基于Hedgehog信号通路的熊果酸诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的机制研究

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoechest/PI染色法观察熊果酸对细胞凋亡的影响;荧光探针法检测熊果酸对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase活性检测试剂盒检测熊果酸对细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的影响;蛋白免疫印迹法检测Hedgehog信号通路相关蛋白SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc、Su Fu及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果 SW480细胞经熊果酸给药后形态发生改变;细胞迁移能力显著下降;线粒体膜电位降低;细胞核出现致密浓染;Caspase-3、Caspase-9活性升高;SW480细胞发生凋亡;Hedgehog信号通路相关蛋白Su Fu的表达水平升高,SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc的表达水平下降;细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降。结论熊果酸对SW480细胞的生长、增殖具有抑制作用,通过抑制Hedgehog信号通路的激活促进SW480细胞凋亡。     

丹溪痛风方对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白的影响

目的探讨丹溪痛风方(DGP)对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白的影响。方法胰腺癌BxPC-3细胞随机分成模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组(50μg/ml),DGP高、中、低剂量组(40,20,10μg/ml)。采用台盼蓝染色、MTT法、细胞划痕法分别检测胰腺癌BxPC-3细胞生长曲线、增殖抑制率、运动能力;采用免疫组织化学、RT-PCR法检测胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1水平。结果与模型组比较,5-FU组,DGP高、中剂量组胰腺癌BxPC-3细胞OD值明显降低(P0.05);运动能力明显降低(P0.05);Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1水平明显降低(P0.05);Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1 mRNA水平明显降低(P0.05)。结论 DGP对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路关键蛋白Shh、Smo、Ptch1、Gli1具有抑制作用,可见DGP在胰腺癌治疗中扮演重要角色。     

蝎毒多肽干预K562/BALB/c-nu小鼠Hedgehog通路传导的机制研究

目的探究蝎毒多肽干预K562/BALB/c-nu白血病荷瘤小鼠Hedgehog通路信号传导的机制,从基因、蛋白水平解析蝎毒多肽抑制慢性粒细胞白血病发展的分子机制和作用靶点。方法将K562/BALB/c-nu白血病荷瘤小鼠分为对照组、模型组、伊马替尼(50 mg/kg)组和蝎毒多肽高、中、低剂量(0.3、0.6、1.2 mg/kg)组,药物干预14 d后,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测小鼠瘤组织Hedgehog信号通路上游因子Shh、Ptch、Smo m RNA表达水平,Western blotting法检测Shh、Ptch、Smo蛋白表达水平,ELISA法检测小鼠瘤组织Hedgehog信号通路下游因子Gli1蛋白表达水平。结果与模型组比较,蝎毒多肽干预组小鼠瘤组织Shh m RNA和蛋白表达水平均升高;蝎毒多肽低、中剂量组小鼠瘤组织Ptch、Smo m RNA及蛋白表达水平均降低;伊马替尼组各上游因子与模型组比较差异不显著;蝎毒多肽低、中剂量组小鼠瘤组织Gli1蛋白表达水平降低,蝎毒多肽高剂量组、伊马替尼组Gli1蛋白表达水平无显著差异。结论蝎毒多肽能够抑制Hedgehog信号通路上游因子Ptch、Smo以及下游因子Gli1的表达,而伊马替尼对Hedgehog信号通路无明显抑制作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过Hedgehog信号诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡的机制研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌HCT-116细胞的抑制作用和机制。方法:MTT实验检测细胞活力,并计算表没食子儿茶素没食子酸酯的IC_(50)值,确定有效给药剂量。采用5-氟尿嘧啶(5-FU)为阳性对照药;EdU掺入法测定细胞增殖情况;JC-1染色测定线粒体膜电位;流式细胞术测定肿瘤细胞凋亡;RT-PCR法测定凋亡相关基因B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)mRNA表达;Western blot测定Smo、Gli-1、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和核凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达情况。结果:与模型对照组比较,32μmol/L和64μmol/L的表没食子儿茶素没食子酸酯显著抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖(P<0.01),诱导线粒体膜电位显著降低(P<0.01),显著诱导细胞凋亡(P<0.01)。与模型对照组比较,表没食子儿茶素没食子酸酯的应用在mRNA水平下调Bcl-2表达,上调Bax表达(P<0.01),在蛋白水平上调Caspase-3和AIF表达(P<0.01),下调Smo和Gli-1表达(P<0.01)。结论:表没食子儿茶素没食子酸酯抑制结肠癌HCT-116细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能通过抑制Smo/Gli-1信号通路的表达实现。     

