内皮素-1及其基因在早期STZ糖尿病大鼠肾组织中的表达及其意义

为探讨内皮素１（ Ｅ Ｔ１）及其基因在早期链脲　菌素 （ Ｓ Ｔ Ｚ） 糖尿病大鼠肾脏组织中的表达及其意义,作者采用免疫组化 Ａ Ｂ Ｃ法和原位杂交技术检测了２４只早期 Ｓ Ｔ Ｚ糖尿病大鼠肾组织中 Ｅ Ｔ１及 Ｅ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的定位及半定量表达。实验分为４组,每组６只。结果： Ｅ Ｔ１和 Ｅ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的分布一致,主要分布于肾小球内皮细胞、系膜细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞及肾小管上皮细胞之中。髓质中 Ｅ Ｔ１和 Ｅ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达高于皮质, 在糖尿病发生后１～２周, 二者在肾小球内均明显减少 （ Ｐ＜ ００５）, 但在４周时开始增高 （ Ｐ＜ ００５）, 而且在髓质中持续性增高。上述结果表明, Ｅ Ｔ１及 Ｅ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 参与了早期 Ｓ Ｔ Ｚ糖尿病大鼠肾小球高灌注及有关小管间质损伤。     

反义IL-6寡核苷酸对实验性系膜增生性肾炎IL-6、IL-6mRNA表达的影响

[目的]观察反义IL-6寡核苷酸经左肾动脉注入系膜增殖性肾小球肾炎SD大鼠后对肾小球系膜区IL-6 mRNA及蛋白水平的影响。[方法]30只SD大鼠接受葡萄球菌内毒素静脉注射、牛血清白蛋白隔日口服、完全弗氏佐剂及不完全弗氏佐剂皮下注射,并加做肝左叶切除术,制作系膜增生性肾小球肾炎动物模型。经FAM标记的反义寡核苷酸肾小球定位后,将IL-6反义、正义、及错义寡核苷酸由左肾动脉注入肾脏,并用右肾作对照,分别作常规组织病理,免疫组织化学及原位杂交检测。[结果]FAM标记的IL-6反义寡核苷酸经左肾动脉注入后1h,系膜区可检测到少量表达,6 h后肾系膜区表达明显增加。反义寡核苷酸治疗组的SD大鼠IL-6。IL-6 mRNA表达被显著抑制(P<0.01),但IL-6正义及错义寡核苷酸对IL-6、IL-6 mRNA表达无明显影响(P>0.05)。3组蛋白尿及病理改变均无显著差异(P>0.05)。[结论]脂质体介导的反义寡核苷酸(IL-6)能在肾小球表达。IL-6反义寡核苷酸治疗显著抑制系膜增生性肾炎SD大鼠IL-6、IL-6 mRNA表达,但IL-6正义、及错义寡核苷酸无此作用。     

反义细胞周期D1蛋白抑制肾小球系膜细胞增殖研究

目的探讨细胞周期蛋白（Ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ１在肾小球系膜细胞增殖机制中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白在系膜细胞内表达;建立了表达ＣｙｃｌｉｎＤ１反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体基因转移系统;利用ＭＴＴ法、流式细胞术对基因转录的系膜细胞的增殖状况进行观察。结果（１）体外培养的系膜细胞核内存在ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白;（２）外源基因经逆转录病毒载体高效转导系膜细胞,并高效表达反义ＲＮＡ;（３）反义ＣｙｃｌｉｎＤ１转导后的系膜细胞对内皮素１刺激的增殖反应不明显,而正常细胞（１８小时０２５９±００８０,６小时０１００±０００７）和空载体转导细胞（１８小时０２７８±００２０,６小时００９７±０００８）有显著效应（Ｐ＜００１）;（４）反义ＣｙｃｌｉｎＤ１抑制细胞从Ｇ１期进入Ｓ期。结论ＣｙｃｌｉｎＤ１是肾小球系膜细胞周期Ｇ１期进展的关键调控蛋白,反义ＣｙｃｌｉｎＤ１基因转导系膜细胞能明显抑制内皮素１的促增殖作用。     

