大鼠脑梗死早期星形细胞胶质化及其与神经营养因子的关系

目的 探讨星形南细胞（ＡＳ）在脑梗死早期的变化及与神经营养因子的关系。方法 运用免疫组织化学技术检测Ｍｉｄｋｉｎｅ（ＭＫ）、星形胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的动态变化。结果 梗死后１天,梗死边缘开始表达ＧＦＡＦ。梗死后２天,ＧＦＡＰ表达达高峰。ＭＫ于梗死后１天表达,随后其阳性梗死后２￣４天表达逐步增强。结论 脑梗死早期星形胶质细胞增生可能与分泌神经营养因子及损伤后的修复有关。     

苯丙胺对星形胶质细胞的影响及星形胶质细胞分泌液在苯丙胺致PC12细胞毒性中的保护作用

目的:探索苯丙胺(amphetamine,AMPH)对星形胶质细胞(astrocyte,AS)的影响以及星形胶质细胞分泌液astrocytic secretory fluid,ASF)在AMPH致PC 12细胞损伤中的作用。方法:观察不同浓度的AMPH对AS数量和形态变化的影响。在PC12细胞中加入AMPH,建立细胞毒性模型,随后加入ASF、神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及其抗体,观察PC12细胞形态的变化以及存活率的差异。结果:(1)AMPH浓度达到9mM时,AS数量减少,而胞体肥大。(2)ASF和NGF均可起保护受损的PC12细胞,其中ASF效果显著优于NGF(P<0.0001)。加入抗体中和ASF中的NGF后,ASF仍然有较好的保护作用。结论:高剂量的AMPH对AS有损伤作用。ASF对AMPH损伤的PC12细胞的保护作用显著优于NGF。     

骨髓基质细胞对脑创伤大鼠神经营养因子表达水平的影响

目的:研究骨髓基质细胞(BMSCs)治疗脑创伤大鼠后内源性的神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的影响。方法:采用大鼠骨髓中提取出来的骨髓基质细胞,进行体外扩增后,静脉移植于大鼠脑创伤模型中,在治疗后1、3、5、7、14d,ELISA法检测损伤半球NGF和BDNF的浓度,并与对照组对比,进行统计学分析。免疫组化法检测骨髓基质细胞在损伤脑组织中的表达。结果:骨髓基质细胞经股静脉移植后可在损伤的脑组织中表达。治疗组NGF和BDNF的表达于伤后1d至7d逐渐增加,于第7天达到高峰,至第14天降至较低水平。结论:骨髓基质细胞经股静脉移植后可在损伤的脑组织中表达。移植后的骨髓基质细胞可增加损伤脑组织中的NGF和BDNF的表达,与时间有相关性。体外扩增的骨髓基质细胞对于创伤性脑损伤具有治疗作用。     

CS2对原代星形胶质细胞的毒性研究

为探讨ＣＳ２的神经毒性机制及体外评价方法,我们研究了ＣＳ２对原代星形胶质细胞的毒性,采用常规培养方法,观察ＣＳ２染毒（０,１０,１００,１０００,１００００μｍｏｌ／Ｌ对星形胶质细胞脱落、细胞形态学、及Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性的影响。结果表明：ＣＳ２染毒可使细胞脱落数增加,且与接触剂量和接触时间有关;细胞形态学明显异常,电镜下观察表现为髓样小体的形成及空泡样改变;Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性下降。提示ＣＳ２对于星形胶质细胞有明显的毒性,此酶活性的下降可作为ＣＳ２毒性的一种标志物     

星形胶质细胞与神经退行性疾病的相关性

星形胶质细胞是脑内数量最多的胶质细胞,其总体积占脑总体积20%-50%,星形胶质细胞与神经元之间存在广泛而复杂的信息传递,以直接、相互作用的方式与神经元发生联系,在神经系统的发育、突触传递、调控信息处理与信号传递、离子平衡、调节神经和突触的可塑性等方面都发挥重要作用。星形胶质细胞在损伤状态下可以快速反应,转变为反应性星形胶质细胞,此时其保护功能己经丧失,反而会加剧损伤。反应性星形胶质细胞并非为"全或无"概念,而是经历了从可逆的基因表达改变、正常结构区域内的细胞肥大,到永久性胶质瘢痕形成、组织结构改变这一系列变化的星形胶质细胞的总称。胶质瘢痕的增殖多伴随着胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达增加,因此组织中GFAP升高是中枢神经系统对损伤作出反应的一个标志性信号。星形胶质细胞功能异常或退变严重破坏了星形胶质细胞-神经元之间的信息传递,导致神经元功能紊乱,诱发神经退行性疾病的产生,包括帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病及肌萎缩脊髓侧索硬化症。因此,星形胶质细胞绝不仅仅是神经退行性疾病中的配角,而是极其重要的参与者。阐明星形胶质细胞与神经退行性疾病的相关性可以为其有效药物的研发提供新的思路。     

