CD55、CD59免疫表型对PNH相关疾病诊断的观察研究

目的探讨CD55、CD59免疫表型与PNH及相关疾病诊断及鉴别诊断价值。方法用流式细胞仪检测PNH及相关疾病CD55、CD59免疫表型。结果发现PNH患者血细胞膜表面与糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚连蛋白有关抗原CD55、CD59表达减低或缺乏,再障-PNH综合症CD55、CD59也呈不同程度降低。其它贫血血细胞膜表面CD55、CD59抗原表达正常。结论CD55、CD59GPI锚连蛋白分子表达可做PNH以及再障-PNH综合症诊断和鉴别诊断的最敏感、最准确的检测指标。     

各种贫血血细胞CD55、CD59免疫表型观察研究

目的观察各种贫血血细胞CD55、CD59免疫表型相互变化关系,探讨其临床意义。方法用流式细胞仪技术检测各种贫血患者骨髓、外周血细胞CD55、CD59免疫表型。结果发现PNH患者血细胞膜表面与糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚连蛋白有关抗原CD55、CD59免疫表达异常减低或缺乏,再障-PNH综合症CD55、CD59也呈不同程度降低。而且较传统常规溶血检测指标敏感。其它贫血血细胞膜表面CD55、CD59抗原表达正常。结论检测血细胞膜表面CD55、CD59GPI锚连蛋白分子表达可做PNH以及再障-PNH综合症确诊诊断和鉴别诊断的最敏感、最特异、最准确的检测指标,并对观察PNH发展、转化、治疗、愈后有重要指导价值。     

CD55、CD59、RET%、N-ALP对PNH及AA-PNH的诊断价值

目的 探讨CD55、CD59、RET%、N-ALP对阵发性血红蛋白尿(PNH)及AA-PNH的早期诊断的价值,寻找PNH及AA-PNH早期诊断敏感指标,进而达到早期发现、早期诊断、早期治疗的目的 .方法 应用流式细胞仪测定PNH综合征及AA-PNH患者的CD55、CD59抗原变化关系,RET%、N-ALP用细胞化学染色显微镜记数.结果 结果表明PNH及AA-PNHCD55、CD59抗原较AA及正常对照组明显减低,AA转变为AA-PNH过程中RET%进行性增高,相反中性粒细胞NALP积分在此过程中呈进行性降低.结论 CD55、CD59抗原表达率以及RET%、NALP可做PNH及AA-PNH早期诊断最敏感指标,同时并与预后转归密切相关.     

CD55、CD59、RET%、N-ALP对PNH及AA-PNH的诊断价值

目的探讨CD55、CD59、RET%、N-ALP对阵发性血红蛋白尿(PNH)及AA-PNH的早期诊断的价值,寻找PNH及AA-PNH早期诊断敏感指标,进而达到早期发现、早期诊断、早期治疗的目的。方法应用流式细胞仪测定PNH综合征及AA-PNH患者的CD55、CD59抗原变化关系,RET%、N-ALP用细胞化学染色显微镜记数。结果结果表明PNH及AA-PNHCD55、CD59抗原较AA及正常对照组明显减低,AA转变为AA-PNH过程中RET%进行性增高,相反中性粒细胞NALP积分在此过程中呈进行性降低。结论CD55、CD59抗原表达率以及RET%、NALP可做PNH及AA-PNH早期诊断最敏感指标,同时并与预后转归密切相关。     

GPI锚定蛋白检测诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿症的临床价值

目的：探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者不同外周血细胞GPI锚定蛋白的表达情况,为PNH的诊断和鉴别诊断提供依据。方法：采用流式细胞术检测32例PNH患者外周血各类细胞膜上CD55、CD59、 CD16及CD14的表达百分率。结果： PNH患者外周血红细胞、粒细胞膜上CD55、CD59表达均明显减少,与正常对照组比较差异有显著性（P<0.001）,且粒细胞上CD55、CD59表达率低于红细胞（P<0.05）;血小板CD55、CD59表达率也较对照组减少（P<0.05）;有27例PNH患者的淋巴细胞CD55、CD59表达降低,其缺失率达30%,低于粒细胞和红细胞;CD16在粒细胞上表达量差异很大（34%～83%）,与对照组比较差异有显著性（P<0.001）;在单核细胞上可见CD14表达缺失的PNH克隆,CD14表达比例明显低于正常对照组（P<0.001）。结论： 检测外周各系血细胞CD55和CD59可以使典型PNH的诊断更加可靠,使部分缺乏典型临床表现的PNH明确诊断。检测CD16和CD14对排除PNH具有重要意义。     

