谈谈肥胖与消化道疾病的关系

肠道菌群紊乱 人的消化道黏膜表面生存着数量惊人的微生物群,细菌的细胞数量高达100万亿,是人体细胞数量的10倍。这些细菌帮助人体分解和消化食物,长期进食高脂食物可引起肠道细菌菌群紊乱,使双歧杆菌等对身体有益的细菌数量减少,对身体有害的细菌数量增加,使肠道黏膜产生慢性炎症,导致肠黏膜的通透性增加、营养物质吸收增加,     

早孕绒毛外细胞滋养细胞的体外培养方法

目的:探讨改良人早孕绒毛外细胞滋养细胞原代分离培养方法。方法:建立改良的复合酶消化梯度离心法,分离培养绒毛外细胞滋养细胞,通过免疫细胞化学、Giemsa染色和细胞侵袭实验检测细胞纯度、数量及生物学活性(侵袭性),并与低浓度胰蛋白酶消化方法进行比较。结果:低浓度胰蛋白酶消化方法和改良的复合酶消化梯度离心法所得贴壁细胞量分别为(11.69±1.26)×104和(17.21±0.51)×104,两者比较有统计学差异(P<0.05);绒毛外细胞滋养细胞纯度分别为(63.20±7.12)%和(92.10±5.11)%,两者比较有统计学差异(P<0.05),穿膜细胞数分别为(36.10±3.28)和(66.20±5.17),两者比较有统计学差异(P<0.05),提示该实验室改良的复合酶消化梯度离心法所得细胞总量、绒毛外细胞滋养细胞纯度及数量均显著高于低浓度胰蛋白酶消化方法。结论:该实验室改良的复合酶消化梯度离心法获得绒毛外细胞滋养细胞纯度和数量显著提高。     

兔子宫平滑肌细胞的原代培养与鉴定

目的研究子宫平滑肌细胞(MSMC)的培养方法及一些生物学特性。方法运用酶消化后组织贴块法及胶原酶Ⅰ消化法进行兔子宫平滑肌细胞的培养,并用倒置生物显微镜、HE染色进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。结果运用此两种方法成功培养了兔子宫平滑肌细胞,培养的细胞呈典型“峰-谷”样生长,HE染色观察细胞呈梭形,胞浆丰富,核大圆形或椭圆形。免疫组化S-P法检测a-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(a-SMActin)表达强阳性。经传代纯化,纯度达99%以上,细胞生长特性未见异常改变。结论酶消化后组织贴块法及胶原酶Ⅰ消化法培养的兔子宫平滑肌细胞生长稳定性好,培养与纯化能同步进行,方法简便,经济。     

组织块法结合胰蛋白酶消化法培养分离人口腔黏膜上皮细胞和成纤维细胞

目的介绍组织块法结合胰蛋白酶消化法培养、分离人口腔黏膜上皮细胞和成纤维细胞。方法选择10例患者第三磨牙拔除时切除的龈瓣,大小为(1×0.5)cm~2/块。将带有上皮层和固有层的组织块种植于培养瓶中,待组织块细胞增殖后,通过胰蛋白酶消化法分离获得原代上皮细胞和成纤维细胞。采用免疫荧光和HE染色进行细胞鉴定。结果组织块植入后的第2 d~3 d可看到组织块周边出现新分裂增殖的细胞,14 d细胞增殖达到0.5 cm~1.0 cm后,进行初次传代。胰蛋白酶消化法可初步分离出上皮细胞和成纤维细胞。通过在不同培养基中的传代培养,2种细胞可以获得进一步纯化。结论组织块法结合胰蛋白酶消化法能快速高效的培养分离口腔上皮细胞和成纤维细胞,是一种实用的口腔黏膜细胞培养方法。     

20例人早孕绒毛滋养细胞的体外培养

目的建立快速、有效的绒毛滋养细胞体外培养的方法。方法采用0．25％胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法消化绒毛组织,用胰蛋白酶消化传代体外培养,通过光镜对培养出的细胞进行形态评价;用细胞角蛋白和波形蛋白单克隆抗体检测细胞纯度。结果联合消化法的细胞生长迅速,接种6～8d可以传代,原代细胞生长时间明显缩短,所得细胞纯度达95％。结论联合消化法是一种较有效的人早孕绒毛滋养细胞培养方法。     

