日本血吸虫感染小鼠肝脏和脾脏淋巴细胞及其表面程序性死亡配体1表达动态变化的研究

目的初步研究日本血吸虫感染对小鼠肝脏和脾脏淋巴细胞数量及其表面程序性死亡配体1(PD-L1)功能的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为感染组和未感染组,每组15只,感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(20±2)条/鼠。感染后2、 4、 6、 8和10周,分别随机取两组小鼠各3只,颈椎脱臼处死小鼠,分离小鼠肝脏和脾脏的淋巴细胞,采用流式细胞术检测CD3~+T细胞(CD3~+CD19~-)、 CD19~+B细胞(CD3~-CD19~+)、 CD4~+T细胞(CD3~+CD19~-CD4~+CD8~-)和CD8~+T细胞(CD3~+CD19~-CD4~-CD8~+)淋巴细胞比例的动态变化,以及这些细胞群上的PD-L1表达变化。组间差异比较采用ANOVA检验。结果感染日本血吸虫后4～8周,小鼠肝脏和脾脏中的CD3~+T细胞、 CD19~+B细胞和CD4~+T细胞比例均低于未感染组(P 0.05或0.01,P 0.05)。感染日本血吸虫后6周的小鼠肝脏中CD8~+T细胞比例增加[(38.03±7.41)%],与未感染组[(23.37±3.98)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01);但脾脏中无明显变化。在感染日本血吸虫后6周,小鼠肝脏中CD19~+B细胞上PD-L1的表达被显著抑制[(7.25±3.47)%],与未感染组[(22.77±8.90)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01);脾脏相对肝脏较晚,感染后8周CD19~+B细胞上PD-L1的表达被抑制[(22.37±4.01)%],与未感染组[(51.97±1.62)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01),且此后在肝脏和脾脏中保持低水平表达。感染后2～10周,肝脏中的CD3~+T和CD4~+T细胞表面PD-L1的表达低于未感染组(P 0.05或0.01, P 0.05),脾脏中的CD3~+T和CD4~+T细胞表面PD-L1的表达分别于感染后4～8周和6～10周低于未感染组(P 0.05)。肝脏和脾脏中CD8~+T细胞上PD-L1的表达在感染早期无变化,感染后10周比例增加,为(34.80±3.68)%、(31.90±2.53)%,与未感染组[(25.5±0.80)%、(29.91±3.55)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01)。结论日本血吸虫感染BALB/c小鼠后,肝脏和脾脏中CD19~+B、 CD3~+T和CD4~+T淋巴细胞亚群的比例显著降低,但对CD8~+T细胞比例影响不明显。感染对PD-L1在上述淋巴细胞亚群的表达也有相同的变化,在CD19~+B、CD3~+T和CD4~+T细胞上表达受抑制,在CD8~+T细胞上的表达影响较小,且肝脏局部淋巴细胞的变化早于脾脏。     

结核分枝杆菌H37Ra感染对小鼠T细胞及Th1/Th2反应的影响

目的探讨结核分枝杆菌H37Ra菌株(H37Ra)感染对BALB/c小鼠T细胞及Th1/Th2反应的影响。方法建立H37Ra菌株BALB/c小鼠感染模型,设生理盐水(NS)处理小鼠作为对照组。在感染早期(4周)和晚期(8周)分别取小鼠脾脏细胞及淋巴结细胞,或培养后的细胞,经荧光抗体染色后采用流式细胞术对不同感染时期小鼠的T细胞表型进行检测分析。结果实验组小鼠感染H37Ra 4周时与对照组比较,脾脏总T细胞(CD3~+)、CD4~+T细胞百分率(CD3~+CD4~+CD8~-)降低((43.03±5.57)%,t=5.804,P=0.000;(47.76±6.22)%,t=2.327,P=0.042),CD8~+T细胞百分率(CD3~+CD4~-CD8~+)增高((47.72±4.39)%,t=-3.698,P=0.004);与感染4周时比较,感染8周时脾脏总T细胞、CD4~+T细胞百分率增高((68.23±4.38)%,t=-8.712,P=0.000;(57.89±4.93)%,t=-3.125,P=0.011),CD8~+T细胞百分率降低((39.23±3.80)%,t=3.585,P=0.005),且晚期时恢复至正常。H37Ra感染4周和8周时与对照组比较,H37Ra感染对小鼠淋巴结总T细胞(CD90.2~+)及T细胞亚群(CD4~+T细胞及CD8~+T细胞)分布无显著影响(P0.05)。H37Ra感染晚期,与对照组比较,IFN-γ表达升高(加培养液而无TB-PPD组:(7.50±1.60)%,t=-4.173,P=0.002;加入PPD组:(6.80±1.36)%,t=-5.014,P=0.001)。结论 H37Ra感染可影响T淋巴细胞及亚群的分布,并出现Th1反应而未见明显Th2反应,促进了机体的抗结核感染作用。     