CD55、CD59在阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断中的作用

目的：探讨衰变加速因子(CD55)、反应性溶血膜抑制物(CD59)在阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)诊断中的意义。方法：用流式细胞仪检测CD55、CD59的表达量(％)。结果：PNH组CD55、CD59明显低于AA—PNH组和AA组、对照组。结论：检测患者外周血粒细胞膜表面抗原CD55、CD59可作为PNH的早期确诊指标,其中CD59是较敏感指标,CD55是特异性指标。     

流式细胞术检测CD55及CD59对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿的意义

目的探讨流式细胞术检测免疫表型对诊断阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）的意义。方法采用流式细胞术测定60例正常人和9例阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者外周血中性粒细胞和红细胞膜抗原的表达,用荧光标记分化群中的CD55、CD59单克隆抗体。结果 PNH患者中性粒细胞CD55、CD59,红细胞CD59表达率较正常人低,且与疾病的严重程度相关。结论用流式细胞术检测CD55、CD59表型是目前诊断PNH的较直接而又高特异、高敏感的方法。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿患者测定CD55、CD59的意义

本文采用流式细胞技术测定6例阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）．11例再障-PNH综合征,10例再生障碍性贫血（AA）患者外周血淋巴细胞膜CD55和CD59标记率。6例PNH患者均表现出CD55和CD59下降（P＜0.01）．11例再障-PNH综合征患者也表现出CD55和CD59下降（P＜0.05）。10例再生障碍性贫血患者中8例CD55和CD59标记率在95％以上．2例标记率在85％以上,与对照组相比无统计学意义。结果表明：血细胞膜上糖基磷脂酰肌醇（GPI）“锚”相关蛋白CD55和CD59的缺陷与PNH有密切关系。流式细胞技术测定血细胞膜CD55和CD59可作为诊断PNH的有效方法。     

CD55、CD59免疫表型对PNH相关疾病诊断的观察研究

目的 探讨CD55、CD59免疫表型与PNH及相关疾病诊断及鉴别诊断价值.方法 用流式细胞仪检测PNH及相关疾病CD55、CD59免疫表型.结果 发现PNH患者血细胞膜表面与糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚连蛋白有关抗原CD55、CD59表达减低或缺乏,再障-PNH综合症CD55、CD59也呈不同程度降低.其它贫血血细胞膜表面CD55、CD59.抗原表达正常.结论 CD55、CD59 GPI锚连蛋白分子表达可做PNH以及再障-PNH综合症诊断和鉴别诊断的最敏感、最准确的检测指标.     

CD34、CD59在阵发性睡眠性血红蛋白尿中的表达及意义

目的研究阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者骨髓CD34^＋细胞比率及外周血粒、红细胞CD59表达阳性率并探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测20例PNH患者骨髓单个核细胞（BMMNC）中CD34^＋细胞比率及外周血中粒、红细胞CD59表达阳性率。结果PNH患者CD34^＋细胞比率显著低于正常人（P〈0．01）;其中增生减低组CD34^＋细胞比率低于增生活跃、增生明显活跃组（P均〈0．05）,而后两组之间差异无显著性（P〉0．05）。正常人外周血粒、红细胞CD59表达阳性率均〉95％,其中粒细胞CD59表达稳定性较好;PNH患者外周血粒、红细胞CD59表达阳性率与正常对照组相比均显著减低（P〈0．01）;粒细胞CD59在不发、偶发、频发组中表达逐渐减低且差异均有显著性（P〈0．05）,红细胞CD59表达则在三组之间差异无显著性（P〉0．05）。结论CD34^＋造血干细胞减少可能参与PNH发病;外周血粒、红细胞CD59检测是诊断PNH的特异性及敏感性方法,其中粒细胞CD59缺失程度对判断病情严重与否具参考价值。     

流式细胞术检测CD55、CD59对阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断价值的探讨

目的探讨患者外周血细胞膜上CD55和CD59缺陷对阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnalhemoglobinuria,PNH)的诊断价值。方法采用流式细胞术对CD55-PE及CD59-FITC标记的患者外周血中性粒细胞和红细胞进行检测。对2009年1月～2012年3月来我院就诊的13例PNH患者、13例再生障碍性贫血(aplasticanemia,AA)、21例骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者、12例缺铁性贫血(irondeficient anemia,IDA)患者与同期80例健康体检者进行回顾性分析。结果 PNH患者中性粒细胞及红细胞膜表面CD55、CD59较AA、MDS、IDA及健康体检者均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用流式细胞术检测贫血患者外周血红细胞及中性粒细胞膜上CD55和CD59缺陷,是临床鉴别诊断PNH与AA、IDA、MDS可靠而敏感的指标。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓CD34+CD59+细胞与正常人CD34+细胞生存、增殖、扩增性能的比较

