抗人肺腺癌单克隆抗体放射免疫显像的动物实验研究

本文介绍用单克隆抗体进行裸鼠移植瘤的放射免疫定位的实验结果。用人肺腺癌细胞株(LTEP-a_2)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出产生抗LTEP-a_2抗体的杂交瘤细胞,经3次亚克隆后,注入BALB/c小鼠腹腔,产生腹水。Zetaprep离子交换     

抗血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫共同抗原决定簇的单克隆抗体

<正> 用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫BALB/c 小鼠,取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞按 Kennett 方法作细胞融合,用有限稀释法克隆化2～3次后,建立一株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞(A6-B6),其培养上清经浓缩后作免疫球蛋白亚类签定为 IgM,杂交瘤诱生的小鼠腹水经 SEA 免疫     

胃癌单克隆抗体的研制及其对胃癌活检组织印片细胞的免疫细胞化学反应性

用体外培养的人胃癌细胞脾内免疫BALB/c小鼠,将致敏脾细胞和小鼠SP2/0细胞融合,获得小鼠杂交瘤细胞。用间接免疫荧光法初筛,将初筛克隆扩增后,用正常组织及新鲜肿瘤组织冰冻切片做免疫组化染色,测定其抗体的反应性。然后用有限稀释法克隆3～5     

质粒DNA促进HBsAg-抗HBs复合型疫苗诱生的免疫应答的研究

目的　研究HBsAg 抗HBs 质粒DNA复合型疫苗的免疫原性及其诱生细胞免疫应答的类型。方法　分别以HBsAg、HBsAg 抗 HBs(IC)、pI/AmpHBs、IC pI/AmpHBs及IC pI/Amp免疫小鼠 ,检测抗 HBs的效价 ,分析抗 HBsIgG亚类 (ELISA) ;取免疫小鼠脾细胞 ,体外抗原刺激 ,用竞争性RT PCR方法检测IFN γ及IL 4mRNA转录水平。结果　IC pI/AmpHBs诱生的抗 HBs效价明显高于IC或pI/AmpHBs单独免疫组 ,其IgG2a/IgG1比值高于IC免疫组 ,而低于pI/AmpHBs免疫组。IC pI/AmpHBs免疫小鼠脾细胞在HBsAg刺激下 ,IFN γmRNA转录水平明显高于其他免疫组 ,其IFN γmRNA的T/C(目的片段Target/竞争片段Competitor)比值为IC免疫小鼠脾细胞的 10倍 ;IC pI/AmpHBs免疫小鼠脾细胞IL 4mRNA转录水平亦高于其他免疫组 ,其IL 4mRNA的T/C比值为IC免疫小鼠脾细胞的 2倍。结论　HBsAg 抗HBs 质粒DNA复合型疫苗在增强体液免疫应答的同时可诱导脾细胞IFN γ的表达水平增高。     

分泌肾综合征出血热病毒单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的初步建立

本文在己制备了HFRSV多克隆抗独特型抗体的基础上,又制备了HFRSV的单克隆抗独特型抗体,为HFRS的研究开辟了新的途径。 我们从HFRS病人血清制备了HFRSV特异性抗体(Ab_1),纯化后免疫BALB/c小鼠。初次免疫用Ab_1γ200μg加福氏完全佐剂乳化后腹腔注射.而后间隔两周以等量Ab_1γ加福氏不完全佐剂乳化后同法加强免疫。融合前再以100μg Ab_1γ静脉注射追加免疫,3～4天后供细胞融合使用。细胞融合取供体脾细胞与Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞按常规方法进行。融合12～15天后,用ELISA间接法检测培养上清中的抗独特型体。在制备McAb_2的     

抗人红细胞单克隆抗体的制备和鉴定

按常规方法将O型人红细胞免疫的BaLb/C小鼠脾细胞和NS-1骨髓瘤细胞融合。两次克隆后,获得两株分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株,H_4D_1和H_4E_(10)。细胞培养上清液经透析浓缩2～5倍,同小鼠Ig分型血清作免疫双扩散试验。结果     

人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-GrnF免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,用ELISA筛选阳性克隆,并采用有限稀释法进行亚克隆;采用免疫荧光染色及Westernblot法对所获得的mAb的特异性进行鉴定,并用抗体亚类测定试剂盒检测所获得单克隆抗体亚类。结果成功获得2株可分泌特异性抗GrnF的杂交瘤细胞株(1G6及4E8),经鉴定这2株抗体重链亚类均为IgG1亚类。结论成功制备了抗人GrnF片段结构域的单克隆抗体。     

人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定北大核心CSCD

目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-GrnF免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,用ELISA筛选阳性克隆,并采用有限稀释法进行亚克隆;采用免疫荧光染色及Westernblot法对所获得的mAb的特异性进行鉴定,并用抗体亚类测定试剂盒检测所获得单克隆抗体亚类。结果成功获得2株可分泌特异性抗GrnF的杂交瘤细胞株(1G6及4E8),经鉴定这2株抗体重链亚类均为IgG1亚类。结论成功制备了抗人GrnF片段结构域的单克隆抗体。     