大鼠系膜增殖型肾小球肾炎模型的改进

为深入探讨胃肠道粘膜免疫与系膜增殖型肾小球肾炎的关系，作者采用葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）分次静脉注射，牛血清白蛋白（ＢＳＡ）隔日灌胃及弗氏佐剂分次皮下注射，建立ＳＤ大鼠系膜增殖型肾小球肾炎模型，观察肾小球的病理变化。结果显示：自实验的第６周末大鼠肾小球出现系膜细胞及系膜基质增生，至第８周末呈现明显的系膜细胞及系膜基质增生。本模型制作时间较短（６～８周），病变稳定，模型的建立进一步证实胃肠粘膜免疫在系膜增殖型肾小球肾炎发病中起着重要的作用。     

大鼠系膜增殖型肾小球肾炎模型的改进

为深入探讨胃肠道粘膜免疫与系膜增殖型肾小球肾炎的关系，作者采用葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）分次静脉注射，牛血清白蛋白（ＢＳＡ）隔日灌胃及弗氏佐剂分次皮下注射，建立ＳＤ大鼠系膜增殖型肾小球肾炎模型，观察肾小球的病理变化。结果显示：自实验的第６周未大鼠肾小球出现系膜细胞及系膜基质增生，至第８周末呈现明显的系膜细胞及系膜基质增生，本模型制作时间较短（６－８周），病变稳定，模型的建立进一步证实胃肠粘膜免疫在     

糖尿病肾病患者血小板活性及血浆内皮素水平测定

为了解血小板活性及血浆内皮素１（ＥＴ１）水平在糖尿病肾病发生与发展中的作用，用放射免疫分析法与酶联免疫吸附分析法分别测定７８例不同程度糖尿病肾病患者血ＥＴ１和血小板α颗粒膜蛋白（ＧＭＰ１４０）、血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）及６酮前列环素Ｆ１α（６ＫｅｔｏＰＧＦ１α）含量。结果，糖尿病患者各组ＧＭＰ１４０与ＴＸＢ２水平分别高于对照组（Ｐ＜００５或Ｐ＜００１），肾功能不全组的ＧＭＰ１４０又高于其他肾病组（Ｐ＜００５）。糖尿病患者ＰＧＦ１α浓度则低于对照组（Ｐ＜００５），但肾病各组间比较无差异（Ｐ＞００５）。糖尿病肾病组各组ＥＴ１水平显著高于对照组（Ｐ＜００１或Ｐ＜０００１），且随肾病病变加重依次升高，各组间比较均有显著性差异（Ｐ＜００５）。结果提示：糖尿病肾病可能与血小板活性增高和血内皮素水平的升高导致肾脏血液动力学方面的改变，减少肾血流量，加重细胞缺血缺氧及直接刺激肾小球系膜细胞增生、肥大有关     

核因子-κB调控白细胞介素1β刺激人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子

目的研究核因子κＢ（ＮＦκＢ）对白细胞介素１β（ＩＬ１β）引起的体外培养的人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子（ＩＣＡＭ１）的基因调控机理。方法采用凝胶迁移率法观测ＮＦκＢ的活化，以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法检测细胞间粘附分子的基因表达，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测ＩＣＡＭ１蛋白水平的表达。结果ｒｈＩＬ１β１０ｎｇ／ｍｌ刺激肾小球系膜细胞１、２、４小时，均引起ＮＦκＢ活化，且１小时为最强。４小时，ＩＣＡＭ１ｍＲＮＡ表达水平上调０３５（刺激前为０１４）。结论细胞因子ＩＬ１β刺激人肾小球系膜细胞表达细胞间粘附分子是通过ＮＦκＢ调控，ＮＦκＢ可能参与调节肾小球疾病的免疫炎症的过程。     

肾脏内皮素的定位研究与血浆水平的测定

目的：探讨内皮素（ＥＴ）与肾小球肾炎的关系，方法：建立改良慢性血清病大鼠系膜增生性肾炎动物模型，采用￣１２５Ｉ－ＥＴ放射免疫分析法测定肾炎组与付照组右心血和肾静脉血中ＦＴ－１的水平。应用免疫组化及免疫电镜方法进行ＦＴ－１的定位研究，结果：肾炎组肾静脉血及右心血ＦＴ－１血浆水平均高于对照组（Ｐ＜０．０５），而且肾静脉血ＦＴ－１含量明显高于右心血（Ｐ＜０．００１）。ＦＴ－１广泛存在于肾脏的各种固有成分中。结论：肾炎时肾阻自身合成和分泌的ＦＴ是血浆ＦＴ的主要来源，炎性增生的肾小球固有细胞和肾小管上皮细胞分泌的ＦＴ是肾脏局部ＦＴ的主要来源。     

