中草药及其提取物治疗骨肉瘤的基础研究进展

骨肉瘤是高度恶性的间叶组织肿瘤,其特点是恶性肉瘤基质细胞产生骨样基质.骨肉瘤好发于青少年和年轻成人,约占儿童肿瘤的5%骨肉瘤在局部呈侵袭性生长并且易发生转移.历史上,对骨肉瘤的评估和治疗主要是X线平片、胸部X线片和截肢.用这种方法治疗只有10-20%的患者能够长期存活.近20年来,对骨肉瘤的诊断和治疗取得了巨大的进步.     

中草药治疗骨肉瘤的基础研究进展

骨肉瘤是高度恶性的间叶组织肿瘤,其特点是恶性肉瘤基质细胞产生骨样基质.骨肉瘤好发于青少年和年轻成人,约占儿童肿瘤的5%,骨肉瘤在局部呈侵袭性生长并且易发生转移.历史上,对骨肉瘤的评估和治疗主要是患部及胸部X线平片和截肢[1],用这种方法治疗只有10%～20%的患者能够长期存活[2].近20年来,对骨肉瘤的诊断和治疗取得了巨大的进步.利用先进的影像技术(CT和MRI)能够清晰地显示肿瘤的局部解剖情况、生长方式和发现隐匿的肺转移灶.同时,经过改良的分级系统有助于判断患者的预后.多药联合化疗极大地提高了患者的长期生存率和施行保肢术的可能性.其他方面的进步,如假体的设计和对异体骨使用经验的积累等,使肢体骨肉瘤患者的保肢手术率提高至90%～95%,但骨肉瘤总体5年生存率只有60%～70%[3].中医积累了不少诊治骨肉瘤的经验,为进一步提高骨肉瘤的生存率提供了可能.     

华蟾素抗骨肉瘤作用中相关信号通路的研究进展

骨肉瘤是常发于青少年的恶性肿瘤,具有易转移、预后差的特点。随着诊疗水平的进步,骨肉瘤患者的5年生存率虽有明显提高,但仍有很大的提升空间。传统中药的抗肿瘤作用已被广泛关注,华蟾素是近些年来较为广泛使用的中药制剂,大量研究已经证实华蟾素能对骨肉瘤产生抑制作用,其中的分子机制复杂多样,尚未完全阐明。现就目前已研究的华蟾素抗骨肉瘤涉及的分子机制中相关信号通路进行综述,归纳起来,华蟾素可以通过抑制GSK-3β/NF-κB信号通路,激活ROS/JNK/p38信号通路,下调骨肉瘤细胞中的Notch信号从而发挥抗骨肉瘤的作用,为进一步探索华蟾素抗骨肉瘤的分子机制提供参考。     

十三味中草药体外抗淋球菌的作用研究

目的探讨13味中草药对淋球菌的抑制作用。方法采用平板打孔法和平板稀释法,分别测定了13种中草药体外抗淋球菌的效果。结果显示黄连的最小抑菌浓度(MIC)值为6.25mg/ml,石榴皮、虎杖的MIC值为12.5mg/ml,黄柏、丁香、五倍子、诃子的MIC值为25mg/ml。结论对淋球菌有明显抑菌作用的单味药有黄连、石榴皮、虎杖,其次有黄柏、丁香、五倍子、诃子,并以黄连作用为最强。     

利用2.2.15细胞株筛选抗乙肝病毒中草药的体外实验研究进展

抗病毒治疗是慢性乙型肝炎治疗的关键所在，但HBV宿主范围狭窄，缺少体外病毒繁殖系统。HBV转染细胞系2．2．15细胞株的建立为抗HBV药物的筛选提供了一个细胞模型，本文就2．2．15细胞株近十年来抗HBV中草药筛选情况作一综述。     

苦参碱对骨肉瘤细胞生长抑制作用的体外研究

目的:观察苦参碱体外对人骨肉瘤MG-63细胞的生长抑制作用。方法:用CCK-8法检测不同浓度苦参碱对人骨肉瘤MG-63细胞的生长抑制率;倒置显微镜下观察0、100、200、400μg/ml苦参碱作用48小时后MG-63细胞形态学改变;流式细胞仪检测0、100、200、400μg/ml苦参碱作用48小时后MG-63细胞周期分布和凋亡现象。结果:不同浓度苦参碱对MG-63细胞均有生长抑制作用,且其生长抑制作用在苦参碱浓度为30~180μg/ml之间随浓度增加而增强;细胞形态学观察和流式细胞仪检测提示,400μg/ml浓度苦参碱能诱导MG-63细胞凋亡。结论:苦参碱对人骨肉瘤MG-63细胞体外有生长抑制和诱导凋亡的作用。     

