卵泡刺激素受体在成年化疗大鼠卵巢中的表达

目的探讨化疗药物所致的卵巢病理损伤以及FSHR在化疗卵巢中的表达. 方法将成年大鼠随机分为两组生理盐水组和环磷酰胺组. 大鼠单次腹腔注射环磷酰胺, 观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目. 荧光定量PCR方法检测大鼠卵巢FSHR mRNA的表达. 结果环磷酰胺可引起原始卵泡大量丢失,卵巢间质严重损害,且卵巢局部发生纤维化. 化疗组卵巢窦卵泡比例显著低于对照组(P＜0.05);化疗组大鼠动情周期日数[(6.83±1.12)d]显著高于对照组[(4.50±0.82)d,P＜0.05]. 荧光定量PCR显示,环磷酰胺组FSHR mRNA水平显著低于对照组(P＜0.05). 结论化疗大鼠卵巢FSHR表达减少,可能是导致化疗卵巢局部窦卵泡比例减少和动情周期延长的原因之一.     

环磷酰胺作用下成年大鼠卵巢干细胞因子和mRNA的表达

目的 探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制.方法 将成年SD大鼠分为两组:生理盐水组和环磷酰胺组.大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后处死,固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目.免疫组化方法检测干细胞因子(SCF)蛋白在卵巢的表达,RT-PCR半定量法检测对侧卵巢SCFmRNA的表达.结果 环磷酰胺可引起卵巢间质的严重损害和局部纤维化的发生.SCF可表达于大鼠卵巢原始卵泡和初级卵泡的卵母细胞,次级卵泡和早期窦卵泡的颗粒细胞也可见SCF的表达.环磷酰胺组注射后8周卵泡颗粒细胞SCF蛋白显著升高,卵母细胞SCF蛋白显著减少(P＜0.05);卵巢SCF mRNA显著升高(P＜0.05).结论 SCF在化疗卵巢表达的变化有助于进一步阐释化疗药物损伤卵巢的机制.     

人类卵巢组织玻璃化冷冻及复苏后形态学及组织增殖活性观察

目的 探讨玻璃化冷冻对成人卵巢组织中原始卵泡与初级卵泡的形态学及细胞增殖状态的影响.方法 采用液氮直接覆盖玻璃化冷冻(direct cover vitrification,DCV)方法冻存成人卵巢组织块,液氮保存2周后复苏组织.观察和比较冻融前后人卵巢组织中原始卵泡与初级卵泡组织形态学改变;免疫组化染色测定经体外培养48 h后新鲜和冻融卵巢组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果 冻融前后人卵巢组织内原始卵泡和初级卵泡分布差异无统计学意义(P>0.05);新鲜卵巢组织中,形态异常的原始卵泡比例与初级卵泡比例差异无统计学意义(P>0.05),冻融卵巢组织中,形态异常的原始卵泡比例低于形态异常的初级卵泡比例(P<0.05);新鲜组、新鲜及冻融后培养组均有PCNA的阳性表达,PCNA 阳性表达可见于中间型卵泡和初级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞、卵巢组织间质细胞.结论 利用DCV方法对人卵巢组织进行冻存能够保存原始卵泡和初级卵泡,冻融过程对原始卵泡和初级卵泡形态结构都可能造成一定程度的损伤,冻融后组织内卵泡有体外生长发育的潜力.     

胎儿卵巢的形态学及细胞凋亡的观察与研究

目的：探讨人胎儿卵泡的发育形成过程及卵细胞凋亡情况。方法收集2013年1~12月于广东省计划生育科学技术研究所行中期妊娠及晚期妊娠(24~32周)引产的女性胎儿卵巢组织18例。其中24~27周(孕中期)胎儿卵巢组织8例,28~32周(孕晚期)胎儿卵巢组织10例。采用免疫组化苏木精-伊红(HE)染色及原位末端标记法(TUNEL),观察胎儿卵巢卵泡发育及形成过程及该过程中卵细胞凋亡情况。结果 HE染色显微镜下观察,孕中期胎龄卵巢原始卵母细胞较多,卵巢间质少,颗粒细胞较少。随着胎龄的增加,颗粒细胞逐渐增多;围绕卵母细胞,原始卵泡逐渐形成并开始增多,卵母细胞数量减少。孕晚期原始卵母细胞明显减少,原始卵泡形成,数量进一步增多,随着孕龄增加,原始卵泡愈发完整。 TUNEL染色观察见阳性凋亡细胞多见于未形成卵泡的卵母细胞,卵细胞周围的颗粒细胞在孕晚期可见少许凋亡,卵泡内卵细胞未见阳性染色。孕中期卵巢卵母细胞凋亡明显多于孕晚期,且凋亡主要发生于未形成原始卵泡的卵母细胞。结论胎儿卵巢发育过程中,原始卵母细胞数量逐步减少,原始卵泡形成,其发育过程中原始卵母细胞不断发生凋亡,导致生殖细胞丢失。     