目的探索阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓CD34CD59细胞体外扩增的方法,并对其与正常人CD34 细胞的生存、增殖及扩增性能进行比较,为PNH患者实现自体骨髓移植(ABMT)或自体外周血干细胞移植(APBSCT)提供重要的实验基础。方法应用免疫磁珠富集纯化CD34 细胞,然后用流式细胞仪分选出PNH患者的CD34 CD59 细胞及正常人CD34 细胞。对两种细胞在不同造血生长因子组合下,进行体外扩增液体培养2周。并对扩增前及扩增不同阶段的细胞进行体外半固体培养。结果(1)PNH患者CD34 CD59 细胞在体外能得到有效的扩增,在细胞因子合理组合作用下,第7天时CD34 CD59 细胞绝对数扩增约23.49倍。2PNH患者CD34 CD59 细胞与正常人CD34 细胞存在部分相同或相似的特性。在体外扩增过程中,对细胞因子的反应有相同的趋势,均为扩增第7天达到扩增高峰,均在SCF IL-3 IL-6 FL Tpo Epo组合条件下达到最大扩增能力。并且扩增后的细胞仍有形成CFU的能力,均能很好地保持CD59抗原,无GPI锚连蛋白的丢失。(3)正常人CD34 细胞在生存、增殖、形成CFU的能力及扩增能力上均明显强于PNH患者的CD34 CD59 细胞。结论(1)PNH患者CD34 CD59 细胞在体外能得到有效的扩增,临床上应用具有一定的可行性,能满足大多数PNH患者ABMT或APBSCT的需要。(2)PNH患者     

CD55,CD59抗原表达在PNH合并全血细胞减少症诊断中的应用

目的 探讨红细胞和粒细胞膜CD55与CD59抗原表达在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)合并全血细胞减少症(PCP)诊断中的应用.方法采用流式细胞术结合直接免疫荧光法,检测PCP患者病因可疑为PNH的的外周血红细胞和粒细胞膜 CD55与CD59抗原的表达.结果 125例中,PNH32例,非PNH 93例(包括再生障碍性...     

CD16在阵发性睡眠性血红蛋白尿症中的特异性表达

目的:检测中性粒细胞表面分化抗原CD16在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)中表达,评价其在PNH诊断中的意义。方法:运用流式细胞术检测40名健康体检者及36例初治PNH患者外周血中性粒细胞表面分化抗原CD16,并与CD55、CD59及与传统Ham's试验结果进行比较研究。结果:PNH患者外周血细胞的CD16、CD55及CD59均有不同程度的缺乏,与健康对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);与传统Ham's试验比较其灵敏度高,特异度高。结论:细胞膜上糖基化磷脂酰肌醇锚的锚定蛋白CD16的缺陷与PNH有密切关系,流式细胞术检测PNH患者外周血中性粒细胞CD16可作为诊断PNH的有效辅助检查方法,具有一定临床意义。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓正常细胞及异常克隆分析

目的 分析阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者骨髓正常细胞（CD59^ )及异常克隆细胞（CD59^－）的细胞构成。方法 骨髓有核细胞免疫荧光标记后用流式细胞术分析。结果 （1）PNH患者骨髓正常及异常克隆的细胞组成在有核细胞水平是显著不均衡的，正常的CD59^ 细胞以淋巴细胞窗内细胞为主，异常的CD59^－细胞则以粒细胞窗及原始细胞窗内细胞为主。（2）PNH患者骨髓CD59^ 正常细胞群所含CD59^ 细胞总数较异常者显著减少，淋巴细胞窗及粒细胞窗内CD59^ 细胞均较异常者显著减少，前者减少更为显著。结论 PNH患者骨髓正常细胞及异常克隆的细胞构成在有核细胞水平及CD59^ 细胞水平都有显著差异，正常造血呈衰竭状态。因此，在考虑用患者自体骨髓体外净化去除异常克隆后回输给患者重建造血时，应对正常造血细胞作进一步处理，否则正常造血细胞可能不具备重建造血的能力。     

CD55、CD59在诊断再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征中的应用

目的研究CD55、CD59在再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿(AA-PNH)综合征中的诊断价值。方法用流式细胞仪对19例AA-PNH综合征进行CD55及CD59的检测,同时做酸化血清溶血试验(Ham试验),比较二者的阳性检测率。结果红细胞CD55异常者17例(89.4%),粒细胞CD55异常者19例(100%);红细胞CD59异常者18例(94.7%),粒细胞CD59异常者19例(100%)。Ham试验异常率为26.3%。红细胞和粒细胞CD55、CD59的异常率明显高于Ham试验(P<0.05)。结论CD55、CD59有助于提高AA-PNH综合征的诊断。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症CD34+CD59+细胞长期造血的动物实验

