腹膜透析滤出液外泌体miR-200a在不同腹膜转运特性患者中的表达差异及其生物学功能预测

目的·提取和鉴定腹膜透析滤出液(peritoneal dialysis effluent,PDE)外泌体,比较不同腹膜转运特性患者PDE外泌体miR-200a的表达水平,预测其潜在靶基因及参与的生物学过程.方法·将20例腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)患者按照腹膜平衡实验(peritoneal ...     

山莨菪碱在腹膜透析治疗中的应用

目的观察山莨菪碱注射液对腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)患者腹膜转运功能的影响。方法选择22例我院腹膜透析住院患者,给予山莨菪碱注射液10 mg/d,静脉滴注1周。采用腹膜平衡试验(peritoneal equilibration test,PET)评估患者的腹膜转运功能。用自身前后对照研究方法,观察患者山莨菪碱注射液治疗前后腹膜转运功能的变化。结果患者腹膜转运功能(PET)绝大多数有明显提升,有高度显著性差异(P<0.01)。同时,观察到有9例腹膜透析患者经山莨菪碱注射液治疗后血磷下降,2.32±0.246 mmol/L vs 1.95±0.185 mmol/L,有显著性差异(P<0.05)。而血白蛋白下降不明显,无统计学意义。结论山莨菪碱注射液经济、实用,在提高患者腹膜透析转运功能、降低血磷方面有很好的应用价值。     

腹膜透析并发胸膜腔积液的处理近况

1967年,Edwards和Unger首次报道了1例行急性腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)的病人并发胸腔积液。以后,有关这一并发症的报道越来越多。急性短暂应用腹膜透析以及持续性非卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)和间断性腹膜透析(intermittent peritoneal dialysis,IPD)均可出现此并发症。发生率约2％～10％。早期,胸腔积液的发生认为是继续行腹膜透析的禁忌证。近年来,随着对此并发症的病因、诊断等的认识,在处理上有新的进展。现综述如下。     

尿毒症患者腹膜透析和血液透析的比较

血液透析(hemodialysis, HD)在尿毒症患者的治疗中已得到了广泛应用,而腹膜透析(peritoneal dialysis, PD)相比之下应用较少.1976年Popovich和Moncrief首次在临床上应用连续不卧床腹膜透析(continous ambulatory peritoneal dialysis, CAPD)方法治疗尿毒症以来,腹膜透析(PD)技术得到了迅猛发展及广泛临床应用.在美国,1979年CAPD患者不足1000人,1985年增殖12 189人,增加约12倍;在欧洲CAPD治疗从1978年的779人增至7529人,增加约10倍;澳大利亚、加拿大等国家CAPD的开展更为广泛.CAPD在终末期肾脏病的替代疗法中,占有愈来愈重要的地位.为比较PD与HD的疗效做一小样本调查比较.     

腹膜透析患者容量超负荷问题的研究进展

腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)患者肾脏替代治疗的重要措施之一,过去人们普遍认为腹膜透析可以持续、缓慢地脱水,从而有效控制水、钠潴留和高血压,容易实现容量平衡.     

恶性腹膜间皮瘤的诊治(附19例报告)

恶性腹膜间皮瘤(Malignant peritoneal mesothelioma,MPM)是一种罕见肿瘤,1990年7月至2007年7月我科共诊治19例,现结合文献复习报告如下.     

腹膜透析相关性腹膜纤维化及防治

腹膜透析（peritoneal dialysis,PD）治疗终末期肾病（end-stage irenal disease,ESRD）已有30余年,因为其具有操作简便、对血流动力学影响较小、残肾功能保护较好等的优点,得到了广泛的应用,目前已成为慢性肾脏病替代治疗的一个重要组成部分。     

升结肠恶性腹膜间皮瘤一例

恶性腹膜间皮瘤(malignant peritoneal mesothelio-ma,MPM)是一种来源于腹膜上皮或间皮组织的恶性肿瘤,几乎无敏感和特异的临床表现、实验室指标及影像学特征.诊断恶性腹膜间皮瘤的金标准是病理学及免疫组化,导致该病早期难以发现,且容易误诊,确诊时多为晚期[1].本文报道1例我院2019年10...     