AMH对暴露于化疗毒性下卵巢功能损伤的评估价值

目的 探讨AMH对于乳腺癌化疗后卵巢储备功能损伤的评估价值。方法 检测不同年龄段正常雌性C57BL/6J小鼠血清AMH水平,并计数不同年龄段小鼠卵巢原始卵泡及生长卵泡的数量。构建乳腺癌荷瘤小鼠模型,于27只6周龄BALB/c裸鼠皮下成瘤,随机分为3组,即对照组、CTX100mg/kg组、CTX200mg/kg组。分别在干预前和干预后1、3周检测血清AMH水平,留取不同时期小鼠卵巢,记录原始卵泡和生长卵泡数目。结果 4~6月龄小鼠血清AMH水平保持较为稳定,8月龄后小鼠AMH总体下降明显,同时小鼠原始卵泡和生长卵泡数量的减少与AMH水平直接相关,HE染色可见年老小鼠卵泡数量明显减少。另外,高剂量CTX处理的小鼠AMH水平(P=0.000)、原始卵泡和生长卵泡数量均显著下降(P=0.000),而低剂量CTX组的变化不显著。结论 血清AMH作为评估卵巢储备功能的指标,对化疗后卵巢损伤的评估具有意义。     

淫羊藿甙对大鼠早期卵巢卵泡发育和卵母细胞凋亡影响的初步研究

目的 探讨淫羊藿甙对早期卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响.方法 用淫羊藿甙对受孕11.5 d大鼠灌胃[100mg/(kg·d)]直至生产,分别取淫羊藿甙灌胃组(试验组)和空白对照组中出生2 d、4 d、8 d龄新生大鼠卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化,免疫组化染色观测caspase-3的定位和表达水平.结果 在试验组新生大鼠,2d龄卵巢卵母细胞巢内卵母细胞比例增高,原始卵泡比例下降;4 d龄卵巢中原始卵泡比例显著增高,发育卵泡比例降低;8d龄卵巢各不同发育阶段卵泡比例与对照组相一致;试验组2d卵巢内TUNEL阳性率降低;Caspase-3主要在卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞中表达,2 d卵巢表达水平高于4 d卵巢.结论 淫羊藿甙能延缓新生大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵泡的消耗;能降低2 d龄卵巢卵母细胞的凋亡率,抑制卵母细胞凋亡,增加原始卵泡池的储备量.     

能量限制对化疗大鼠卵巢的形态结构与功能的保护作用

目的探讨能量限制对环磷酰胺处理大鼠卵巢的保护作用。方法将48只10周龄大鼠随机分为对照组、能量限制组、环磷酰胺组、能量限制加环磷酰胺组。观察各组动物的动情周期,实验结束时称取卵巢重量,并进行卵巢组织形态学观察及卵泡计数,测定血清雌二醇、促黄体生成素、促卵泡生成激素评估卵巢储备功能。结果经环磷酰胺处理的大鼠出现精神萎靡、体重下降、动情周期逐渐消失,卵巢体积缩小,颗粒细胞变性、坏死,各期卵泡数均明显减少,闭锁卵泡数增加(P<0.01)。能量限制组大鼠卵巢的原始卵泡数比对照组明显增多(P<0.01),窦状卵泡数减少(P<0.01)。能量限制加环磷酰胺组的原始卵泡和初级卵泡数比环磷酰胺组明显增多(P<0.01),且卵巢组织受损程度较单用环磷酰胺轻。环磷酰胺处理组大鼠血清雌二醇显著低于对照组和能量限制组,促黄体生成素和促卵泡生成素水平则显著高于对照组和能量限制组(P<0.01)。结论能量限制模型可以抑制原始卵泡的的转化使其数量明显增多,并可以适度减轻化疗造成的结构与功能损伤,使卵巢保留有一定储备功能。     

