免疫抑制剂干扰联合瘤细胞接种构建肝癌移植瘤小鼠模型

目的：探讨构建肝癌移植瘤动物模型的最佳方法。方法选用BALB/c小鼠160只,随机分为地塞米松组、肝癌细胞注射组、地塞米松加肝癌细胞注射组及空白对照组,每组40只,雌、雄各半。地塞米松组在小鼠腹腔内注射地塞米松;肝癌细胞注射组于不同时间在肝脏直接接种H22肝癌细胞株3次;地塞米松加肝癌细胞注射组将上述2种方法联合使用;空白对照组注射生理盐水。1个月后,颈椎脱臼处死小鼠,取其肝组织,计算肝指数,苏木精-伊红染色（HE）后观察肝组织病理变化。结果地塞米松组、空白对照组未发现肝组织癌变,肝癌细胞注射组、地塞米松加肝癌细胞注射组癌变的百分比分别为71.4%（20/28）、91.2%（21/23）。结论肝癌细胞直接接种小鼠肝脏及联合地塞米松干扰均可建立肝癌移植瘤动物模型,但联合地塞米松干扰建模的成功率明显升高。     

中药提取物对小鼠肝癌移植瘤作用研究

目的探讨大黄素、苦参素、黄连素和黄芩苷中药提取物对小鼠肝癌移植瘤的作用。方法选用BALB／c小鼠,构建肝癌移植瘤。随机抽取肝癌模型小鼠共105只,用沸水溶解大黄素等中药提取物为不同浓度的药液．隔天对模型小鼠灌胃给药,连续灌胃15次,每种药物每个浓度单独给药。末次灌胃后7d,分别随机抽取小鼠（每组2只）,颈椎脱臼处死,取肝组织,苏木精-伊红染色后观察肝组织病理变化。结果大黄素、苦参素、黄连素和黄芩苷组在浓度128μg/mL时,肝组织癌变明显减少,而五味子组变化不大。结论大黄素、苦参素、黄连素和黄芩苷对肝癌移植瘤有明显的抑制作用。     

荷肝癌小鼠血浆和肿瘤组织支链氨基酸代谢变化

目的:探讨荷肝癌小鼠游离支链氨基酸(BCAA)代谢变化,为肝癌患者氨基酸失衡疗法提供理论依据.方法:采用HITACHI L-8800型氨基酸分析仪,检测10例荷肝癌H22的ICR小鼠血浆和肿瘤组织游离BCAA,以10例正常ICR小鼠作为对照组,比较2组血浆BCAA浓度,对肿瘤组织与对应血浆BCAA浓度及肿瘤体积进行相关分析.结果:荷瘤组血浆缬氨酸、亮氨酸、总BCAA低于对照组[(107.38±25.39)、(62.74±21.55)、(228.86±56.42)vs(150.64±26.18)、(90.84±25.96)、(300.89±58.44)μmol/L],差异有统计学意义(t分别为3.751、2.630及2.804,P<0.05或P<0.01),2组异亮氨酸比较差异无统计学意义.肿瘤组织缬氨酸(0.192±0.020)μmol/L、亮氨酸(O.105±4).019)μmol/L与血浆对应氨基酸呈负相关(r分别为-0.726和-0.671,P<0.05),异亮氨酸与血浆对应氨基酸无明显相关性;肿瘤组织异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸与肿瘤体积呈正相关(r分别为0.936、0.933、0.897,P<0.01).结论:肝癌对3种支链氨基酸的代谢有区别,其中缬氨酸可能是肝癌的必需氨基酸.     

