黄芪调节维生素D介导OPG/RANKL/RANK信号通路对维甲酸诱导骨质疏松C57BL/6J小鼠股骨的影响

目的 通过研究黄芪对骨质疏松C57BL/6J小鼠股骨VDR、SOST、OPG、RANKL、RANK mRNA及蛋白表达的影响，初步探讨其治疗骨质疏松作用机制。方法 将30只C57BL/6J小鼠随机分为6组：模型组，黄芪低、中、高剂量组[2g/(kg·d)、4g/(kg·d)、8g/(kg·d)],骨化三醇组0.06μg/(kg·d)和正常组，各组均采用灌胃给药。HE染色法观察各组小鼠股骨组织病理学改变；比色法检测小鼠血清中Ca²⁺含量；ELISA法检测小鼠血清中BGP、25(OH)D₃含量；RT-PCR及Western-Blot法检测小鼠股骨中VDR、SOST、OPG、RANKL、RANK mRNA和蛋白表达量。结果 与正常组比较，模型组小鼠股骨骨皮质粗糙，破骨细胞增多，骨小梁变细，数量减少，间隙增大，见骨髓水肿；与模型组比较，黄芪高、中、低剂量组小鼠股骨骨小梁变细、数量减少程度均明显减轻。与正常组比较，模型组小鼠血清Ca²⁺、25(OH)D₃、BGP含量显著降低(P<0.01);模型组小鼠股...     

筋骨胶囊对骨质疏松大鼠骨髓细胞OPG和RANKL mRNA表达量的影响

目的:观察筋骨胶囊对骨质疏松大鼠骨髓细胞护骨素(OPG)和核因子kB受体活化子配体(RANKL)mRNA表达量的影响,从分子水平上进一步探讨筋骨胶囊治疗骨质疏松症的有效机制。方法:取健康6月龄雌性SD大鼠48只,采用摘除双侧卵巢去势方法造成大鼠骨质疏松模型,随机分为假手术组、模型组、阿仑膦酸钠组(0.5mg/kg)、筋骨胶囊组(0.27g/kg)4组。用药12周后,处死所有大鼠,并取双侧股骨骨髓为标本,运用现代分子生物学RT-PCR技术,测量各大鼠骨髓基质细胞的OPG和RANKL mRNA表达量。结果:模型组OPG和RANKL mRNA表达量均明显高于假手术组(P0.01);阿仑膦酸钠组OPG mRNA表达量与模型组对比差异无统计学意义(P0.05),阿仑膦酸钠组RANKL mRNA表达量明显低于模型组(P0.01);筋骨胶囊组OPG mRNA表达量明显高于模型组(P0.01),筋骨胶囊组RANKL mRNA表达量明显低于模型组(P0.01);筋骨胶囊组OPG mRNA表达量明显高于阿仑膦酸钠组(P0.01),筋骨胶囊RANKL mRNA表达量与阿仑膦酸钠组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:筋骨胶囊能有效地上调OPG mRNA表达量,并抑制RANKL mRNA的表达,通过影响OPG/RANKL系统,抑制骨吸收,并促进骨形成,能有效地防治骨质疏松症。     

壮骨关节丸对去势所致雌性小鼠骨质疏松的治疗作用

目的探讨壮骨关节丸对去势所致雌性ICR小鼠骨质疏松的治疗作用。方法雌性ICR小鼠双侧卵巢切除造模后随机分为模型组、壮骨关节丸低剂量组(0.77 g/kg)、中剂量组(1.54 g/kg)、高剂量组(3.08 g/kg)和阳性药组(0.15mg/kg戊酸雌二醇片),假手术对照组给予相应量的水。各组小鼠每天灌胃给药1次,连续8周。给药结束后取血、双侧胫骨、股骨,检测血清中ALP、OC和TRACP含量,CT扫描右侧胫骨分析骨微结构,小动物骨骼强度测定仪检测股骨结构强度和最大荷载,组织病理学观察左侧胫骨的骨组织变化。结果与对照组相比,模型组、阳性药组和壮骨关节丸给药组的ALP、OC水平稍有改变,但无显著性差异。模型组TRACP显著升高(P0.01),经不同剂量的壮骨关节丸治疗8周后显著降低(P0.05,P0.01)。与对照组相比,模型组的BV/TV、Tb.N、Tb.Th和Tb.Sp极显著改变(P0.01)。壮骨关节丸可以提升Tb.N、降低Tb.Th和Tb.Sp,使其向正常水平显著改善(P0.01),且剂量越大改善效果越好。模型组小鼠股骨的结构强度和最大荷载均明显降低,给予壮骨关节丸后可显著增强(P0.05,P0.01)。组织病理学显示壮骨关节丸治疗组骨小梁数目均有所增多,膜下生骨增多,骨小梁间隙减少。结论壮骨关节丸对骨质疏松小鼠具有治疗作用,其可显著改善骨微结构,增强骨结构强度和最大荷载,在该研究的剂量范围内存在剂量依赖的现象。     