超声诊断原发性腹膜癌1例

<正>原发性腹膜癌(Primary peritoneal carcinoma,PPC)是一种起源于腹膜间叶组织,并引起腹盆腔弥漫性癌变的恶性肿瘤。其发病率低,起病隐匿,患者的临床表现酷似晚期卵巢癌;加上临床医师对该病认识不足,因此术前误诊率高。为提高诊断准确率,现将本院收治的1例PPC患者资料总结如下。     

持续性不卧床腹膜透析疗法的护理

持续性不卧床腹膜透析(Continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)是治疗肾功能衰竭的有效疗法之一。与血液透析相比,具有设备简单,操作容易、禁忌症少,对中分子物质透析充分,价格便宜等优点,受到多数患者的欢迎。但如果操作不慎,可并发腹膜炎,而中止CAPD。预防腹膜炎等并发症是护理工作的重要职责,腹膜透析的护理也是一门综合性的护理,就将个人体会简述如下。     

葡萄糖PDS对单层人腹膜间皮跨细胞电阻及迁移修复能力的影响

目的：观察不同浓度葡萄糖PDS（PDS）对单层人腹膜间皮细胞（HPMCs）跨细胞电阻（TER）以及迁移修复能力的影响。方法：用不同葡萄糖浓度PDS(1.5%,2.5%,4.25%)分别与DMEM以1∶1比例混合后体外培养HPMCs。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定细胞增殖。使用双池培养皿(transwell)构建HPMCs单层细胞模型。采用TER技术测定PDS对HPMCs通透性的影响。划痕损伤实验观察葡萄糖对HPMCs修复再生能力的影响。结果：不同浓度葡萄糖PDS(1.5%,2.5%,4.25%)干预均可明显地抑制HPMCs的增殖(P＜0.05)。TER值随PDS干预时间的延长而逐渐下降,且与葡萄糖浓度呈负相关(P＜0.01)。葡萄糖PDS可明显抑制HPMCs迁移修复能力,且与葡萄糖浓度相关。结论：高糖PDS液抑制细胞增殖,降低单层HPMCs的TER值,并抑制HPMCs损伤后迁移修复能力。提示PDS中高糖成分是导致腹透患者腹膜高通透性和超滤衰竭的重要因素。     

氧化应激在腹膜纤维化大鼠模型腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的:研究氧化应激在腹膜纤维化大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用;观察抗氧化剂普罗布考的干预效应.方法:采用4.25%高糖腹透液以100 mL/kg 腹腔注射法复制腹膜纤维化大鼠模型,实验分为正常对照组、生理盐水对照组、腹膜纤维化模型组和普罗布考干预组.4周后行腹膜平衡试验,处死大鼠,准确测量超滤量,检测腹膜功能;取肠系膜...     

Galectin-1 在高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的：研究人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs) 中galectin-1 的表达和在高糖腹透液(peritoneal dialysate solution, PDS) 刺激下galectin-1 表达的变化及其与上皮细胞- 间充质细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT) 的关系。方法：以HPMCs 为研究对象,实验分为：正常对照组(5.5 mmol/L 葡萄糖),含1.5% 葡萄糖的PDS(1.5% PDS) 组,2.5%PDS 组及4.25% PDS 组。培养48 h 后,采用实时定量PCR 和Western 印迹检测galectin-1,vimentin 和zo-1 mRNA 和蛋白的表达水平,分析galectin-1 与vimentin 和zo-1 表达的相关性。使用阳离子脂质体转染galectin-1 siRNA 至HPMCs 内,实验分为：正常对照组(5.5mmol/L 葡萄糖),高糖组(4.25% PDS) 和转染组(galectin-1 siRNA +4.25% PDS)。观察galectin siRNA 干预后vimentin 和zo-1 mRNA 和蛋白的表达水平。结果：不同浓度PDS 刺激HPMCs 48 h 后,与对照组比,galectin-1mRNA 表达上调,尤以4.25%PDS 组明显(P<0.05),其蛋白水平的表达均明显上调(P<0.05),且具有浓度依赖性;同时 vimentin mRNA 表达上调,以2.5%PDS 组和4.25%PDS 组更明显(P<0.05),其蛋白水平的表达均明显上调(P<0.05);而zo-1 mRNA 和蛋白水平的表达均明显下调(P<0.05)。不同浓度高糖PDS 刺激下galectin-1 mRNA 和蛋白表达水平与vimentin mRNA 和蛋白表达水平呈正相关(P<0.05);与zo-1 mRNA 和蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。Galectin-1 siRNA 干预后vimentin mRNA 和蛋白水平的表达较高糖组明显下调(P<0.05),而zo-1 mRNA 和蛋白水平的表达较高糖组明显上调(P<0.05)。结论：Galectin-1 与高糖PDS诱导的HPMCs EMT 相关,galectin-1 siRNA 能够抑制高糖PDS 诱导的HPMCs 转分化。 Galectin-1 可能参与腹膜纤维化的发生环节,成为防治腹膜纤维化的新靶点。     