个体化裸鼠荷人肺癌肿瘤模型的建立

目的:建立人肺癌个体化可传代组织块动物模型.方法:组织块移植组将直径2mm的人肺癌新鲜标本癌组织块移植于BALB/C裸鼠背部皮下组织内,每例人肺癌新鲜标本均移植入5只裸鼠体内,成瘤者为第1代.取第1代移植瘤组织块以相同方法每例标本移植于另5只BALB/C裸鼠背部皮下组织内,成功者为第2代.重复上述传代方法得到第3代移植瘤.将人肺癌细胞株A549、H1795分别移植于BACLC裸鼠背部皮下组织内,成瘤达500 mm3后取癌组织块.分别取实验组的原代人肺癌肿瘤及第1、2、3代移植瘤部分组织,及作为对照的细胞系移植瘤组织,固定于10％福尔马林溶液中,石蜡包埋、切片、HE染色,光镜下观察比较其形态异同.结果:组织块移植组瘤细胞不仅保留了人肺癌细胞的异型性,还保持原有排列结构;而作为对照的细胞系移植瘤细胞失去了原有的排列结构,仅保留了癌细胞的异型性.结论:利用不同患者的手术切除肺癌标本所建立的裸鼠荷人肺癌肿瘤模型具有个体化特征,为肺癌个体化治疗的研究提供依据.     

建立人多发性骨髓瘤NOD/SCID小鼠皮下移植瘤动物模型

目的探讨建立人多发性骨髓瘤(MM)NOD/SCID小鼠皮下移植瘤动物模型的方法。方法在NOD/SCID小鼠皮下接种1×107个人MM细胞株(MM1.S或RPMI-8226),每3~4 d记录小鼠体重、肿瘤体积及生存期;如肿瘤生长超过规定最大径仍未死亡,即处死小鼠,取其皮下移植瘤进行病理检测与CD138免疫组化染色。结果总成瘤率为75%(9/12);荷瘤小鼠皮下移植瘤形成的高峰时间为接种后第15~18天,瘤体体积在接种后第35~40天达高峰,平均体积分别为1710.8 mm3(MM1.S组)与1749.5 mm3(RPMI-8226组);NOD/SCID小鼠在荷瘤后第13~14天即开始有死亡,生存期最长达38~42 d,两组小鼠的中位生存时间均为荷瘤后28 d;皮下移植瘤病理检测与CD138检测证实瘤组织为浆细胞来源。结论于NOD/SCID小鼠皮下接种人MM细胞(1×107个),建立人MM移植瘤动物模型成功率高,且无须射线预处理、技术要求较低、操作过程简单及瘤体观察方便,可作为MM动物实验研究的主要模型之一。     

三氧化二砷对小鼠肝癌生物学行为的影响

目的研究三氧化二砷对HepA小鼠肝癌生长、血管生成及侵袭与转移特性的影响。方法建立皮下种植肝癌小鼠模型,用药后观察小鼠肿瘤体积变化及抑瘤率;利用免疫组织化学观察移植瘤中血管内皮生长因子（VEGF）,对移植瘤的微血管密度（MVD）进行计数。结果三氧化二砷对小鼠肝癌瘤体体积和抑瘤率均具有抑制作用;三氧化二砷能抑制肿瘤新生血管生成,降低VEGF的表达,并能降低肿瘤MVD,与未用药对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论三氧化二砷能缩小肿瘤体积、增加抑瘤率,并能降低VEGF的表达,减少微血管密度。     

裸鼠人肝癌移植瘤耐药模型的建立

目的 建立裸鼠人肝癌(HCC)移植瘤多药耐药(MDR)模型.方法 体外培养肝癌细胞系HepG2,建立裸鼠的皮下肿瘤.诱导组(12只)用阿霉素(ADM)间歇腹腔注射,诱导建立裸鼠肝癌耐药模型;对照组(4只)腹腔注射等容积的生理盐水.MTT比色法检测耐药细胞的MDR,RT-PCR和流式细胞术检测肿瘤耐药基因MDR1-mRNA和P-糖蛋白(P-gp)的表达,罗丹明试验观察该蛋白功能.结果 移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征.诱导组肝癌细胞MDR1-mRNA和P-gp蛋白的表达均明显高于对照组.诱导组HepGZ对ADM的耐药指数增加了15.6倍.耐药细胞有较强的药物外排功能.结论 成功地建立了与临床肝癌相似的裸鼠肝癌耐药模型.     