莫西沙星序贯疗法在老年下呼吸道感染中的应用及对血清炎症因子的影响

目的探讨莫西沙星序贯疗法在老年下呼吸道感染中的应用及对血清炎症因子的影响。方法 80例老年下呼吸道感染患者按照抽签法分为对照组与实验组各40例,对照组给予左氧氟沙星序贯治疗,实验组给予莫西沙星序贯治疗,比较两组临床疗效、细菌清除情况、炎症因子、T细胞亚群、免疫状态和不良反应。结果实验组总有效率、细菌清除率显著高于对照组(P0.05)。治疗前,两组白细胞介素(IL)-6、IL-8,C反应蛋白(CRP)差异无统计学意义(P0.05);治疗后,实验组IL-6、IL-8、CRP显著低于对照组(P0.05)。治疗前,两组CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+差异无统计学意义(P0.05);治疗后,实验组CD4~+、CD4~+/CD8~+显著高于对照组,实验组CD8~+显著低于对照组(P0.05)。两组不良反应差异无统计学意义(P0.05)。结论老年下呼吸道感染患者应用莫西沙星序贯疗法的效果确切,能够导致血清炎症因子降低,对T淋巴细胞亚群起到改善作用。     

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察

目的 动态观察细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化.方法 将120只Balb/c小鼠按体质量随机分为3组:鼻腔内接种组、口服灌胃组、对照组.将疫苗分别采用鼻腔内接种和口服灌胃免疫实验组小鼠,对照组单次接种10μl磷酸盐缓冲液(PBS)于小鼠鼻腔黏膜.在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18周各剖杀4只小鼠,取脾脏,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的百分比.结果 不同组的小鼠脾细胞CD4+、CD8+亚群百分比比较差异有统计学意义(F值分别为21.56、22.08,P＜0.05),不同周数的小鼠脾细胞CD4+、CD8+亚群百分比比较差异有统计学意义(F值分别为5.75、6.29.P＜0.01).鼻腔内接种组的脾CD4+、CD8+T细胞亚群分别在免疫后6-18、12周升高,在免疫后10、12周达最高水平,其值分别为0.348±0.013、0.090±0.003.与0周(0.230±0.022、0.069±0.015)比较差异有统计学意义(q值分别为7.32、5.32,P＜0.01或＜0.05);口服灌胃组脾细胞CD4+、CD8+T细胞亚群分别在免疫后6～16、8-18周增加,分别在免疫后10、16周达最高水平,其值分别为0.405±0.006、0.096±0.004,与0周(0.230±0.022、0.069±0.015)比较差异有统计学意义(q值分别为7.53、5.35,P＜0.01或＜0.05).结论 CD4+、CD8+T细胞亚群在细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗诱导的小鼠免疫应答中起重要作用.     

弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗免疫小鼠诱导细胞免疫应答的研究

目的观察弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗诱导小鼠产生的细胞免疫应答.方法大量制备重组真核表达质粒pBK-P30,用生理盐水(NS)稀释至1 μg/μl,1次肌注免疫BALB/c小鼠,分别在免疫后5和10周,通过ConA刺激,MTT法测定免疫鼠脾脏T淋巴细胞转化率;使用间接免疫荧光法,用流式细胞仪对CD4+、CDs+T细胞亚群进行测定.结果ConA刺激小鼠脾T淋巴细胞发生增殖反应,pBK-P30免疫组与两对照组及对照组之间的差异均无显著性(P＞0.05).T细胞亚群CD4+、CD8+动态分析,CD4+T细胞在各组增殖均不明显(P＞0.05),但免疫组CDs+细胞数量升高,CD4+/CDs+比率下降,与空质粒pBK-CMV对照组和NS对照组之间差异均有显著性(P＜0.05,P＜0.01),pBK-CMV对照组与NS对照组之间差异也有显著性(P＜0.01).免疫后10周,与NS对照组相比较,免疫组和pBK-CMV对照组CDs+细胞仍升高(P＜0.01),但它们之间的差异无显著性(P＞0.05).结论弓形虫表面抗原P30 DNA疫苗能诱导BALB/c小鼠产生一定的细胞免疫应答.     