环磷酰胺对成年大鼠卵巢的损伤以及GnRHR在卵巢的表达

目的 探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制.方法 将成年SD大鼠分为2组:生理盐水组和环磷酰胺组.大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目;免疫组化法检测GnRHR在卵巢的表达.RT-PCR法检测对侧卵巢GnRHR mRNA的表达.结果 环磷酰胺可引起卵巢皮质区原始卵泡发生大量丢失,卵巢间质严重损害,血管发生特征性病理改变;局部发生纤维化.GnRHR mRNA和蛋白质可表达于大鼠卵巢.与对照组相比,环磷酰胺组颗粒细胞GnRHR蛋白表达减少;化疗组GnRHR mRNA表达量低于对照组(P＜0.05).结论 GnRHR在化疗卵巢较低水平的表达,提示化疗晚期卵巢局部微环境的紊乱.     

1-磷酸-神经鞘氨醇干预化疗对荷瘤小鼠卵巢功能和抑瘤效果的影响

目的探讨凋亡抑制因子1-磷酸-神经鞘氨醇(S1P)对环磷酰胺(CTX)联合顺铂(DDP)诱导的S180荷瘤小鼠卵巢功能损害的干预作用及其对肿瘤化疗效果的影响。方法将52只C57BL/6雌性小鼠随机选取10只作为空白对照组,余皮下接种S180肿瘤细胞后随机分为3组,即荷瘤对照组、单纯化疗组、S1P+化疗组,每组14只。用药期间动态观察动情周期及肿瘤体积变化,于用药前、用药第11天左右的动情间期分批处死小鼠,分别称取体质量、卵巢质量及肿瘤质量;采用酶联免疫吸附(ELISA)法动态检测用药前后各组小鼠血清的卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平的变化;卵巢组织连续病理切片,计算原始卵泡、生长卵泡数量的变化。每组剩余小鼠与成年雄性小鼠合笼,观察生育情况。结果(1)血清基础性激素水平:给药前,各组血清FSH、LH、E2水平无显著性差异(P>0.05);用药第11天左右,单纯化疗组血清FSH水平明显高于其余3组、E2水平明显低于其余3组,其差异均有显著性意义(P<0.01),但血清LH水平各组间无显著性差异(P>0.05);S1P+化疗组血清FSH、LH、E2水平与两对照组均无显著性差异(P>0.05);(2)卵泡数量及卵巢质量:用药第11天左右,单纯化疗组原始卵泡数和卵巢质量明显低于其余3组(P<0.01),其生长卵泡数亦明显低于空白对照组、荷瘤对照组(P<0.01),但与S1P+化疗组的差别无显著性意义(P>0.05)。S1P+化疗组原始卵泡数、生长卵泡数及卵巢质量与空白对照组、荷瘤对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05);(3)肿瘤质量和抑瘤率:给药第11天左右,与荷瘤对照组比较,单纯化疗组、S1P+化疗组的皮下肿瘤体积增长速度均受到明显抑制,两组的肿瘤质量与荷瘤对照组相比均有显著性差异(P<0.01),且两组的抑瘤率均高于60%。结论 S1P可以在不影响肿瘤化疗效果的同时,预防化疗对小鼠卵巢功能的损害。     

卵巢生殖细胞凋亡标记物的表达与生殖能力衰退的探讨

目的 通过对卵巢生殖细胞凋亡标记物的表达对卵巢生殖储备能力的衰退机制进行探讨.方法 选择2005年7月至2007年2月因妇科良性肿瘤而行手术的40例患者,根据患者的年龄将入选对象分为两组,绝经过渡期25例:年龄47.13±3.56岁;对照组(育龄期)15例,年龄34.60±5.60岁.手术中留取少许卵巢组织进行免疫组化观察Fas与Fas-l,Bcl-2与Bax蛋白的表达.应用末端标记法检测细胞凋亡.结果 TUNEL的阳性表达出现在两组原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡中,在次级卵泡的表达率最高,P＜0.01,绝经过渡组女性次级卵泡的表达率高于育龄妇女,P＜0.01,有显著性差异.Fas与Fas-l在次级卵泡的表达率明显增高,差异有显著性.Bcl-2与 Bax的表达在次级卵泡的表达＞初级卵泡＞原始卵泡,各级比较有统计学意义,P＜0.01.结论 凋亡标记物在卵巢各级卵泡均有阳性表达并随卵泡的发育其表达率逐渐升高,表明卵巢卵泡的不断凋亡,导致卵泡数量持续减少,造成卵巢储备力的不断降低与功能中止.     