细胞骨架中间丝包括神经细丝蛋白、角蛋白、波形蛋白单克隆抗体的制备和应用

本文主要制备抗3种类型中间丝的单克隆抗体;从人胼胝和HeLa细胞中分别提取角蛋白,从牛脊髓中提取神经细丝蛋白,从人胎脑中提取波形纤维蛋白,纯化后免疫小鼠,经细胞融合,筛选和鉴定,并进行亚克隆培养,分别证明获得2株特异性不同的抗     

一种针对多种上皮样细胞系的单克隆抗体

用人卵巢粘液囊腺癌细胞系细胞制备抗原,给BALB/c小鼠脾内注射后,取其脾细胞与Sp2/0瘤细胞融合,HAT选择培养基培养21d,以免疫荧光法检测,经3次亚克隆培养,获1株能稳定分泌单克隆抗体的杂交     

大鼠抗—HBs的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞系的建立

用纯化的小鼠单克隆抗—HBs和纯化的大鼠多克隆抗—HBs免疫LOU/C大鼠,取免疫大鼠脾细胞与IR983F骨髓瘤细胞融合,获得两株(TD_1、TD_2)持续分泌抗—HBs的单克隆抗独特型抗体(抗—Id,Ab_2)杂交瘤细胞系。对TD_2进行了较全面的鉴定,TD_2的Ig类型为IgG,亚类为IgG_(2?),核型分析结果染色体数为65条。通过ELISA竞争抑制和中和抑制试验表明,TD_2所分泌的Ab_2既能被不同来源的抗—HBs所中和。又能被HBsAg.所竞争,且都呈现剂量依赖关系。将纯化的TD_2IgG免疫同系大鼠,诱导出了具有抗—HBs活性的抗—抗—独特型抗体(Ab_3)。上述结果证实,TD_2所分泌的单克隆抗体(McAb)是带有HBsAg表位内影像,具有HBsAg免疫源性的抗—HBs的单克隆抗—Id。     

乙型肝炎疫苗联合B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠抗HBsAg免疫应答的影响

目的:研究B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠免疫应答的影响,探索治疗慢性乙型肝炎的新方法。方法:用不同剂量的乙型肝炎疫苗和B7-H1蛋白疫苗联合免疫HBV转基因小鼠,应用ELISA法检测转基因小鼠在不同时间点血清抗B7-H1抗体滴度,同时在免疫后第14周末处死小鼠取脾细胞,检测不同的免疫方法对小鼠脾细胞产生HBsAg特异性Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)、对HBsAg特异性分泌IFN-γT细胞数量及对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果:成功完成小鼠的免疫计划,5周起血清中即能测到B7-H1抗体,同一时间点各组之间的抗体滴度值并无明显差异。加B7-H1蛋白免疫各组与相同剂量单用HBsAg蛋白免疫各组相比:IL-2均明显减低(P<0.05),分泌IFN-γT的T细胞数量下降,但脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平各组间无明显差异;MTT法测定的淋巴细胞增殖能力各组间也无明显变化。结论:B7-H1蛋白疫苗可诱导HBV转基因小鼠产生明显的抗B7-H1抗体应答,但不能增强抗HBsAg的免疫应答。较小剂量的HBsAg即可引起HBV转基因小鼠Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)的分泌以及淋巴细胞增殖。     

抗HCV HVR1模拟合成肽单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备抗-HCV高变区1(HVR1)合成肽单克隆抗体(mAb),并对其特性进行鉴定。方法:以固相合成的HCV HVR1合成肽与牛血清白蛋白(BSA)偶联后,免疫8周龄的BALB/c小鼠。采用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,制备抗-HCV HVR1 mAb。经HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化后,用相关的试剂盒鉴定小鼠mAb的Ig亚类;经中和抑制后用ELISA法检测mAb的特异性;用间接ELISA法检测mAb腹水的效价及相对亲和常数。结果:获得1株可分泌抗-HCV HVR1合成肽特异性mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11。该株mAb的Ig亚类为IgG3;腹水效价为3.125×10-5;相对亲和常数为1.0×106L/mol。该株mAb与HBsAg、HBeAg、HBcAg、HAAg、牛血清白蛋白、酪蛋白和胸腺5肽均无交叉反应,与HCV HVR1合成肽-牛血清白蛋白出现特异性反应。结论:成功地建立了1株可分泌抗-HCV HVR1 mAb的杂交瘤细胞1A9G9F11,为进一步的实验研究提供了重要的制剂。     

抗血小板膜糖蛋白Ib单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究

目的:制备抗人血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)单克隆抗体(mAb),并进行生化鉴定与初步探讨其临床应用.方法:采用血小板免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经间接ELISA法筛选和克隆化培养,获得1株抗人GPIb mAb的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得mAb;免疫双扩散鉴定其抗体亚类;流式细胞术和免疫放射法鉴定...     

