOV3细胞呈悬浮、团簇状生长;将miR-101 mimics转染SKOV3细胞后,SKOV3细胞中miR-101表达水平增加,同时癌细胞失巢凋亡增加;透膜细胞数量及细胞迁移距离减少;c-fos mRNA和蛋白表达水平均降低。结论:miR-101过表达可增加SKOV3细胞失巢凋亡,降低细胞侵袭及迁移能力,下调c-fos基因表达可能是其作用分子机制。     

微小RNA-16逆转上皮性卵巢癌顺铂耐药的研究

目的:研究微小RNA-16(miR-16)在人上皮性卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其与顺铂耐药的关系。方法:脂质体lipofectamine2000介导miR-16成熟体模拟物(mimics)及阴性对照片段(NC)分别转染人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP。实时荧光定量PCR检测各组细胞中miR-16的表达;蛋白印迹法检测细胞中Bcl-2蛋白、c-myc蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50);caspase-3活性检测试剂盒检测细胞内caspase-3酶的活性;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果:(1)SKOV3/DDP细胞顺铂耐药指数(RI)为5.33;(2)SKOV3/DDP细胞中miR-16表达水平明显低于SKOV3细胞,约为后者的1/10(P=0.000),转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞中miR-16水平升高约660倍(P=0.001);(3)SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量较SKOV3细胞明显升高,转染miR-16 mimics后SKOV3/DDP细胞Bcl-2、c-myc蛋白的相对表达量明显降低(P<0.01);(4)SKOV3/DDP细胞转染miR-16 mim-ics后,顺铂IC50(14.19±0.06)较转染NC组(22.52±0.60)明显降低(P=0.002),且顺铂作用后caspase-3的酶活力单位也明显升高(P=0.000);(5)顺铂(20μg/ml)作用24h、48h后,SKOV3组凋亡率明显高于SKOV3/DDP组,转染miR-16 mimics的SKOV3/DDP细胞凋亡率约为转染NC细胞的1.5倍(P<0.01)。结论:miR-16可能通过靶向下调上皮性卵巢癌细胞Bcl-2蛋白,并协同调节c-myc蛋白的表达,增强卵巢癌顺铂耐药细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性,发挥逆转耐药的作用。     

肿瘤坏死因子相关诱导配体与化疗药物联合诱导抗化疗卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）相关诱导配体（TNF-related apoptosis inducinglig and，TRAIL）和（或）化疗药物联合使用对人卵巢癌细胞系耐药株A2780与SKOV3细胞凋亡的影响。方法2005-01日本国岐阜大学免疫病理3种化疗药物（顺铂、紫杉醇、阿霉素）和TRAIL分别加入培养的A2780与SKOV3细胞，通过hoechst 33342染色在荧光显微镜下确定细胞凋亡效应；蛋白印记杂交法分析bax，bcl-2，及caspase-3，8蛋白表达量的变化。应用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法测定A2780与SKOV3细胞体外增殖活性。结果3种化疗药物与TRAIL对A2780和SKOV3细胞的生长都表现抑制作用，3种化疗药物与TRAIL联合用药组A2780与SKOV3的生长抑制率明显高于单独用药组。结论3种化疗药物与TRAIL联合作用所产生的正效应对卵巢癌临床治疗有潜在的意义。     

金雀异黄素调控Egr1/PTEN信号通路诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的实验研究

目的通过金雀异黄素(genistein)诱导人卵巢癌细胞SKOV3细胞的凋亡,探讨即刻早期反应基因(Egr1)/细胞骨架蛋白同源在10号染色体有缺失的磷酸酶(PTEN)信号通路在金雀异黄素诱导SKOV3细胞凋亡过程中的作用。方法应用磺酰罗丹明B(SRB)染色法测定经金雀异黄素处理后的SKOV3卵巢癌细胞生长抑制率,组蛋白DNA酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞凋亡,采用游离硝基苯胺(p NA)法检测细胞内半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的蛋白含量,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定细胞内Bcl-2相关X蛋白基因(bax)和B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)的基因表达变化,蛋白质印迹法(Western blotting)分析Egr1、PTEN、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达变化。结果金雀异黄素显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖(P0.05),并呈浓度依赖性。金雀异黄素处理24 h后,处理浓度高于40μmol/L时,与对照组相比,调亡指数、Caspase-3活性、bax的相对表达及细胞中Egr1蛋白和PTEN蛋白的表达量均显著增加(P0.05),Bcl-2的相对表达量及AKT蛋白的磷酸化水平p-Akt则显著降低(P0.05)。当同时给予50 nmol/L PTEN抑制剂Bpv后,p-Akt表达明显增加,细胞凋亡程度受到明显抑制。结论金雀异黄素可能通过上调Egr1/PTEN信号通路的表达抑制PI3K/Akt信号通路的激活诱导SKOV3细胞凋亡,进一步影响了调亡相关基因Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达。     