细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠LncRNA 031520表达的研究

目的探讨长链非编码RNA031520(LncRNA 031520)分子在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15诱导小鼠免疫保护的表达分析。方法 36只雌性BALB/c小鼠分为PBS对照组、弗氏佐剂组和ZW-15免疫组,12只/组。PBS对照组、弗氏佐剂组分别皮下多点注射PBS溶液和完全/不完全弗氏佐剂100μl/只,ZW-15免疫组注射重组抗原100μl/只(10μg/只)。弗氏佐剂组和ZW-15免疫组初次免疫使用完全弗氏佐剂,加强免疫使用不完全弗氏佐剂。共免疫3次,初次免疫后的2次加强免疫间隔时间为两周。免疫小鼠经麻醉取血,分离血清。采用ELISA法检测特异IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b抗体水平。无菌取脾脏,分离淋巴细胞采用流式细胞术分选CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞及B淋巴细胞群;利用qRT-PCR检测CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞、B淋巴细胞及总淋巴细胞中LncRNA 031520及内参GAPDH的表达;利用流式细胞术检测脾脏CD4~+T淋巴细胞中IFN-γ、IL-4的表达。使用SPSS 17.0统计软件和Graphpad Prism 8.0绘图软件对实验数据进行统计分析。结果小鼠经亲肌肉重组抗原ZW-15免疫后血清特异IgG、IgG1、IgG2a及IgG2b抗体水平均升高,且均显著高于PBS组、弗氏佐剂对照组,差异均有统计学意义(P0.001)。LncRNA 031520在ZW-15免疫组CD4~+T淋巴细胞、总淋巴细胞中相对表达量显著高于PBS对照组和弗氏佐剂对照组(P0.01),在ZW-15免疫组B淋巴细胞及CD8~+T淋巴细胞中相对表达量与PBS对照组及弗氏佐剂对照组相比差异均无统计学意义(均P0.05)。免疫组小鼠脾脏淋巴细胞Th1亚群标志分子IFN-γ表达量为(19.07±3.44)%,显著高于PBS对照组(8.03±2.67)%和弗氏佐剂对照组(9.37±1.25)%(P0.05),Th2亚群标志分子IL-4表达量为(0.79±0.02)%,显著高于PBS对照组(0.44±0.13)%和弗氏佐剂对照组(0.50±0.15)%(P0.05)。结论 LncRNA 031520在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠淋巴细胞中表达上调,可能在亲肌肉抗原抵御细粒棘球蚴感染中发挥免疫保护作用。     

抗H.pylori治疗对胆石症患者胆汁H.pylori DNA、PLA-2活性及免疫功能的影响

背景胆石症发病与胆道系统动力学、胆汁成分改变、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)感染等因素有关. H. pylori感染一方面能引起胆汁中磷脂酶A2(phospholipaseA-2,PLA-2)释放增加,可促进胆固醇沉淀,引发结石;另一方面, H. pylori感染可对机体免疫反应产生刺激作用,导致免疫功能下降.胆石症合并H. pylori感染抗H. pylori治疗,能否降低PLA-2活性、改善免疫功能,目前并不确切.本研究初步探讨抗H. pylori治疗与胆汁H. pylori DNA、PLA-2、免疫功能关系.目的探讨胆石症患者实施抗H. pylori治疗对其胆汁H. pylori DNA、PLA-2活性以及免疫功能的影响.方法选取粤北人民医院2014-06/2018-03因胆石症行经内镜逆行性胰胆管造影术胆总管取石+鼻胆管引流术或外科胆管取石行T管引流术合并H. pylori感染患者80例.通过随机数字法分为两组, 40例予以抗H. pylori治疗者为研究组, 40例常规施予质子泵抑制剂治疗者为对照组.回顾性对比分析两组胆汁H. pylori DNA转阴率、PLA-2活性、免疫功能变化.结果研究组胆汁H. pylori DNA转阴率为92.50%,较对照组的67.50%高,差异有统计学意义(P 0.05);研究组治疗后PLA-2低于对照组,差异存在统计学意义(P 0.05);两组治疗后免疫球蛋白A、免疫球蛋白M差异无统计学意义(P0.05);治疗后免疫球蛋白G较治疗前升高,差异有统计学意义(P0.05),且两组免疫球蛋白G差异有统计学意义(P0.05);研究组CD4+、CD8+水平优于对照组,差异有统计学意义(P0.05).结论抗H. pylori治疗可通过提升H. pylori DNA转阴率、降低胆汁PLA-2水平,达到改善患者免疫功能.     