六味地黄汤及其“补泻”药对对绝经后骨质疏松大鼠股骨和肾脏中OPG及RANKL蛋白表达的影响

目的:观察六味地黄汤及其3个"一补一泻"药对对绝经后骨质疏松模型大鼠股骨及肾脏中骨保护素(OPG)及核转录因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的影响。方法:将3~4月龄SD大鼠随机分为空白组(假手术组,蒸馏水10 m L·kg-1),模型组(蒸馏水10 m L·kg-1),六味地黄汤组(6.75 g·kg-1),山茱萸-牡丹皮组(1.89 g·kg-1),熟地黄-泽泻组(2.97 g·kg-1),山药-茯苓组(1.89 g·kg-1),阿仑膦酸钠组(阳性药物组,6.3 g·kg-1)。除空白组外,其余各组大鼠均采用摘除双侧卵巢的方法制备绝经后骨质疏松症大鼠模型。造模后第16天开始,各组按相应剂量连续灌胃给药90 d,每周观察各组大鼠体重的变化,并采用免疫组化法检测股骨成骨细胞和肾脏肾小管上皮细胞中OPG,RANKL蛋白的表达。结果:与模型组比较,六味地黄汤组能上调股骨成骨细胞及肾脏肾小管上皮细胞中的OPG的蛋白表达、下调RANKL的蛋白表达;但山茱萸-牡丹皮药对仅能降低股骨成骨细胞中OPG的灰度值(P0.05),升高RANKL的灰度值(P0.01),即山茱萸-牡丹皮药对仅能上调股骨成骨细胞中OPG的蛋白表达、下调RANKL的蛋白表达(灰度值越低,OPG,RANKL的蛋白表达越强)。结论:六味地黄汤改善绝经后骨质疏松症的机制之一可能与其方中山茱萸-牡丹皮药对调节股骨中的OPG及RANKL的蛋白表达有关。     

基于组蛋白去乙酰化酶2介导的成骨细胞分化通路探讨电针治疗骨质疏松症的效应机制

目的:观察电针对骨质疏松大鼠股骨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)、组蛋白H3、骨形成相关基因及蛋白表达的影响,探讨电针改善骨质疏松症的机制。方法:将雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和阳性药物(E2)组,每组10只。采用去势法建立骨质疏松大鼠模型。电针组电针双侧"肾俞""脾俞"穴,10 min/d;E2组予20μg/mL 17β-雌二醇(E2)皮下注射,100μg/kg。均每周一、三、五治疗,共治疗8周。采用显微计算机断层扫描成像法检测大鼠股骨组织微观结构变化;蛋白质免疫印迹法检测大鼠股骨HDAC2、组蛋白H3和成骨细胞转录因子(Runx2)蛋白表达;比色法及酶联免疫吸附法检测大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)和E2含量;实时荧光定量PCR法检测大鼠股骨Runx2 mRNA表达;免疫荧光双标法检测大鼠股骨中乙酰化组蛋白H3/Runx2及Runx2/ALP蛋白的共表达。结果:与假手术组比较,模型组股骨松质骨密度(TBMD)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)均显著降低(P0.01),骨小梁分离度(Tb. Sp)、骨小梁模式因子(Tb.Pf)、结构模型指数(SMI)均显著升高(P0.01)。与模型组比较,电针组大鼠股骨TBMD、BV/TV和Tb. N显著升高(P0.01,P0.05),Tb. Pf和SMI显著下降(P0.05,P0.01);E2组大鼠股骨TBMD、BV/TV和Tb. N显著升高(P0.01), Tb. Sp、Tb. Pf和SMI均显著下降(P0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠股骨中HDAC2、组蛋白H3表达水平显著升高(P0.01), Runx2蛋白和mRNA表达水平显著降低(P0.01),血清E2和ALP含量显著降低(P0.01),股骨中乙酰化组蛋白H3、Runx2、ALP的荧光强度显著降低(P0.01)。与模型组比较,电针组HDAC2、组蛋白H3表达水平显著降低(P0.01),Runx2蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.05,P0.01),血清ALP含量显著升高(P0.05),乙酰化组蛋白H3、Runx2、ALP荧光强度显著升高(P0.01);E2组Runx2蛋白和mRNA表达水平显著升高(P0.01),血清E2和ALP含量显著升高(P0.01,P0.05),Runx2和ALP荧光强度显著升高(P0.01)。与E2组比较,电针组HDAC2和组蛋白H3蛋白表达水平显著降低(P0.01),Runx2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),乙酰化组蛋白H3荧光强度显著升高、Runx2荧光强度显著降低(P0.05)。结论:电针治疗骨质疏松可上调体内骨形成相关基因的表达,下调对骨形成通路有抑制作用蛋白的表达,使骨密度升高、骨体积和骨小梁数量增加,并促进骨小梁由杆状向板状变化,其机制可能与组蛋白乙酰化修饰有关。     