大鼠肾细胞分离制备及培养方法的比较

目的比较胶原酶消化法、胰蛋白酶消化法和胶原酶、胰蛋白酶两步消化法(简称两步消化法)对大鼠肾细胞分离效果及细胞产量的影响,以及不同培养基(MEM、RPMI1640)、鼠龄(乳鼠、成年鼠)对细胞产量、质量、增殖率和乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的影响。方法分别对两组Wistar大鼠(乳鼠和成年鼠)用三种不同的消化方法制备大鼠肾组织细胞悬液,分别在MEM培养液和RPMI1640培养液中原代培养,培养48小时之后第一次传代,观察细胞质量,计算细胞产量,MTT法检测传代细胞24~48小时之间的增殖率,生化分析仪检测传代细胞第1~7天培养液中LDH漏出量。结果胶原酶消化法和两步消化法的肾细胞产量显著高于胰蛋白酶消化法(P<0.01),两步消化法的细胞质量优于胶原酶消化法,MEM培养液和RPMI1640培养液对细胞产量、增殖率和LDH漏出量的影响均无显著性差异,乳鼠的肾细胞产量显著高于成年鼠(P<0.01)。结论两步消化法对于肾细胞的分离制备尤为适合,MEM培养液和RPMI1640培养液均适于肾细胞的培养,乳鼠比成年鼠更适合肾细胞的制备。     

创伤性脑损伤后肠黏膜细胞凋亡和c-fos基因表达

目的:研究创伤性脑损伤(TBI)后小肠黏膜细胞凋亡及c-fos基因表达,探讨肠黏膜上皮细胞凋亡在破坏肠黏膜屏障中的作用及c-fos基因表达与凋亡的关系.方法:雄性Wistar大鼠,随机分为假手术(对照)组和脑创伤后3 h、12 h、24h、72 h和7 d组,采用自由落体撞击致重型颅脑损伤.在各时相点取空肠近端,应用TUNEL法观测小肠黏膜细胞凋亡,应用免疫组化法观察c-fos基因的表达.结果:①凋亡细胞以肠黏膜上皮细胞为主;②脑损伤后3 h肠黏膜上皮即出现明显凋亡,凋亡细胞的数量以伤后72 h最多,分布于绒毛顶端,后延伸至绒毛中下部;③脑损伤后肠黏膜上皮细胞的c-fos基因表达逐渐增强,主要出现在上皮细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞,伤后24h、72h和7d的表达明显升高.结论:创伤性脑损伤可引起大鼠小肠黏膜细胞明显凋亡和c-fos基因的显著表达.     

人胎盘滋养细胞分离培养及HPV6感染研究

目的研究人胎盘滋养细胞分离纯化培养及人乳头瘤病毒6型(HPV6)感染后其生物学特性的变化。方法用酶消化法和Percoll密度梯度离心分离培养人胎盘滋养细胞,免疫细胞组化染色鉴定其纯度,以HPV6感染后检测滋养细胞凋亡率。结果获得纯化的滋养细胞,HPV6感染48h后检测其凋亡率为(38.26±6.38)%。结论人乳头瘤病毒6型能感染滋养细胞并诱导其凋亡。     

n-3多不饱和脂肪酸对大鼠小肠移植慢性排斥肠黏膜细胞凋亡的抑制作用

目的: 探讨大鼠小肠移植后移植肠发生慢性排斥时,口服n-3多不饱和脂肪酸对移植肠黏膜细胞凋亡、颗粒酶B和穿孔素表达的调控作用. 方法: 将大鼠分为三组:①Lewis- Lewis组,口服玉米油;②F344-Lewis组,口服玉米油;③F344-Lewis组,口服鱼油.所有受鼠在移植术后16周取材检测.用流式细胞法检测肠黏膜细胞凋亡,RT-PCR法检测穿孔素和颗粒酶的表达. 结果: 慢性排斥发生后,移植肠黏膜细胞凋亡率、颗粒酶B和穿孔素的表达明显增加.口服鱼油可抑制移植肠黏膜细胞的凋亡、颗粒酶B和穿孔素的表达. 讨论: 口服n-3多不饱和脂肪酸能抑制慢性排斥期移植肠的排斥反应,提高受鼠和移植物的存活率,延缓移植物的慢性失功.     

胎盘Hofbauer细胞的体外培养和鉴定

目的 通过对早孕胎盘绒毛膜Hofbauer细胞的分离,纯化和培养,寻找一种稳定、简便的,可获得较高纯度Hofbauer细胞的培养方法,以满足后续实验要求.方法 通过胰酶/胶原酶联合消化法对妊娠6～10周绒毛组织进行消化,获得单细胞悬液,根据不同细胞贴壁时间的差异,对Hofbauer细胞进行纯化,并通过免疫组织化学法对Hofbauer细胞进行鉴定.结果 获得了较高纯度的胎盘Hofbauer细胞,免疫组化法鉴定CD68阳性,细胞生长状态良好.结论 利用胰酶/胶原酶联合消化法及差异贴壁法可以获得满意的人胎盘Hofbauer细胞.     