免疫球蛋白辅助治疗隐球菌性脑膜炎的临床疗效观察

目的观察免疫球蛋白辅助治疗隐球菌性脑膜炎的临床疗效。方法选取广西壮族自治区桂东人民医院2014年6月—2015年11月收治的隐球菌性脑膜炎患者58例,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组29例。对照组患者采用两性霉素B脂质体联合氟康唑、5-氟胞嘧啶治疗,观察组患者在对照组基础上给予免疫球蛋白辅助治疗。比较两组患者临床疗效和起效时间,治疗前后颅内压、脑脊液生化指标、CD_4~+T淋巴细胞计数和CD_8~+T淋巴细胞计数,并观察两组患者治疗期间不良反应发生情况。结果两组患者临床疗效比较,差异无统计学意义(P0.05);观察组患者起效时间快于对照组(P0.05)。治疗前两组患者颅内压及脑脊液蛋白含量、氯化物含量、葡萄糖含量、白细胞计数比较,差异均无统计学意义(P0.05);治疗后观察组患者颅内压和脑脊液白细胞计数低于对照组,脑脊液蛋白、氯化物及葡萄糖含量高于对照组(P0.05)。治疗前两组患者CD_4~+T淋巴细胞计数和CD_8~+T淋巴细胞计数比较,差异均无统计学意义(P0.05);治疗后观察组患者CD_4~+T淋巴细胞计数和CD_8~+T淋巴细胞计数高于对照组(P0.05)。两组患者治疗期间发热、呕吐、肾损伤、低血压、低钾血症发生率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论免疫球蛋白辅助治疗隐球菌性脑膜炎能加快药物起效时间,提高患者免疫功能,降低患者颅内压并控制隐球菌感染。     

金属螯合亲和层析法对重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的纯化

背景：幽门螺杆菌（H.pylori)疫苗是近年研究的热点。H.pylori尿素酶B亚单位（UreB)是理想的候选抗原。目的：获得纯化的重组H.pylori UreB(rUreB)，为进一步的H.pylori疫苗制备打下基础。方法：采用金属螯合亲和层析法（MCAC）在变性条件下纯化rUreB,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和免疫印迹法鉴定纯化产物的分子量、纯度和抗原性。结果：纯化产物的分子量与预计分子量相符，具有良好的特异性UreB免疫原性，且一步即可达到90％以上的纯度。结论：MCAC是一种简单、高效的rUreB纯化方法。     

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导小鼠脾细胞亚群的变化

目的 探讨细粒棘球绦虫(Eg)转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫和Eg原头节攻击后小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的变化.方法 热絮凝法提取转基因苜蓿叶蛋白,用无菌双蒸水将叶蛋白提取液配成20 g/L,同时提取转空质粒(pBI121)苜蓿叶蛋白及正常苜蓿叶蛋白作对照.32只雌性Balb/c小鼠按体质量随机分为4组,每组8只.口服灌胃组:灌胃接种100 μl转基因苜蓿叶蛋白提取液;鼻腔黏膜接种组:滴鼻接种10 μl转基因苜蓿叶蛋白提取液;空质粒对照组:滴鼻接种10μl转空质粒苜蓿叶蛋白提取液;正常蛋白对照组:灌胃接种100μl正常苜蓿叶蛋白提取液.小鼠每3天免疫1次,连续免疫2个月.末次免疫后第8周,各组小鼠用Eg原头节腹腔注射攻击感染(50个/只),感染后第24周剖杀小鼠,分离脾细胞,用流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群百分比.结果 口服灌胃组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比(0.286±0.009)、CD8+ T细胞亚群百分比(0.102±0.004)和CD4+/CD8+比值(2.814±0.014)均显著高于正常蛋白对照组(0.166±0.018、0.083±0.006、2.019±0.369,P<0.01或<0.05);鼻腔黏膜接种组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比(0.269±0.016)和CD4+/CD8+比值(2.955±0.986)与正常蛋白对照组比较明显升高(P均<0.01);口服灌胃组小鼠脾CD4+T细胞亚群百分比高于鼻腔黏膜接种组(P<0.05);空质粒对照组小鼠脾CD4+、CD8+T细胞百分比和CD4+/CD8+比值(0.169±0.018、0.093±0.019、1.852±0.188)与正常蛋白对照组比较,差异无统计学意义(P均>0.05).结论 CD4+T细胞亚群可能与细粒棘球绦虫转Eg95-Eg31融合基因苜蓿疫苗诱导的小鼠抗Eg原头节攻击感染的保护力有关.疫苗灌胃接种可能是一种较好的免疫途径.     