抗血栓,抗动脉硬化中草药的筛选

动脉硬化、血栓症等疾病的发生及发展的过程,血小板起着主要作用。已有报道这类疾病患者血小板机能亢进。血小板中存在环氧酶和脂氧酶,二酶作用于花生四烯酸代谢系统,产生形成血栓的血栓烷A_2(TXA_2)及引起过敏性疾病的12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)。TXA_2不稳定,在提取分离过程中生成稳定的TXB_2。若抑制TXB_2生成则可抑制血栓形成,若抑制12-HETE则可防治动脉硬化及过敏症。鉴于此,作者按文献方法。测定48种中药对血小板中花生四烯酸代谢的影响,从中筛选出具有抑制花生四烯酸代谢的中药,     

caspase-3在骨肉瘤中表达的研究

应用SP免疫组织化学方法分别检测caspase-3在38例骨肉瘤及20例骨软骨瘤中的表达。caspase-3在骨肉瘤中表达阳性率为52．6％，骨软骨瘤中为85．0％，差异显著（P〈0．05）。骨肉瘤组织中caspase-3的表达降低与骨肉瘤的发生有关。     

抗厌氧菌中草药的体外筛选

目前治疗厌氧菌感染的药物有多种,但各有利弊,均不理想,为此需发掘抗厌氧菌感染新药。作者用389种中草药的提取液,对12株厌氧菌分别进行体外抗菌活性测定,从中筛选出肉桂,大黄等几种有较显著抗厌氧菌作用的中药。 材料与方法 中草药的选择 根据《本草纲目》、《中药大辞典》等书籍,从中选出对痈肿疮疖、呼吸道或消化道等     

中草药体外抗淋球菌的实验研究

该文报道采用琼脂对倍稀释法，测定了１２种中草药体外抗淋球菌作用的效果。结果显示：黄莲、五倍子、诃子有效强的抗淋球菌作用，其ＭＩＣ５０和ＭＩＣ９０为０．６２５ｍｇ／ｍｌ和１．２５ｍｇ／ｍｌ。黄柏、黄芩、金银花、连翘、虎杖抗淋球菌作用次之，其ＭＩＣ５０和ＭＩＣ９０分别为１．２５ｍｇ／ｍｌ和２．５ｍｇ／ｍｌ。赤芍、秦皮抗淋球菌作用较弱，其ＭＩＣ５０和ＭＩＣ９０均为２．５ｍｇ／ｍｌ和５．０ｍｇ／ｍｌ。研究结果提示中草药可用于治疗淋球菌所致感染，但需进一步临床研究。     

何首乌、女贞子等中药煎剂对阿霉素诱导的猪毛囊细胞凋亡的影响

目的　探讨何首乌、女贞子等中药混合煎剂对阿霉素诱导的猪毛囊细胞凋亡的影响。方法　将体外培养的猪毛囊分别经阿霉素、阿霉素 +中药处理 ,显微镜下观察各组毛囊、毛发生长和毛球部形态变化 ,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)检测各组毛囊中的凋亡细胞。结果　培养第 4天 ,阿霉素组毛囊、毛发生长长度明显低于阿霉素 +中药组 (P <0 .0 1) ;阿霉素组毛囊TUNEL阳性细胞数明显高于阿霉素 +中药组 (P <0 .0 1) ;毛球形态观察 ,2组均出现退行性变化 ,阿霉素组较阿霉素 +中药组明显。结论　何首乌、女贞子等中药煎剂能在一定程度上抑制阿霉素诱导的猪毛囊细胞凋亡 ,减轻阿霉素对毛囊的损伤。     

hsa-miR-30a在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达及其对细胞凋亡的影响

目的:研究miR-30a在人骨肉瘤细胞U2-OS中的过表达对其凋亡的影响。方法:构建pEZX-MR04-pre-miR-30a真核表达载体,瞬时转染人骨肉瘤细胞株U2-OS,荧光显微镜及荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测miRNA-30a在U2-OS中的表达,并采用流式细胞仪检测稳转株细胞的凋亡情况。结果:荧光显微镜下观察真核表达载体pEZX-MR04-pre-miR-30a转染后的U2-OS细胞,可见大量绿色荧光;qRT-PCR检测U2-OS中miR-30a的表达明显提高;流式细胞检测转染后的U2-OS细胞的凋亡明显增加。结论:miR-30a在人骨肉瘤细胞U2-OS过表达能促进其凋亡,miR-30a可能是U2-OS细胞潜在的抑癌基因。     