系膜增生性肾小球肾炎的中西医研究进展

系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）是指以肾小球系膜细胞（GMC）增生和细胞外基质（ECM）增生为主要病理改变的一类肾小球疾病的总称[１]。１９６１年Jnennings首次提出系膜增生的问题[２]。１９７０年，Churg等在小儿肾病综合征中报道了系膜增生性肾小球病变[３]。四十年来，随着研究的深入，人们逐渐认识到MsPGN病因多样，临床涉及范围广，是肾小球疾患中常见的病理类型之一[４]。在儿科，系膜增生是肾小球疾病最多见的病理改变[５]。近１０年来，中医对MsPGN也有了系统的认识，中医及中西医结合治疗MsPGN显示出较好的疗效。本文就…     

血管紧张素Ⅱ2型受体基因缺失抑制诱导的成纤维细胞凋亡

目的探讨血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）２型受体（ＡＴ２）基因表达与成纤维细胞凋亡的关系。方法分别从正常（ＡＴ２＋／＋）和ＡＴ２受体基因缺失（ＡＴ２／）胎鼠培养皮肤成纤维细胞,经ＡｎｇⅡ诱导后,采用ＲＴＰＣＲ检测成纤维细胞ＡｎｇⅡ的ＡＴ１和ＡＴ２受体ｍＲＮＡ表达,分别用基因组ＤＮＡ电泳、ＴＵＮＥＬ染色和流式细胞仪等定性和定量方法检测细胞的凋亡改变。结果经１０８、１０７、１０６和１０５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ刺激４８小时,成纤维细胞的ＡＴ１和ＡＴ２受体基因表达均有显著增强,并与浓度呈正相关。经１０６和１０５ｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡｎｇⅡ诱导７２小时,ＡＴ２＋／＋成纤维细胞出现了明显的标志着细胞凋亡的基因组ＤＮＡ片段化,凋亡细胞分别是（１２３±２７）％和（２１７±６７）％,而ＡＴ２／成纤维细胞则未出现明显的细胞凋亡改变。结论ＡＴ２受体基因缺失后,抑制了ＡｎｇⅡ介导的成纤维细胞凋亡,为进一步揭示ＡｎｇⅡ的生理和病理作用提供了实验依据     

苯那普利对抗Thy1.1大鼠系膜基质积聚的影响

目的 观察血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利对系膜增殖性肾炎（MsPGN）大鼠系膜基质的影响。方法 用抗胸腺细胞血清（ATS）诱导SD大鼠产生MsPGN后，用苯那普利治疗24d，处死大鼠并用ELISA方法测定大鼠肾小球系膜中胶原Ⅳ（ColⅣ）、胶原Ⅲ（ColⅢ）、层粘连蛋白（LN）、纤维连接蛋白（FN）的含量。结果 治疗组大鼠系膜中ColⅣ、ColⅢ、LN、FN的含量明显低于对照组大鼠系膜中各相应成分的含量，各对应成分之间两两比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 苯那普利对MsPGN大鼠系膜基质的积聚有明显的抑制作用。     

大黄素对高糖环境下系膜细胞收缩功能的影响

目的 探讨高糖环境下大黄素能否通过抑制系膜区p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的过度活化而改善系膜细胞的收缩功能。方法 培养系膜细胞,调整培养液为以下5组：正常糖组（糖浓度5.6mmol/L,NG组）、高糖组（糖浓度30mmol/L,HG组）、低质量浓度大黄素组（50mg/L大黄素+高糖,LE组）、高质量浓度大黄素组（100mg/L大黄素+高糖,HE组）和过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）抑制剂GW9662组（10μmol/L GW9662+高糖+高质量浓度大黄素,GW组）。系膜细胞收缩力以细胞收缩前后表面积的变化表示,采用Western blot和Real time PCR法测定p38MAPK的活性及PPARγ的表达水平。 结果 高糖组p38 MAPK的活性增加,系膜收缩功能明显下降（P<0.05）;大黄素组能明显抑制p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能,且具有剂量依赖性（50mg/L大黄素组p38活性降低了40%,100mg/L组降低了73%,P均<0.05）;大黄素组PPARγmRNA水平及其蛋白水平均明显升高（P均<0.05）;PPARγ抑制剂GW9662能有效地阻断大黄素所产生的保护效应（P<0.05）。结论 高糖环境下,大黄素通过激活PPARγ抑制系膜区p38MAPK的过度活化进而改善系膜细胞的收缩功能。     

