体外诱导培养大鼠牙乳头细胞碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原的表达

目的:观察体外诱导培养的大鼠牙乳头细胞碱性磷酸酶和I型胶原蛋白合成的变化。方法:原代培养法获得大鼠牙乳头细胞,在条件培养基中进行诱导培养,在不同时间进行钙结节染色,ALP染色和定量测定,ELISA法和RT-PCR法测定细胞I型胶原蛋白的量和mRNA表达水平。结果:体外诱导培养的大鼠牙乳头细胞形成含钙化物的细胞结节,体外培养至12d的诱导组细胞ALP高于对照组(P<0.05),细胞内I型胶原表达量高于对照组(P<0.05),且I型胶原mRNA表达水平上调(P<0.05);培养15d后诱导组细胞分泌的I型胶原高于对照组(P<0.05)。结论:大鼠牙乳头细胞在体外分化的过程中碱性磷酸酶活性明显增高,矿化能力增强,并不断合成和分泌I型胶原形成胞外基质。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响

目的：观察釉基质蛋白对体外培养的人牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的影响。方法：改良组织块法培养人牙周膜细胞，免疫细胞化学方法和图像分析方法观察细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原的能力。结果：50、100、200mg/L的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞合成I、Ⅲ型胶原，其中，以100mg/L釉基质蛋白的促I型胶原合成作用最明显，50mg/L釉基质蛋白的促Ⅲ型胶原合成作用最明显。但是，这种促进作用有一定的时间性。结论：一定浓度的釉基质蛋白可以促进牙周膜细胞形成I型胶原、Ⅲ型胶原。     

牙髓组织再生中I型胶原支架最佳浓度的体外研究

目的：探讨牙髓组织再生研究中不同浓度的I型胶原支架对牙髓细胞的分布及数量的影响,确定最佳胶原材料的浓度。方法实验组将10μl移液枪头一端封闭,做为人工根管;对照组为两端开放的10μl移液枪头。体外培养转染绿色荧光蛋白的C57BL/6小鼠牙髓细胞,并将其分别接种于1%,2%和3%的I型胶原支架中,注入10μl的实验组和对照组移液枪头内,于6孔板中培养2周。荧光显微镜下观察牙髓细胞的分布,胰蛋白酶消化后计算各浓度中牙髓细胞的数目。结果对照组各浓度的胶原支架内牙髓细胞均生长良好。实验组1%和2%的I型胶原中的牙髓细胞生长良好,且细胞计数无显著性差异（ P〉0.05）;浓度为3%的胶原中牙髓细胞在人工根管的中、上段少有生长,且与1%和2%的胶原支架中的牙髓细胞数目差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 I型胶原支架材料浓度从1%提高到2%,可减少材料的收缩,并能保证细胞生长良好,2%的I型胶原浓度是牙髓组织再生中最佳浓度。     

神经生长因子对体外培养的人牙乳头间充质细胞ALP活性的影响

目的：观察神经生长因子（nerve growth factor NCGF)对人牙乳头间充质细胞ALP活性的影响。方法：酶组织化学法,结果：100U／ml NGF,在培养3d时即显著刺激人牙乳头间充质细胞ALP活性,培养5d和7d时,刺激作用进一步加强,且ALP活性在培养5、7d时明显高于3d者。NGF（100U／ml)在各培养时间点,对照组细胞ALP的分泌差异不显著。结论：NGF对人牙乳头间充质细胞ALP活性的刺激作用可能在成牙本质细胞的分化过程中具有重要意义。而促进细胞局部环境ALP的分泌可能与细胞间基南的生物矿化过程有关。     

牙乳头细胞体外培养研究

在牙齿发育形成过程中,由神经嵴细胞迁移分化而来的牙乳头细胞,作为牙胚发育过程中唯一具有分化为成牙本质细胞的间充质细胞群体,扮演着重要的调节作用,受到口腔医学研究者的高度重视。由于体内原位研究的困难性,许多学者通过体外培养的方法来弥补这一缺憾。现将有关牙乳头细胞体外培养研究的资料综述回顾如下。１　牙乳头细胞培养类型和方法文献报告的牙乳头细胞体外培养主要有两种类型,一种是单层细胞培养,一种是组织器官培养。Ｋｏｌｌａｒ［１］在１９７２年就报道成功地进行了牙乳头细胞的单层培养,但未对细胞的表型特征进行描…     