化疗源性卵巢早衰的中西医防治进展

恶性肿瘤是严重威胁人类的高发病种,手术、放疗和化疗并称恶性肿瘤的"三大治疗手段",其中手术和放疗属于局部治疗,对转移病灶难以发挥作用,而化疗属于全身治疗,化疗药物会随着人体中的血液循环遍布到绝大部分组织。所以,对一些已经有转移的中晚期肿瘤患者,化疗是最主要的治疗手段。但是,化疗作为主要的抗肿瘤手段极易导致卵巢早衰(POF)从而出现卵巢萎缩性持续性闭经、第二性征退缩、盗汗、易怒、色斑等症状,严重影响女性患者的生活质量。旨在总结近年来针对化疗后出现卵巢早衰症状的中西医防治手段,帮助患者有效改善POF症状,提高生活质量。     

循期阴阳序贯疗法对卵巢早衰患者性功能的影响

目的探讨循期阴阳序贯疗法对卵巢早衰患者性功能的影响。方法采用随机、对照原则,选60例患者分为中药组、中西医结合组、西药组,中药组选择左归丸及右归丸为治疗用药,西药组给予雌孕激素序贯疗法,中西医结合组中西药同用。所有患者均以3个周期为1个疗程,进行总疗效观察判定;采用酶联免疫吸附法检测治疗前后FSH和E2以及性功能积分量化比较。结果卵巢早衰患者中药组有效率为60%,中西医结合组有效率为75%,西药组有效率为45%;中药组与中西医结合组比较差别无显著意义(P>0.05),中药组、中西医结合组与西药组总有效率比较差别均有显著意义(P<0.05),说明中药组及中西医结合组治疗效果明显优于西药组,而中药丸剂与汤剂无明显差异。结论循期阴阳序贯疗法主要是通过纠正紊乱的生殖内分泌轴和恢复部分卵巢功能,从而改善卵巢早衰患者的性功能。     

补肾活血方对小鼠自身免疫性卵巢功能衰退的防治作用

目的：探讨补肾活血中药对小鼠自身免疫性卵巢功能早衰（premature ovarian failure．POF）的防治怍用。 方法：以BALB／c雌性小鼠卵巢组织制备卵巢抗原，皮下和两后脚掌多点注射免疫同种雌性小鼠建立卵巢早衰模型。分别在第1次免疫以及第3次免疫后给予补肾活血中药，灌服中药后分析阴道脱落细胞涂片．酶联龟疫法检测外周血雌二醇（estradiol，E2）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone．FSH）以及黄体生成素（1uteinizing hormone，LH）浓度。 结果：POF小鼠卵巢间质可见淋巴细胞浸润，外周血FSH和LH升高,E2下降明显（P〈0.05）；而补肾活血中药能减少POF小鼠外周血FSH和LH含量，提高体内E2水平。早期预防比岳期治疗用药作用显著。 结论：补肾活血中药主要通过纠正紊乱的生殖内分泌轴，恢复部分卵巢功能，对免疫性卵巢早衰具育防治作用。     

间充质干细胞在卵巢早衰治疗中的应用进展

卵巢早衰（POF）是妇科常见的一种内分泌疾病，目前认为POF的发病与遗传、自身免疫功能异常、环境及代谢异常以及放、化疗损伤等有关。激素替代治疗虽然可以缓解一些临床症状，但不能有效恢复卵巢功能和生育能力，还可能带来明显不良反应。再生医学在组织器官修复上有着不可替代的价值，尤其是干细胞在治疗多种疑难疾病中发挥了关键作用，本文将对间充质干细胞在卵巢早衰治疗中的应用进展进行综述。     

Pregnancy in premature ovarian failure after therapy using Chinese herbal medicine