目的获得阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者正常克隆干细胞（CD34^＋CD59^＋）支持长期造血的证据。方法纯化、扩增PNH患者骨髓CD34^＋CD59^＋细胞并移植入联合免疫缺陷（SCm）小鼠体内,90d后以首次移植的小鼠骨髓细胞进行二次移植。结果分别移植了PNH患者和正常对照骨髓CD34^＋CD59^＋细胞的小鼠在移植后第90天,外周血细胞水平均恢复正常;两组小鼠的组织中均有CD45的表达,且差异无统计学意义。分别移植了由PNH患者和正常对照骨髓CD34^＋CD59^＋细胞重建造血的小鼠骨髓细胞的小鼠在移植后第30天,外周血细胞水平差异无统计学意义;两组小鼠的组织中均有C1M5的表达,且差异无统计学意义;移植后小鼠骨髓细胞里均可扩增出供者的SRY基因片段。结论经体外纯化、扩增后的PNH患者骨髓CD34^＋CD59^＋细胞具有与正常CD34^＋CD59^＋细胞同样的长期造血的能力。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者CD34+CD59-与CD34+CD59+细胞膜EPO、TPO受体后STAT5磷酸化水平的关系

目的 观察阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者骨髓CD34+CD59+和CD34+CD59-细胞膜促红细胞生成素(EPO)受体(EPOR)、血小板生成素(TPO)受体(TPOR)后信号转导通路中信号转导和转录激活因子(STAT)5磷酸化水平.方法 应用流式细胞术分别检测2010年4月至2011年2月天津医科大学总医院血液肿瘤科PNH患者23例及11名健康对照骨髓单个核细胞(BMMNC)经和不经10 U/ml EPO、50 U/ml TPO刺激后CD34+CD59-和CD34+CD59+细胞磷酸化STAT5(P-STAT5)的平均荧光强度(MFI).结果 (1)未加入细胞因子时,PNH患者CD34+CD59-细胞P-STAT5的MFI为31±15,明显低于 CD34+CD59+细胞(74±47,P<0.01)及健康对照组CD34+CD59+细胞(59±23,P<0.05);PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5的MFI与健康对照组CD34+CD59+细胞比较差异无统计学意义(P>0.05).(2) EPO、TPO刺激后,PNH患者CD34+CD59-细胞P-STAT5的MFI分别为49±24、51±41,明显低于CD34+CD59+细胞(120±82、124±87,均P<0.01)及健康对照组CD34+CD59+细胞(79±47、98±53,均P<0.05),PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5的MFI与健康对照组CD34+CD59+细胞比较差异无统计学意义,经EPO、TPO刺激后PNH患者CD34+CD59+细胞P-STAT5的增高值分别为49±11、54±43,明显高于CD34+CD59-细胞(17±4、16±6,均P<0.01).结论 体外予EPO、TPO刺激,PNH患者正常克隆造血干细胞(CD34+CD59+)EPO、TPO受体后信号转导通路中STAT5磷酸化水平明显优于异常克隆造血干细胞(CD34+CD59-).

Abstract：

Objective To study the STAT5 phosphorylation levels of erythropoietin receptor (EPOR) and thrombopoietin receptor (TPOR) in CD34+CD59- and CD34+CD59+ bone marrow cells of the patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH).Methods The bone marrow mononuclear cells (BMMNC) were extracted from 23 PNH patients treated at our department from April 2010 to February 2011 and 11 normal controls. The mean fluorescence intensity (MFI) of phosphorylated STAT5 (P-STAT5) in CD34+CD59+cells and CD34+CD59-cells with or without the stimulation of 10 U/ml EPO and 50 U/ml TPO were examined by flow cytometry.Results (1)Without stimulation, the P-STAT5 MFI in CD34+CD59- cells of PNH patients was significantly lower than that of CD34+CD59+cells (31±15 vs 74±47, P<0.01). And it was 59±23 in normal control CD34+CD59+cells (P<0.05). No statistic difference existed between the CD34+CD59+cells of PNH patients and the normal control CD34+CD59+cells. (2)Under the stimulations of EPO and TPO, the P-STAT5 MFI was significantly lower in CD34+CD59-cells of PNH patients than that of CD34+CD59+cells (49±24 and 51±41 vs 120±82 and 124±87, both P<0.01). For the normal control CD34+CD59+cells, they were 79±47 and 98±53 respectively (P<0.05).No statistic difference existed between the CD34+CD59+cells of PNH patients and the normal control CD34+CD59+cells. P-STAT5 MFI was elevated after the stimulations of EPO and TPO. The increments of CD34+CD59+cells in PNH patients were significantly higher than those of CD34+CD59-cells (49±11 and 54±43 vs 17±4 and 16±6, both P<0.01).Conclusion Under the in vitro stimulations of EPO and TPO, the STAT5 phosphorylation levels of EPO and TPO receptors in normally cloned hematopoietic stem cells in PNH patients are obviously superior to those in abnormally cloned counterparts.