C-myc单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备与鉴定鼠抗C-myc蛋白单克隆抗体。方法利用C-myc蛋白做免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,经间接ELISA法筛选、有限稀释法克隆、单克隆抗体Ig亚型鉴定,获得2株能够稳定分泌抗C-myc特异性抗体的杂交瘤细胞株,再将杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔诱使小鼠产生腹水。结果获得2株可稳定分泌抗C-myc抗体的杂交瘤细胞株,命名为SHH-1H11,SHH-2A9,Ig亚型分别为IgG1亚类和IgM。细胞培养上清效价分别为1:10240、1:5 120;小鼠腹水效价分别为1:64 000、1:32 000。结论制备的C-myc单克隆抗体仅与C-myc蛋白反应,与其他蛋白没有交叉反应,表明获得的单克隆抗体的特异性很高。     

抗乙肝病毒核心抗体的单克隆抗独特型抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用单克隆抗体HBc免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选到1C12、2G12两株分泌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株,经鉴定属于IgG2a亚类。经ELISA独特型结合试验,抗原—抗体结合抑制试验进行鉴定,证实为抗乙肝病毒核心     

可生物降解高分子乙型肝炎疫苗微球的免疫原性研究

目的　研究聚乳酸 聚乙二醇共聚物 [poly dl lactide poly(ethyleneglycol) ,PELA]包被汉逊酵母表达的HBsAg制备所得乙型肝炎PELA疫苗微球 (PELA·HBsAg)的免疫原性。方法　应用PELA·HBsAg皮下免疫BALB c小鼠 ,在体液免疫方面 ,采用固相放免法测定抗 HBs的水平 ,对抗 HBs中IgG的亚类进行了ELISA测定。在细胞免疫方面 ,于免疫后用3H TdR法测定单个核细胞 (MNC)对ConA、LPS和HBsAg的增殖反应性 ;小鼠迟发型超敏反应 (DTH)的发生程度 ;淋巴细胞亚群分析 ;检测HBsAg特异性CTL活性等评价细胞免疫。结果　①免疫 4周后 ,PELA·HBsAg与HBsAg混合 ,产生抗 HBs的滴度高于铝佐剂的HBsAg[Al(OH) 3 HBsAg]的 2倍多 ;②PELA·HBsAg与HBsAg混合以及PELA·HBsAg产生的IgG2a与IgG的比例显著高于与铝佐剂的HBsAg ;③PELA·HBsAg免疫 2 5d小鼠脾细胞的MNC体外经ConA、LPS刺激后SI最高 ,达到 133.5 9、4 7.4 8,显著高于Al(OH) 3 HBsAg组 (2 8.98、2 1.81)和HBsAg组 (34.95、14 .75 ) ,P <0 .0 5 ;④PELA·HBsAg免疫小鼠后对SRBC所诱导的DTH反应程度有显著的增强作用 (P <0 .0 5 )。⑤PELA·HBsAg与HBsAg混合后免疫小鼠的脾细胞对P815 HBs细胞的特异杀伤率显著高于其它组别 (P <0 .0 5 )。结论　以PELA为佐剂的HBsAg所     

抗地高辛单克隆抗体的制备、签定及其抗地高辛毒性机制和应用的研究

用过氧酸氧化法把地高辛结合于卵蛋白(Dig-OVA)或牛血清蛋白(Dig-BSA)上。用Dig-OVA采取14天免疫程序免疫BALB/c系小鼠(用完全福氏佐剂一次初次免疫,细胞融合前用0.4mg加强免疫四次),14天后取出小鼠脾细胞,与Sp2/0-Ag-14系融合。以Dig-OVA做为固定抗原,经过ELISA筛选和有限稀释亚克隆,制得八株能分泌抗地高辛单克隆抗体的杂交瘤系。对8种MAbS(FD_1-FD_3)的研究表明,它们具有高度特异性。FD_8     

抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗狂犬病毒单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础.方法 将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经细胞克隆和间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株.小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价,用G蛋白亲和层析柱进行纯化,间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性.结果 细胞融合率达100%,经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株,其腹水效价分别为1×104,1×105,1×104和1×105;4株单抗均为IgG类型且特异性好.结论 制备的单抗具有良好特异性和敏感性.     

抗人肝癌单克隆抗体HL2的制备及鉴定

本文以贯序免疫法依次用人肝癌细胞株QGY-7703、BEL-7402、SMMC-7721免疫BACB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞融合,经检测细胞抗原的EL-ISA方法筛选,连续克隆4次后,获得了1株能稳定分泌肝癌单抗的杂交瘤株HL_2。其