静脉血栓栓塞症合并感染与单纯感染患者外周血T细胞免疫功能变化的比较

目的:研究静脉血栓栓塞症(VTE)患者、VTE合并感染患者、单纯感染患者与正常对照者之间T淋巴细胞亚群(CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+)水平变化及超敏C-反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hsCRP)的差异。方法:入组289例患者,其中对照组82例,单纯VTE组68例(VTE组),VTE合并感染组44例(合并组),单纯感染组95例(感染组)。分别检测T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、hsCRP、空腹血糖及血脂系列。结果:感染组与对照组相比,CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞均显著降低,CD4~+/CD8~+显著升高(P0.05),而VTE组、合并组与对照组相比主要表现为CD3、CD8~+T细胞显著降低,CD4~+/CD8~+升高(P0.05),而CD4~+T细胞无显著改变(P0.05)。VTE组、合并组和感染组组间比较差异无统计学意义(P0.05),但VTE组CD8~+T细胞下降和CD4~+/CD8~+升高均较感染组和合并组明显。同时笔者观察了4组间CD值过低、正常及过高各占比例,并行χ2值检验,结果发现对照组与其他3组比较差异均有统计学意义,主要表现在CD3~+和CD8~+T细胞下降的比例升高;CD4~+/CD8~+升高的比例显著增多。而除外对照组的3组间除VTE组与感染组CD3~+T细胞存在微小差异外(P=0.043),其余均差异无统计学意义(P0.05)。炎性因子hsCRP在VTE组、合并组、感染组中均明显升高。结论:VTE和感染患者均存在免疫功能紊乱,而VTE患者多合并感染,本研究发现VTE患者T淋巴细胞亚群变化独立于感染导致T细胞免疫功能紊乱,提示VTE本身存在T细胞免疫功能异常。VTE患者整体的T细胞识别抗原和转导活化信号的功能下降,同时T细胞直接杀伤病毒微生物的功能显著下降,炎症免疫机制参与了静脉血栓的发生发展。     

艾滋病患者胃黏膜与外周血中人类免疫缺陷病毒感染和CD4~+T淋巴细胞数量的区室性差异的探讨

目的 探讨AIDS患者胃黏膜与外周血中HIV感染和CD4~+T淋巴细胞数量的区室性差异.方法 选取AIDS患者35例,对照组为HIV抗体阴性者10例,均进行胃镜检查并收集外周血.PCR法制备地高辛标记HIV-1长末端重复序列(LTR)、gag基因的双链cDNA探针,核酸原位杂交方法观察胃黏膜组织冰冻切片和外周血单个核细胞(PBMC)涂片H1V感染情况,免疫组织化学方法检测CD41T淋巴细胞,数据结果行t检验.结果 AIDS未治疗组胃黏膜中HIV阳性率为(1.67±1.48)%,PBMC中为(19.37±9.23)%.AIDS未治疗组与高效抗反转录病毒治疗(HAART)组各组间的胃黏膜HIV阳性率差异尤统计学意义(t=-0.996,t=-0.794,t=-0.461;P＞0.05).PBMC涂片中,治疗1～4年组HIV阳性率为(4.25±3.47)%,明显低于未治疗组的(19.37±9.23)%(t=3.000,P＜0.05).AIDS未治疗组胃黏膜单个核细胞(MMC)中CD4+T淋巴细胞阳性率为(12.53±8.14)%,PBMC中CD4+T淋巴细胞阳性率为(19.00±9.55)%,HAART1～4年组胃黏膜MMC中CD4~+T淋巴细胞计数为(37.44±18.00)%,仍低于对照组的(50.35±3.41)%(t=-4.620,P＜0.01),但PBMC中CD4+T淋巴细胞计数与对照组比较,差异无统计学意义(t=-2.094,P＞0.05).结论 胃黏膜与外周血中HIV感染和CD4~+T淋巴细胞数量存在区室性差异.     

不同麻醉方式对老年结直肠癌患者术后效果、免疫功能及预后的影响

目的探讨不同麻醉方式对老年结直肠癌患者的术后效果、免疫功能及预后的影响。方法 105例老年结直肠癌患者随机分为全身麻醉组(对照组,n=54)和全麻复合硬膜外阻滞麻醉组(试验组,n=51)。比较分析患者术中血流动力学、术后呼吸恢复时间、苏醒时间、拔出喉罩时间、恶心呕吐及躁动率。采用酶联免疫吸附法检测各组术前术后血清中糖类抗原(CA)199和癌胚抗原(CEA)的阳性率及血浆中T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+的水平,评估患者预后和免疫功能状态。结果与对照组比较,试验组平均动脉压(MAP)、心率(HR)、恶心呕吐发生率均降低,呼吸恢复时间、苏醒时间、拔出喉罩时间均缩短,差异有统计学意义(P0.05),躁动率未见统计学差异(P0.05)。术前酶联免疫吸附法检测,两组CA199、CEA阳性率及T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+水平差异无统计学意义(P0.05);术后两组CA199、CEA阳性率及T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+水平均降低,且试验组CA199和CEA阳性率较对照组低、T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+水平较对照组高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论全麻复合硬膜外阻滞麻醉能够显著缩短术后呼吸恢复时间、苏醒时间、拔出喉罩时间,显著降低MAP、HR、恶心呕吐发生率及CA199、CEA阳性率,提高T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+的水平,这对老年结直肠癌患者预后及提高免疫功能有重要意义。     

