磷酸化JNK在庆大霉素致豚鼠前庭毛细胞凋亡中的表达

目的:观察庆大霉素致豚鼠前庭毛细胞损伤特点,并探讨磷酸化cjun氨基末端激酶(JNK)在前庭毛细胞凋亡过程中的作用机制。方法:健康豚鼠随机分为实验组和对照组各15只,分别行100mg/(kg·d)庆大霉素和生理盐水连续肌肉注射7d,第8天全身麻醉下处死豚鼠,取壶腹嵴为观察对象,左耳铺片,硝酸银染色检测毛细胞损伤;右耳冷冻连续切片,DNA末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测毛细胞凋亡,免疫组织化学方法检测细胞中JNK磷酸化。结果:实验组中毛细胞受损,壶腹嵴顶端见凋亡细胞,并在细胞内观察到磷酸化JNK免疫阳性反应;对照组中未见毛细胞损伤及凋亡细胞,未见磷酸化JNK。结论:庆大霉素可以通过诱导凋亡造成内耳前庭毛细胞损伤,同时磷酸化的JNK标志着JNK途径的活化,提示JNK途径在细胞凋亡过程中发挥了一定作用。     

大鼠螺旋神经节干细胞体外优化培养方法的研究

目的 探索贴壁法进行螺旋神经节（Spiral Ganglion,SG）干细胞培养,同时与传统悬浮培养法对比培养的SG干细胞形态、增殖效率及分化表型。方法 取新生1天SD大鼠耳蜗的螺旋神经节位置,以悬浮和单层贴壁的方式进行培养,观察SG干细胞的形态学特点。通过活/死细胞染色和Annexin-V/PI双染法比较其生长状态。通过Nestin、Sox2、Ki67等免疫荧光染色及生长曲线测定等方法对其增殖能力进行比较分析。体外胎牛血清诱导SG干细胞分化,通过Tuj1免疫荧光染色鉴定分化表型并比较分化效率。结果 两种培养方式均可获得状态良好的高纯度SG干细胞,免疫荧光染色和生长曲线测定结果提示贴壁培养的干细胞的增殖活性较悬浮培养的干细胞更强。诱导分化后,两种培养方式获得的SG干细胞均可分化为Tuj1染色阳性的双极神经元样细胞。结论 本研究结果表明单层贴壁可培养出状态良好的SG干细胞,并且其增殖能力较悬浮培养的干细胞更强。贴壁培养的干细胞可被可成功诱导分化为神经元。提示单层贴壁方式可作为一种稳定的SG干细胞培养方法,从而为SG干细胞的相关研究提供重要技术支持。     

顺铂作用下沙鼠耳蜗螺旋神经节神经元和Corti器细胞的凋亡

目的　探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节 (spiralganglion ,SG)神经元和Corti器细胞的凋亡。方法　对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,每日 4mg kg体重 ,分别于健康对照组及给药 4、5、6、7d各处死沙鼠 12只 ,取左侧耳蜗 ,每组动物取 10只耳蜗做平行蜗轴的石蜡切片 ,另 2只耳蜗做底回蜗轴及基底膜超薄切片。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术 (terminaldeoxynucleotidyltransferase mediateddUTPnickendlabelingmethod ,TUNEL)及透射电镜检测连续用药不同时间后底回SG及Corti器的细胞凋亡情况。结果　连续应用顺铂 5～ 7d ,在透射电镜下可以观察到底回SG神经元及外毛细胞中出现凋亡特征性病理改变 ,TUNEL标记的石蜡切片中可见给药 5d后SG和Corti器出现的阳性细胞明显高于健康对照组 ,给药 6～ 7d阳性细胞进一步增加。结论　细胞凋亡是顺铂损伤沙鼠SG神经元和Corti器细胞的重要方式     