微小RNA-125b过表达对卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用

目的通过在人卵巢癌SKOV3细胞中转染微小RNA-125b（miR-125b）真核表达质粒,探讨miR-125b过表达对SKOV3细胞失巢凋亡的作用及可能机制。方法针对miR-125b基因序列设计并合成两条寡聚DNA片段,并克隆入pSilencer 2.1-U6-neo质粒中,脂质体法将重组质粒转染人卵巢癌SKOV3细胞。定量PCR方法检测miR-125b,以及BDNF和TrkB基因mRNA表达;Western blot检测BDNF和TrkB蛋白表达;体外侵袭模型检测细胞侵袭能力;失巢凋亡模型及流式细胞术检测细胞失巢凋亡。结果成功构建miR-125b真核表达载体并转染人卵巢癌SKOV3细胞,SKOV3细胞miR-125b表达增加;同时BDNF和TrkB基因mRNA和蛋白表达均降低;穿透Matrigel膜的细胞数减少;细胞失巢凋亡增加。结论 miR-125b基因过表达能够诱导人卵巢癌SKOV3细胞失巢凋亡和抑制细胞侵袭能力,抑制BDNF/TrkB途径可能是其作用机制。     

吴茱萸碱抑制人卵巢癌细胞SKOV3增殖的实验研究

目的:探讨吴茱萸碱对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的抑制作用及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度吴茱萸碱对SKOV3细胞增殖活性的影响;采用Annexin V-FITC/PI染色检测吴茱萸碱对SKOV3细胞凋亡的影响;Western blot法检测吴茱萸碱对SKOV3细胞内caspase-3和PARP活化的影响。构建卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤模型并给予吴茱萸碱灌胃,绘制肿瘤生长曲线、称取瘤重,检测肿瘤组织中caspase-3和PARP活化情况。结果:0.5、1、2、4μmol/L吴茱萸碱处理SKOV3细胞24h后,细胞活性较对照组分别减少(15.95±1.61)%、(33.82±4.03)%、(46.62±5.45%)和(63.82±5.42)%,且呈明显时间和浓度依赖性;0.5、1、2μmol/L吴茱萸碱作用SKOV3细胞24h诱导细胞凋亡率分别为(12.93±3.81)%、(26.27±3.31)%和(36.72±4.73)%,均高于对照组(8.08±1.04,P0.05);吴茱萸碱显著活化SKOV3细胞内caspase-3和PARP,诱导细胞凋亡发生。成功构建卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,给药14天后裸鼠皮下移植瘤体积明显小于对照组(P0.01),给药21天后移植瘤体积较对照组减少54.01%(P0.01)、瘤重减少42.03%(P0.01),给药组裸鼠移植瘤蛋白内cleaved caspase-3和cleaved PARP小片段活化部分显著增多。结论:吴茱萸碱显著抑制人卵巢癌细胞SKOV3体外增殖和裸鼠皮下移植瘤生长,其作用机制与吴茱萸碱诱导细胞凋亡密切相关。     

卵巢癌细胞株SKOV3中ERβ表达对细胞增殖凋亡影响的研究

目的:研究卵巢癌细胞株SKOV3中ERβ表达对细胞增殖凋亡的影响。方法:MTT法检测卵巢癌细胞暴露于17β-E2不同浓度及不同时间的细胞增殖率。用特异性雌激素受体激动剂DPN联合17β-E2或单独使用DPN处理细胞,RT-PCR法检测ERβmRNA、ERK1/2 mRNA及caspase-3 mRNA表达,蛋白免疫印记法检测ERβ和p-ERK1/2蛋白表达。结果:10-6mol/L 17β-E2作用60min时,细胞的增殖活性最强(5.7±0.23),与对照组相比(3.5±0.45),差异有统计学意义(P0.05)。ERβ在卵巢癌中低表达。随着DPN作用时间延长及浓度增加,ERβmRNA、caspase-3 mRNA表达逐渐增加(P0.05),ERK2 mRNA表达逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。随着DPN作用时间延长及浓度的增加,ERβ蛋白表达逐渐增加,p-ERK1/2蛋白表达逐渐降低,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:ERβ在卵巢癌中低表达,上调ERβ表达能抑制卵巢癌细胞的增殖,同时促进细胞的凋亡。     