人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的 :观察人牙本质涎蛋白对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。方法 :分对照组和实验组 ,对照组是转染不含目的基因的空白质粒 pcDNA3的培养上清 ,实验组是转染pcDNA3 -hDSP重组质粒的培养上清。取第 5代人牙乳头间充质细胞 ,接种于 96孔板 ,对照组 6孔 ,实验组 10孔 ,用MTT法检测hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖的影响 ,用碱性磷酸酶检测试剂盒检测hDSP对体外培养的人牙乳头间充质细胞碱性磷酸酶活性的影响。结果 :hDSP能明显抑制体外培养的人牙乳头间充质细胞增殖 (P <0 .0 1) ,但能促进细胞内和培养上清中碱性磷酸酶的分泌 (P <0 .0 1)。结论 :hDSP能促进人牙乳头间充质细胞的分化和矿化     

甲状旁腺激素对人牙乳头细胞牙本质基质蛋白1表达的影响

目的：观察甲状旁腺激素(parathyroid hormone，PTH)对体外培养的人牙乳头细胞(human dental papilla cells，HDPC)牙本质基质蛋白1(dental matrix protein，DMP1)合成分泌的影响。方法：原代方法培养出人牙乳头细胞，用不同浓度的甲状旁腺激素刺激培养的第5代人牙乳头细胞，免疫组化观察结果，并采用图像分析的方法，进行半定量分析。结果：PTH可刺激人牙乳头细胞DMP1的表达，诱导的DMP1主要表达于细胞胞浆内，呈一定的浓度依赖性，0．3μg／mL为刺激最佳浓度。结论：PTH能够刺激人牙乳头细胞产生DMP1，对牙乳头细胞向成牙本质细胞分化有一定促进作用，可能是成牙本质细胞分化的重要介质之一。     

实验性牙龈炎I型胶原的变化

目的观察实验性牙龈炎早期炎症牙龈组织Ｉ型胶原的变化。方法 以正畸钢丝拴结豚鼠切牙牙颈部，取临床牙周炎患者牙周袋内菌斑种人豚鼠受试牙龋沟，连续５天，受试牙龈局部红肿，龋沟加深，形成实验性牙龈炎动物模型。取其切牙连同周围牙周组织，常规石蜡切片，免疫组化ＰＡＰ法检查牙龈Ｉ型胶原，同时ＨＥ染色。结果 炎性牙龈Ｉ型胶原较正常着色明显减弱，着色缺乏连续性。结论 早期炎症已有胶原受损，其损伤可能主要由炎症反应所     

TGF—β对人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响

目的： 探讨ＴＧＦ－ β对人牙乳头间充质细胞增殖和细胞周期的影响。方法：采用ＭＴＴ法和流式细胞仪观察ＴＧＦ－β对人牙乳头细胞增殖和细胞周期的影响。结果：５０μｇ／Ｌ 组显著刺激人牙乳头细胞增殖（Ｐ＜ ０．０５）,Ｇ１ ％ 显著降低,Ｓ％ 明显升高（Ｐ＜ ０ ．０１）,反映细胞增殖活力的增殖指数ＰｒⅠ值（Ｓ＋ Ｇ２ Ｍ） 也明显增高（ Ｐ＜０ ．０１）。结论：ＴＧＦ－β可能通过促进人牙乳头细胞增殖参与牙胚发育和牙髓损伤修复。     

四种生长因子对体外培养的人牙乳头细胞表达核心结合因子a1的研究

目的：探讨4种生长因子对体外培养的人牙乳头细胞中核心结合因子a1（core binding factor al，cbfal）表达的影响。方法：体外培养人牙乳头细胞，转染pcDNA3-cbfal重组质粒，G418筛选建立稳定表达cbfal的细胞模型PC-3，分别在正常细胞和PC-3细胞中加入不同浓度的BMP-2、TGF-β1、FGF-2、EGF，采用RT-PCR、Western blot、免疫组织化学的方法，观察这4种生长因子在人牙乳头细胞中对cbfal基因表达、蛋白合成、蛋白表达部位的影响。结果：200ng／mLBMP-2和50ng／mL的FGF-2刺激正常人牙乳头细胞6h后cbfal的表达明显升高，而20和40ng／mL的TGF-β1作用12h，能抑制稳定转染cbfal基因的细胞中cbfal mRNA的表达；EGF则对人牙乳头细胞中cbfal的表达没有显著影响。结论：BMP-2和FGF-2可以上调人牙乳头细胞中cbfal的表达，TGF-β1对cbfal的表达有抑制作用，EGF则对人牙乳头细胞中cbfal的表达没有显著影响。     