RNAi干扰WT1和Pax2表达对逆转肾小管上皮间充质转化的作用

 【目的】 探讨抑制肾小管上皮间充质转化(EMT)过程中胚胎发育关键基因WT1和Pax2的表达对EMT的逆转作用。【方法】 采用RNAi技术分别抑制WT1和Pax2。分别构建pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体,采用脂质体转染技术,使质粒瞬时转染NEK52E细胞后用10 ng/mL IL-1α刺激细胞,分别提取不同时间点细胞的RNA和蛋白质,采用RT-PCR和Western blot检测细胞WT1、Pax2、Snail、上皮细胞标志E-cadherin和间充质标志α-SMA的mRNA和蛋白质的表达,并观察NRK52E细胞的形态。【结果】构建的pshRNA-WT1和pshRNA-Pax2表达载体可在转染细胞内发挥RNAi作用抑制WT1和Pax2基因的表达,抑制率分别为80.4 %和82.7 %。分别抑制WT1和Pax2基因后EMT过程受阻,α-SMA和Snail的表达显著减少,E-cadherin的表达无显著性变化,细胞形态未发生明显的成纤维化样改变。【结论】 WT1和Pax2基因是EMT中的关键基因,分别抑制胚胎发育关键基因WT1和Pax2均可使EMT受阻。阻断WT1和Pax2的表达有望中止EMT及肾纤维化的发生。     

丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞转分化及致纤维化因子表达的影响

目的腹膜纤维化是长期腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)的常见并发症,也是透析不充分和退出PD的主要原因,研究表明丹参酮ⅡA能改善各种组织中的纤维化。文中研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对在高糖腹膜透析液(peritonealdialysis fluid,PDF)诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维化及其相关因子表达的影响。方法选择非尿毒症、非糖尿病择期手术患者的大网膜作为HPMCs的来源,将培养的细胞随机分成4组:对照组、PDF组、丹参酮1组(含丹参酮ⅡA浓度为50μmol/L的PDF组)、丹参酮2组(含丹参酮ⅡA浓度为100μmol/L的PDF组),同步培养72h后,应用间接免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)表达,实时荧光定量PCR检测E-cadherin、α-SMA、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原酶(CollagenⅠ)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、smad2、smad7 mRNA表达。结果免疫荧光法发现,丹参酮ⅡA能显著抑制高糖诱导的E-cadherin低表达和α-SMA高表达。Real-time-PCR发现,添加丹参酮ⅡA的PDF组α-SMA、FN、CollagenⅠ、TGF-β1、smad2 mRNA表达与PDF组比较显著下调(P<0.05);E-cadherin、smad7 mRNA表达显著上调(P<0.05)。结论在PDF中添加丹参酮ⅡA可显著减轻PDF导致的HPMCs转分化,从而抑制纤维化相关因子的表达。     

