Omi/HtrA2基因表达对食管癌细胞EC9706凋亡及对耐药影响的实验研究

目的：研究凋亡促进因子Omi/HtrA2基因过表达对食管癌细胞EC9706凋亡及对耐药性的影响。方法用脂质体包裹转染人食管癌EC9706细胞,实验分为对照组、空载体组、Omi载体组、顺铂组、Omi+顺铂联合组,采用RT-PCR检测不同干预组Omi/HtrA2基因mRNA表达的变化,MTT法检测不同干预组细胞生长抑制率,流式细胞术检测不同干预组细胞的凋亡率,分析Omi/HtrA2基因蛋白表达对细胞耐药性的影响。结果①Omi/HtrA2基因mRNA在EC9706细胞中的表达：对照组为（0.113±0.009）,空载体组为（0.106±0.006）,Omi载体组为（0.436±0.021）,顺铂组为（0.196±0.013）,Omi+顺铂联合组为（0.639±0.032）,顺铂组、Omi+顺铂联合组较对照组、空载体组明显增强,差异有统计学意义（P<0.01,P=0.011,P=0.000）,对照组与空载体组比较无显著性差异（P>0.05,P=0.725）。②MTT法检测Omi/HtrA2的表达对细胞生长的抑制率：对照组为0,空载体组为2.89%,Omi载体组为27.61%,顺铂组为30.02%,Omi+顺铂联合组为48.47%,与对照组相比,Omi载体组、顺铂组、Omi+顺铂联合组均显著抑制EC9706细胞的生长,差异具有显著性（P=0.000）。③流式细胞术检测Omi/HtrA2的表达对凋亡的影响：对照组细胞凋亡率为10.76%,空载体组为13.26%,Omi载体组为38.14%,顺铂组为45.86%,Omi载体+顺铂联合组为56.64%,与对照组、空载体组比较,Omi载体组、顺铂组、Omi载体+顺铂联合干预组细胞凋亡率明显提高,差异具有显著性意义（P=0.000）。结论 Omi/HtrA2基因过表达可以明显抑制癌细胞的生长,提高癌细胞的凋亡率及癌细胞对化疗药物的敏感性,且Omi/HtrA2基因的表达与化疗药物具有协同抗癌作用。     

Omi／HtrA2及其在恶性肿瘤中的研究进展

在肿瘤组织中,通常存在着坏死性细胞死亡和细胞凋亡两种死亡形式,而就目前研究认为肿瘤细胞的增殖率与死亡速率决定肿瘤的生长速率,因此,有效地调控细胞凋亡的速率以期达到治疗肿瘤的目的成为了肿瘤治疗研究的重要方向。2001年人们发现了一种存在于线粒体膜间隙的促凋亡蛋白--Omi／HtrA2,并开始对这一凋亡分子的进行研究扩展,发现其对多种肿瘤细胞可显示促凋亡效应以及预测肿瘤预后的作用。     

Omi/HtrA2在大鼠肾缺血-再灌注损伤诱导的细胞凋亡中的作用

目的探讨促凋亡因子Omi/HtrA2在大鼠肾缺血-再灌注损伤诱导的细胞凋亡中的作用。方法雄性Wistar大鼠随机分为假手术组[给空溶剂二甲基亚砜(DMSO)]、模型1组和模型2组(分别于再灌注1h时及再灌注前10min给予空溶剂DMSO)、阻断剂1组和阻断剂2组(分别于再灌注1h时和再灌注前10min给予Omi/HtrA2特异性阻断剂Ucf-101)。双侧肾动脉夹闭45min再灌注24h制作动物模型。原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;Western印迹法检测肾组织匀浆中Omi/HtrA2蛋白质表达;比色法检测肾组织匀浆中caspase-3活性。结果肾缺血45min再灌注24h后,肾小管上皮细胞凋亡数目明显增加,同时肾组织中Omi/HtrA2表达及caspase-3活性显著增高。再灌注前10min给予Ucf-101,抑制Omi/HtrA2的表达,caspase-3活性显著降低,细胞凋亡明显减轻。再灌注1h时给予Ucf-101阻断Omi/HtrA2的表达,caspase-3活性及细胞凋亡的变化不明显。结论促凋亡因子Omi/HtrA2在肾缺血-再灌注损伤诱导的细胞凋亡中发挥重要作用,在再灌注前10min阻断Omi/HtrA2的表达,可减轻肾缺血-再灌注损伤引起的细胞凋亡。     