同型半胱氨酸、高血压、颈内动脉粥样硬化易损斑块及T淋巴细胞亚群的关系研究

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)、高血压、颈内动脉粥样硬化易损斑块及T淋巴细胞亚群的关系。方法选取在我科住院治疗的高血压合并颈动脉粥样硬化斑块患者243例为研究对象,根据Hcy水平,将患者分为H型高血压组(162例,Hcy15 mmol/L)和非H型高血压组(81例,Hcy≤15 mmol/L)。根据患者Hcy水平以及颈动脉斑块类型,将患者分为H型高血压+易损斑块组(HHT+易损组,36例)、H型高血压+稳定斑块组(HHT+稳定组,126例)、非H型高血压+易损斑块组(HT+易损组,5例)、非H型高血压+稳定斑块组(HT+稳定组,76例)。对H型和非H型高血压组患者颈动脉易损斑块的发生率,四组(HHT+易损组、HHT+稳定组、HT+易损组、HT+稳定组)患者的Hcy水平及T淋巴细胞亚群进行比较分析;对高血压并颈动脉粥样硬化患者的Hcy水平与T细胞亚群的关系进行Spearman相关分析。结果 HHT组患者颈动脉易损斑块的发生率(22.2%)显著高于HT组患者(6.2%),差异有统计学意义(P0.05)。HHT+易损组患者的Hcy水平、外周血CD3~+T细胞比例、CD3~+CD4~+T细胞比例、CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值均显著高于其余三组,CD3~+CD8~+ T细胞比例明显低于其他三组,差异有统计学意义(P0.05)。HHT+稳定组患者的Hcy水平、CD3~+T细胞比例、CD3~+CD4~+T细胞比例、CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值均显著高于HT+易损组及HT+稳定组,CD3~+CD8~+T细胞比例明显低于HT+易损组及HT+稳定组患者,差异有统计学意义(P0.05)。HT+易损组、HT+稳定组患者的Hcy水平及T淋巴细胞亚群比较,差异无统计学意义(P0.05)。高血压合并颈动脉粥样硬化斑块患者的血Hcy浓度水平与其CD3~+CD4~+T细胞比例呈正相关(r=0.397,P0.05),与CD3~+CD8~+T细胞比例呈负相关(r=-0.411,P0.05),与CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值呈正相关(r=0.465,P0.001)。结论在高血压并颈动脉粥样硬化患者中,H型高血压患者颈动脉易损斑块的发生率较高,随着Hcy浓度升高,CD4~+T细胞比例升高,CD8~+T细胞比例下降,CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+比值增高,免疫紊乱趋向严重,有可能会促进颈动脉易损斑块的形成。     

解毒化瘀汤对活动期溃疡性结肠炎临床疗效的观察

[目的]:观察解毒化瘀汤对湿热蕴结证活动期溃疡性结肠炎(UC)临床疗效。[方法]选取符合诊断和纳入标准的UC患者70例,按照随机数字表法分为对照组和治疗组。其中对照组35例,给予美沙拉嗪肠溶片口服;治疗组35例,在对照组的基础上给予解毒化瘀汤口服。2组疗程均为12周,分别观察2组患者临床疗效,ELISA法检测血浆COX-2、PGE_2、MMP-1水平,流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群CD8~+CD28~+和CD8~+CD28~-含量。[结果]治疗组总有效率为93.3%,对照组为80.6%;治疗组COX-2、PGE2、MMP-1较本组治疗前明显降低(P0.01);治疗后COX-2、MMP-1组间比较,差异有统计学意义(P0.05),PGE_2组间比较,差异有统计学意义(P0.01);治疗组CD8~+CD28~+、CD8~+CD28~-及CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-与本组治疗前比较,差异有统计学意义(P0.01);治疗后CD8~+CD28~+、CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-组间比较,差异有统计学意义(P0.01),CD8~+CD28~-组间比较,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]解毒化瘀汤能够明显改善湿热蕴结型活动期UC患者临床症状,降低COX-2、PGE_2、MMP-1水平,调控CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-平衡,减少复发率,疗效显著。     

Construction of prokaryotic expression system of ureB gene from a clinical Helicobacter pylori strain and identification of the recombinant protein immunity