长期索拉菲尼暴露促进Huh7肝癌细胞上皮间质变的实验研究

目的探讨索拉菲尼耐药肝癌细胞发生上皮间质变(EMT)及侵袭、转移能力增强的机制。方法通过药物连续诱导人肝癌细胞株Huh7建立索拉菲尼耐药肝癌细胞株Huh7R,显微镜下观察细胞形态学变化;CCK-8细胞增殖试验检测Huh7R细胞增殖能力;荧光定量PCR检测ABC家族耐药基因ABCB1、ABCC1、ABCG2及EMT相关调控锌指蛋白转录因子Snail、Slug基因表达水平;Westernblot检测耐药蛋白ABCG2,EMT标记分子E-cadherin、Vimentin及N-cadherin,转录因子Snail、Slug蛋白表达水平;Transwell小室侵袭试验检测Huh7R细胞迁移、侵袭能力。结果Huh7R细胞呈细长形,伴纤维状突起,形态学上符合EMT改变;CCK-8细胞增殖试验显示在索拉菲尼作用下,Huh7R细胞生存率高于Huh7细胞;荧光定量PCR结果显示,Huh7R细胞ABCB1、ABCC1、ABCG2及Snail、Slug基因表达水平均高于Huh7细胞（均P＜0.05）;Westernblot显示,Huh7R细胞上皮标记蛋白E-cadherin表达水平低于Huh7细胞（P＜0.05）,而间质标记蛋白Vimenti、N-cadherin及Snail、Slug蛋白表达水平均高于Huh7细胞（均P＜0.05）;Transwell小室侵袭试验显示Huh7R细胞迁移、侵袭能力均较Huh7细胞增强。结论长期低剂量索拉菲尼暴露会促进肝癌细胞Snail和Slug表达,诱导肿瘤细胞发生EMT,增强其侵袭、转移能力。     

Snail介导的肺上皮间质转化在肌成纤维细胞活化中的作用

目的 探讨核转录因子Snail介导的肺上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）在肌成纤维细胞活化中的作用。方法 培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（MLE-12）并利用转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）刺激获得EMT模型,应用RT-qPCR检测上皮标志物E钙粘蛋白（E-cadherin,CDH1）、间质标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、核转录因子Snail mRNA表达变化。建立MLE-12与小鼠胚肺成纤维细胞（NIH-3T3）共培养体系,应用RT-qPCR检测NIH-3T3的α-SMA、Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ α1,COL1A1）、Ⅲ型胶原（collagen Ⅲ α1,COL3A1）mRNA表达。利用Snail-shRNA转染MLE-12,应用RT-qPCR、Western blotting检测Snail mRNA和蛋白质表达。建立慢病毒转染的MLE-12与NIH-3T3共培养体系,应用RT-qPCR检测NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达。采用单因素方差分析及最小显著差法判断结果差异是否具有统计学意义。结果 加入TGF-β1刺激48 h后,RT-qPCR结果显示,与对照组相比,TGF-β1组的CDH1 mRNA的表达下调、α-SMA和Snail mRNA的表达上调（P<0.05）;共培养体系中,RT-qPCR结果显示,与TGF-β1和MLE-12组相比,加入TGF-β1刺激的MLE-12引起下室NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达上调,且上调程度高于TGF-β1和MLE-12的单独作用（P<0.05）;慢病毒转染后,与阴性对照病毒组相比,Snail慢病毒干扰组Snail的mRNA和蛋白质表达均明显下调（P<0.05）;分别用阴性对照病毒和Snail慢病毒转染MLE-12后与NIH-3T3建立共培养体系,RT-qPCR结果显示,与TGF-β1+阴性对照病毒组相比,TGF-β1+Snail慢病毒转染组下室NIH-3T3的α-SMA、COL1A1、COL3A1 mRNA表达上调程度降低（P<0.05）。结论 Snail介导的小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT可引起肌成纤维细胞活化,敲减Ⅱ型肺泡上皮细胞的Snail基因可抑制成纤维细胞活化为肌成纤维细胞。提示Snail介导的肺上皮间质转化在肌成纤维细胞活化中发挥重要作用。     