EGB对大鼠神经干细胞分化为星形胶质样细胞的影响

目的：观察银杏叶提取物（EGB）对大鼠海马神经干细胞（NSCs）增殖及分化为星形胶质样细胞的影响。方法：取新生24h内的Wistar大鼠海马组织的细胞进行体外培养，1周后将其接种在培养板中．观察不同浓度的EGB对细胞的生长作用．并检测胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果：各实验组NSCs的生长明显好于对照组．免疫细胞化学显示：同一时间内，诱导NSCs分化为星形胶质样细胞的百分率增高；同一浓度的EGB，诱导神经干细胞分化为星形胶质样细胞的百分率随着时间的延长呈上升的趋势。结论：EGB能促进神经干细胞的存活、增殖及向星型胶质样细胞的方向分化。     

PAS-Na对锰致大鼠基底核原代星形胶质细胞损伤的拮抗模型探讨

目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对锰(Mn)致大鼠基底核原代星形胶质细胞损伤的拮抗作用,为深入Mn中毒机制及其防治研究提供科学技术平台。方法取SPF级新生24 h内SD大鼠基底核进行消化、传代培养,用荧光免疫法鉴定星形胶质细胞。给予不同浓度Mn (125、250、500和1 000μmol/L)和PAS-Na (5、50、500和5 000μmol/L)对星形胶质细胞处理24 h,用MTT法测定细胞存活率,按细胞存活率75%为Mn细胞毒性的筛选标准,细胞存活率100%为PAS-Na无细胞毒性标准,选择染Mn和PAS-Na干预剂量。结果染不同浓度Mn 24 h后,星形胶质细胞出现不同程度的肿胀或皱缩,并随染锰浓度增加而加重。正常培养液(对照)、125、250、500和1 000μmol/L Mn组细胞存活率依序为100. 0%、91. 5%、83. 3%、78. 2%和55. 6%。与对照组比较,250、500和1 000μmol/L Mn组细胞存活率均降低(P<0. 05)。随着Mn浓度增高,细胞存活率呈剂量-反应性下降(r=0. 979)。给予5、50、500和5 000...     

乙醇对大鼠睾丸细胞凋亡的影响

目的探讨乙醇对大鼠睾丸细胞凋亡的影响。方法将72只雄性性成熟大鼠随机分为3组,对照组24只给予0.9%氯化钠溶液灌胃,6 mL.kg-1.d-1;实验组A和实验组B分别均给予50度乙醇(乙醇浓度为0.378g.mL-1)灌胃,剂量分别为6和12 mL.kg-1.d-1。均连续灌胃39 d。分别在实验第14,27,40天取各组大鼠睾丸细胞,采用流式细胞仪结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测大鼠睾丸细胞凋亡情况。结果第14,27,40天,对照组大鼠睾丸细胞凋亡指数(AI)分别为(7.41±1.97)%,(9.06±2.36)%和(8.58±1.64)%,不同时点差异无显著性(均P>0.05)。实验组A第27,40天平均AI分别为(48.26±6.27)%和(53.18±6.56)%,差异无显著性(P>0.05),但均比第14天[(13.07±2.05)%]显著增高(均P<0.01);实验组B第27,40天AI分别为(53.41±6.93)%和(59.89±7.05)%,差异无显著性(P>0.05),但均比第14天[(19.68±3.84)%]高(均P<0.01)。实验组A和实验组B大鼠AI在各时间点均较对照组大鼠高(均P<0.01)。实验组B第14天AI明显较实验组A高(P<0.01)。结论乙醇可导致大鼠睾丸细胞凋亡增加。灌胃给予乙醇,随着时间的延长,大鼠睾丸细胞凋亡增加;27 d后睾丸细胞的凋亡保持较高水平。     

碱性成纤维细胞生长因子上调原代培养鼠星形胶质细胞中血管内皮生长因子的表达(英文)