内皮素反义寡核苷酸在抑制大鼠肾小球系膜细胞和系膜基质增生中的 …

OBJECTIVE: To investigate the effect of endothelin-1 (ET-1) on mesangial cells(MC) proliferation and mesangial matrix expansion in vivo. METHODS: Antisense oligodeoxynucleotide(As-ODN) and its control sequences, sense oligodeoxynucleotide(Se-ODN) and mismatch oligodeoxynucleotide(Mis-ODN), targeting pre-proendothelin-1 mRNA (ppET-1) were delivered into the kidney of rats with mesangioproliferative glomerulonephritis (MsPGN) model respectively at day 2 by lipofectin-mediated gene transfer method. The efficiency of transfer of ODNs into MC was examined with biotinylated As-ODN staining. Four days after the rats were sacrificed, the influence of ODNs on ET-1 production by glomeruli was tested with radioimmunoassay(RIA). The action of ODNs on MC proliferation and mesangial matrix expansion was evaluated with quantitative pathologic analysis. RESULTS: ODNs were transferred into MC in vivo. The glomerular ET-1 production was decreased by As-ODN [(32 +/- 19) ng/g, P < 0.05] with reduction of mesangial cell proliferation [(0.82 +/- 0.04)/100 micron 2, P < 0.05] and mesangial matrix expansion[(12.8 +/- 1.6)%, P < 0.05], where Se-ODN and Mis-ODN did not show any effect on all of these. CONCLUSIONS: Specific inhibition of ET-1 gene expression leads to reduction of proliferation of mesangial cell and expansion of mesangial matrix in rats with MsPGN model. ET-1 is one of the important inflammatory mediators which can stimulate MC proliferation and mesangial matrix expansion in vivo.     

The role for endothelin in mesangial proliferative glomerulonephritis

Summary To understand the effect of endothelin (ET) on the mesangium and matrix proliferation on the basis of hyperlipidemia, the model of mesangial proliferative glomerulonephritis (MSPGN) was established by intravenously giving calf serum albumin (250 mg/L) to the rabbits fed on feed containing 1 % cholesterol for 4– 8 weeks. Our results showed that in the 4th week of the experiment, the ET level in experiment group was significantly higher than that of normal controls (P <0.01) and the pathological examination revealed development of MSPGN. In the 8th week of the experiment, the ET level was further elevated and pathological study demonstrated local glomerular sclerosis and infiltration of lymphocytes of interstitia. We are led to conclude that ET. as a newly identified hormon, is involved in the pathogenesis and development of MSPGN and acts as an important regulator in the proliferation of mesangium and accumulation of matrix of basal membrane.     

Immunohistological Study on the Mechanism of Mesangial Proliferation

ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＭｅｓａｎｇｉａｌＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＺＨＡＮＧＭｉｎｇ（张明）；ＧＵＯＭｕｙｉ（郭慕依）；ＺＨＡＮＧＸｉｕｒｏｎｇ（张秀荣）；ＪＩＮＨｕｉｍｉｎｇ（金惠铭）（Ｄｅｐ...     

缓激肽对PDGF诱导的肾小球系膜细胞增殖的影响

[目的]探讨缓激肽（bradykinin,BK）对血小板源生长因子（PDGF）诱导的系膜细胞增殖的影响及与ERK信号途径相关性。[方法]BK预孵系膜细胞,采用PDGF-BB刺激系膜细胞,应用MTT法测细胞增殖,ELISA法测Ⅳ型胶原,应用Western法检测ERK蛋白表达,并应用BK受体特异性阻断剂HOE-140进一步研究BK对ERK通路的作用。[结果]（1）BK抑制PDGF所致的系膜细胞增殖,与单用PDGF-BB组比较差异有非常显著性意义（P〈0.05）。（2）BK抑制PDGF-BB所致系膜细胞Ⅳ型胶原分泌,与单用PDGF-BB组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。（3）BK抑制PDGF-BB所致的系膜细胞ERK1/2磷酸化表达,与单用PDGF-BB组比较差异有显著性意义（P〈0.01）,HOE-140能阻断BK对于PDGF-BB/ERK1/2途径磷酸化的抑制作用。[结论]BK抑制PDGF诱导的系膜细胞增殖及细胞外基质分泌,该作用可能是通过抑制PDGF诱导的ERK1/2途径激活实现。     