Immunolocalization of bone extracellular matrix proteins (type I collagen,osteonectin and bone sialoprotein) in human dental pulp and cultured pulp cells

AIM: To simultaneously analyse the expression of type I collagen, osteonectin and bone sialoprotein (BSP) in human dental pulp of different ages. METHODOLOGY: Cultured dental pulp fibroblasts (FP1 cell line), pulps from dental germs with incomplete root formation (n = 4) and pulps of erupted teeth with total root formation (n = 4) were used. Bone proteins were searched by immunohistochemistry and immunofluorescence using polyclonal antibodies and compared among the three groups assessed. RESULTS: Immunohistochemistry detected the three proteins in dental pulp tissue, as it labelled extracellular matrix, predentine and odontoblasts. The BSP label was weaker, when compared to both type I collagen and osteonectin. The presence of type I collagen was more evident in pulps from erupted teeth, when compared to germ dental pulps. On the other hand, a strong expression of osteonectin in germ dental pulps was observed. CONCLUSIONS: Regardless of the degree of maturation, dental pulps present type I collagen, osteonectin and BSP in the extracellular matrix (ECM) and in the odontoblastic layer. Thus, the results suggest that these proteins are related to the production and mineralization of dentine.     

体外培养的人牙乳头间充质细胞的矿化特征

目的;观察体外２的人牙乳头间充质细胞矿化特征,深入研究成牙本质细胞的分化和牙本质形成。方法：第４代人牙也头间充质细胞连续培养３５ｄ后,进行组织学染色,透射电镜和扫描电镜观察。结果：人牙乳头间质细胞可出现复层生长和形成矿化结节,ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ杂色提示细胞结节中有明显的钙盐沉积;细胞可出现与成牙本质细胞相似的超微结构特征并出现典型的矿化影像。     

cbfa1在人牙乳头细胞中的免疫组织化学研究

目的：构建pcDNA3-cbfal重组质粒，瞬时转染人牙乳头细胞，观察cbfal在转染前后的表达。方法：用EcoRV和XbaⅠ双酶切pcDNA3空载体和pGEM-5z-f-cbfal质粒，电泳回收后进行连接，连接产物转化DH5α，进行酶切鉴定和PCR分析。采用脂质体法瞬时转染人牙乳头细胞，制备细胞爬片。免疫组织化学染色。结果：共挑出7个阳性转化子，酶切和PCR分析结果均显示重组质粒构建成功。正常人牙乳头细胞中cbfal表达阴性，瞬时转染24h后，cbfal表达阳性。结论：成功构建了pcDNA3-cbfal真核表达载体。人牙乳头细胞无cbfal的表达，当转染正义的cbfal重组质粒后出现cbfal的表达。为进一步研究cbfal在牙乳头细胞中的作用奠定了基础。     

BMP2对人牙乳头细胞c-fos和c-jun诱导作用的研究

目的:探讨生长因子BMP2对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的诱导作用.方法:采用免疫组织化学和图像分析的方法,观察特定浓度的BMP2在不同时问点对体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达的影响.结果:不加刺激时人牙乳头细胞c-fos、c-jun在胞浆阴性表达,胞核不表达或弱阳性表达.200 ng/mL BMP2刺激30 min后,c-fos和c-jun在胞浆胞核均出现表达,但较稀疏;刺激lh胞核胞浆内表达明显增强,浆内表达较核内弱;2 h c-fos和c-jan在细胞核内表达最强,12 h胞核着色明显变浅,24 h基本已无阳性着色.结论:生长因子BMP2可诱导体外培养的人牙乳头细胞c-fos和c-jun表达,整个过程约持续24 h;c-fos和c-jun的表达存在核转位现象,提示c-fos和c-jun参与了BMP2的信号转导过程.     