多药耐药基因ABCB1和ABCG2在下咽癌FaDu细胞多药耐药中的研究

目的 研究多药耐药基因ABCB1和ABCG2在下咽癌FaDu细胞株及其耐紫杉醇细胞株FaDu/T中的多药耐药特征及其机制,为进一步研究下咽癌细胞的多药耐药性及逆转提供理论支持.方法 以人下咽癌细胞株FaDu为亲本细胞,采用浓度梯度递增法成功建立下咽癌细胞株FaDu的耐紫杉醇细胞株FaDu/T.四甲基偶氮唑蓝法分别检测FaDu和FaDu/T对顺铂、氟尿嘧啶、多柔比星和长春新碱的多药耐药性;多药耐药基因及蛋白表达变化情况分别通过RT-PCR,Western blot和激光共聚焦检测;c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号转导通路相关蛋白的表达变化通过Western blot检测.结果 耐药细胞株FaDu/T比FaDu细胞有更强的多药耐药性.FaDu细胞相比,FaDu/T细胞株中多药耐药蛋白ABCB1的表达增加(t=22.42,P＜0.05),但ABCG2表达下降(t=10.06,P＜0.05).紫杉醇初始作用于FaDu细胞后JNK信号转导通路被激活,但是在FaDu/T细胞中JNK信号转导通路呈失活状态,丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的激活剂茴香霉素(Anisomycin)可以使FaDu/T细胞的JNK信号通路重新激活.耐药细胞株FaDu/T中加入茴香霉素时ABCB1表达下调(F=33.72,P＜0.05),ABCG2的表达升高(F =220.16,P＜0.05),但是在预先加入JNK特异性抑制剂SP600125的FaDu/T细胞株中加入茴香霉素时,ABCB1和ABCG2的表达无明显变化(P＞0.05),提示JNK信号通路在下咽癌的多药耐药过程中具有重要的调控作用.结论 下咽癌FaDu细胞的多药耐药性以多药耐药蛋白ABCB1的高表达和ABCG2的低表达为主要特征,且两种耐药蛋白的表达变化与JNK信号转导通路密切相关.     

顺铂作用下沙鼠耳蜗螺旋神经节神经元和Corti器细胞的凋亡

目的 探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节(spiral ganglion，SG)神经元和Corti器细胞的凋亡。方法 对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射，每日4mg／kg体重，分别于健康对照组及给药4、5、6、7d各处死沙鼠12只，取左侧耳蜗，每组动物取10只耳蜗做平行蜗轴的石蜡切片，另2只耳蜗做底回蜗轴及基底膜超薄切片。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling method，TUNEL)及透射电镜检测连续用药不同时间后底回SG及Corti器的细胞凋亡情况。结果 连续应用顺铂5—7d，在透射电镜下可以观察到底回SG神经元及外毛细胞中出现凋亡特征性病理改变，TUNEL标记的石蜡切片中可见给药5d后SG和Cord器出现的阳性细胞明显高于健康对照组，给药6～7d阳性细胞进一步增加。结论 细胞凋亡是顺铂损伤沙鼠SG神经元和Cord器细胞的重要方式。     

黄芩苷抑制庆大霉素致小鼠听神经细胞损伤的实验研究

目的探讨黄芩苷(baicalin, BA)对庆大霉素(gentamicin, GM)致小鼠耳蜗螺旋神经节(spiral ganglion, SG)细胞毒性的拮抗作用.方法用MTT法检测庆大霉素对SG细胞的毒性作用,用紫外分光光度法测定各实验组SG细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和丙二醛(MDA)含量.结果黄芩苷能显著抑制GM所致的SG细胞中T-SOD和GSH-PX活性降低及MDA含量升高.结论黄芩苷通过清除耳蜗螺旋神经节细胞内氧自由基和抑制脂质过氧化反应,拮抗庆大霉素耳毒性作用.     