顺铂对沉默β-catenin的卵巢癌SKOV3增殖、凋亡的影响

目的:通过沉默Wnt/β-catenin信号转导通路的核心蛋白β-catenin,探讨顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的影响,为卵巢癌的耐药逆转提供新思路。方法:用包含β-catenin基因特异RNA序列的慢病毒转染人卵巢癌SKOV3细胞,沉默β-catenin蛋白表达。分组:SKOV3组、SKOV3-neg组(转染空载体)、SKOV3-RNAi组(转染β-catenin-RNAi慢病毒)。Western blot法检测转染前后SKOV3细胞中β-catenin蛋白的表达。12.5μg/ml顺铂作用48h后,用MTT法检测顺铂对各组SKOV3细胞增殖抑制率的影响;流式细胞术检测各组中SKOV3细胞的凋亡率。结果:(1)Western blot结果显示,SKOV3-RNAi组中β-catenin蛋白表达水平显著低于SKOV3-neg和SKOV3组(P<0.05)。(2)相同浓度顺铂作用下,SKOV3-RNAi组的增殖抑制率显著高于SKOV3组及SKOV3-neg组(P<0.05),而后两组的增殖抑制率无显著差异(P>0.05)。(3)流式细胞术检测结果显示,SKOV3-RNAi、SKOV3-neg和SKOV3组的细胞凋亡率分别为(18.8±4.3)%、(1.8±0.3)%、(1.9±0.3)%,SKOV3-RNAi组凋亡率显著高于其余两组(P=0.008<0.05)。顺铂作用后,SKOV3-RNAi、SKOV3-neg和SKOV3组的细胞凋亡率分别为(67.7±2.5)%、(33.3±2.6)%、(32.3±2.1)%;顺铂作用后,各组凋亡率均显著升高(P均<0.05),且SK-OV3-RNAi组凋亡率显著高于其余两组(P=0.000<0.05)。结论:沉默β-catenin蛋白能有效增强SKOV3对cDDP的敏感性,β-catenin有可能成为逆转卵巢癌化疗耐药的治疗靶点。     

Bax、Bcl-2ASODN联合转染增强宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的实验研究

目的:研究凋亡抑制基因bcl-2反义寡核苷酸(ASODN)和促凋亡基因bax联合转染对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,进而探求其放射增敏作用。方法:用逆转录病毒颗粒感染HeLa细胞,获得HeLa-bax细胞后,将bcl-2ASODN转染HeLa及HeLa-bax细胞,36h后放射治疗,通过MTT法、细胞形态学及流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡,半定量RT-PCR测bcl-2及bax基因的表达。结果:(1)HeLa细胞经bcl-2ASODN及bax联合转染并放疗后,光镜观察有明显凋亡趋势;(2)MTT法及流式细胞仪检测其凋亡率明显高于单基因转染+放疗组(P<0.05);(3)RT-PCR结果显示,bax基因表达显著增强,而bcl-2基因表达较各对照组明显减弱。结论:凋亡抑制基因bcl-2ASODN和促凋亡基因bax联合转染诱导HeLa细胞凋亡效果明显优于单基因转染,可有效提高HeLa细胞的放射敏感性。     

3-甲基腺嘌呤对顺铂诱导卵巢癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对顺铂(DDP)诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,用PI3K/Akt通路抑制剂3-MA预处理SKOV3细胞3h,再用DDP作用48h,经Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测凋亡率,TUNEL法检测凋亡指数(AI),Western blot检测凋亡蛋白caspase3,caspase9的表达。结果:3-MA预处理后,DDP诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡率为(37.04±7.15)%,凋亡指数为58.0±5.20,而单用DDP组凋亡率为(10.46±0.65)%,凋亡指数为26.0±3.46。3-MA预处理后,DDP诱导的SKOV3细胞凋亡率和凋亡指数均较单用DDP组明显提高(P<0.05)。caspase3,caspase9蛋白的表达也明显增强。结论:3-MA可上调caspase3,caspase9蛋白的表达,通过内源性途经增强DDP促卵巢癌细胞SKOV3的凋亡活性。     

自噬在卵巢癌失巢凋亡抵抗中的作用

目的 探讨自噬在卵巢癌失巢凋亡抵抗中的作用。分析自噬和整合素相关蛋白在卵巢癌细胞株A2780不同培养方式下的表达情况,并通过siRNA和化学抑制剂来明确其调控机制。方法 2012年6月至2013年6月在上海交通大学医学院附属仁济医院以卵巢癌细胞株A2780在常规培养、Matrigel铺胶培养和悬浮培养这3种培养方式中用Western blot检测自噬和整合素相关蛋白的表达,流式细胞技术检测细胞凋亡情况。结果 卵巢癌细胞株A2780在常规培养、Matrigel铺胶培养和悬浮培养这3种培养方式中自噬相关分子LC3、Beclin1和整合素CD51(αv),CD61(β3),CD29(β1)的表达情况发现,CD51和CD61的表达逐渐下降（[WTBX]P[WTBZ]< 0.05）,而自噬相关分子LC3的表达却为递增（[WTBX]P[WTBZ]<0.05）,Beclin1蛋白表达差异无统计学意义（[WTBX]P[WTBZ]>0.05）。在3种不同培养方式中,RGD使用后自噬相关分子LC3的蛋白表达增强（[WTBX]P[WTBZ]<0.05）;RGD阻断整合素信号途径并没有促进细胞的凋亡（[WTBX]P[WTBZ]>0.05）,但是RGD作用下同时加入自噬抑制剂3-MA可以促进细胞的凋亡（[WTBX]P[WTBZ]<0.05）。结论 自噬在卵巢癌失巢凋亡中主要通过整合素信号αvβ3途径来调控,可以为失巢细胞早期提供能量支持,在一定条件下抵抗失巢凋亡,这也是造成卵巢恶性肿瘤转移的重要原因。     

