lncRNA GHET1表达水平对人胃癌细胞MGC-803增殖迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌高表达转录本1(GHET1)对人胃癌细胞MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法 以MGC-803细胞作为实验对象,通过慢病毒转染的方法构建lncRNA GHET1过表达和lncRNA GHET1沉默的MGC-803细胞模型,分别为过表达组和沉默组,并设置其对应的阴性对照组。通过荧光显微镜观察慢病毒转染效率。通过实时荧光定量PCR检测各组lncRNA GHET1、miR-105表达水平。通过CCK-8实验检测各组细胞增殖能力。通过Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 荧光显微镜下观察见各组细胞病毒转染率均高于90%。实时荧光定量PCR结果显示,过表达组lncRNA GHET1的相对表达量显著高于过表达对照组（P<0.05）,沉默组lncRNA GHET1相对表达量显著低于沉默对照组（P<0.05）,提示成功建立过表达和沉默lncRNA GHET1的MGC-803细胞模型。CCK-8实验结果显示,过表达组细胞增殖速度较过表达对照组快,而沉默组细胞增殖速度较沉默对照组慢。Transwell实验结果显示,过表达...     

树舌多糖对胃癌MGC-803细胞蛋白激酶A活性的影响

目的 研究树舌多糖(GAPS)对胃癌MGC-803细胞增殖抑制与细胞蛋白激酶A(PKA)活性的关系,探讨GAPS抗肿瘤作用机制.方法 倒置显微镜观察细胞形态;PepTag非放射法检测PKA活性.结果 GAPS组细胞形状不规则,细胞间隙增大折光性差,生长状态差;GAPS组PKA活性的上调,与细胞对照组比较有差异(P＜0.05).结论 GAPS能抑制胃癌MGC-803细胞的增殖,上调PKA活性.     

姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的机制

目的通过体外实验探讨姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的作用机制。方法取人胃癌细胞系MGC-803培养至对数生长期,按姜黄素作用的不同浓度分组:3.12、6.25、12.5、25.0、50.0μmol/L,作用的不同时间分组:24、48、72 h,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)计算细胞抑制率;应用吖啶橙荧光染色观察细胞的形态学改变;流式细胞仪检测细胞周期的变化;使用琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA片段化作用。结果 (1)利用MTT比色分析法,发现MGC-803细胞分别用含不同浓度姜黄素溶液培养24、48、72 h后,细胞增殖受到明显的抑制,且与浓度和时间呈正相关;(2)通过吖啶橙染色发现,在姜黄素作用下,部分细胞明显变圆,体积缩小,荧光增强,核染色质固缩,呈新月形、肾形在核膜周边聚集;(3)流式细胞仪分析结果显示,姜黄素主要使细胞周期阻滞于S期,G1期细胞数减少,G2/M期细胞数变化不明显;(4)DNA琼脂糖凝胶电泳显示,12.5、25.0、50.0μmol/L浓度处理组作用48 h后出现典型的DNA断裂的梯子样外观。结论姜黄素能明显抑制人胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与细胞的S期阻滞有关。     

五味子乙素对人胃癌细胞株MGC-803凋亡的影响

目的观察五味子乙素诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡作用。方法用10、50、100、200μmol/L浓度五味子乙素作用胃癌细胞株48 h,倒置显微镜下观察细胞增殖情况;MTT法检测五味子乙素对细胞增殖的抑制作用;电镜观察、判定凋亡细胞;凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。结果倒置显微镜下,随着五味子乙素作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降;MTT法亦检测到上述结果;当五味子乙素作用浓度是100μmol/L时,可检测到明显的凋亡细胞。结论高浓度的五味子乙素可剂量依赖性地诱导胃癌细胞株MGC-803细胞的凋亡。     

人胃癌细胞株MGC-803侧群细胞的分选与生物学特征

目的 从人胃癌细胞株MGC-803中分离侧群(SP)细胞,研究其生物学特征.方法 利用流式细胞分选术(FACS)从MGC-803细胞株中分选出SP细胞和非SP细胞亚群进行培养,采用克隆形成实验比较两组亚群细胞的体外增殖能力,NOD/SCID鼠成瘤实验检测两组亚群细胞体内成瘤能力.结果 FACS结果显示,细胞株MGC-803中SP细胞亚群占总细胞的0.3％ ～ 1.2％;SP细胞体外克隆形成率为(0.862±0.050)％,非SP细胞体外克隆形成率为(0.325 ±0.207)％,两者比较P＜0.05;SP细胞最低成瘤数量是1×103/只,非SP细胞为5×103/只.结论 人胃癌细胞株MGC-803中存在SP细胞,其生物学特性与干细胞基本符合.     