鼻成形术中类固醇的应用

鼻成形术后易发生肿胀和瘀斑,作者用类固醇或安慰剂行双盲随机研究。将30例病人随机分为类固醇组(SG)16例,安慰剂组(PG)14例。术前5～20分钟由护士给药,术者和病人双盲,SG用地塞米松10mg静脉给药,PG用生理盐水。术后24h对肿胀和瘀斑用4级评分判定,在眶周区内1/3为+;<2/3为++;     

大鼠出生后发育中螺旋神经节神经元凋亡的观察

目的：研究大鼠出生后发育时螺旋神经节（spiral ganglion,SG）神经元凋亡和分化的关系。方法：应用透射电镜观察1、3、5、7、10、14和30天龄大鼠螺旋神经节神经元超微结构的变化及细胞凋亡现象。结果：大鼠出生后5和7天，在透射电镜下观察到SG神经元凋亡，其典型的超微结构改变为染色质凝聚和着边形成的新月样结构、凋亡小体和细胞皱缩；随后的发育阶段细胞凋亡现象消失；最早可识别的富含神经丝的Ⅱ型神经元（neuron2,N2）出现在出生后7天，新出现的N2有明显的细胞皱缩现象；在随后发育的各阶段，SG中I型神经元（neuron1,N1）和N2的结构特征更明显，逐渐发育成熟。结论：神经元凋亡是大鼠螺旋神经节出现后发育过程中的一个重要事件，发生在N2分化过程中，可能与SG中N2发育有关。     

喉癌和咽癌的对侧颈淋巴结转移的风险

该文为了确定喉癌和咽癌病人发生对侧颈淋巴结转移的风险性，回顾1962～1981年间治疗的846例声门型、跨声门型及梨状窝癌的病例，病变归组分别为：跨声门癌伴声带固定（＊＊一F），跨声门癌伴声带可动（＊＊一M），中央性声门上痛（SG－C），边线性声门上痛（SG－M），侵及声门上区、会厌溪及舌根的舌会厌癌（SG－GE），以及梨状窝癌（PS）．结果显示：存有或以后发生的对测颈淋巴结转移者在SG－GE组中占26qo，SG－M组占！410，PS组占13qo，SG－C组占7qo，TG组中占《畅。对侧须转移比同侧颈转移在临床上更有意义，引起对侧颈转…     

JNK抑制剂CEP-1347对噪声损伤耳蜗的保护作用及意义

目的 探讨JNK抑制剂CEP-1347对噪声损伤耳蜗的保护作用及意义。方法 27只wistar大鼠随机分成3大组,A组：噪声组,B组：噪声＋CEP 1347组,C组：噪声＋盐水组,分别给予噪声暴露,B组在噪声暴露前给予皮下注射CEP-1347;C组同时间皮下注射等量生理盐水。在噪声暴露后的1、4及14d分别测试各组的ABR阈值,同时检测外毛细胞的凋亡情况。结果 ABR阈值及外毛细胞凋亡数显示B组在1d时与A组比较差异无统计学意义（P>0.05）,4d时听力较A组差异有统计学意义（P<0.05）,用药后第14d听力与A组比较差异有统计学意义（P<0.01）;C组在各时间点与A组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 应用JNK抑制剂CEP-1347进行干涉,可以减轻噪声造成的听力损失,JNK抑制剂的开发可能会成为NIHL防治的一个新的靶点和方向。     

JNK信号通道在强噪声诱导豚鼠耳蜗细胞凋亡的作用

目的：探讨强噪声对豚鼠耳蜗细胞死亡的机制及磷酸化c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通道在强噪声诱导耳蜗细胞凋亡的作用。方法：将实验组豚鼠暴露在4kHz窄带噪声120dBSPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1d、4d、14d组及对照组（每组各8只）在处死前测ABR。取每组4只豚鼠耳蜗作石蜡切片,另外4只豚鼠提取耳蜗总蛋白。脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术（TUNEL）检测耳蜗凋亡细胞,免疫组织化学及WesternBlot方法检测JNK信号途径蛋白质P-JNK、P-c-Jun的表达。结果：实验组耳蜗Corti器毛细胞、血管纹和螺旋神经节细胞存在TUNEL阳性细胞,以1d组最多,逐渐减少,14d组最少,而对照组未见阳性细胞。免疫组织化学观察到实验组P-JNK、P-c-Jun有免疫反应阳性,定位于细胞核,对照组未见阳性细胞。Western Blot检测P-JNK、P-c-Jun含量在噪声刺激后迅速增高并快速活化,1d、4d达到高峰,随后逐渐下降,但在14d仍然维持较高水平。结论：强噪声可以通过诱导凋亡造成耳蜗细胞损伤,同时P-JNK标志着JNK信号途径的激活,提示JNK信号通道可能也是介导强噪声诱导豚鼠耳蜗细胞凋亡信号通道之一。     