不同品系小鼠急性胰腺炎并发肺损伤模型的比较

目的:比较小鼠的品系对诱导急性重症胰腺炎并发肺损伤模型的影响.方法:将昆明白、ICR及Balb/c 3种品系小鼠各24只于各品系内均分为12、20 h对照组及12、20 h实验组,每组6只.将3种不同品系小鼠各实验组腹腔内注射雨蛙素诱导并建立急性重症胰腺炎模型,雨蛙素(50 μg/kg)稀释于生理盐水中,每小时注射1次,连续腹腔注射12 h、20 h;各相应对照组腹腔注射等量生理盐水.各组末次注射后1 h下腔静脉取血测血淀粉酶,取胰腺、肺脏组织行病理学检查.观察不同品系小鼠注射雨蛙素12h、20h后胰腺、肺组织形态学及血淀粉酶水平差异.结果:昆明白12h实验组及ICR20h实验组仅出现胰腺轻微损伤.Balb/c 12h、20h实验组及昆明白20h实验组造模成功,胰腺腺泡广泛变性、坏死及空泡化,炎症细胞大量浸润;肺部间质及部分肺泡腔有炎细胞浸润、肺不张、肺泡间隔增宽.各品系内12 h、20 h实验组与相应对照组血淀粉酶比较差异有统计学意义(P<0.05).Balb/c 12 h、20 h实验组各测量值比较差异无统计学意义(P>0.05).Balb/c 12 h实验组与昆明白20 h实验组病理学检测结果比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:Balb/c小鼠对药物反应灵敏,用药量少,更适用于急性重症胰腺炎模型的研究.     

芝麻素对H22肝癌荷瘤小鼠抑癌作用的实验研究

目的:研究芝麻提取物芝麻素对H22肝癌荷瘤小鼠的抑癌作用及其对荷瘤小鼠白细胞的影响。方法:将移植H22肝癌瘤株的昆明种小鼠分成:模型组(生理盐水)、环磷酰胺组(0.2g/L)、芝麻素高浓度组(15g/L)、芝麻素低浓度组(1.5g/L);末次用药第2天取小鼠尾血,计数白细胞;处死小鼠剥瘤称质量,计算抑瘤率。结果:(1)瘤质量芝麻素高浓度组与模型组差异无统计学意义(P>0.05),芝麻素低浓度组瘤质量较模型组、芝麻素高浓度组均降低(P<0.05),但仍比环磷酰胺组高(P<0.05)。(2)抑瘤率芝麻素低浓度组抑瘤率高于高浓度组,但仍低于环磷酰胺组。(3)白细胞模型组较正常组高(P<0.01),环磷酰胺组较正常组低(P<0.01),芝麻素高浓度组和低浓度组与正常组差异均无统计学意义(P>0.05),但均比环磷酰胺组白细胞高(P<0.01)。结论:芝麻素对小鼠H22肝癌有一定的防治作用,低浓度比高浓度有效;其对肝癌的直接治疗效果不如环磷酰胺明显,但其毒性小于环磷酰胺。     

阿霉素对裸小鼠人肝癌原位移植瘤多药耐药性的影响

目的　探讨阿霉素对裸小鼠原位移植人肝癌多药耐药性的影响 ,并研究其耐药机制。方法　人肝癌 (BEL 740 2 )裸小鼠原位移植 ,用阿霉素腹腔注射诱导耐药 ,经MTT法检测原代培养的耐药细胞对抗癌药的敏感性 ,以流式细胞仪检测癌细胞表面mdr1基因产物P170的表达及功能。以裸小鼠原位移植人肝癌模型观察阿霉素对耐药组的疗效。结果　移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征 ,耐药细胞表面P170表达为 75 45 %± 5 6 7% ,而对照组表达仅 4 2 5 %± 1 2 8% (P <0 0 1) ,对阿霉素的耐药倍数提高了 16 7倍 ,对羟基喜树碱和表阿霉素具有交叉耐受性(13 7倍和 7 5倍 )。耐药细胞表面P170有较强的药物外排功能。诱导后的肝癌在体内对阿霉素获得了明显的抗性。结论　阿霉素较易诱导原位移植于裸小鼠的人肝癌多药耐药性的产生 ,耐药机制主要与P170的过度表达有关     