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对鼠星形胶质细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用半定量聚合酶链反应(PCR)法和免疫组织化学法分别考察bFGF对VEGF信使RNA(mRNA)水平和蛋白质水平的影响。对不同剂量bFGF(1,10,100 ug·L~(-1))和不同孵育时间(3,6,12,24 h)的作用均进行了分析。 结果:bFGF可以剂量依赖性升高VEGF的mRNA水平。bFGF 10ug·L~(-1)在孵育3 h后即可上调VEGF mRNA水平,孵育24 h后细胞内VEGF mRNA水平显著高于对照组。免疫细胞化学分析结果表明bFGF也能升高细胞的VEGF蛋白质水平。结论:碱性成纤维细胞生长因子可以上调鼠星形胶质细胞中血管内皮生长因子的表达。     

神经生长因子对培养的脑皮质神经元谷氨酸毒性的影响

在原代培养的大鼠胎鼠脑皮质神经元，观察神经生长因子(NGF)对谷氨酸损伤的影响. 谷氨酸(0.2-0.8 mmol·L^-1) 促进神经元死亡及乳酸脱氢酶(LDH)释放，增加丙二醛(MDA)含量. NGF 3-100 μg·L^-1浓度依赖地抑制谷氨酸引起的神经元死亡及LDH和MDA的增加. NGF 30 μg·L^-1提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶活力. NGF浓度依赖地增加谷氨酸引起的抗氧化酶水平降低. 结果提示NGF通过抑制脂质过氧化物生成及提高抗氧化酶活性来保护大脑皮质细胞抗谷氨酸毒性.     

Effect of nerve growth factor on glutamate-induced neurotoxicity in cerebral cortical neuronal cultures

在原代培养的大鼠胎鼠脑皮质神经元，观察神经生长因子（ＮＧＦ）对谷氨酸损伤的影响．谷氨酸（０．２－０．８ｍｍｏｌ·Ｌ－１）促进神经元死亡及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放，增加丙二醛（ＭＤＡ）含量．ＮＧＦ３－１００μｇ·Ｌ－１浓度依赖地抑制谷氨酸引起的神经元死亡及ＬＤＨ和ＭＤＡ的增加．ＮＧＦ３０μｇ·Ｌ－１提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化酶活力．ＮＧＦ浓度依赖地增加谷氨酸引起的抗氧化酶水平降低．结果提示ＮＧＦ通过抑制脂质过氧化物生成及提高抗氧化酶活性来保护大脑皮质细胞抗谷氨酸毒性．     

Antagonistic effect of nerve growth factor on neuronal injury induced by hypoxia in cultured cerebral cortical neurons of rats

目的：以连二亚硫酸钠造成原代培养的大鼠胎鼠脑皮质神经元缺氧损伤,观察神经生长因子（ＮＧＦ）对缺氧损伤神经元的影响．方法：测定神经元生存力及细胞外液乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的活性来分析ＮＧＦ的作用,脑皮质细胞匀浆用于测定丙二醛（ＭＤＡ）含量及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）活性．结果：缺氧后,ＬＤＨ释放及细胞生存力降低．ＮＧＦ（１－１００μｇ·Ｌ－１）浓度依赖地减少ＬＤＨ的释放及ＭＤＡ的生成,ＮＧＦ１００μｇ·Ｌ－１显著提高细胞生存力及提高ＳＯＤ和ＧＳＨＰｘ活性２７倍．结论：ＮＧＦ通过减少脂质过氧化物生成及提高ＳＯＤ和ＧＳＨＰｘ活性来保护大脑皮质细胞抗缺氧损伤     

神经生长因子在培养的皮质神经细胞中抑制谷氨酸毒性

目的：确定ＮＧＦ是否防止原代培养的神经细胞中谷氨酸引起的损伤．方法：采用皮质神经细胞体外培养及形态学观察，测定神经细胞的生存力和ＬＤＨ的释放来分析ＮＧＦ的作用，并利用钙指示剂Ｆｕｒａ２来检测［Ｃａ２＋］ｉ的变化．结果：ＮＧＦ阻止［Ｃａ２＋］ｉ的增加，并且对谷氨酸引起的皮质细胞的损伤具有拮抗作用，最大拮抗剂量为６０μｇ·Ｌ－１．结论：ＮＧＦ通过稳定［Ｃａ２＋］ｉ水平，或阻止［Ｃａ２＋］ｉ的升高来保护大脑皮质细胞抗谷氨酸毒性．     

