雷帕霉素诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡中Bcl-2作用研究

目的探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制及诱导细胞凋亡中的作用及Bcl-2变化在凋亡机制中的意义。方法以5、10、20、30、40和50nmol/L不同浓度的RAPA作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,Westernblot观察Bcl-2、Bcl-xl和bax等凋亡相关表达变化。结果RAPA可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。RAPA作用肝癌细胞BEL-740248h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,凋亡过程中伴有抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达的降低和促凋亡蛋白bax上调。结论RAPA可能通过诱导抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达的降低和促凋亡蛋白bax表达上调而诱导凋亡发生,抑制BEL-7402细胞的生长。     

三氧化二砷对肝癌细胞survivin基因和端粒酶活性的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)诱导肝癌细胞凋亡时survivin基因表达和端粒酶活性的变化。方法:采用倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞亚二倍体百分率,逆转录-多聚酶链式反应检测细胞survivin mRNA表达,免疫组织化学染色检测细胞survivin蛋白的表达,端粒酶检测试剂盒检测端粒酶活性。结果:0.25~2.00μmol/L As2O3明显抑制肝癌Bel-7402细胞生长,诱导细胞凋亡,survivin mRNA和蛋白表达上调,端粒酶活性下降,呈时间、剂量依赖关系。结论:As2O3抑制肝癌Bel-7402细胞增殖,诱导细胞凋亡,可能与其降低端粒酶活性有关;而survivin基因表达上调,可能是抵抗As2O3诱导凋亡的途径之一。     

冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用研究

目的:探讨冬凌草甲素对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制作用。方法:以8、16、24和32μmol/L不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。结果:16~32μmol/L的冬凌草甲素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用48~60h后Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。结论:冬凌草甲素能通过诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长而发挥抗增殖作用。     

α干扰素联合阿糖胞苷对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的:研究α干扰素联合阿糖胞苷对白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法:以浓度2 000 U/ml的α干扰素与不同浓度的阿糖胞苷作用于体外培养的K562细胞，观察细胞生长状态的变化，检测细胞生长抑制率及细胞凋亡率的变化，并对细胞端粒酶活性及P53蛋白的表达水平进行检测。结果:α干扰素与阿糖胞苷联合应用可显著抑制K562细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并降低K562细胞端粒酶活性，升高P53蛋白的表达水平，其作用呈现出明显的量效与时效关系。结论:α干扰素与阿糖胞苷联合应用对白血病K562细胞具有明显的生长抑制及诱导凋亡作用，降低细胞端粒酶活性及升高P53蛋白的表达水平是其重要作用机制之一。     

Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用

背景与目的:雷帕霉素是从吸水性链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)发酵液中提取,最近研究发现雷帕霉素具有免疫抑制作用和广泛的抗肿瘤作用。本研究主要探讨Caspase-3在雷帕霉素诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用。方法:以不同浓度(5、10、20、30、40、50nmol/L)的雷帕霉素作用于BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化,采用Caspase-3试剂盒和Westernblot蛋白电泳测定Caspase-3活性。结果:雷帕霉素可显著抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,具有量-效与时-效关系;雷帕霉素作用BEL-7402细胞48h后,Hoechst33258荧光染色可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;凋亡过程中Caspase-3酶原蛋白的激活,出现20ku亚单位,Caspase-3特异性抑制剂z-DEVD-FMK能阻断凋亡的发生。结论:雷帕霉素能抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞凋亡发生,Caspase-3酶的激活在雷帕霉素诱导细胞凋亡机制中起到重要作用。     

干扰素α对Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的：探讨干扰素α对白血病Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法：以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪及hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，FRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果：干扰素α可显著的降低Raji细胞端粒酶活性，抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：干扰素α能抑制Raji细胞的生长并诱导细胞发生调亡，降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