左归丸联合温和灸对骨质疏松症模型大鼠骨密度、骨保护素mRNA及核因子κB受体活化因子配体mRNA的影响

目的探讨左归丸联合温和灸治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法 40只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组,每组10只。模型组、左归丸组、左归丸+温和灸组采用手术完整摘除双侧卵巢法制造骨质疏松症模型。造模3个月后左归丸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃,左归丸+温和灸组予左归丸10 ml/(kg·d)灌胃+长强穴艾灸治疗,空白组和模型组予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃。各组均干预6周。干预前后测定大鼠股骨近端及第2腰椎骨密度,干预后通过PCR法检测大鼠骨组织骨保护素(OPG)mRNA和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达水平。结果与空白组比较,模型组股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL降低,RANKL mRNA表达上升(P0.05或P0.01);与模型组比较,左归丸组、左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均升高,RANKL mRNA表达降低(P0.05或P0.01),且左归丸+温和灸组大鼠股骨、腰椎骨密度,骨组织OPG mRNA表达及OPG/RANKL均较左归丸组升高,RANKL mRNA表达较左归丸组降低(P0.05)。结论左归丸联合温和灸能明显升高骨质疏松症大鼠的骨密度,上调OPG mRNA表达、下调RANKL mRNA表达可能是其作用机制之一。     

姜黄素对佐剂性关节炎大鼠血清骨保护素和核因子κB受体活化因子配体蛋白表达及骨密度的影响

目的观察姜黄素对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠血清骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)表达以及骨密度的影响,探讨姜黄素防止类风湿关节炎(rhuematoid arthritis,RA)骨破坏的作用机制。方法取SD大鼠30只,随机分为模型组、姜黄素组及正常组,第28天腹主动脉取血,采用ELISA法来检测血清中RANKL、OPG蛋白的表达,取血后处死大鼠,剥离大鼠右侧胫骨,行骨密度检查。结果 (1)与正常组比较,造模组即模型组与姜黄素组大鼠血清RANKL均显著升高(P0.01),血清OPG显著降低(P0.01),RANKL/OPG比值显著升高(P0.01);(2)与模型组比较,治疗组即姜黄素组血清RANKL显著降低(P0.01),血清OPG均显著升高(P0.01),RANKL/OPG比值均显著降低(P0.01);(3)3组大鼠胫骨整体骨密度无显著性差异(P0.05),姜黄素组大鼠兴趣区骨密度值显著高于模型组(P0.01)。结论姜黄素对AA大鼠具有良好的治疗作用,能够通过调节血清RANKL及OPG的表达,来调节OPG/RANKL通路,从而提高AA大鼠骨密度,抑制其骨丢失。     