牙乳头细胞基本特征及其研究进展

牙乳头细胞来源于外胚间充质,具有多向分化潜能,是体内唯一分化为成牙本质细胞的前体细胞。该细胞在牙发育和牙体牙髓损伤修复过程中起重要作用。牙乳头细胞相关的组织工程化研究是近年来的热点。下面就牙乳头细胞的形态及其功能特征、三维细胞培养、组织工程化牙研究进展等方面的研究作一综述。     

甲状旁腺激素对人牙乳头间充质细胞矿化能力的影响

目的：观察体外培养的人牙乳头间充质细胞（ｄｅｎｔａｌ ｐａｐｉｌｌａ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｃｅｌｌ,ＤＰＭＣ）矿化特征及甲状旁腺激素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＰＴＨ）对人ＤＰＭＣ矿化特征的影响,以深入研究成牙本质细胞的分化和牙本质形成。方法：第４代人ＤＰＭＣ在含３３．３ｎｍｏｌ／Ｌ ＰＴＨ的矿化液中连续培养３５ｄ后,进行组织学染色、透射电镜（ＴＥＭ）和扫描电镜（ＳＥＭ）观察。用     

Mineralized nodule formation by human dental papilla cells in culture

Human dental papilla cells were enzymatically separated from deciduous tooth germs of an 8-month-old embryo legally aborted. the second passage cells were cultured up to 35 days in 3 groups. The β-gp group was cultured in the Dulbecco MEM containing ascorbic acie and β-glycerophosphate supplemented with 15% fetal bovine serum. The Dex group was in the same medium, in addition containing dexamethasone. The Control group contained none of the 3 chemicals, Mineralized nodules were formed after 15 days in the β-GP and Dex groups. Only in the presence of ascorbic acid and organic phosphate did they mineralize. The addition of dexamethasone caused a significant increase in the number of nodules. By electron microscopy, the nodules contained needle-shaped crystals associated with a network of collagen fibrils. Calcium and phosphorus were detected by energy-dispersive X-ray diffiractometry. Cells showed high levels of alkaline phosphatase activity, which was increased 2∼3 times in the presence of the 3 chemicals. These results indicated that human dental papilla cells have the ability to from dentin in culture. The formation of mineralized nodules by human dental papilla in vitro provides a useful model for studying the morphogenesis and differentiation of dental papilla cctomesenchyme.     

大鼠牙乳头细胞旁分泌效应对巨噬细胞分泌炎症因子的调控作用

目的:研究大鼠牙乳头细胞(rat dental papilla cells,RDPCs)对LPS活化的巨噬细胞分泌免疫因子的影响.方法:分离SD大鼠牙胚,酶消化法原代培养牙乳头细胞并进行矿化诱导和成脂诱导,茜素红染色观察矿化结节形成.油红O染色观察脂滴形成.CCK8法检测大鼠牙乳头细胞条件培养基(rat dental papilla cells' conditioned medium,RDPC-CM)对巨噬细胞增殖能力的影响,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定RDPC-CM对巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6的影响,Griess reagent法检测RDPC-CM对巨噬细胞分泌炎症因子NO的影响.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:原代培养24 h后,大鼠牙乳头细胞从组织块中爬出,传代后可得到纯化大鼠牙乳头细胞;茜素红染色见矿化诱导组中出现散在的红色矿化结节;油红O染色后可见经成脂诱导的牙乳头细胞中脂滴形成;CCK8结果表明,RDPC-CM对巨噬细胞增殖能力无影响;ELISA结果显示,大鼠牙乳头细胞条件培养基可对LPS活化巨噬细胞分泌细胞因子产生作用,表现为条件培养基作用于巨噬细胞24h可减少细胞分泌TNF-α,而对IL-1β和IL-6分泌无影响;Griess reagent法结果显示,RDPC-CM对LPS活化的巨噬细胞分泌NO无影响.结论:大鼠牙乳头细胞条件培养基作用于LPS活化的巨噬细胞,可使巨噬细胞分泌TNF-α下降,提示牙乳头细胞具有一定的免疫调控作用.