高糖腹透液对腹膜间皮细胞分泌VEGF的影响及氟伐他汀的干预作用

目的:观察氟伐他汀(fluvastatin,Flu)对高糖腹透液(high-glucose peritoneal dialysate,HGPDS)诱导的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的影响?方法:体外培养HPMCs,同步化48 h后,分组如下:正常对照组?HGPDS组?HGPDS+Flu组?单纯Flu组?倒置显微镜观察各组细胞形态,RT-PCR法检测各组VEGF的mRNA表达,Western blot检测各组VEGF蛋白的表达?结果:与正常对照组相比,在HGPDS作用下,48 h后细胞由铺路石样转变为长梭形,1 × 10-6 mol/L Flu可部分逆转HPMCs的形态改变?与正常对照组相比,在HGPDS作用下,人腹膜间皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达明显增多(P < 0.05),并呈时间依赖性,VEGF mRNA和蛋白分别在HGPDS干预后12 h和48 h达高峰(P < 0.05)?Flu可明显抑制HGPDS诱导的VEGF的表达(P < 0.05),并呈浓度依赖性?结论:适当浓度的Flu可以抑制HGPDS刺激体外培养人腹膜间皮细胞VEGF表达增加?     

上皮间质转化状态在内镜治疗慢性鼻窦炎患者预后的预测意义研究

目的探讨不伴有鼻息肉的慢性鼻窦炎患者鼻腔或鼻窦黏膜组织中的上皮间质转化状态（EMT）与临床资料、症状评分等的相关性,分析其对患者预后的预测意义。方法收集2012年1月-2013年5月经鼻内镜手术治疗的不伴有鼻息肉的慢性鼻窦炎患者30例及健康者15例的鼻腔或鼻窦黏膜标本,采用实时定量PCR（RT—PCR）检测黏膜组织中上皮细胞表型标志E—cadherinmRNA及间质细胞表型标志α-SMAmRNA的相对表达量,分析其与患者症状评分的关联性。结果病例组上皮细胞标志物E—cadherinmRNA相对表达较对照组下降,间质细胞标志物α—SMAmRNA相对表达较对照组上升,提示病例组标本中存在EMT现象;α-SMAmRNA表达与吸烟史呈正相关关系,E—cadherinmRNA表达与年龄、病程、吸烟史等呈负相关关系（P〈0．05）;睡眠评分、Lund—Kennedy总评分、前筛评分与0l—SMAmRNA表达呈正相关,鼻部症状评分、Lund—Kennedy体征总评分、Lund—Mackay体征总评分与E—cadherinmRNA表达呈负相关（P〈0．05）。结论在不伴有鼻息肉的CRS患者鼻腔或鼻窦黏膜组织中确实存在EMT现象;患者的病情越重,EMT现象越明显,EMT对患者的预后和转归具有一定的预测意义。     

16HBE细胞上皮间质转化模型建立以及麻黄-甘草药对对其影响

目的?体外诱导人支气管上皮细胞（16HBE）上皮间质转化（EMT）最适条件摸索以及探讨麻黄-甘草对EMT的影响。方法?以16HBE细胞株为研究对象,分别给予转化生长因子β1（TGF-β1）单一刺激以及血清饥饿联合刺激,运用Western blot法检测上皮及间质特征性蛋白的表达。运用免疫荧光检测E-Cadherin和N-Cadherin胞内表达分布情况。运用qPCR检测上皮及间质特征性基因的表达水平。血清饥饿联合TGF-β1刺激,给予麻黄-甘草药对干预,Western blot法检测上皮及间质特征性蛋白的表达水平。结果?TGF-β1可诱导16HBE细胞由结构规则、质密均匀的鹅卵石状向纺锤体状转化。TGF-β1单独刺激可诱导16HBE细胞N-Cadherin、α-SMA蛋白表达升高,对E-Cadherin、ZO-1蛋白表达未见明显影响。而当细胞密度为15%时,血清饥饿联合TGF-β1可诱导16HBE细胞N-Cadherin、α-SMA、Vimentin、Collagen Ⅰ蛋白、基因水平升高以及E-Cadherin、ZO-1蛋白、基因水平降低,并且E-Cadherin蛋白分布紊乱,上皮结构破坏。血清饥饿联合TGF-β1刺激,麻黄-甘草药对可抑制N-Cadherin、α-SMA的表达,并恢复E-Cadherin蛋白的表达,对ZO-1无明显影响。结论?血清饥饿联合TGF-β1能体外诱导16HBE细胞建立稳定可重复的EMT模型,可用于体外研究哮喘发生EMT相关机制。麻黄-甘草药对一定程度上可抑制16HBE细胞EMT过程。