补血益母丸对气血双虚模型小鼠的药效作用研究

目的:探讨补血益母丸对气血双虚模型小鼠的作用。方法:以放血和环磷酰胺并用建立气血双虚小鼠模型,模型建立后,连续给予补血益母丸1.82、7.28 g/kg 10 d进行干预。末次给药后,检测小鼠负重游泳时间和全血乳酸含量;动物处死前,检测小鼠游泳后血尿素氮的含量;采用摘眼球法取血行血常规检测;摘取小鼠胸腺和脾脏并称重,计算脏器指数;部分脾脏在4%多聚甲醛中固定后行HE染色观察脾脏形态;部分脾脏用于Western blot实验检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素2(IL-2)蛋白表达情况;取小鼠右腿骨髓,检测骨髓有核细胞。结果:与正常对照组相比,模型对照组出现活动减少,耳发白,呼吸短促等症状,小鼠负重游泳时间显著缩短(P<0.01),脾指数和胸腺指数均明显降低(P<0.05或P<0.01),且血乳酸和血尿素氮含量明显升高(P<0.05或P<0.01);骨髓有核细胞显著减少(P<0.01),血中红细胞数、白细胞数和血红蛋白含量均显著降低(P<0.01);脾脏结节和淋巴细胞数显著减少(P<0.01),红、白髓界线不明,淋巴结和红髓中有广泛的局灶性纤维化;脾脏中IL-2蛋白表达明显下调(P<0.01),TNF-α蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型对照组相比,乳酸亚铁10 ml/kg组、四物汤12 g/kg组、补血益母丸1.82 g/kg、7.28 g/kg组小鼠负重游泳时间均显著延长(P<0.01),脾指数和胸腺指数均明显升高(P<0.01);血乳酸含量均明显降低(P<0.01),骨髓有核细胞显著增多(P<0.01),血中红细胞数、白细胞数和血红蛋白含量均明显升高(P<0.01);脾脏结节和淋巴细胞数明显增多(P<0.01),红、白髓较清晰;小鼠脾脏中IL-2蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01),补血益母丸7.28 g/kg组血尿素氮含量明显降低(P<0.01),小鼠脾脏中TNF-α蛋白表达下调(P<0.05)。结论:补血益母丸能有效地抗气血双虚证候。这可能与其改善骨髓造血功能,提高气血双虚模型小鼠外周血细胞数和提高免疫功能有关。     

补肾强督方含药血清对强直性脊柱炎OPG/RANKL通路的作用

目的探讨补肾强督方对强直性脊椎炎(ankylosing spondylitis,AS)骨保护素和核转录因子-κB受体活化因子配基(osteoprotegerin receptor activator for nuclear factorκB ligand,OPG/RANKL)通路的作用机制。方法选取2009年1-5月卫生部中日友好医院中医风湿病科门诊和住院活动期AS患者30例,予补肾强督方,每天1剂,早晚分两次口服,连续3个月;另选取健康志愿者30名。采集治疗前后患者血清及健康人血清。将成骨细胞hFOB1.19分为患者治疗前组、治疗后组及健康人组(对照组)。各组细胞分别于含相应血清的基础培养基中进行培养。取成骨细胞培养上清液,采用ELISA法检测成骨细胞OPG/RANKL含量及mRNA表达,采用RT-PCR检测OPG/RANKL蛋白表达。结果与对照组比较,治疗前组成骨细胞OPG含量、OPG mRNA及蛋白表达、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达均降低,RANKL mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与治疗前组比较,治疗后组OPG含量、OPGmRNA及蛋白表达、OPG/RANKL mRNA及蛋白表达升高,RANKL mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 AS患者血清能直接抑制成骨细胞OPG表达、促进RANKL表达、下调OPG与RANKL比率,补肾强督方治疗后的血清能直接促进成骨细胞表达OPG,抑制表达RANKL,上调OPG与RANKL比率,补肾强督方可能是通过直接上调成骨细胞OPG/RANKL而抑制破骨细胞分化和功能,达到促进骨生成,抑制骨吸收。     