NAC-1通过自噬介导卵巢癌细胞顺铂耐药的研究

目的:探讨NAC-1在自噬介导的卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用。方法:Western blot及流式细胞术检测顺铂诱导的耐药卵巢癌细胞(SKOV3/DDP)自噬及凋亡过程中,NAC-1蛋白的表达情况。采用siRNA下调NAC-1表达,检测其对SKOV3/DDP细胞自噬及凋亡的影响,并检测其对顺铂耐药性的影响。结果:顺铂处理SKOV3/DDP细胞后,细胞自噬及凋亡水平升高,NAC-1蛋白表达升高。siRNA下调NAC-1基因后,顺铂处理SKOV3/DDP细胞的自噬水平降低,凋亡升高,细胞顺铂耐药性降低。结论:NAC-1基因可能通过调节自噬参与卵巢癌细胞顺铂耐药,降低NAC-1基因表达有助于提高顺铂对卵巢癌细胞的杀伤作用。     

小鼠卵巢玻璃化冻融过程中重组人卵泡刺激素干预对血管内皮生长因子(VEGF)及整合素αvβ3表达的影响

目的:观察重组人卵泡刺激素(r FSH)对小鼠卵巢血管内皮生长因子(VEGF)以及整合素αvβ3表达的影响。方法:将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、300 IU/L r FSH干预玻璃化冻存组(r FSH-VG)。通过对冻融卵巢内各级卵泡计数、免疫组织化学观察VEGF和整合素αvβ3在卵巢不同细胞中的定位,Western blotting检测VEGF、整合素αv和整合素β3蛋白表达量。结果:各级卵泡计数、VEGF及整合素β3的蛋白表达均为r FSHVG组优于VCG组(P0.05),整合素αv的表达组间均无统计学差异(P0.05)。结论:玻璃化冻融过程中添加r FSH可以上调VEGF及整合素β3蛋白的表达。     

顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的研究

目的:研究顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的发生情况,并探讨可能的发生机制。方法:顺铂干预卵巢癌SKOV3细胞后,用MDC染色荧光显微镜观察自噬囊泡及流式细胞仪检测自噬率;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪检测凋亡率及TUNEL法检测凋亡指数;Western blot检测自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3的表达。结果:顺铂干预SKOV3细胞后,MDC阳性细胞数明显增多;自噬率提高(P<0.05);凋亡率提高(P<0.05);凋亡指数提高(P<0.05);自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3表达均增强(P<0.05)。结论:顺铂不仅可诱导卵巢癌SK-OV3细胞凋亡,而且可诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞相互作用对卵巢癌细胞运动及侵袭的影响

目的:探讨卵巢癌细胞与腹膜间皮细胞(HPMC)相互作用对卵巢癌细胞运动及侵袭的影响。方法:检测卵巢癌细胞SKOV3条件培养液(CM)及转化生长因子β1(TGF-β1)中和抗体培育HPMC后,HPMC-CM对SKOV3趋化性、趋触性及侵袭性的影响。Checkerboard实验检测HPMC-CM诱导SKOV3运动的方向性。用ELISA检测不同HPMC-CM中纤维粘连蛋白(Fn)及透明质酸(HA)的水平。结果:未刺激组的HPMC-CM1诱导SKOV3趋化、趋触及侵袭(P<0.01)。抗Fn抗体或透明质酸酶(HAase)均可部分抑制HPMC-CM1的作用(P<0.05),二者合用抑制作用增强(P<0.01)。Checkerboard实验证实HPMC-CM1诱导的细胞运动是方向性的。HPMC-CM2Fn及HA蛋白水平高于HPMC-CM1(P<0.01),HPMC-CM3Fn及HA水平较HPMC-CM2降低(P<0.05)。HPMC-CM2诱导趋化、趋触及侵袭的细胞数较HPMC-CM1增多(P<0.01),HPMC-CM3诱导运动及侵袭的细胞数均低于HPMC-CM2(P<0.05)。结论:HPMC合成Fn及HA诱导卵巢癌细胞运动及侵袭,卵巢癌细胞分泌TGF-β1可能通过诱导HPMC合成Fn及HA而促进自身的运动及侵袭。二者相互作用促进卵巢癌的腹膜转移。