黄芩苷对庆大霉素致小鼠耳毒性作用的影响

目的探讨黄芩苷(baicalin,BA)拮抗庆大霉素(gentamycin,GM)致小鼠耳蜗螺旋神经节(spiraIganglion,SG)细胞毒性作用的机理.方法用紫外分光光度法分别测定各实验组SG细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性以及丙二醛(MDA)含量.结果黄芩苷可显著抑制GM所导致的SG细胞中T-SOD和GSH-PX活性降低及MDA含量升高.结论黄芩苷可清除耳蜗螺旋神经节细胞内氧自由基,抑制脂质过氧化反应.     

颈清扫后或放疗后颈部复发癌的挽救性手术

头颈部肿瘤病人术后或放疗后复发是一个棘手的难趔。报告113例颈部多发癌的手术挽救结果。所有病例为原发头颈部爆，有过颈部手术或放疗史。根据颈部触诊以及CT和动脉造影决定能否手术。本组中单纯放疗（RT）后复发者32例，多数病例放疗量大干50Gy。颈清扫术后（SG）复发81例，其中有44例SG＋RT。术式有根治性颈清扫20例，改良颈清扫48例，颌下清扫10例，清扫术或不详3例。病变同侧颈部复发59例（SG土RT28例，RT31例），病变对测颈部复发54例（SG53例，RTI例）。复发肿块大于3cmsl例，小于3cm57例，5例记录不确切。肿块活动58例，…     

顺铂作用下沙鼠耳蜗细胞Bcl-2及Bax的表达

目的 :通过检测应用顺铂 (CDDP)前后凋亡相关蛋白 Bcl- 2蛋白家族中 Bcl- 2和 Bax在沙鼠耳蜗 Corti氏器和螺旋神经节 (SG)神经元的表达情况 ,探讨 Bcl- 2蛋白家族是否参与了 CDDP诱导耳蜗细胞凋亡。材料和方法 :对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,4 mg/ kg,分别于给药 4、5、6、7天组各处死沙鼠 10只 ,取左侧耳蜗 ,做平行蜗轴的石蜡切片 ,用免疫组织化学方法检测连续用药不同时间后底转 SG及 Corti氏器的 Bcl- 2及 Bax的表达变化情况。结果 :在用药 4～ 7天中 ,耳蜗底转 SG及 Corti氏器的 Bcl- 2表达不断下降 ,分别在用药第 6天和第 7天时低于正常 ;Bax在用药第 5～ 7天时显著高于正常。结论 :CDDP作用下 ,Bcl- 2和 Bax表达发生变化 ,Bcl- 2蛋白家族参与了 CDDP诱导的耳蜗细胞凋亡。     

胸骨后甲状腺肿手术入路选择及诊疗回顾性分析

目的　探讨胸骨后甲状腺肿（substernal goiter,SG）手术入路选择及诊疗经验。方法　回顾性分析青岛大学附属烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉头颈外科2010年1月~2020年1月收治的36例SG患者的临床资料。根据危险因素分层,其中高风险6例,中风险13例,低风险17例。选择颈部入路切除病变30例,联合胸腔镜手术切除6例,观察手术入路与治疗效果的关系。结果　36例患者都获得完整切除,术中均未转胸骨裂开,其中1例术中出现颈段食管破裂,经胸腔镜缝合修补;3例术后出现短暂的甲状旁腺功能低下,1例术后 出现Honer综合征。结论　大部分SG可单纯经颈部切口切除,对于有高危因素者,颈部切口联合胸腔镜下侧胸部小切口,是较为安全、微创的手术方式,值得临床借鉴。     