AIM:To clone ureB gene from a clinical isolate ofHelicobacter pylori and construct a prokaryotic expressionsystem of the gene and identify immunity of the expressedrecombinant protein.METHODS:ureB gene from a clinical H pylori strain Y06was amplified by the high fidelity polymerase chain reactiontechnique.The target DNA fragment amplified from ureBgene was sequenced after T-A cloning.Prokaryoticrecombinant expression vector pET32a inserted with ureBgene (pET32a-ureB) was constructed.The expression ofrecombinant UreB protein (rUreB) in E.coli BL21DE3induced by isopropylthio-β-D-galactoside (IPTG) at differentconcentrations was examined by SDS-PAGE.Western blotusing commercial antibodies against whole cell of H pyloriand an immunodiffusion assay using a self-prepared rabbitanti-rUreB antibody were applied to determine immunityof the target recombinant protein.ELISA was used to detectthe antibody against rUreB in sera of 125 H pylori infectedpatients and to examine rUreB expression in 109 H pyloriisolates.RESULTS:In comparison with the reported correspondingsequences,the nucleotide sequence homology of the clonedureB gene was from 96.88-97.82% while the homology of itsputative amino acid sequence was as high as 99.65-99.82%.The rUreB output expressed by pET32a-ureB-BL21DE3 wasapproximate 30% of the total bacterial proteins,rUreBspecifically combined with the commercial antibodiesagainst whole cell of H pylori and strongly induced rabbitsto produce antibody with a 1:8 immunodiffusion titer afterthe animals were immunized with the recombinant protein.Serum samples from all H pylori infected patients werepositive for UreB antibody and UreB expression weredetectable in all tested H pylori isolates.CONCLUSION:A prokaryotic expression system with highexpression efficiency of H pylori ureB gene was successfullyestablished.The expressed rUreB showed qualifiedimmunoreactivity and antigenicity.High frequencies of UreB expression in different Hpyloriisolates and specific antibodyagainst UreB in sera of H pylori infected patients indicatethat UreB is an excellent antigen candidate for developingH pylori vaccine.     

外周血淋巴细胞亚群在慢性HBV感染过程中表达的变化分析

目的探讨HBV感染患者外周血淋巴细胞亚群在疾病进展过程中的表达变化。方法选取2018年1月-2019年4月在天津市第二人民医院住院的慢性HBV感染患者共132例,其中慢性乙型肝炎患者47例,乙型肝炎肝硬化患者44例,乙型肝炎肝硬化相关原发性肝癌患者41例。另选取同期健康体检者42例作为对照组。采用流式细胞术检测4组外周血淋巴细胞亚群精准计数,比较4组外周血淋巴细胞亚群的表达水平。正态分布的计量资料,组间方差不齐采用Welch方差分析,两两比较采用GamesHowell检验。非正态分布的计量资料多组间及进一步两两比较采用Kruskal-Wallis H检验。计数资料组间比较采用χ2检验。相关性分析采用Spearman检验。结果与对照组和慢性乙型肝炎组相比,肝硬化组和肝癌组CD3^+、CD4^+T淋巴细胞数量明显减少,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与对照组相比,肝癌组CD8^+T淋巴细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);与慢性乙型肝炎组相比,肝硬化组和肝癌组CD8^+T淋巴细胞数量明显减少,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与对照组和慢性乙型肝炎组相比,肝硬化组和肝癌组CD19^+B淋巴细胞数量明显减少,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与对照组相比,肝硬化组和肝癌组CD16^+CD56^+NK细胞数量明显减少,差异均有统计学意义(P值均<0.05);与慢性乙型肝炎组比较,肝癌组CD16^+CD56^+NK细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。4组疾病进展与外周血CD3^+T淋巴细胞、CD4^+T淋巴细胞、CD8^+T淋巴细胞、CD19^+B淋巴细胞、CD16^+CD56^+NK细胞呈明显负相关(r值分别为-0.414、-0.503、-0.269、-0.435、-0.402,P值均<0.01)。结论随着疾病的进展,慢性HBV感染患者免疫状态发生变化。外周血淋巴细胞亚群精准计数能够反应机体的免疫状态,可作为慢性HBV感染临床病情演变、治疗效果及疾病预后的参考依据。     