Omi/HtrA2短发夹RNA在大鼠肾小管上皮细胞凋亡中的作用及机制

目的探讨Omi/HtrA2短发夹RNA(shRNA)对缺氧/复氧诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的作用及机制。方法细胞分为5组:正常组(常规培养),模型组(缺氧/复氧组)、HK组(转染重组质粒Pgenesil-1/HK)、shRNA1组(转染Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA1)、shRNA2组(转染Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA2)。用荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,Westernblot检测各组Omi/HtrA2、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-3/-9蛋白表达,比色法测定caspase-3/-9的活性。结果在荧光显微镜下,转染组细胞均可见绿色荧光,未转染组未见绿色荧光。与模型组相比,shRNA1组和shRNA2组Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达明显减少(P<0.01)。模型组和HK组、shRNA1组和shRNA2组之间Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达差异无统计学意义。与正常组相比,模型组Omi/HtrA2、caspase-3/-9蛋白表达明显增强(P<0.01)。结论Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA1和Pgenesil-1/Omi/HtrA2shRNA2能明显减少缺氧/复氧诱导的NRK-52E中Omi/HtrA2蛋白的表达。通过抑制procaspase-9的活化,进而减少了下游procaspase-3的激活,最终减轻了缺氧/复氧诱导的NRK-52E的凋亡程度。     

Omi/HtrA2在大鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧模型凋亡中的作用

目的研究在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡模型中Omi/HtrA2的表达,并观察抑制Omi/HtrA2表达后细胞凋亡的变化。方法用脂质体介导的基因转染方法将Omi/HtrA2的特异性shRNA表达载体251(Pgenesil-1/Omi/HtrA1 shRNA1)和252(Pgenesil-1/Omi/HtrA2 shRNA2)及阴性质粒HK(Pgenesil-1/HK)分别转入NRK-52E。应用Western印迹方法检测Omi/HtrA2及caspase3的表达,用DNA ladder检测各组细胞发生凋亡的情况。结果带有绿色荧光的NRK-52E即为成功转染细胞;在Western blot结果显示:对照组在缺氧复氧后Omi/HtrA2表达较正常组明显增强,而在转251和252组Omi/HtrA2表达较对照组减弱(P<0.05),但251和252两组间差异无统计学意义。对照组caspase3的表达明显较正常组增强(P<0.05)。且在Omi/HtrA2被抑制的两组caspase3的明显较对照组(P<0.05)。DNA ladder也显示:在对照组出现典型的DNA条带。251和252组条带减弱。结论通过RNA干扰技术成功抑制了Omi/HtrA2缺氧/复氧模型中Omi/HtrA2的表达,从而抑制了凋亡的发生。     

线粒体促凋亡因子Omi/htrA2在结肠癌组织中表达的研究

目的探讨丝氨酸蛋白酶Omi/htrA2在结肠癌组织、癌旁组织、结肠正常黏膜组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测46例结肠癌组织、15例癌旁组织及15例结肠正常黏膜组织中Omi/htrA2的表达,并分析其表达与结肠癌临床病例特征及预后的关系。结果 Omi/htrA2在结肠癌组织中的阳性表达率为69.57%(32/46),高于癌旁组织(13.33%,2/15)和正常结肠黏膜(6.67%,1/15),差异有统计学意义(P<0.01)。结肠癌组织中Omi/htrA2的表达与患者的性别、年龄、及肿瘤大小无关(P>0.05);与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05)。结论 Omi/htrA2在结肠癌组织中高表达,其表达与结肠癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关。结肠癌可能需要Omi/htrA2的表达来促进凋亡,Omi/htrA2的表达对结肠癌的发展有重要作用。     