端粒酶反义核酸对BEL-7402肝癌细胞生长和活性的影响

目的 研究人类端粒酶RNA（hTR)基因的反义寡核苷酸（AS－ODN）对BEL－7402肝癌细胞生长和活性的影响。方法 将AS－ODN作用于BEL－7402细胞，观察细胞生长状况，PCR－ELISA法检测端粒酶活性，流式细胞仪和细胞DNA电泳观察细胞的凋亡情况。结果 AS－ODN能抑制BEL－7402细胞的生长，降低其端粒酶活性并诱导细胞凋亡。结论 针对hTR的AS－ODN对治疗肝癌有潜在意义。     

雷帕霉素对人肝癌细胞BEL-7402体外抗肿瘤作用研究

目的：观察雷帕霉素体外对肝癌细胞BEL-7402生长、细胞凋亡以及细胞转移能力作用。方法：以5nmol／L。10nmol／L，20nmol／L，30nmol／L，40nmol／L和50nmol／L不同浪度的雷帕霉素作用于体外培养的BEL-7402细胞。MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪检测细胞凋亡。Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化。细胞粘附分析及体外侵袭试验观察肿瘤细胞的转移能力。结果：雷帕霉素可显著的抑制BEL-7402细胞的生长．诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的量-效与时-效关系。雷帕霉素作用肝癌细胞BEL-740248h后，在Hoechst 33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征。雷帕霉素能抑制其粘附性和侵袭性。具有剂量依赖性。随浓度增加而抑制增加。结论：雷帕霉素不仅能诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡，抑制细胞的生长。而且同时抑制肿瘤细胞的粘附性和侵袭性．阻止肿瘤细胞的转移，雷帕霉素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡及其机制探讨

目的:探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂NS-398对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及凋亡抑制蛋白survivin、XIAP和c-IAP1表达的调节作用.方法:用不同浓度的NS-398作用BEL-7402细胞后,MTT法测定细胞增殖抑制情况,FCM法和TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫细胞化学法检测COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达情况.结果:NS-398 可以显著抑制BEL-7402细胞的增殖,诱导其凋亡.免疫细胞化学法检测结果显示,与未处理组相比,NS-398作用可使BEL-7402细胞中COX-2、survivin、XIAP和c-IAP1蛋白的表达明显下调(P<0.01).结论:NS-398对人肝癌细胞株BEL-7402有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与通过下调survivin、XIAP和c-IAP1的表达有关.     

反义端粒酶RNA对SMMC7721肝癌细胞系的作用

目的　观察反义端粒酶RNA对SMMC 772 1肝癌细胞系的作用 ,探讨抗端粒酶治疗在原发性肝癌治疗中的意义。方法　采用脂质体介导的方式将潮霉素抗性的反义端粒酶RNA真核表达载体PBBS2 12 /hTR转入SMMC772 1肝癌细胞中 ,经潮霉素筛选 ,克隆细胞株扩增鉴定后 ,采用TRAP PCR ELISA及FCM、电镜检测反义端粒酶RNA对SMMC 772 1细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。结果　TRAP PCR ELISA法检细胞端粒酶活性的检测结果为 :实验组吸光度值为 0 .482 ,对照组吸光度值为 2 .86 1;FCM检测细胞凋亡结果为 :实验组 13 .8% ,对照组未见有凋亡峰形成 ,电镜观察发现转染反义端粒酶RNA的SMMC772 1细胞具有典型的凋亡细胞形态 ,细胞发生较多的凋亡。结果表明反义端粒酶RNA显著抑制SMMC772 1肝癌细胞的端粒酶活性 ,并且对其有显著的促凋亡作用。结论　反义端粒酶RNA能有效地抑制肝癌细胞端粒酶活性 ,同时显著促进癌细胞凋亡。借助抑制细胞端粒酶活性的手段来达到阻止肿瘤生长的目的 ,为肝癌的治疗提供了新的途径。     