Smac对骨肉瘤细胞系Saos-2生长及耐药性的影响

目的：观察Smac表达对骨肉瘤细胞Saos-2生长和耐药性的影响。方法：构建smac和反义smac表达载体pcDNA-smac和pcDNA—anti-smac，G418筛选出分别稳定转染pcDNA—$mac和pcDNA—anti—$mac的骨肉瘤细胞Saos—2。利用流式细胞仪检测各转染细胞的细胞周期分布；绘制各细胞在6d内的生长曲线以观察各细胞生长情况的变化。同时采用MTT法检测各转染Saos—2细胞对依托泊苷的敏感性。结果：与转染空载体pcDNA3．0的Saos—2细胞相比，转染反义smac的Saos—2细胞G1／G0期比例升高，细胞生长自第4天起明显加快。转染smac的Saos—2细胞的细胞周期及生长曲线无明显差别；依托泊苷作用细胞后，与转染空载体pcDNA3．0的Saos—2细胞相比，转染反义smac的Saos—2细胞的存活率增高；而转染smac的Saos—2细胞的存活率降低。结论：抑制Smac在细胞中表达，可使Saos—2细胞生长加快，增强对依托泊苷的耐受性，Smac在细胞中的过表达可提高Saos—2对依托泊苷的敏感性。     

蜂毒素诱导骨肉瘤细胞U2OS凋亡与坏死的实验研究

目的:研究蜂毒素是否能够诱导骨肉瘤细胞U2OS凋亡与坏死.方法:U2OS经不同浓度蜂毒素处理后,采用台盼蓝排染法测定细胞增殖抑制率,利用单克隆抗体,通过流式细胞仪检测AnnexinV、Apo2.7及Fas蛋白的表达.结果:64 mg/L蜂毒素作用U2OS 12 h、24 h,其坏死率在80%以上.16 mg/L、32 mg/L蜂毒素对细胞增殖有明显抑制作用,并且可诱导细胞凋亡和坏死的产生,增加细胞Aap2.7及 Fas 蛋白的表达.结论:蜂毒素高剂量有明显杀伤U2OS的作用,低剂量具有促细胞凋亡作用,并能上调Fas蛋白的表达.     

不同中药提取物对幽门螺杆菌耐药菌株体外抗菌活性研究

目的探索不同中药提取物对幽门螺杆菌(helicobter pylori,H.pylori)耐药菌株是否具有体外抗菌活性,为中药治疗H.pylori耐药菌株提供依据。方法采用琼脂稀释法分别检测不同中药乙醇提取物对H.pylori标准菌株和临床耐药菌株的最小抑菌浓度(MIC),分别计算其MIC50和MIC90。结果中药提取物大黄、黄连、黄芩、败酱草、延胡索的MIC50和MIC90分别为:32,64,32,64,128,256,>512,>512,>512,>512 mg/L。结论大黄及黄连提取物对H.pylori临床耐药菌株具有较明显的体外抑菌作用;黄芩提取物对H.pylori临床耐药菌株具较弱的体外抑菌作用;败酱草、延胡索提取物对于H.pylori临床耐药菌株无明显体外抑菌作用。     

氯化两面针碱对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨氯化两面针碱对人骨肉瘤MG-63细胞诱导凋亡作用及其相关机制。方法将不同浓度的氯化两面针碱作用于MG-63细胞,采用MTT法检测其增殖抑制作用;利用荧光显微镜和电镜观察其对细胞形态的影响;利用流式细胞仪检测不同浓度的氯化两面针碱诱导MG-63细胞的凋亡率;Western blotting法分析caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax表达的变化。结果 MTT结果表明,氯化两面针碱可明显抑制MG-63细胞的增殖,并存在时间-剂量依赖性。荧光显微镜下,氯化两面针碱处理过的细胞呈现典型的凋亡形态,如细胞核清亮,大小不一,有的裂解成亮蓝色的颗粒。透射电镜下,同样可看到细胞凋亡现象,如胞质内出现大量空泡,细胞核边集,细胞表面微绒毛减少。流式细胞仪结果表明氯化两面针碱诱导细胞凋亡呈明显的剂量依赖性,随着药物浓度升高,凋亡率升高。Western blotting证实,氯化两面针碱能上调MG-63细胞中cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9和Bax的表达,同时下调pro-caspase-3、pro-caspase-9和Bcl-2的表达。结论氯化两面针碱可诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其具体机制可能与激活caspase凋亡通路有关。     