P53促凋亡蛋白家族和p53的相互作用与细胞凋亡的研究进展

肿瘤的形成是原癌基因和抑癌基因遗传性变化如增加、丢失、突变，逐步积累的过程。同时，肿瘤又是遗传因素和后天因素共同作用的多因子疾病。p53是一个肿瘤抑制蛋白，它首先可通过影响编码细胞周期相关蛋白质的基因表达来调控细胞周期的G1停滞．同时它还会因为DNA的损伤增多．诱导细胞发生细胞凋亡。但p53诱导细胞凋亡的机制多年来一直不太清楚．而最近发现的ASPP(apoptosis stimulating protein of p53)蛋白家族对p53诱导细胞凋亡的机制的研究有了新的进展。本文就此作一综述。     

大黄素诱导HK-2细胞凋亡的机制探讨

 目的：探讨大黄中游离蒽醌大黄素诱导人近曲小管上皮细胞（HK-2）的细胞凋亡作用机制。方法：体外 培养HK-2细胞,利用MTT法评价大黄素对HK-2细胞的增殖抑制作用,利用TUNEL染色检测大黄素对HK-2细胞凋亡的影响, 流式细胞技术检测大黄素对HK-2细胞线粒体膜电位的影响,凋亡相关蛋白检测采用Western Blot分析;结果：大黄素作 用HK-2细胞48 h后,明显抑制细胞的增殖,IC50值为130.65 μmol•L-1。大黄素浓度为80 μmol•L-1时促使细胞凋亡, 线粒体膜电位降低,Western Blot分析凋亡相关蛋白显示,大黄素作用HK-2细胞后,抑制细胞外信号调节激酶1/2 （extracelluar signal regulated kinase 1/2,ERK1/2）的磷酸化,并且呈现明显的剂量和时间效应关系,细胞内 Bcl-2表达降低,Bax没有明显的变化,致使促凋亡基因蛋白占优势,细胞向促调亡的方向发展,细胞色素c释放增加, 从而使Caspase-8活化,激活下游Caspase-3,引起细胞的凋亡;大黄素对HK-2细胞的损伤效应可能是通过MAPK/ERK信号 转导通路抑制ERK磷酸化,而导致了细胞凋亡。结论：大黄素能够引起HK-2细胞的凋亡,其机制可能涉及MAPK/ERK信号 转导通路抑制途径。     

细胞凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax在溃疡性结肠炎表达的研究

溃疡性结肠炎的特征性表现在于结肠上皮表浅广泛的缺失和固有层的炎症改变。关于溃疡性结肠炎上皮层破坏的机制目前还不清楚，认为可能与上皮细胞坏死和凋亡均有关。胞细凋亡是为了调控机体发育，维护内环境稳定，而由一系列基因控制的细胞主动死亡过程。Bcl-2（B cell leukemia／lymphoma-2）和Pax（Bcl-2-associated Xproteingene）均为凋亡相关基因。本研究采用免疫组织化学的方法观察溃疡性结肠炎肠黏膜组织中细胞凋亡调控蛋白Bel-2和Bax的表达情况，以了解其在溃疡性结肠炎发病中的作用。     

细胞凋亡抑制蛋白(IAPs)与肿瘤治疗的策略

凋亡是维持机体稳定的重要过程，其功能失调与多种疾病的发生有关。IAPs家族蛋白参与凋亡的调节，与肿瘤的关系受到人们的关注。本对近年来IAPs家族蛋白和以其某些成员为靶点的抗癌策略的研究进展作一概述。     

乙肝相关性肝癌组织中细胞凋亡蛋白抑制因子 2蛋白的表达变化及其意义

目的 探讨乙肝相关性肝癌组织中细胞凋亡蛋白抑制因子2(inhibitor of apoptosis protein 2,IAP2)蛋白的表达变化及其意义.方法 选取2015年1月至2017年6月河南省传染病医院乙肝相关性肝癌术后组织标本80例(A组)、非乙肝相关性肝癌术后组织标本40例(B组)、乙肝相关性肝癌癌旁组织(C组)40例,采用免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blotting)检测三组标本中IAP2蛋白表达,分析乙肝相关性肝癌组织中IAP2蛋白表达与其病理特征的关系.结果 A组的IAP2蛋白阳性表达率为76.25％,高于B组的35.00％和C组的30.00％,差异有统计学意义(P<0.05);A组的IAP2蛋白积分光密度累积值高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05);IAP2蛋白阳性表达与乙肝相关性肝癌病人的临床分期、包膜侵犯、门脉侵袭、发生淋巴结转移显著相关(P<0.05).结论 IAP2蛋白在乙肝相关性肝癌组织中表达显著提高,并且与病人的临床分期、包膜侵犯、门脉侵袭、发生淋巴结转移有相关关系.     