端粒酶反义RNA 对HL-60 细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响

 目的　探讨端粒酶反义 RNA对 HL- 60细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法　用脂质体介导法将 p BBS2 1 2 - h TR(反义端粒酶 RNA真核表达载体 )导入人髓性白血病细胞系 HL-60中 ,采用 TRAP法测定端粒酶活性 ,细胞生长动力学检测 ,FCM分析等方法观察其对 HL- 60细胞的端粒酶活性及细胞增殖影响。结果　端粒酶反义 RNA能显著抑制 HL- 60细胞的端粒酶活性 ,抑制 HL- 60细胞的增殖并诱导其凋亡。结论　以端粒酶反义 RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸诱导人肝癌细胞凋亡模型构建的实验研究

 目的　观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株的作用。方法　用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人肝癌细胞株共同孵育一定时间后 ,观察细胞形态变化 ,观察细胞 DNA含量的分布 ,测定端粒酶活性。结果　端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;电泳呈凋亡特征性 Ladder带 ;流式细胞仪分析显示 ,在 G1期前出现亚 2倍体凋亡峰 ;端粒酶活性抑制。结论　端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,抑制端粒成 ,从而抑制肝癌细胞的生长。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞的作用

目的　观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人肝癌细胞株的作用。方法　用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人肝癌细胞株共同温育一定时间后 ,观察细胞形态变化 ,检测细胞DNA含量的分布 ,测定端粒酶活性。结果　端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成 ;电泳呈凋亡特征性Ladder带 ;流式细胞仪分析显示 ,在G1 期前出现亚二倍体凋亡峰 ;端粒酶活性抑制。结论　端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡 ,抑制端粒酶活性 ,抑制端粒合成 ,从而抑制肝癌细胞的增殖     

抑制端粒酶活性对As2O3诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的： 〖HT5"SS〗观察端粒酶反义寡核苷酸、As2O3对肝癌细胞生长的影响,寻找低剂量、低毒、高效、安全的抗肝癌新疗法。〖HT5W〗方法：〖HT5"SS〗 自行设计合成靶向端粒酶模板区的20 nt硫代反义寡核苷酸,观察端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞端粒酶活性的影响及两者协同对肝癌细胞生长的影响,采用HE染色、流式细胞仪及DNA琼脂糖凝胶电泳观察端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞的凋亡诱导作用,以流式细胞术检测肝癌细胞的Fas、FasL、bcl2蛋白的表达。〖HT5W〗结果： 〖HT5"SS〗5 μmol/L的端粒酶反义寡核苷酸作用24h可显著抑制肝癌细胞端粒酶活性（P<0.01）;肝癌细胞端粒酶活性被抑制后对As2O3诱导凋亡的敏感性显著增加,表现为低浓度、短时间即可诱导肝癌细胞凋亡（P<0.01）,端粒酶反义寡核苷酸与As2O3对肝癌细胞的凋亡诱导作用是通过Fas、FasL途径实现的。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗抑制肝癌细胞端粒酶活性可显著增强其对As2O3诱导凋亡的敏感性,减少砷剂用量,两者协同有潜在的临床应用前景。     

STAT3抑制剂S3I-201对人肝癌BEL-7402细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 研究STAT3小分子抑制剂S3I-201对人肝癌细胞系BEL-7402增殖、凋亡与细胞周期的影响和初步的作用机制。方法 分别采用细胞活性检测试剂盒cell couting kit-8(CCK-8)和EdU细胞增殖法检测S3I-201对人肝癌细胞BEL-7402细胞增殖的影响,应用流式细胞术分析S3I-201对BEL-7402的细胞凋亡和周期的影响,通过Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 CCK-8及EdU结果显示,S3I-201能抑制BEL-7402细胞的生长和增殖(P<0.05),使BEL-7402细胞阻滞于S期,具有诱导细胞凋亡的作用,上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达(P<0.05)。结论 STAT3小分子抑制剂S3I-201通过促进BEL-7402凋亡、上调促凋亡蛋白Bax、下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并将BEL-7402阻滞于S期而发挥抗肿瘤效应。     

三氧化二砷对A549细胞增殖抑制作用及其机制

[目的]探讨三氧化二砷对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其作用机制.[方法]以不同浓度三氧化二砷作用于体外培养的A549细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪及Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡,TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性.[结果]三氧化二砷可显著降低A549细胞端粒酶活性,抑制细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;在Hoechst染色图片上可见细胞染色质浓缩及细胞核碎裂等典型的凋亡改变.[结论]三氧化二砷能抑制A549细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一.     

冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制

目的：研究冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，检测细胞生长抑制率．观察细胞凋亡时的形态学变化．对细胞凋亡前后的端粒酶活性进行检测。结果：冬凌草甲素可显著降低K562细胞的端粒酶活性．抑翻细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：冬凌草甲素能抑制K562细胞的生长并诱导细胞发生凋亡．降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

蜂毒肽突变体Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用

目的:为了提高蜂毒肽Melittin的抗肿瘤活性,我们设计出新型多肽并将其命名为Melittin-K1。并对多肽Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用进行研究。方法:采用CCK-8法检测细胞活力。扫描电镜拍照结合培养基上清中乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）的表达水平来评价细胞膜的损伤水平。构建BEL-7402细胞裸鼠异种移植瘤模型来评价Melittin-K1、Melittin体内对肝癌生长的影响以及毒性。结果:与Melittin相比,Melittin-K1抑制BEL-7402细胞生长的作用更显著;与L02细胞相比,BEL-7402对Melittin-K1的杀伤作用更敏感;Melittin-K1体外抑制BEL-7402细胞生长呈时间、剂量依赖性。扫描电镜以及LDH检测结果均显示Melittin-K1处理组细胞膜的破损情况严重。BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型结果表明,Melittin-K1体内显著抑制肿瘤生长,其抗肿瘤作用明显高于同剂量Melittin。Melittin-K1和Melittin体内毒性小,主要表现在,与模型组相比,体重曲线、肝功指标均未发生明显改变。结论:Melittin-K1能够明显抑制肝癌细胞BEL-7402的增殖,是一种极具潜力的抗肝癌药物。     

冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的调节

目的：探讨冬凌草甲素对HL-60细胞的生长抑制作用及其对细胞端粒酶活性的影响．方法：应用噻喳蓝(MTT)还原法检测细胞生长抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2基因的表达水平；应用端粒重复扩增(TRAP)法检测端粒酶活性。结果：5nmol／L～25nmol／L的冬凌草甲素可诱导细胞凋亡．抑制细胞增生。在细胞生长受抑制过程中．端粒酶活性及bcl-2表达水平显著下降。结论：冬凌草甲素可诱导急性白血病HL-60细胞凋亡、抑制细胞增生；其作用机制与端粒酶活性下降及bcl-2的表迭水平下调有关．其中bcl-2的表达水平可能起重要的调节作用。     

几种化疗药物对肝癌耐药细胞BEL7404/ADM端粒酶活性的影响

目的:研究顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)、多柔比星(ADM)和长春新碱(VCR)4种化疗药物对人肝癌细胞株BEL-7404、耐阿霉素肝癌细胞株BEL-7404/ADM的细胞毒作用及其对端粒酶活性影响的关系。方法:采用MTT法测定常用4种(DDP、MMC、ADM和VCR)化疗药物对人肝癌细胞株BEL-7404、BEL-7404/ADM的体外抑制作用;以TRAP-PCR-ELISA法检测化疗药物作用后两种细胞端粒酶的活性。结果:DDP、MMC、ADM、VCR对BEL-7404均敏感,各种化疗药物IC50大小比较,DDP和ADM比VCR和MMC均小;而对BEL-7404/ADM这几种化疗药物敏感性均不同程度下降,其中以ADM及VCR尤其明显,耐药倍数分别为100·0倍、60·14倍。未加药前,肝癌亲本细胞BEL-7404和耐药细胞BEL-7404/ADM端粒酶活性均表达,加入化疗药物后,亲本细胞端粒酶活性下降明显,并呈现时间-剂量关系,而对于耐药细胞,只有高浓度的化疗药物才能抑制其端粒酶活性。结论:端粒酶活性的抑制与耐药细胞对药物敏感性存在一定关系,端粒酶可作为化疗敏感的潜在标志。