莪术含药血清抑制HSCs中Shh和Gli1表达的机制研究

研究莪术含药血清抑制活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中Hedgehog(Hh)信号通路关键因子Shh(sonic hedgehog),Gli1(glioma-associated oncogene homolog-1)表达的机制。清洁级SD大鼠均分2组,分别给予莪术水煎剂、生理盐水灌胃取血制备含药血清。体外培养大鼠HSCs,分为7组:空白组、模型组、Hh通路抑制剂组、莪术组、Hh通路抑制剂+莪术组、Hh通路激动剂组、Hh通路激动剂+莪术组。除空白组外,其余各组均给予100μg·L-1瘦素诱导后,各组再予以相应药物干预24 h,经MTT法检测HSCs增殖情况,RT-PCR法检测Shh,Gli1的mRNA表达,Western blot法检测Shh,Gli1蛋白表达及免疫荧光法检测Gli1蛋白表达。经瘦素活化的大鼠HSCs中Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达均显著上调(与空白组比较P0.01)。Hh通路抑制剂、莪术含药血清分别干预后,Shh,Gli1的mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P0.01);莪术含药血清与Hh通路抑制剂协同干预后,Shh,Gli1 mRNA和蛋白表达显著下调(与模型组比较P0.01);Hh通路激动剂干预后,Shh,Gli1 mRNA和蛋白表达显著上调(与模型组比较P0.01)。用莪术含药血清干预Hh通路激动剂组后,Shh,Gli1mRNA和蛋白表达显著下调(与Hh通路激动剂组比较P0.01)。莪术含药血清可通过抑制瘦素诱导活化的HSCs中Shh,Gli1的表达,参与Hh信号通路抑制HSCs的活化,发挥抗肝纤维化的作用。     

吴茱萸碱激活结肠癌细胞自噬抑制其增殖的研究

目的探讨吴茱萸碱(evodiamine,Evo)对结肠癌HCT-116细胞自噬、增殖的影响及其可能的分子机制。方法 CCK-8法检测Evo对HCT-116细胞增殖的影响;Evo(3、6μmol/L)处理48 h后,MDC法检测细胞内自噬小泡的数量,DHE法检测细胞内活性氧(ROS)的量,Western blotting法检测细胞自噬相关蛋白和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)通路相关蛋白的表达;Evo(6μmol/L)分别与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)和凋亡抑制剂Z-DEVD-FMK共同作用48 h后,Western blotting法检测细胞内自噬及凋亡相关蛋白的表达。结果与对照组比较,Evo对HCT-116细胞呈现浓度依赖性的增殖抑制作用;Evo(3、6μmol/L)使HCT-116细胞内的ROS量升高、自噬小泡数量增加、自噬相关蛋白LC3表达增加、p62表达降低、p-AMPK及m TOR表达增加;Evo与自噬抑制剂联合给药后,细胞内LC3蛋白表达减少,而有活性的Caspase-3表达增加,Evo与凋亡抑制剂联合给药后,细胞内LC3表达增加,而有活性的Caspase-3表达被抑制。结论 Evo能够通过AMPK/m TOR通路激活自噬、抑制HCT-116细胞增殖,且细胞自噬与凋亡呈现互补作用。     

薏苡仁油对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响和机制

目的:观察薏苡仁油对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响,探讨薏苡仁油对人结肠癌HT-29细胞Hedgehog(Hh)信号通路的影响。方法:分别使用不同浓度薏苡仁油处理人结肠癌细胞株HT-29,另取空白培养基做对照组。采用噻唑蓝还原法[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]检测各组细胞增殖情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用实时定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,q-PCR)检测Ptch、Smo、Shh和Gli-1 mRNA表达,采用蛋白印迹检测CyclinD1、p21、Caspase-3、Bcl-2、Ptch、Smo、Shh和Gli-1蛋白的表达。结果:MTT法观察到薏苡仁油可抑制人结肠癌HT-29细胞增殖,各浓度水平组HT-29细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P0.05),抑制率随着薏苡仁油浓度的增加而升高。流式细胞术观察到薏苡仁油可诱导HT-29细胞凋亡,各浓度水平组HT-29细胞凋亡率差异均有统计学意义(P0.05),凋亡率随着薏苡仁油浓度的增加而升高。与空白对照组比较,薏苡仁油各组Ptch、Smo、Shh和Gli-1 mRNA的表达降低,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,薏苡仁油各组CyclinD1、Bcl-2、Ptch、Smo、Shh和Gli-1蛋白的表达降低,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,薏苡仁油各组p21和Caspase-3蛋白的表达升高,且随着薏苡仁油浓度增加,各组表达变化逐渐升高,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:薏苡仁油能抑制人结肠癌HT-29细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能和薏苡仁油抑制Hh信号通路相关。     