血管内皮生长因子受体-3抗体对人喉鳞癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)抗体对人喉鳞癌裸鼠移植瘤是否具有生长抑制作用。方法利用人喉鳞癌细胞株Hep-2细胞建立裸鼠喉癌模型,分成2组,每组12只,瘤周注射用药。观察肿瘤体积,生长曲线以及抑瘤率。结果 VEGFR-3抗体可以引起荷瘤体积和质量的减少,较0.9%氯化钠注射液对照组差异有统计学意义(t=11.64,P<0.05)。VEGFR-3抗体组抑瘤率为48.21%。结论阻断VEGFR-3受体有望成为喉癌淋巴结转移预防和治疗的潜在靶点。     

芪麦汤对糖尿病模型小鼠降血糖作用的实验研究

目的 观察芪麦汤对糖尿病模型小鼠的降糖及降糖增效作用,初步探索该方在糖代谢调节方面的药效.方法 四氧嘧啶高血糖模型小鼠随机分为芪麦汤低、中、高剂量组,芪麦汤低、中、高剂量+二甲双胍组,二甲双胍对照组,模型对照组及正常对照组.给药30 d,结束后测空腹血糖及糖负荷后2h血糖.结果 中、高剂量芪麦汤组对糖尿病模型小鼠空腹血糖[( 15.56±9.32) mmol/L,t =2.43;(17.16±8.03) mmol/L,t=2.19]、糖负荷后2h血糖[(15.57±8.13) mmol/L,t =3.83;( 16.41±8.15) mmol/L,t =3.63]均有明显的降低作用(P＜0.05 ～0.01);中、高剂量芪麦汤+二甲双胍组明显降低模型小鼠空腹血糖[(12.18±7.32) mmol/L,t =2.68;( 12.97±6.95) mmol/L,t =2.54]、糖负荷后2h血糖(15.19±7.52) mmol/L,t=2.68;( 12.96 ±5.93) mmol/L.t=3.25]与单用二甲双胍差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).芪麦汤单用或与二甲双胍合用均可减少模型小鼠饮水量与进食量(P＜0.05或P＜0.01),对模型小鼠体质量均无明显影响.结论 芪麦汤具有明显降低糖尿病模型小鼠空腹血糖及糖负荷后2h血糖的作用,具有增强二甲双胍降糖的作用.能减轻模型小鼠多饮多食状况.     

P53和VEGF在SKOV3荷瘤裸鼠不良心理应激模型血清及移植瘤中的表达及意义

目的:探讨不良心理应激对SKOV3荷瘤裸鼠血清及移植瘤中P53、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白水平的影响.方法:建立荷卵巢癌裸鼠不良心理应激模型,采用ELISA检测正常对照组(A)、单纯应激组(B)、单纯荷瘤组(C)和荷瘤应激组(D)各10只小鼠的血清P53和VEGF浓度,用Western blot方法分析C组和D组移植瘤中P53、VEGF蛋白表达情况;另取32例荷瘤应激和24例单纯荷瘤的裸鼠移植瘤标本,免疫组化检测P53和VEGF的蛋白表达水平.结果:A组与B组血清P53和VEGF含量比较差异无统计学意义(P＞0.05),C组的P53、VEGF含量均明显高于A组(P＜0.01),D组的血清P53、VEGF与B、C组相比差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);D组P53、VEGF的蛋白灰度值明显高于C组(P＜0.05);免疫组化结果示P53蛋白在荷瘤应激组和单纯荷瘤组的阳性表达率分别为87.5%和62.5%,VEGF蛋白在2组的阳性表达率分别为93.8%和70.8%,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:不良心理应激明显促进荷瘤鼠SKOV3移植瘤生长,可能与P53和VEGF有关;P53及VEGF有望成为心理肿瘤学的分子靶标.     