具有细胞毒素相关蛋白和细胞空泡毒素的幽门螺杆菌与消化性溃疡的相关性研究

目的探讨能产生细胞毒素相关蛋白（ＣａｇＡ）与细胞空泡毒素（ＶａｃＡ）的幽门螺杆菌（ＨＰ）与消化性溃疡的关系。方法用免疫印迹法检测分析经尿素酶及组织学Ｇｉｅｍｓａ染色证实ＨＰ阳性的血清标本共１１２份，其中慢性胃炎６５份，消化性溃疡４７份。观察两种疾病中ＣａｇＡ与ＶａｃＡ阳性的ＨＰ检测结果。结果慢性胃炎组、消化性溃疡组的ＣａｇＡ与ＶａｃＡ阳性的ＨＰ感染率分别为３３．８５％和５９．５７％，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。结论具有ＣａｇＡ与ＶａｃＡ的ＨＰ菌株与消化性溃疡发病密切相关     

大型成年哺乳类动物绵羊阴道平滑肌细胞的原代培养改进方法研究

目的探索原代培养成年大型哺乳动物绵羊阴道平滑肌细胞(vaginal smooth muscle cells,VSMC)改良方法。方法成年绵羊阴道平滑肌取材,利用预消化组织块法(将组织剪碎呈1 mm3大小组织块,0.1%Ⅰ型胶原酶消化20 min,0.1%胰酶-EDTA与0.1%Ⅰ型胶原酶混合溶液再次消化30 min,将组织块种于培养瓶)原代培养VSMC,并与传统组织块法和酶消化法进行细胞萌出速度及增殖速度比较,提高VSMC原代培养效率;免疫荧光染色法和western bloting法检测平滑肌细胞标志物calponin及a-SMA表达鉴定VSMC。结果预消化组织块法获得原代VSMC速度快于传统组织块法和酶消化法,3 d可见细胞萌出,9 d可达80%细胞融合,"峰谷"特征明显,而酶消化法至12 d增殖至80%细胞汇合,传统组织块法约7 d可见细胞萌出,14 d可达80%细胞汇合;VSMC平滑肌标志物calponin和a-SMA均呈阳性表达(P0.05);VSMC可扩增代数有限,扩增7代后即表现出细胞形态改变,增殖缓慢,胞核内出现空泡,死亡细胞增加等表现。结论预消化组织块法可较快速多量获得绵羊VSMC。     

丹参肠内营养制剂对MODS大鼠肠黏膜细胞凋亡及ICE mRNA表达的影响

目的:研究丹参EN制剂对多器官功能障碍综合征(S-MODS)模型大鼠空肠黏膜上皮细胞凋亡及细胞凋亡调控基因ICE mRNA表达的影响. 方法:将55只大鼠随机分为对照组、模型组、能全素组和丹参组.模型组、能全素组和丹参组分别经鼠尾静脉注射内毒素(LPS),建立S-MODS模型.对照组和模型组大鼠除正常喂养外,再用等渗盐水灌胃;能全素组给予EN制剂能全素灌胃;丹参组用丹参EN制剂灌胃.实验期为12 d.采用RT-PCR法检测空肠黏膜上皮细胞的凋亡,观察各组空肠黏膜上皮细胞ICE mRNA基因表达情况. 结果:丹参组肠黏膜上皮细胞凋亡数低于模型组,且与能全素组有显著性差异(P<0.05).丹参组空肠黏膜上皮ICE mRNA表达明显低于模型组(P<0.05),与对照组比较,无显著性差异(P>0.05). 结论:丹参EN制剂可能通过下调ICE mRNA表达,减少肠黏膜上皮细胞的凋亡,进而发挥防治S-MODS的作用.     

宫颈液基细胞学139例ASC-H临床病理分析

目的分析宫颈液基细胞学诊断非典型鳞状上皮细胞,不能除外鳞状上皮内高度病变（ASC-H）在宫颈病变中的诊断意义。方法回顾性分析本院139例诊断ASC—H患者行阴道镜下宫颈活检结果的临床资料。结果液基细胞诊断ASC-H139例中,组织病理学诊断宫颈黏膜慢性炎18例（12．95％）,宫颈黏膜慢性炎伴鳞状上皮增生26例（18．71％）,宫颈黏膜慢性炎伴挖空细胞改变、HPV感染者24例（17．27％）,CINI16例（11．51％）,CINII19例（13．69％）,CINIII25例（18．oo％）鳞状细胞癌（scc）11例（7．91％）。结论液基细胞学用于宫颈病变筛查,能早期发现宫颈癌前病变及宫颈癌;疑诊宫颈鳞状上皮内高度病变者行阴道镜活检能发现一定比例的宫颈鳞状上皮内病变,可避免宫颈鳞状上皮内病变及宫颈癌的漏诊。     