We present ovulation that occurred after the administration of traditional Chinese herbal medicine for 3 months in a woman with premature ovarian failure (POF) and secondary amenorrhea for 8 years. Traditional Chinese medicine concentrated herbal extracts of cooked rehmannia, Chinese yam, wolfberry fruit, dogwood fruit, cyathula root, dodder seed, antler glue, tortoise-plastron glue, epimedium and morinda root were prescribed, which were a modification of the herbal formula Zuo-gui-wan. When the patient discontinued the Chinese herbal medicine treatment and tried therapy with clomiphene citrate, neither ovulation nor conception occurred. Eight months after beginning clomiphene citrate therapy, the concentrations of follicle stimulating hormone and luteinizing hormone were still in the postmenopausal range. The modified formula of Zuo-gui-wan was prescribed again and the patient conceived 1 month after taking Zuo-gui-wan. Thus, we suggested that Chinese herbal medicine restored ovarian function effectively and promptly, and offers another option for treating infertility in patients with POF.     

中西医结合治疗卵巢早衰的Meta-分析

目的对中西医结合治疗卵巢早衰(POF)的疗效和安全性进行Meta-分析。方法采用循证医学的评价方法,对1989年1月至2010年12月国内外公开发表及未发表的有关中西医结合治疗对比西医激素治疗卵巢早衰的所有文献进行统计,对符合循证医学评价的文献结果进行分析,从而评价中西医结合治疗卵巢早衰患者的疗效。结果符合纳入标准的文献共16篇,包括1 168例患者。Meta-分析显示:合并OR=3.13,95%CI为[2.32,4.22]。合并效应的检验Z=7.46(P<0.000 01),差异有统计学意义。结论分析结果显示中西医结合方案在治疗卵巢早衰方面优于单纯西医激素治疗,但文章的随机方法、分配隐藏、盲法及随访上有较大的不足,尤其是随访报道甚少,高质量的研究文献较少,提示今后在临床研究的方法学上有待进一步改善。     

中西医治疗卵巢早衰的超声血流动力学变化规律

目的观察采用中西医结合方式治疗卵巢早衰（premature ovarian failure, POF）患者前后的血流动力学变化规律，为POF的临床诊断及治疗提供理论参考依据。方法对作者医院自2011-12／2012—12月期间收治的40例POF患者的临床资料进行回顾性分析。采用中西医结合手段对上述POF患者进行治疗，治疗前后利用经阴道彩色多普勒超声技术的局部放大以及高频技术对患者的血流动力学进行测定，测定指标包括卵巢体积、患者卵巢动脉血管收缩期的峰值流速（artery systolic peak flow velocity, PSV1）、卵巢内基质动脉血管的收缩期的峰值流速（systolic arterial vessels of ovarian stroma, PSV2）、阻力指数（resistance index，RI）、加速时间（acceleration time，TA）、加速度（acceleration，ACC），评价中西医治疗前后POF患者的血流动力学参数变化及治疗意义。结果POF患者经阴道超声检查，卵巢和子宫均呈现萎缩状态，治疗后卵巢体积、PSV2血流动力学参数显著高于治疗前（P〈0．05）；治疗后患者的PSV1、RI、TA、ACC等血流动力学参数显著低于治疗前（P〈0．05）。结论采用中西医结合治疗女性POF的临床效果显著，患者的血流动力学参数有较大的改善。采用多普勒超声技术测定POF患者的血流动力学参数，测定结果准确度较高，为临床POF的诊断提供了可靠的技术帮助。     

卵巢功能早衰的中医临床治疗进展概况

卵巢早衰系一种多病因所致的卵巢功能衰竭,是临床较常见疾病,近年来发病率呈上升趋势,尤其是现代人生活节奏快速,压力增大,使得许多职业女性觉得体力、精力跟不上生活工作节奏,进而随着内分泌混乱而出现一系列的临床症状。由于卵巢早衰病因复杂,治疗难度较大,现代医学迄今尚未取得突破性进展,主要采取激素替代疗法。而近年来随着中医药对本病研究的深入,中医药具有整体调控和多靶点、多方式调节的特点显示出优势,且与西药相比无任何毒副反应,所以更为患者所接受。     

基于本体推理的中西药物相互作用自动发现研究

目的:通过构建中西药物相互作用本体,利用本体推理工具自动发现中西药物相互作用.方法:基于用药安全规则及药物相互作用原理,利用本体语言构建疾病治疗的中西药物相互作用本体.设计本体推理工具的自定义规则,实现从药物相互作用到药物使用风险的推理.结果:药物相互作用本体构建及推理方法可用于发现中西药物联用可能发生的风险和风险预警...