顺铂作用下沙鼠耳蜗细胞Bcl—2及Bax的表达

目的：通过检测应用顺铂（CDDP）前后凋亡相关蛋白Bcl-2蛋白家族中Bcl-2和Bax在沙鼠耳蜗Corti氏器和螺旋神经节（SG）神经元的表达情况，探讨Bcl-2蛋白家族是否参与了CDDP诱导耳蜗细胞凋亡。材料和方法：对沙鼠进行顺后连续腹腔注射，4mg/kg，分别于给药4，5，6，7天组各处死沙鼠10只，取左侧耳蜗，做平行蜗轴的石蜡切片，用免疫组织化学方法检测连续用药不同时间后底转SG及Corti氏器的Bcl-2及Bax的表达变化情况。结果：在用药4－7天中，耳蜗底转SG及Corti氏器的Bcl-2表达不断下降，分别在用药第6天和第7天时低于正常；Bax在用药第5－7天显著高于正常。结论：CDDP作用下，Bcl-2和Bax表达发生变化，Bcl-2蛋白家族参与了CDDP诱导的耳蜗细胞凋亡。     

炎症激活的破骨细胞在胆脂瘤骨破坏中的作用

关于胆脂瘤骨质破坏的原因众说纷纭,近年来的研究认为破骨细胞在其骨质破坏中发挥重要的作用。破骨细胞的活化有两个途径：主要途径是RANKL/RANK/NF-κB或JNK通路；次要途径是IL-1、TNF-α等炎症因子激活的非RANKL/RANK依赖通路,两者是相互联系的。炎症对破骨细胞的两个活化途径都起到至关重要的作用。     

小儿声门上喉炎变化形式:1980～1992年多单位调查

声门上喉炎（SG）是一种发病急且危及生命的小儿呼吸道疾病。由流感嗜血杆菌B型（HIB）致病。本文调查统计5个单位儿科SG252例，分析不同时期发病率及本病特征的变化，HIB疫苗接种（HIBV）对其影响。结果：①SG年发病总例数以！985年40例，最多，而1992年仅3例；②年平均病例数有明显下降趋势，1980～1983年71例．1984～1986年32例，1987～1989年22．7例，1990～1992年5．7例；③发病季节，一年中以3、11月高峰，④发病年龄1980—1986年（I组）平均为36月，1990年～且992年（I组）55个月后1组男女之比为63：37，1组70：30；③症状均…     

炎症激活的破骨细胞在胆脂瘤骨破坏中的作用

关于胆脂瘤骨质破坏的原因众说纷纭,近年来的研究认为破骨细胞在其骨质破坏中发挥重要的作用。破骨细胞的活化有两个途径：主要途径是RANKL／RANK／NF-κ B或JNK通路;次要途径是IL-1、TNF-α等炎症因子激活的非RANKL/RANK依赖通路,两者是相互联系的。炎症对破骨细胞的两个活化途径都起到至关重要的作用。     

Fas和DcR3在垂体腺瘤的表达及FasL与RGD-FasL诱导的细胞凋亡机制

目的 研究RGD-FasL诱导垂体腺瘤细胞株GH 3、MMQ、AtT20所产生的细胞毒性效应,并探讨其机制.方法 应用RT-PCR法和流式细胞仪检测肿瘤细胞上Fas、DcR3的表达.应用MTT测定法检测FasL、RGD-FasL对肿瘤细胞所产生的细胞毒性效应,并经琼脂糖凝胶电泳证实是否为该配体所诱导的凋亡.通过流式细胞仪PI染色法评价细胞周期的变化和凋亡分析.通过Western蛋白印迹法检测Caspase8、Caspase9、Caspase3、Bcl-2、RANKL和JNK2的表达.结果 垂体腺瘤细胞株GH 3、MMQ、AtT20均表达Fas和DeR3.FasL和RGD-FasL诱导肿瘤细胞所产生的细胞毒性效应均呈现剂量依赖关系.细胞周期分析表明RGD-FasL能诱导细胞周期的停滞.经RGD-FasL或FasL干预的肿瘤细胞的凋亡指数差异不明显.经RGD-FasL干预后,Caspase8、Caspase9、Caspase3、RANKL和JNK2的表达均增加,而Bcl-2的表达减少.结论 RGD-FasL能通过Caspase途径诱导垂体腺瘤细胞的凋亡.RGD-FasL的研制很可能为垂体腺瘤的生物靶向治疗提供一种新的途径.