维生素B2：女性性爱的润滑剂

维生素B2俗称核黄素，是促进细胞呼吸和新陈代谢的一种重要的辅酶，当缺乏时，可导致口角炎、结膜炎、唇炎、舌炎、阴道炎，主要是由于黏膜干燥、变薄、损伤、出血，使阴道干涩、受损、隐痛不适，对性生活厌倦、畏惧、沮丧。当适量补充维生素B2后，促进了黏膜层细胞代谢，改善了细胞的分泌及修复功能，     

以支持细胞为饲养层培养冻存后大鼠精原干细胞研究

目的：研究冻存的精原干细胞体外分离培养的生物学特性,为今后冻存精原干细胞的批量培养和长期利用提供依据。方法：取7～8d的sD雄性大鼠,分离睾丸组织,用两步酶消化法和差速时间贴壁法,分离精原干细胞和支持细胞。以二甲基亚砜（DMSO）作冷冻保护液,将分离到的精原干细胞放置于液氮中冻存;利用体外培养体系,进行支持细胞的培养和饲养层的制备;然后将复苏的精原干细胞接种到支持细胞饲养层上培养,并利用碱性磷酸酶鉴定精原干细胞。结果：用两步酶消化法和差速贴壁法能分离到纯度较高的精原干细胞和支持细胞,冻存的SSCs解冻后能在支持细胞饲养层上贴壁、生长、增殖,碱性磷酸酶活性鉴定呈阳性。结论：冻存后精原干细胞在体外支持细胞饲养层上呈集落样生长,并能长时间维持细胞集落形态及数目,可为体外研究药物或毒物干扰精原干细胞提供细胞模型。     

秋冬要防胃溃疡酿“血案”

消化性溃疡是指胃、十二指肠黏膜在某种情况下被胃酸和胃蛋白酶消化而造成的黏膜缺损，常易反复发作，秋季气候转凉也是消化性溃疡好发的时期。     

食管鳞状细胞癌中Bax、XIAP与细胞凋亡的关系

目的研究食管鳞状细胞癌中Bax、XIAP的表达及其与细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学SABC法检测Bax与XIAP在食管鳞癌与正常食管黏膜中的表达。结果 Bax蛋白在正常食管粘膜中的表达高于食管鳞癌(P0.05),XIAP在食管鳞癌中的表达高于正常食管黏膜,差异具有统计学意义(P0.05);Bax与XIAP的表达与食管鳞癌的组织学分级与临床病理分期无关。结论 Bax与XIAP可能通过细胞凋亡参与食管鳞癌的发生发展,二者的异常表达对食管鳞癌的侵袭与预后的判断具有一定的参考价值。     

IL-13与支气管哮喘

支气管哮喘是由多种细胞和细胞成分参与的气道慢性炎症性疾病，以肺部可逆性阻塞、气道黏膜炎症和气道高反应性为特征。随着分子生物学和免疫学的发展，人们逐渐认识到T淋巴细胞释放的多种多功能的细胞因子在炎症反应中起着关键的作用。TH0细胞可分化为TH1型和TH2型细胞，其中，TH1型细胞能产生IFN-7，IL-2等细胞因子；TH2型细胞能产生IL-4，IL-5，IL-13，IL-6等细胞因子。TH1／TH2型细胞因子平衡，在哮喘发病机制中起着重要作用，其中IL-13作为近年发现的细胞因子正成为研究热点。     

食管鳞状细胞癌发生发展过程中环氧合酶-2表达的研究

目的　研究环氧合酶 2 (cyclooxygenase 2 ,cox 2 )在正常食管黏膜、食管黏膜鳞状上皮不典型增生和食管鳞状细胞癌组织中的表达 ,探讨cox 2在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用。方法　用免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹方法检测 86例食管鳞癌、4 7例食管黏膜鳞状上皮不典型增生和 4 2例癌周正常组织cox 2的表达。结果　食管鳞状细胞癌、食管黏膜鳞状上皮不典型增生组织中cox 2表达显著增高 ,免疫组织化学染色积分分别为 2 .6 7± 1.77和 2 .19± 1.79,而正常食管黏膜组织的cox 2无表达或表达极弱 ,免疫组织化学染色积分为 0 .71± 0 .4 6。蛋白质免疫印迹检测的结果与免疫组织化学的检测结果相似。在食管鳞状细胞癌、食管黏膜鳞状上皮不典型增生组织中 ,cox 2表达与细胞增殖活力显著相关 ,而在正常食管黏膜组织中二者无相关关系。食管鳞状细胞癌cox 2的表达与其临床病理特征如年龄、性别、癌肿大小、分化程度、临床分期、淋巴结是否转移等无关。结论　cox 2在食管黏膜鳞状上皮不典型增生和食管鳞状细胞癌组织中表达增高 ,并与细胞增殖活力有关 ,提示cox 2在食管鳞状细胞癌发生发展过程中起重要作用。