瑞香狼毒提取物对肝癌原位移植瘤小鼠的生命延长作用

目的观察瑞香狼毒提取物对肝癌原位移植瘤小鼠的生命延长作用。方法从山西省吕梁山区采集瑞香狼毒,采用水提醇沉的方法制备药物;建立小鼠肝癌原位移植瘤动物模型,采用灌胃给药方法,观察瑞香狠毒提取物对荷瘤动物的生命延长作用。结果瑞香狼毒提取物高、中、低剂量组小鼠平均生存时间分别为(14.7±1.9)d、(13.0±3.4)d和(16.2±3.4)d,模型对照组小鼠平均生存时间为(12.9±2.0)d,阳性对照组小鼠平均生存时间为(12.7±3.4)d,与模型对照组比较,瑞香狼毒低剂量组生命延长率为25.15%,与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞香狼毒提取物在适当剂量下能延长肝癌H22荷瘤小鼠的生存时间,对实验性小鼠肝癌可以起到显著的抑制作用。     

尼可胺对H22肝癌荷瘤小鼠的放射增敏作用

目的:探讨尼可胺对荷H22肝癌小鼠的放射增敏作用。方法:建立H22肝癌小鼠模型,按照给药和照射的不同,分为空白对照组、单纯照射组、阳性对照(烟酰胺、甘氨双唑钠)组、尼可胺(高、中、低)组。经照射后,观察H22肝癌小鼠肿瘤生长情况,记录肿瘤照射后生长时间,计算肿瘤生长延缓时间及各组的增敏系数(EF)。照射后28d时处死小鼠,剥瘤称质量,计算抑瘤率。结果:尼可胺高、中、低组较单纯照射组均能增加辐射敏感性,抑制肿瘤的生长,且尼可胺高剂量组的增敏系数和抑瘤率均高于其母体化合物烟酰胺和甘氨双唑钠,差异均有统计学意义(均P<0.05或P<0.01)。结论:较高剂量的尼可胺对H22肝癌小鼠肿瘤生长有较强的抑制作用和放射增敏效果。     

人鼻咽癌肝转移灶裸小鼠移植瘤模型的建立及生物学初步研究

1995年1月，从1例鼻咽癌肝转移尸检中取出转移部分的肝组织，进行裸小鼠异种移植获得成功，命名为CNT-1，对此瘤我们进行了生长状况、病理组织学及染色体和有关EB病毒DNA等方面的检测。1材料和方法1．1实验动物T淋巴细胞缺陷裸小鼠，80只，雌雄兼用，鼠龄为3～12周，NC系，nu／nu。由中国预防医学科学院病毒学研究所肿瘤室和南通医学院提供，部分由我所繁殖。裸小鼠置于带过滤罩笼内饲养，饮水、垫料均经高压消毒处理。实验过程基本达到SPF条件。     

羧甲基壳聚糖温敏凝胶对小鼠L929细胞增殖的影响

目的:研究自制羧甲基壳聚糖温敏凝胶对小鼠肺成纤维细胞(L929)增殖的影响及其组织相容性.方法:用羧甲基壳聚糖(CMCS)与甘油磷酸盐(GP)互配,制备羧甲基壳聚糖温敏凝胶,22只小鼠分为正常对照组1只、空白对照组3只,2％凝胶组和5％凝胶组各9只.采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)分别测定质量浓度为50、10、2、0.4、0.08倍的羧甲基壳聚糖温敏凝胶浸提液对体外培养的L929细胞的增殖情况;分别将2％和5％的温敏凝胶植入小鼠皮下,于3、7、14d处死,常规组织切片,HE染色观察凝胶周围组织的炎症反应.结果:培养24 h～96 h,0.4倍及0.08倍浸提液组与阴性和阳性对照组的OD值差异有统计学意义(P＜0.05);培养48、72、96 h后,除50倍浸提液组外其余各实验组与阴性和阳性对照组的OD值差异有统计学意义(P＜0.05),其中0.4倍浸提液促细胞增殖作用最为明显;凝胶植入后前3d,实验组以急性炎症为主,随着时间的延长各实验组炎症细胞逐渐减少至消失.结论:羧甲基壳聚糖温敏凝胶对L929细胞有明显的促进作用,且具有良好的组织相容性,在牙周病治疗中具有潜在的应用价值.     