淫羊藿醇提物对去卵巢大鼠骨质疏松治疗作用及机制研究

目的评价淫羊藿醇提物对去除卵巢致骨质疏松大鼠的治疗作用,初步探讨其作用机制。方法 SD大鼠切除双侧卵巢,造成骨质疏松大鼠模型。手术4周后,以阳性药依普黄酮片(200 mg/kg)和不同剂量的淫羊藿醇提物(170、85 mg/kg)连续ig给药8周,然后取血清测定其碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶(StrACP)活性;采用免疫组化法测定股骨中骨保护素(OPG)、破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达;采用三点弯曲法测定其胫骨的生物力学性质;最后运用micro-CT对股骨远端的骨小梁参数进行分析,并对其进行三维重建,得到骨小梁的3D图形来直观地说明淫羊藿醇提物对骨质疏松大鼠的作用。结果淫羊藿醇提物高剂量组不仅能够显著降低血清ALP和StrACP活性,还能显著增加OPG蛋白表达,降低RANKL蛋白表达,且能有效地改善胫骨生物力学性质和股骨骨小梁参数。结论淫羊藿醇提物高剂量(170 mg/kg)对骨质疏松大鼠具有明显的治疗作用,其可能是通过促进成骨细胞活性、抑制破骨细胞活性来实现的。     

温和灸背俞穴对2型糖尿病合并骨质疏松患者血清中OPG、RANKL、DKK-1蛋白表达的影响

目的:观察温和灸治疗前后2型糖尿病合并骨质疏松患者血清中OPG、RANKL和DKK-1蛋白表达的变化情况,探讨温和灸背俞穴对2型糖尿病合并骨质疏松患者的临床疗效。方法:选取12例糖尿病性骨质疏松(DOP)患者行温和灸治疗,采用Western印迹法检测患者治疗前后血清中骨保护素(Osteoprotegerin,OPG),核因子-κB受体活化因子(Receptor activator of NK-κb ligand,RANKL)和糖蛋白Dickkop(Dickkop,DKK-1)的表达水平。结果:治疗后,患者血清中OPG的表达量增加,与治疗前比较差异具有统计学意义(P0.01);DKK-1和RANKL的表达量无明显改变(P0.05),但OPG/RANKL值显著提高。结论:温和灸背俞穴治疗DOP的作用机制可能与上调血清中OPG的表达有关。     

补肾通督胶囊对胶原诱导关节炎大鼠RANK/RANKL/OPG系统的影响

目的研究补肾通督胶囊对胶原诱导关节炎大鼠RANK/RANKL/OPG系统的影响,为中医药治疗类风湿关节炎(RA)提供理论依据。方法 RA动物模型选用胶原诱导关节炎模型,将大鼠分为正常对照组、模型组、补肾通督胶囊低剂量组(BSL)、中剂量组(BSM)、高剂量组(BSH)和雷公藤组6组,每组7只大鼠。造模后13天开始给药,BSL、BSM及BSH组分别给予120、240及480 mg/(kg·d)的补肾通督胶囊灌胃,雷公藤组给予雷公藤多苷片24 mg/(kg·d)灌胃。各组每天灌胃1次,每次2 m L。正常对照组和模型组给予2 m L的生理盐水灌胃。共灌胃18天。于31天取材,制作踝关节TRAP切片,采用ELISA法检测血清核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、OPG巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)。结果与正常对照组比较,模型组大鼠踝关节病理切片的阳性反应、炎症和骨破坏程度显著提高(P<0.01),血清RANKL和M-CSF水平皆有显著上升(P<0.01),而OPG和OPG/RANKL水平皆有显著降低(P<0.01)。与模型组比较,BSH组和雷公藤组阳性反应、炎症和骨破坏评分也显著下降(P<0.01);而BS各组和雷公藤组RANKL和M-CSF均显著下调,而OPG和OPG/RANKL均显著上调,差异有统计学意义(P<0.01)。与雷公藤组比较,正常组M-CSF较低,而OPG和OPG/RANKL均较高,差异有统计学意义(P<0.01),而模型组和BS各组RANKL和M-CSF均显著上调,而OPG和OPG/RANKL均显著下调(P<0.01)。结论补肾通督胶囊对于关节炎大鼠缓解骨破坏的机制,可能是通过对破骨细胞的调控起作用。     