慈菇消脂方对TGF-β1诱导LX2细胞miR-378a-3p表达及Hh信号通路的影响

目的 观察慈菇消脂方对TGF-β1诱导活化LX2细胞miR-378a-3p表达及Hh信号通路的影响。方法 将细胞分为对照组、诱导组、含药血清组、miR-378a-3p inhibitor组、miR inhibitor NC组。CCK-8法检测各组细胞活力，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，RT-qPCR检测各组细胞miR-378a-3p表达，RT-qPCR和Western blot法检测各组细胞Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA和蛋白表达。结果 与对照组比较，诱导组细胞活力及Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA和蛋白表达升高(P<0.01),miR-378a-3p表达降低(P<0.01)。与诱导组比较，含药血清组细胞活力、Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA及α-SMA、Gli2蛋白表达降低(P<0.05),细胞凋亡率及miR-378a-3p表达升高(P<0.01);miR-378a-3p inhibitor组细胞活力、Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA及Gli1、G...     

Hedgehog 信号通路与慢性肝损伤后肝再生的调控

目的 初步探讨小肝细胞样祖细胞增殖过程中Hedgehog 信号通路的表达及其变化.方法 按Gordon's方案,Fisher344 大鼠腹腔注射倒千里光碱后,择期行部分肝切除术诱导小肝细胞样祖细胞的增殖,反转录聚合酶链反应、实时荧光定量PCR 及免疫组化等方法检测原代再生细胞均浆中Hedgehog 信号通路相关成分在不同时间点的表达,并以同期正常大鼠原代肝细胞作对照.结果 小肝细胞样祖细胞增殖过程中Hedgehog 信号通路多种成分表达,其中IHH、PTCH、Smo、Gli1、Gli2、Gli3 mRNA 持续表达并呈动态变化,SHH 表达阴性.信号分子IHH,以及反映通路活动状态的3 个标志(PTCH,Gli1,Gli3)在同一时间点与对照组之间差异有统计学意义,在实验组内不同时间点之间差异也有统计学意义(均P ＜0.001),时间与处理组之间有交互效应.免疫组化证实PTCH、Gli1 在蛋白水平的表达.结论 Hedgehog 信号通路在小肝细胞样祖细胞增殖过程中持续激活,可能是调控慢性肝损伤后肝再生的一条新的重要的信号通路.     

基于Hedgehog信号通路探析白头翁汤抗结直肠癌HCT116细胞机制

目的：探讨白头翁汤水煎液通过调控经典Hedgehog(Hh)信号通路诱导人结直肠癌细胞HCT116凋亡的作用及其机制。方法：用白头翁汤(25、50、100、200、500、750、1 000 mg·L^-1)处理HCT116细胞24 h,然后用噻唑蓝(MTT)比色法检测白头翁汤对细胞增殖的影响;分别设置空白组、白头翁汤组(125、250、500 mg·L^-1)和五氟尿嘧啶(5-FU)组(40 mmol·L^-1),显微镜观察细胞给药前后形态变化;划痕实验检测白头翁汤对细胞迁移的影响;Hoechest 33324/碘化丙锭(PI)染色法评价白头翁汤对细胞凋亡的影响;流式细胞术检测白头翁汤对HCT116细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平及Hh信号通路关键因子音猬因子(SHh)、GLI家族锌指蛋白1(Gli1)、G蛋白偶联受体蛋白Smoothened(Smo)、苏氨酸蛋白激酶Fused抑制因子(SuFu)、c-核蛋白类基...     

略述《内经》色诊

《内经》是一部医学全书,它素被尊为"医书之祖",《内经》中的色诊学说,内容丰富,论述甚详,是望诊部分的中坚内容。通过对《内经》中色诊内容的整理,概述色诊内容,主要包括望色之神、望色之常、望色之异、五色主病、望色之位、望色之变等。     

论正胰腺脏位 还十二指肠腑名

长期以来,大凡认真研读过《黄帝内经》(以下简称《内经》)脏腑理论的中医学者,都会因文中既提"十二藏",又述"五藏六府",以及将一个不具备"藏而不泄"之"脏"功能的"心包"列于脏位。将无"满而不能实","传化物而不藏"之"腑"功能的"三焦"给以腑名,而时有困惑。近年来,随着糖尿病患者,胰腺癌患者及十二指肠球部溃疡等患者的大量涌现。胰腺和十二指肠作为脏腑功能的显现,越来越受到重视。笔者根据《内经》,关于脏与腑功能的界定标准,及现代解剖学,生化学所见,结合长期的临床实践之需求,提出了将人体"胰腺"取代无脏功能的"心包"以正其脏位。并将与胰腺有密切生理关系的十二指肠取代三焦,作为与胰腺相表里的腑。这样就将"五藏六府",正式升级为"六脏六腑"。即:肺与大肠、胰与十二指肠、心与小肠、脾与胃、肝与胆、肾与膀胱,以合《内经》"十二藏"之说。经过如此传承精华与守正创新,则可使《内经》的脏腑理论得以进一步完善。既符合了人体内客观真实的脏腑生理结构状况,而且对中医临床的脏腑辨证论治,提供了理论依据。     