肝细胞生长因子在LO2细胞表达的实验研究

目的 将肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)真核表达栽体,转染培养的LO2肝细胞,观察其表达。方法 将含肝细胞生长因子cDNA真核表达栽体PEGFP-HCF,脂质体(Lipofectauline)转染培养的LO2肝细胞;PCR鉴定外源基因的导入,绿荧光蛋白检测肝细胞生长因子的表达。结果 (1)重组质粒PEGFP-C1-HGF转染峨肝细胞,5d后,细胞内可检测到绿荧光蛋白。(2)PCR结果显示：转染PEGFP-C1-HGF质粒组可见306bp特征条带与阳性对照大小一样,假转染组与空质粒组无特征条带。结论 人肝细胞生长因子基因真核表达栽体,PEGFP-C1-HGF,能成功转染LO2细胞并获表达。     

人神经生长因子基因血管内给药的安全性评价

目的：评价用高渗法向大鼠脑内导入二型重组腺相关病毒/人神经生长因子（NGF）β基因（rAAV2/hNGFβ）的安全性。方法：大鼠经颈外动脉输入甘露醇诱导血脑屏障开放。分别经颈外动脉输入生理盐水（对照组），rAAV2/hNGFβ或rAAV2/GFP。对导入rAAV2/hNGFβ的大鼠。观察饲养期间的一般情况。d60称重，测定痛敏感度，出血时间和凝血时间，麻醉后腹腔取血，行血液学，血液生化检测；脏器称重。计算脏器系数，并做病理组织学检查。对导入rAAV2/GFP的大鼠处死后用4%多聚甲醛-PBS原位灌注固定，脏器连续冰冻切片，用激光共聚焦显微镜观察rAAV2/GFP在各脏器中的分布及表达。结果：和对照组相比，导入rAAV2/hNGFβ大鼠的一般情况，痛敏感度，血液学和血液生化指标，脏器系数及各脏器病理组织学检查无明显差异，rAAV2/GFP分布器官包括肝，脾，肾，肾上腺，肺，甲状腺，垂体，胸腺，胃，小肠和胰腺组织。结论：经颈外动脉将rAAV2/hNGFβ导入大鼠脑内d60,rAAV2/hNGFβ对大鼠全身无明显毒性；rAAV2/hNGFβ除在大鼠脑内有表达外，其在体内的生物学分布较为广泛。     

拟除虫菊酯诱导大鼠脑组织神经生长因子的表达

目的　为了探讨拟除虫菊酯对中枢神经系统损害的机理。方法　用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR) ,斑点杂交 ,流式细胞术及免疫组织化学技术同时检测了氯菊酯 (PM )和溴氰菊酯 (DM )对大鼠脑组织中神经生长因子 (NGF)表达的影响。结果4种方法检测结果均表明 1次大剂量 (PM1组 ,4 0 0mg·kg- 1)和连续 5d较小剂量 (PM2组 ,2 0 0mg·kg- 1)PM处理后大鼠脑组织NGF的mRNA和蛋白表达增多。其中RT PCR和斑点杂交结果表明各组大鼠大脑皮层和海马的NGFmRNA水平均有显著升高 ;其蛋白表达水平的变化与mRNA升高基本一致。而DM对NGF的影响与PM稍有不同 ,虽然大剂量(DM1组 ,2 5 .0mg·kg- 1) 1次ip和连续 5d较小剂量 (DM2组 ,12 .5mg·kg- 1)ip均可引起NGFmRNA表达的增加 ,流式细胞术结果却表明DM2组海马的NGF蛋白表达水平无明显的增加 ;免疫组化亦表明DM2组皮层及海马各区NGF的蛋白表达均无明显升高。结论　两型拟除虫菊酯对NGF蛋白表达的诱导作用不同 ,而NGF表达的增加可能在其神经损伤修复中有重要意义     

神经生长因子抗体对哮喘模型大鼠肺中趋化素样因子1表达的影响

目的观察神经生长因子(NGF)抗体对OVA诱导的哮喘模型大鼠肺中趋化因子CKLF1的表达变化。方法采用OVA诱导的大鼠哮喘模型,通过腹腔给予NGF(8 ng.kg-1)及NGF抗体(0.1 mg.L-1),采用Western blot、ELISA和免疫组化观察CKLF1在支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中的表达变化。结果 CKLF1在OVA诱导的哮喘模型大鼠肺组织中的蛋白表达升高(P<0.05);NGF抗体能够降低CKLF1的表达;CKLF1在哮喘大鼠BALF中的含量升高(P<0.05),NGF抗体能够降低BALF中CKLF1的含量(P<0.05);NGF对肺组织及BALF中CKLF1的表达没有明显的影响。结论 NGF抗体能够抑制哮喘模型大鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液中CKLF1的表达和释放,改善哮喘症状。