基于传统功效的野生与栽培苦参药效学对比研究

目的:基于苦参的传统功效,从利尿、抗炎、免疫增强等方面开展野生与栽培苦参药效学对比研究。方法:采用小鼠耳肿胀和肉芽肿方法考察野生与栽培苦参的抗炎作用;以滤纸片称质量法收集小鼠不同时间段的排尿量和各时间段平均排尿量,考察其利尿作用;以小鼠炭粒廓清、环磷酰胺所致大鼠免疫损伤模型,环磷酰胺所致免疫低下小鼠迟发型超敏反应模型,考察其免疫增强作用。结果:与模型对照组比较,野生与栽培苦参3、6 g/kg组排尿量明显升高(P<0.05或P<0.01);与等剂量野生苦参组比较,给药2 h后栽培苦参3、6 g/kg组排尿量显著降低(P<0.01)。与模型对照组比较,野生与栽培苦参6 g/kg组可显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀率(P<0.01);与等剂量野生苦参组比较,栽培苦参3 g/kg组耳肿胀率显著升高(P<0.01)。与模型对照比较,野生1.5、3、6 g/kg组与栽培苦参3、6 g/kg组可显著升高小鼠肉芽肿抑制率(P<0.01);与等剂量野生苦参组比较,栽培苦参1.5、3、6 g/kg组肉芽肿抑制率明显降低(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,野生与栽培苦参各组均可显著升高小鼠炭粒廓清指数和吞噬指数(P<0.01);与等剂量野生苦参组比较,栽培苦参1.5、3 g/kg组炭廓清指数及吞噬指数显著降低(P<0.01)。与正常对照组比较,免疫损伤大鼠脾脏指数及胸腺指数显著降低(P<0.01),白细胞及红细胞计数显著降低(P<0.01),免疫损伤小鼠皮肤伊文斯蓝吸光度值显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,野生苦参1、2、4 g/kg组与栽培苦参2、4 g/kg组可明显升高大鼠脾脏、胸腺指数(P<0.05或P<0.01),野生苦参2、4 g/kg组与栽培苦参1、2、4 g/kg组可明显升高白细胞、红细胞数量(P<0.05或P<0.01),野生与栽培苦参3、6 g/kg组可提高小鼠皮肤伊文斯蓝吸光度值(P<0.01);与等剂量野生苦参组比较,栽培苦参2、4 g/kg组胸腺指数、白细胞及红细胞数量明显降低(P<0.05或P<0.01),栽培苦参3、6 g/kg组小鼠皮肤吸光度值显著降低(P<0.01)。结论:野生与栽培苦参均具有不同程度的利尿,抗炎及免疫增强作用,在相同剂量下野生苦参作用效果优于栽培苦参。这一结果为临床上苦参栽培品代替野生品提供了理论依据,也为临床医师在栽培苦参用法用量方面提供了实验依据。     

淫羊藿素与RANKL蛋白靶点结合抑制破骨细胞分化抗骨质疏松作用研究

目的探讨淫羊藿素(IT)与核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白靶点结合能力,并阐明其抗骨质疏松作用机制。方法采用分子对接技术模拟并预测RANKL与IT的相互作用,并通过切除大鼠双侧卵巢制备骨质疏松模型,评价IT对模型大鼠体质量、骨吸收血清指标碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸盐酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)、骨密度(BMD)以及骨组织形态的调节作用。结果 IT可与靶蛋白RANKL发生稳定对接,IT组大鼠体质量较模型组显著降低(P0.05),IT能显著降低模型大鼠血清ALP、TRACP-5b水平(P0.01),显著降低模型大鼠股骨表面积与体积比值(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)值(P0.01),显著增加BMD、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th N)、骨小梁数目(Tb.N)值(P0.01)。结论 IT能通过与RANKL蛋白靶点结合,抑制破骨细胞分化并发挥抗骨质疏松作用。     