论保健按摩的繁荣对推拿学发展的影响

本文分析了保健按摩的繁荣给推拿学发展所带来的利与弊,认为保健按摩的繁荣普及提高了全社会对推拿的认知度,扩大了推拿的社会影响力,"倒逼"医院设置推拿科室或推拿治疗项目,增加了就业平台,壮大了推拿队伍,但部分民众、医务工作者和政府管理部门人员对推拿不全面、不正确的认知观,导致愿意学习推拿和从事推拿专业工作的高素质人才减少,对部分推拿医务工作者自尊心、自信心、成就感、成功感和荣誉感等带来负面影响,并大大降低了推拿学科的严肃性,提出如何正确对待、界定保健按摩在推拿学科中的地位和作用是推拿学界无法回避的现实问题,必须认真加以正视和思考,否则将不利于推拿学科的健康发展。     

五脏神识系统的形成

目的：系统研究中医五脏相关学说。方法：从发生学角度,结合《内经》、道家学说探讨中医五脏神识系统建立的理论与实践问题。结果：五脏神识系统是在胚胎时期的脑髓中,元神与脑髓共同作用、发生分化而形成的。元神分化出心神,再由心神分化出五神等各种神识元素;脑髓分化出心肾等五脏,五神、五脏分化完成后,五神入藏于五脏,从而形成了五脏神识系统。结论：脑为元神化生神识元素、脏腑之处所,心神为五脏神识系统的主宰。     

对部分分娩女婴产妇实施心理护理的体会

目的：预防与治疗因分娩女性婴儿导致情绪受到刺激,因而引起平衡、调节系统的崩溃,同时促发心理疾病、精神病及躯体病.方法：通过护士的语言、行为、表情、姿势等改变产妇的不良心理状态.结果：预防产后并发症的发生并促进机体的康复.     

略论太平惠民局的成立对宋代医药发展的影响

本文就宋代太平惠民局的成立对宋代医药学发展的影响做了相关论述。认为太平惠民局的成立促进了《太平惠民和剂局方》的成书。制定了药物炮制规范,对当时医生诊疗疾病处方用药带来很大便利。但生产的成药也存在弊端,这也从一定程度上推动了新的医学流派的产生。     

调和脾胃在失眠治疗中的运用

失眠症为临床常见病症,且多与脾胃功能失调有关,在治疗上也常采取健脾、和胃、疏肝等法。本文就脾胃失调引起失眠的病因病机,调和脾胃的治法方药运用等方面作一阐述。     

海南青牛胆挥发油化学成分的研究

海南青牛胆 (ＴｉｎｏｓｐｏｒａｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓＨ .Ｓ .ＬｏｅｔＺ .Ｘ .Ｌｉ)系防己科青牛胆属植物 ,为一新种。民间用以治疗关节疼痛和筋骨损伤。主要含有甾酮类、生物碱等化合物。为探讨海南青牛胆中挥发油成分 ,对其藤茎进行了挥发油的研究 ,通过ＧＣ ＭＳ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ进行测定分析 ,从中共鉴定出 2 0个化合物。1　材料及样品的制备原材料采集于海南省文昌市龙楼乡 ,经海南师范学院钟义教授鉴定为海南青牛胆 (ＴｉｎｏｓｐｏｒａｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓＨ .Ｓ .ＬｏｅｔＺ .Ｘ .Ｌｉ)。取该植物藤茎经切片、干燥 ,粉碎成…     

方证相对论研究的关键问题与思考

中医学以间接致思的思维方式探求人体生理、病理及防病治病规律，开展方证研究也应遵循中医学的本原思维模式。方随证出，因证变化而药物组成变化是方证对应的一般规律，称之为“方证相对论”。方证对应理论体系是非线性的、多维的、开放的复杂系统，其研究内容应体现当代医学最新成就。从中药分子水平开展方剂配伍规律研究，阐明方剂作用机理以求得方证的最佳对应和变化规律，应是方证研究深化的客观要求和关键所在。