间充质干细胞和单个核细胞异种移植治疗大鼠肝损伤的研究

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)和单个核细胞(MNCs)在四氯化碳(CCl4)诱导性大鼠肝损伤治疗中的作用.方法:无菌条件下取雄性Balb/c小鼠骨髓分离MNCs,培养纯化及流式细胞仪筛选获得MSCs;采用CCl4制作雌性Wistar大鼠肝损伤模型,随机分为MSCs移植组、MNCs移植组和肝损伤对照组.2个细胞移植组分别在CCl4损伤后立即经尾静脉注入小鼠MSCs或MNCs,各组分别于移植细胞输入前即刻(T0)、输入后第1(T1)、7(T2)、14(T3)、28(T4)、42(T5)天断尾取血检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST).6周后处死大鼠,比较肝脏质量指数,肝病理学切片检测肝损伤程度,PCR检测小鼠Sry基因片段植入大鼠肝脏的情况.结果:MSCs CD44、CD90均表达阳性,而CD45表达阴性;2个细胞移植组在T1-4时点ALT和AST浓度差异有统计学意义(P<0.05);与肝损伤对照组比较,MSCs移植组ALT和AST浓度在T1-4时点均降低;MSCs移植组肝损伤修复程度明显好于MNCs移植组和肝损伤对照组;仅MSCs移植组肝内有小鼠Y染色体阳性细胞存在.结论:体外分离培养及扩增的小鼠MSCs可植入到CCl4诱导性肝损伤大鼠的肝组织中,并改善CCl4导致的肝损伤.     

有机硒降小鼠血糖和血脂作用的实验研究

目的:探讨有机硒对糖尿病小鼠血糖和高脂血症小鼠血脂的影响。方法:小鼠180只随机分为6组,对照1组、糖尿病模型组、治疗1组、对照2组、高脂模型组和治疗2组,每组30例,雌雄各半。治疗组给予有机硒蛋白粉,对照组和疾病模型组给予等容积的自来水,末次给药后取血,测定空腹血糖、血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。结果:治疗结束时糖尿病模型组和治疗1组小鼠血糖均高于对照1组;治疗1组小鼠血糖低于糖尿病模型组。高脂模型组TC、TG、LDL-C和HDL-C均显著高于治疗2组和对照2组;治疗2组血清TC、TG、LDL-C和HDL-C均高于对照2组。结论:有机硒蛋白粉具有显著降低高脂血症小鼠血脂和糖尿病小鼠血糖的作用。     

酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402的抑制作用,并分析其可能机制。方法:制备裸鼠移植瘤模型,随机分为生理盐水、氨基酸混合物、环磷酰胺、酪丝亮肽高低剂量等5组,每组12只,观察酪丝亮肽对人肝癌BEL-7402肿瘤组织坏死和凋亡的影响;电镜观察其对肿瘤细胞超微结构改变;流式细胞技术分析其对细胞周期及细胞凋亡率的影响。结果:酪丝亮肽能够诱导肿瘤细胞坏死和凋亡、细胞周期阻抑、显著抑制肿瘤的生长,给药剂量为80μg.kg-1.d-1和160μg.kg-1.d-1时,肿瘤抑制率分别为42%与58%。结论:酪丝亮肽可以显著抑制人肝癌BEL-7402的生长,作用机制与促进肿瘤细胞的凋亡和坏死有关。