补肾法对恶性肿瘤骨转移模型小鼠的作用价值

目的:从RANKL/RANK/OPG系统探讨补肾法抑制恶性肿瘤骨转移的作用机制。方法:在C57BL/6雄性小鼠左后肢接种Lewis肺癌细胞株制备肺癌骨转移动物模型,并将18只造模小鼠随机分为6组:模型对照组,补肾方低剂量组,补肾方中剂量组,补肾方高剂量组,唑来膦酸盐组以及补肾方(低)+唑来膦酸盐组。观察小鼠骨肿瘤组织病理,骨组织骨护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、白介素-6(IL-6)蛋白的表达情况。结果:模型组小鼠病理图片显示:骨皮质表面大部分被肿瘤细胞侵蚀破坏,骨髓腔内骨小梁被严重破坏,骨髓腔内造血细胞部分坏死,结构模糊不清(+++);唑来膦酸组及补肾方中剂量、补肾方(低)+唑来膦酸盐组小鼠病理:骨皮质完整结构清晰,骨髓腔内骨小梁与造血细胞少量破坏(+);模型组转移癌OPG的表达较低,补肾方中剂量及补肾方(低)+唑来膦酸盐的OPG蛋白的表达增高,与模型组相比差异有统计学意义(P0.05);补肾方低剂量、补肾方高剂量、唑来膦酸盐的OPG蛋白的表达与模型组相比差异无统计学意义(P0.05);模型组转移癌RANKL的表达较高,补肾方高剂量的RANKL蛋白的表达降低,与模型组相比差异有统计学意义(P0.01,)补肾方中剂量、唑来膦酸盐及补肾方(低)+唑来膦酸盐的RANKL蛋白的表达降低,与模型组相比差异有统计学意义(P0.05),补肾方低剂量的RANKL蛋白的表达与模型组相比差异无统计学意义(P0.05);模型组转移癌IL-6的表达较高,补肾方中剂量、补肾方高剂量的IL-6蛋白的表达降低,与模型组相比差异有统计学意义(P0.01),唑来膦酸盐及补肾方(低)+唑来膦酸盐的IL-6蛋白的表达降低,与模型组相比差异有统计学意义(P0.05),补肾方低剂量的IL-6蛋白的表达与模型组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:补肾方可能通过增加OPG蛋白的表达,从而抑制破骨细胞活性,抑制肺腺癌细胞的骨转移;同时,还可能通过抑制RANKL及IL的表达从而抑制肿瘤组织对骨质的溶骨性破坏。     

淫羊藿苷对尾悬吊模拟失重诱导大鼠骨丢失的防护作用

目的 研究淫羊藿苷对尾悬吊模拟失重大鼠骨丢失的影响。方法 大鼠随机分为空白组、模型组、阿仑膦酸钠组(2.0 mg/kg)、淫羊藿苷组(30 mg/kg),每组10只。大鼠灌胃给药6周,每周称重1次,从第3周开始,除空白组外,其他各组均给予尾悬吊处理。6周后,ELISA法检测大鼠相关骨代谢标志物水平;双能X线骨密度仪检测大鼠骨密度;三点弯曲力学实验分析大鼠股骨生物力学性能;Micro-CT扫描仪观察大鼠股骨形态结构特性并对骨小梁进行三维重建,测定相关空间结构参数;Schr9dinger Maestro 12.8软件将阿仑膦酸钠、淫羊藿苷分别与BMP-2、OPG、RANK、RANKL蛋白进行分子对接;Western blot法检测股骨组织BMP-2、OPG、RANK、RANKL蛋白表达。结果 与模型组比较,淫羊藿苷组骨吸收相关标志物水平降低(P<0.05,P<0.01),骨形成相关标志物水平、骨密度、股骨骨应力、弹性模量及最大载荷、股骨组织BMP-2和OPG蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01);淫羊藿苷较阿仑膦酸钠与骨代谢蛋白对接更好,更易发生作用。结论 淫羊...     

楮实子对APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生的影响

目的探讨楮实子对APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生的影响。方法 40只APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性药组(10 mg/kg多奈哌齐)及楮实子低、高剂量组(1.8、3.6 g/kg),C57BL/6小鼠作为对照组,每组10只,灌胃给药6周。然后,Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,TUNEL法检测小鼠海马区神经细胞凋亡,免疫荧光染色法检测小鼠海马区NeuN/BrdU阳性细胞表达,Western blot法检测GSK-3β、β-catenin蛋白表达。结果与模型组比较,楮实子高剂量组学习记忆能力显著改善(P<0.05),凋亡细胞数显著减少(P<0.01),NeuN/Brdu阳性细胞数显著增加(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著降低(P<0.05),β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论楮实子能促进APP/PS1双转基因小鼠海马神经发生,其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。     