川芎嗪对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：探讨川芎嗪对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及其细胞外基质含量的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组、TMP组,分别培养12h、24h、48h,CASY细胞计数仪计数细胞存活率;以CCK-8法检测细胞增殖;以ELISA法检测细胞上清液细胞外基质ColⅣ及FN的含量。结果：各TMP浓度组之间存活率无统计学差异（P〉0.05）;与对照组比较,高糖下培养24h、48hMCs增殖显著增快（P〈0.01）,分泌的ColⅣ及FN含量增多（P〈0.05）;与高糖组比较,TMP各组MCs增殖显著减慢（P〈0.01）,分泌ColⅣ及FN减少（P〈0.01或P〈0.05）。结论：川芎嗪可以有效抑制高糖的促增殖作用并能减少系膜细胞外基质的增加。     

人肾小球系膜细胞原代培养及鉴定方法的研究

目的：建立一种重复性好、传代次数多的人肾小球系膜细胞培养方法。方法：取肾脏肿瘤手术切除后远离患病部位的正常肾脏组织、水囊引产的胎儿肾,三层筛网滤过分离,取最下层筛网上组织,用胶原酶消化,培养正常人肾小球系膜细胞。同时采用形态学观察和免疫荧光技术,对鼠抗人结蛋白,鼠抗人角蛋白进行鉴定,采用MTT、 流式细胞仪技术对不同来源肾脏的系膜细胞生长状况进行比较。结果：形态学、免疫荧光法鉴定表明培养细胞为肾小球系膜细胞,胎肾原代培养后8～10d即可传代,而成年肾脏原代培养后需15～16d方可传代。成年肾脏培养细胞至第4代细胞生长缓慢,贴壁能力减弱,出现死亡。而胎肾培养细胞则可继续培养至第7～10代。结论:三层滤网法分离人肾小球系膜细胞, 方法简单、高效,培养的原代肾小球系膜细胞符合肾小球系膜细胞的生物学特性,且进一步证明胚胎组织比成年个体肾脏原代细胞培养容易成功。     

原代大鼠肾小球系膜细胞最佳电转染条件的探索和验证

目的探索并验证原代大鼠肾小球系膜细胞最佳电转染条件。方法设立不同的电压与电容组合、电击前孵育温度、质粒DNA浓度等电转染条件,将绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1导入原代大鼠肾小球系膜细胞。24h后比较各组细胞存活率和绿色荧光蛋白表达情况,确立最佳电转染条件。再以此条件电转染质粒pcDNA3.1和pcDNA3.1-FHL2,48h后收取两组细胞RNA和蛋白。应用RT-PCR和Western印迹检测目的基因FHL2的核酸和蛋白表达,验证电转染效果。结果在电击前室温孵育,40μg质粒,340V电压、550μF电容的最佳电转染条件下,原代大鼠肾小球系膜细胞的电转染效率可达40%以上,细胞存活率在50%左右。转染FHL2质粒组较对照组检测FHL2的核酸和蛋白表达水平明显升高（P〈0.05）。结论适当的电转染条件可以有效转染原代大鼠肾小球系膜细胞。     

醛固酮对系膜细胞合成纤溶酶原激活剂抑制物-1的影响

目的 探讨醛固酮及阻断其受体后对系膜细胞生成纤溶酶原激活剂抑制物1（PAI-1）的影响。方法 醛固酮单独刺激大鼠系膜细胞24h以及采用螺内酯阻断后,用RT-PCR观察系膜细胞PA1-1mRNA的变化;用Western印迹方法检测细胞上清液中的PA1-1;采用ELISA方法测定细胞上清液中转化生长因子p1（TGF-β1）的含量;采用激光共聚焦检测系膜细胞内的活性氧（ROS）水平。观察不同浓度及不同作用时间的醛固酮刺激系膜细胞对PA1-1mRNA的影响。结果 醛固酮使系膜细胞PA1-1mRNA及蛋白表达明显升高,同时升高了TGF-β1的表达和细胞内的ROS水平。醛固酮使PA1-1mRNA表达呈剂量依赖性增加。100nmol／L醛固酮刺激系膜细胞4h后PA1-1mRNA表达才明显增加。加用螺内酯后使升高的PA1-1、TGF-β1表达以及细胞内ROS恢复到正常水平。结论醛固酮能独立促进大鼠系膜细胞分泌PA1-1的增加,同时醛固酮使TGF-β1表达以及细胞内ROS水平升高,而这些都是通过盐皮质激素受体介导的。