可溶性AZURIN分子重组子构建对人骨肉瘤U2OS细胞的杀伤和诱导凋亡

目的:研究可溶性细菌氧化还原蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制效应及凋亡诱导作用.方法:用PCR方法由假单胞菌染色体DNA扩增AZURIN基因片段,将其融合插入原核表达载体pQE30中,并在M15大肠杆菌表达可溶性的AZURIN蛋白.该蛋白经纯化和复性后,诱导人骨肉瘤U2OS细胞,通过MTT法、Hoechest 33258荧光染色法及倒置显微镜观察凋亡细胞;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率、线粒体膜电位变化和DNA断裂实验检测细胞增殖和细胞凋亡.结果:AZURIN的蛋白纯度达99.1%以上.用50～200 mg/L的蛋白诱导人骨肉瘤U2OS细胞12 h以上细胞的生长和增殖被显著抑制,并且观察到典型的凋亡细胞、凋亡小体、凋亡峰及DNA的片段化等凋亡的特征性变化,线粒体跨膜电位随着AZURIN作用的时间和浓度的增加而逐渐降低,对照组和50 mg/L AZURIN、100 mg/L AZURIN、200 mg/L AZURIN组细胞线粒体跨膜电位分别降低(7.76±0.47)%、(9.01±0.87)%、(24.13±2.12)%、(37.48±3.59)%(P<0.01).细胞的凋亡率也呈剂量依赖和时间依赖关系,作用48 h时凋亡率达峰值(35.8±3.78)%.结论:利用大肠杆菌制备的小分子蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞有明显的增殖抑制效应和凋亡诱导作用,线粒体途径可能是AZURIN诱导细胞凋亡的机制之一.     

硫化氢抑制骨肉瘤U2OS细胞的体外生长

【目的】 探讨硫化氢单独及与顺铂联用对骨肉瘤细胞生长的影响及其可能机制?【方法】 分别用0.2?0.4?0.6?0.8?1.0?2.0?3.0?4.0?5.0 mmol/L NaHS(硫化氢载体)单独或与20 mg/L顺铂共同作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,CCK-8比色法法检测细胞存活率;分别用0.4及1.0 mmol/L NaHS作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,1.0 mmol/L NaHS单独或与20 mg/L顺铂联用作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,细胞单克隆形成法检测各组单克隆数;1.0 mmol/L NaHS与20 mg/L顺铂共同作用骨肉瘤U2OS细胞24 h,Western-Blot法检测Bcl-2?Bax?NFκB蛋白的表达?【结果】硫化氢对U2OS细胞生长的影响:0.2?0.4?0.6?0.8 mmol/L NaHS作用U2OS细胞24 h,细胞存活率与对照组比较,差异无统计学意义(P > 0.05); 1?2?3?4?5 mmol/L NaHS作用U2OS细胞24 h,细胞存活率分别为(90.01 ± 7.49)%?(88.00 ± 4.12)%?(87.26 ± 4.05)%?(85.40 ± 4.39)%和(82.99 ± 4.65)%,与对照组比较,能不同程度抑制U2OS细胞的生长(P 0.05)?NaHS与顺铂联用对骨肉瘤细胞的影响:分别用0.8?1?2?3?4?5 mmol/L NaHS联合20 mg/L顺铂共同作用U2OS细胞24 h,细胞存活率分别为(54.13 ± 4.03)%?(54.09 ± 1.13)%?(50.37 ± 4.56)%?(41.44 ± 3.95)%?(40.00 ± 4.34)%和(36.35 ± 3.90)%,与单用顺铂组(59.76 ± 3.15%)比较,存活率下降(P < 0.05)?NaHS+顺铂组细胞单克隆数为231.00 ± 13.52,与顺铂组(285.67 ± 11.59)比较,细胞单克隆数下降(P < 0.01); NaHS+顺铂组NFκB蛋白表达及Bcl-2/Bax蛋白表达比值较顺铂组下降?【结论】 1 mmol/L浓度以上的NaHS能抑制骨肉瘤细胞的生长,0.8 mol/L浓度以上的NaHS通过减少NFκB入核,增加细胞的凋亡,从而增强顺铂对骨肉瘤细胞的抑制作用?     

腺病毒介导BMP-2和BMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用研究

目的 研究骨形态发生蛋白(BMP)-2和BMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用.方法 分别用重组腺病毒AdBMP-2、AdBMP-6和AdGFP感染骨肉瘤细胞MG63和U2OS,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶(ALP)活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化.结果 与感染AdGFP的相应骨肉瘤细胞株(对照组)相比,分别感染AdBMP-2和AdBMP-6的两种骨肉瘤细胞株的细胞存活率随时间延长逐渐降低,凋亡率逐渐增加,细胞穿膜数逐渐减少,ALP活性逐渐增加.结论 BMP-2和BMP-6可以抑制人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的增殖和迁移,并诱导它们凋亡和向成骨细胞分化.     

bFGF对骨肉瘤细胞系U2-os细胞的促凋亡作用

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨肉瘤细胞系U2-os细胞增殖及生存的影响,探讨bFGF在肿瘤细胞发生发展中的作用。方法:以bFGF处理U2-os细胞,采用台盼蓝排除检测法及MTT法检测细胞存活及增殖情况;用Annexin V-EGFP/PI双染流式细胞术及DNA梯状带检测细胞凋亡情况。结果:bFGF呈浓度、时间依赖性降低U2-os细胞活力并诱导细胞凋亡。结论:bFGF可以诱导U2-os细胞发生凋亡,生长因子在细胞的生长调控方面具有双重作用。