左归丸对骨质疏松症模型大鼠铁过载的影响

目的探讨左归丸治疗骨质疏松症的可能作用机理。方法将60只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、假手术组、模型组、西药组、左归丸组各12只。模型组、西药组和左归丸组大鼠行双侧卵巢切除术以制作骨质疏松症模型。造模后左归丸组给予左归丸0.968 g/100 g灌胃,西药组给予戊酸雌二醇片0.018 mg/100 g灌胃,空白对照组、假手术组和模型组给予纯净水1 ml/100 g灌胃。每日1次,每周连续给药6次,休息1天,共给药3个月。给药结束后检测各组大鼠腰椎骨密度,股骨最大载荷、弯曲强度、弹性模量,肝组织中铁离子水平及铁调素蛋白表达,胫骨骨髓中骨保护素(OPG)及细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠腰椎骨密度及股骨最大载荷、弯曲强度、弹性模量水平均降低;肝组织中铁离子水平升高,铁调素蛋白降低;胫骨骨髓中OPG蛋白表达降低,RANKL蛋白表达增高(P0.05或P0.01)。与模型组比较,左归丸组和西药组大鼠腰椎骨密度及股骨的最大载荷、弯曲强度、弹性模量升高,肝组织铁离子水平降低,铁调素蛋白表达升高;胫骨骨髓中OPG蛋白表达升高,RANKL蛋白表达下降(P0.05或P0.01)。结论左归丸可提高肝脏分泌铁调素水平,进而对OPG/RANKL信号通路进行调节,最终降低破骨细胞活性,减少骨量丢失,保护骨组织,这可能是其治疗骨质疏松症的作用机理之一。     

桃红四物汤治疗骨质疏松症的药效学研究

目的考察桃红四物汤对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨形态学和骨载荷能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、仙灵骨葆胶囊(0.4 g/kg)组以及桃红四物汤低、高剂量(0.2、0.4 g/kg)组,每组8只。除对照组外,其余各组大鼠去除双侧卵巢建立骨质疏松模型。各给药组ig相应药物,连续3个月。采用三点弯曲实验检测各组大鼠股骨荷载能力;采用苏木素-伊红(HE)和番红固绿染色观察各组大鼠胫骨病理变化;采用微计算机断层扫描技术(micro computed tomography,Micro-CT)分析各组大鼠胫骨骨密度、骨小梁宽度和分离度等形态学参数;采用抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测各组大鼠胫骨破骨细胞数量;采用免疫组化法检测各组大鼠胫骨骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)蛋白表达情况。结果与模型组比较,桃红四物汤组大鼠股骨最大载荷、最大应力和弹性载荷均显著升高(P0.05、0.01);胫骨骨丢失程度改善,骨小梁数量和连接增多;胫骨骨密度、骨小梁与骨组织面积比、骨小梁宽度和骨小梁数量显著升高(P0.05、0.01),骨小梁分离度显著降低(P0.01);胫骨破骨细胞数量减少,OPG表达增加,RANKL表达降低。结论桃红四物汤能够增加骨密度及荷载能力,促进成骨细胞功能,抑制破骨细胞功能亢进引起的骨吸收,从而发挥抗骨质疏松作用。     

补肾化痰祛瘀方对铜负荷Wilson病模型TX小鼠骨代谢异常的影响

目的 探讨补肾化痰祛瘀方对Wilson病TX小鼠骨代谢异常的影响及其作用机制。方法 TX和正常对照小鼠随机分为空白组(Blank group)、Wilson病模型组(Wilson disease model group)、二巯丁二酸组(DMSA group)、补肾化痰祛瘀方(BSHTQYF group)、补肾化痰祛瘀方+DMSA组(BSHTQYF+DMSA),每组10只。运用苏木精-伊红染色法观察小鼠股骨组织病理形态结构变化，番红染色法进一步辨析小鼠软骨组织的剥脱与生长；免疫组化法检测小鼠股骨组织中骨钙蛋白(Osteocalcin, BPG)与骨保护蛋白(Osteoprotegerin, OPG)的表达情况，并测定其平均光密度水平。结果 与空白组相比，Wilson病模型组小鼠股骨组织形态结构紊乱变形；股骨组织中的BPG蛋白及OPG蛋白阳性表达及平均光密度水平显著下降(P<0.01);补肾化痰祛瘀方组上述指标较Wilson病模型组改善明显(P<0.01)。结论 补肾化痰祛瘀方能促进TX小鼠股骨组织的生长发育，提高TX小鼠骨组织中BPG蛋白及OPG蛋白表达水平，改善TX小鼠的骨...