有效的高效抗反转录病毒治疗后低CD4/CD8比值HIV/AIDS患者免疫学特征分析

目的对比研究有效的高效抗反转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)后低CD4/CD8比值组与高CD4/CD8比值组患者相关免疫学特征。方法选择接受HAART≥96周、CD4~+T淋巴细胞≥500/μl、HIV载量低于检测值下限的HIV感染者/AIDS患者(HIV/AIDS患者)109例,从中选出CD4/CD8比值≥0.82的患者28例及CD4/CD8比值≤0.48的患者28例,对比分析2组T淋巴细胞上CD38、人类白细胞抗原DR(HLA-DR)、CD27、CD28、CD45RA及CD31的表达,进而分析2组外周血T淋巴细胞的免疫活化与免疫老化状况。结果①低CD4/CD8比值组的基线CD4~+T淋巴细胞计数和基线CD4/CD8比值较高CD4/CD8比值组低(P0.05);②低CD4/CD8比值组HLA-DR~+CD8~+T淋巴细胞频率、处于中期分化阶段(CD27~-CD28~+)的CD4~+T淋巴细胞频率及处于晚期分化阶段(CD27~-CD28~-)的CD4~+和CD8~+T淋巴细胞频率高于高CD4/CD8比值组(P均0.05),而处于早期分化阶段(CD27~+CD28~+)的CD4~+和CD8~+T淋巴细胞频率低于高CD4/CD8比值组(P均0.05);③低CD4/CD8比值组纯真CD4~+和与CD8~+T淋巴细胞频率以及CD31~+纯真CD8~+T淋巴细胞的频率低于高CD4/CD8比值组(P均0.05)。结论①低基线CD4~+T淋巴细胞计数和低基线CD4/CD8比值HIV/AIDS患者有效HAART后CD4/CD8比值仍然相对较低,应及早起始HAART,预防CD4/CD8低比值持续的发生;②有效HAART后低CD4/CD8比值的HIV/AIDS患者表现出更为严重的免疫活化和免疫老化现象,针对这些免疫紊乱应给予除HAART外新的干预措施。     

胃黏膜TGF-β1在幽门螺杆菌感染中的表达及与外周血T细胞亚群变化的关系

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)感染、TGF-β1及T淋巴细胞亚群在胃黏膜癌变过程中的作用及相互关系.方法:选取不同胃黏膜病变组织的72例胃镜活检标本,采用快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)结合Giemsa染色判断H.pylori感染,免疫组织化学染色技术检测胃黏膜组织中TGF-β1表达,流式细胞术检测不同胃黏膜病变患者外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值.结果:TGF-β1在慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎(CAG)、肠上皮化生及不典型增生(IM/Dy)和胃癌(GC)中表达的阳性率分别为39.1%,52.6%,62.3%和87.5%,CSG组与IM/Dy、GC组相比,差异有统计学意义(P<0.05);IM/Dy中H.pylori阳性者TGF-β1表达明显高于H.pylori阴性者(87.5% vs 33.3%,P<0.05).与CSG相比,GC中CD3+明显降低(P<0.05),CD4+及CD4+/CD8+明显降低(P<0.01);IM/Dy患者CD4+及CD4+/CD8+低于CSG,有显著性差异(均P<0.01).不同胃黏膜病变TGF-β1表达与CD3+、CD4+T细胞、CD4+/CD8+呈负相关.结论:在GC前病变中,AKCSG到GC,TGF-β1表达逐渐增加,细胞免疫功能降低,TGF-β1对细胞免疫功能的抑制作用是IM/Dy、GC患者细胞免疫功能低下的原因之一.     

HBV相关原发性肝癌患者外周血T、NK、B细胞及胸腺功能特征

目的:观察乙型肝炎相关原发性肝癌患者(hepatitis B virus-related primary liver cancer,H B V-P L C)发生和进展过程中外周血T、N K、B细胞数量的变化,并初步探讨T淋巴细胞减少与胸腺功能的联系.方法:收集在首都医科大学附属北京地坛医院住院的73例HBV-PLC患者,50例乙型肝炎肝硬化患者(liver cirrhosis,LC),37例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者.收集3组患者一般资料和临床生化指标.采用流式方法检测3组患者外周血中CD3~+T淋巴细胞、CD4~+T、CD8~+T、CD3-CD16~+CD56~+NK、CD3-CD19~+B的分布情况,并检测了T淋巴细胞表面CD31、CD45RA分子的表达水平.结果:与CHB和LC患者相比,HBV-PLC患者外周血中性粒细胞升高,淋巴细胞减少(P0.001);与CHB患者相比,HBV-PLC患者外周血NK细胞计数减少(P=0.011),T淋巴细胞、CD4~+T、C D8~+T、B细胞计数减少,纯真CD4~+和CD8~+T细胞表面CD31表达降低(P0.001).在肝癌Child、Okuda、BCLC分期中晚期比早期淋巴细胞计数、T、CD4~+T、CD8~+T计数均降低(P0.05).结论:随着肝癌的发生和进展,HBV-PLC患者外周血抗肿瘤免疫细胞减少,这种减少与胸腺迁出功能降低有关.