Epstein-Barr病毒相关胃癌bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的研究进展

Epstein-Barr病毒（EBV）为疱疹病毒科嗜淋巴细胞病毒属的成员，是一种γ-DNA疱疹病毒，在全世界普遍存在，95％的健康人都有所携带。是传染性单核细胞增多症的病原体，与鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤、Hodgkin病、口腔腺体肿瘤、胸腺瘤、器官移植肿瘤以及艾滋病患者所患B淋巴细胞瘤等密切相关。自1990年Burke等通过聚合酶链反应在未分化的淋巴上皮瘤样胃癌组织中检测到EBV DNA以来，     

凋亡抑制蛋白在TRAIL诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的探讨凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis pro-teins,IAP)在调节胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)敏感性方面的作用。方法 PI染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、PARP、XIAP、Survivin、cIAP1和cIAP2的表达。结果 TRAIL能诱导胃癌细胞凋亡,BGC-823细胞较SGC-7901细胞对TRAIL更敏感。caspase-3的活化及PARP的裂解在TRAIL作用早期即出现,且BGC-823细胞较SGC-7901细胞发生得更快。4种IAP蛋白在两株胃癌细胞中都组成性地高表达,Survivin和cIAP1在TRAIL处理前后无变化。而XIAP在BGC-823细胞中明显下降,在SGC-7901细胞中无改变。cIAP2在TRAIL作用后两株细胞中均有所降低。结论 TRAIL诱导胃癌细胞凋亡可能在活化的caspase-3水平受调控,XIAP能保护胃癌细胞免于凋亡。     

Th1/Th2免疫应答与疾病

198 6年 Mosmann等根据鼠的辅助性 T细胞 (Th)分泌的细胞因子及生物学功能不同 ,首次提出 Th细胞分为 Th1细胞和 Th2细胞。 1991年 Maggi等证实 ,人的 Th细胞与鼠类似 ,也可分为 Th1和 Th2两类。Th1和 Th2的区分迅速在免疫学各个领域得到广泛应用 ,Th1/ Th2免疫应答与临床各类疾病之间关系的认识引起关注。1　人类 Th1和 Th2细胞的生物学特性1.1　产生的细胞因子 :根据产生细胞因子的不同 ,Th可分为Th0、 Th1和 Th2 ,成熟未致敏 (native)细胞为 Th0 ,在抗原刺激及细胞因子参与下 ,分化为 Th1及 Th2细胞。Th1细胞产生 IL- 2、IFN…     

非小细胞肺癌凋亡及相关基因bcl-2和bax的表达

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡与相关基因bcl-2、bax表达产物的关系及其临床意义。方法:应用流式细胞术和间接免疫荧光标记法进行检测。结果:凋亡率,Bcl-2、Bax蛋白标记率在NSCLC组与对照组中的差别有统计学意义(P<0.05)。NSCLCI期凋亡率明显高于II、III期组(P<0.01)。NSCLCI期组Bcl-2蛋白标记率明显低于II、III期组(P<0.01)。NSCLC中Bcl-2蛋白标记率与凋亡率呈负相关(r=-0.667,P<0.01)。Bax标记率与凋亡率无直线相关性(r=0.230,P>0.05)。Bcl-2/Bax>1组凋亡率明显低于Bcl-2/Bax≤1组(P<0.05)。结论:随着NSCLC临床分期的进展凋亡率下降,Bcl-2通过抑制凋亡影响NSCLC的进展。NSCLC细胞内存在一种对死亡讯号的应答模式:bcl-2/bax。     

细胞凋亡相关基因研究现状

细胞凋亡又称细胞程序化死亡 ,受基因调控 ,调控基因大体分为凋亡抑制基因和凋亡促进基因 ,二者此消彼长 ,共同调节细胞的凋亡 ,对它们的研究将是解决细胞凋亡机制的根本 ,但迄今为止它们的确切作用机制仍不完全清楚。现综述了近年来该领域的研究进展。1bcl-2基因家族bcl-2基因家族在凋亡的调节中起重要作用 ,是研究热点之一 ,目前已知该家族成员主要有Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-W、Mcl-1、Bfl-1、Brag-1、Bax、Bak、Bcl-Xs、Bag、Bid、Bik、Hrk,它们相互作用 ,共同决定受凋亡刺激的细胞最终是否会发生凋亡。1.1bcl-2:bcl-2属原癌基因 ,是8…     

乙肝病毒x蛋白结合蛋白抑制阿霉素诱导HepG2细胞凋亡的机制研究

目的探讨乙型肝炎病毒x蛋白结合蛋白(hepatitis Bvirus x-interacting protein,HBXIP)抑制阿霉素(doxorubicinhydrochloride,DOX,adriamycin,ADM)诱导HepG2肝癌细胞凋亡的作用及可能的分子机制,为研究肝细胞癌的临床耐药性奠定基础。方法以建立的稳定高表达HBXIP基因的HepG2细胞系为研究对象,分别用不同浓度的DOX处理高表达HBXIP组及对照组细胞,MTT法检测细胞的生存率,DAPI染色及Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡,免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果 MTT结果表明,DOX能够抑制HepG2细胞的存活,但HBXIP对DOX诱导的HepG2细胞凋亡作用具有明显的拮抗效应,并抑制DOX诱导的caspase-3、caspase-9及其底物PARP的活化,同时促进Bcl-2蛋白的表达。结论 HBXIP蛋白能够抑制化疗药物DOX诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能与调节胱天蛋白酶家族关键因子的活性相关。     

细胞凋亡机制中的关键性蛋白活性调控与临床疾病新药设计

细胞凋亡的调控研究主要包括两部分,阻止凋亡发生的调控研究(负向调控)和促进凋亡发生的调控研究(正向调控)。当前阻止凋亡发生的调控研究(负向调控),主要是针对Cas-pase-3激活之前的各种蛋白激酶等,因为已有实验证明激活Caspase-3是凋亡发生不可逆转的一点,而促进凋亡发生的调控研究(正向调控),则是设法对Caspase家族的激活,目前选择性激活肿瘤细胞Caspase-3但不影响正常细胞中该酶的活     

胃癌组织中细胞凋亡与bcl-2、bax基因蛋白表达的关系

为了探讨胃癌发生发展与细胞凋亡、ｂｃｌ ２ 和ｂａｘ 基因蛋白表达之间的关系,采用原位末端标记ＤＮＡ 断裂片段技术和免疫组化方法对６０ 例胃癌和２５ 例正常胃粘膜中的细胞凋亡指数、ｂｃｌ ２ 和ｂａｘ 进行检测。正常胃粘膜凋亡指数为１１－２ ±４－５１ ,高于胃癌的６－３５ ±３－８４（ Ｐ ＜ ０－０１） 。胃癌中ｂｃｌ ２强表达组凋亡指数为５－１９ ±２－０５ ,低于弱表达组的７－１２ ±３－８９（ Ｐ ＜ ０－０５） ;ｂａｘ 强表达组凋亡指数为７－１９ ±３－７２ ,高于弱表达组的５－２８ ±２－１３（ Ｐ ＜ ０－０５） ,胃癌分化好组凋亡指数为７－８９ ±３－１２ ,高于分化差组的５－２３ ±２－２１（ Ｐ ＜ ０－０５） 。ｂｃｌ ２ 表达越强,ｂａｘ 表达越弱,癌组织分化越差,凋亡指数就越少。提示ｂｃｌ ２ 和ｂａｘ 参与了胃癌组织中细胞凋亡的凋节,并在胃癌的发生发展中发挥着重要作用