大蒜素对人胃癌细胞系MGC-803增殖的影响及其作用机制

目的通过大蒜素作用于人胃癌细胞系MGC-803,探讨其对胃癌细胞增殖的影响及机制。方法通过细胞培养技术检测大蒜素作用胃癌细胞后细胞增殖抑制率;免疫组化及RT-PCR法检测胃癌细胞中p16INK4因子表达变化。结果大蒜素作用于MGC-803细胞后,对其增殖表现出了明显的抑制作用,且呈浓度依赖性：大蒜素处理的MCC-803细胞p16蛋白及p16INK4 mRNA表达明显强于未应用大蒜素处理组（P〈0．05）。结论大蒜素可以抑制MGC-803细胞的增殖,其机制之一可能为上调了细胞抑癌基因p16INK4的表达。     

非小细胞肺癌肿瘤相关巨噬细胞表型检测及临床意义

目的检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者肿瘤相关巨噬细胞表型及其分布,探讨NSCLC患者预后与肿瘤相关巨噬细胞各表型的关系。方法收集47例有完整临床病理和随访资料的NSCLC标本,运用免疫组化方法检测CD68、TNF-α、TGF-β1在肿瘤间质及癌旁肺组织巨噬细胞表达,分析其与患者各项临床指标及预后的关系。结果 CD6＋8TNF-α＋M1型巨噬细胞在NSCLC癌组织低于癌旁正常肺组织（P〈0.05）,CD6＋8TNF-β1＋M2型巨噬细胞在NSCLC肿瘤间质高于癌旁正常肺组织（P〈0.05）;M1型及M2型巨噬细胞在肿瘤间质内的数量与临床分期相关（P〈0.05）;Kaplan-Meier生存曲线分析显示患者术后生存率随巨噬细胞TNF-α阳性表达而呈上升趋势,随TGF-β1阳性表达呈现下降趋势。结论 M1型巨噬细胞减少和M2型巨噬细胞增多与NSCLC患者的不良预后有关。     

熊果酸对人胃癌细胞株MGC-803的抑制作用及其机制

目的观察熊果酸（UA）对胃癌细胞株MGC-803的抑制增殖作用。方法培养胃癌细胞株MGC-803,以MTT比色法及生长曲线测定UA对MGC-803抑制增殖的作用。免疫印记法测定p-ERK1/2、CyclinD1、p21^waf/tip。表达。结果MTT实验及生长曲线均显示UA明显抑制MGC-803细胞增殖,免疫印记法显示UA抑制pERK1/2、CyclinD1表达,同时上调p21^waf/vip。表达。结论熊果酸可以抑制MGC-803增殖,机制与影响p-ERK1／2及下游CyclinD1、p21^waf/cipl表达有关。     

肿瘤相关巨噬细胞与肺癌侵袭转移的研究进展

肺癌是常见的恶性肿瘤之一,肿瘤侵袭转移是导致肺癌治疗失败和预后不良的重要原因。现就肿瘤相关巨噬细胞（TAM）在肺癌侵袭转移过程中的作用及与肿瘤血管生成的关系作一综述。     

树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖及对酪氨酸激酶活性的影响

目的探讨树舌多糖对人胃癌MGC-803细胞增殖、细胞周期分布及其对酪氨酸激酶表皮生长因子受体(EGFR)、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)表达的影响。方法 MTT法检测树舌多糖对胃癌细胞MGC-803增殖抑制;流式细胞仪检测树舌多糖作用后MGC-803细胞的周期分布、EGFR及PDGFRβ表达变化;荧光显微镜下观察细胞EGFR、PDGFRβ表达情况。结果树舌多糖对胃癌MGC-803细胞增殖具有抑制作用,并呈时间及剂量依赖性。2mg/ml树舌多糖作用MGC-803细胞2h后,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少,与对照组细胞比较有差异(P0.05)。树舌多糖下调MGC-803细胞EGFR、PDGFRβ的表达,与对照组细胞比较有差异(P0.05);荧光显微镜和流式细胞仪检测结果一致。结论树舌多糖抑制胃癌MGC-803细胞增殖,下调酪氨酸激酶EGFR、PDGFRβ表达和阻止胃癌细胞由G1期进入S期,延缓细胞周期进程。     

幽门螺旋杆菌感染MGC-803胃癌细胞后对MMP-1及MMP-10蛋白表达的影响

目的研究幽门螺旋杆菌（Hp）感染对MGC-803胃癌细胞表达MMP-1及MMP-10的影响。方法 Hp感染培养的MGC-803细胞,Western blot检测其MMP-1及MMP-10的表达情况。结果 Hp感染胃癌细胞12 h后,细胞内MMP-1表达明显增加（P〈0.05）,24 h后表达无明显增加。Hp感染胃癌细胞6 h后,细胞内MMP-10表达明显增加（P〈0.05）,12 h后表达无明显增加。结论 Hp感染能上调MMP-1、MMP-10表达,与胃癌转移有关。     

白术内酯I抑制胃癌MGC-803细胞增殖的机制

目的探讨白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用及其机制。方法 MTT实验和集落形成实验检测白术内酯I对MGC-803细胞增殖的抑制作用;Western印迹检测白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1蛋白表达的影响;实时定量PCR分析白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1 mRNA水平表达的影响。结果 MTT实验和集落形成实验表明,白术内酯I抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性(P<0.05);Western印迹实验表明白术内酯I抑制Notch信号通路中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1蛋白表达水平;实时定量PCR结果显示白术内酯I抑制Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1 mRNA表达水平(P<0.05)。结论白术内酯I通过抑制Notch信号通路从而抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,白术内酯I可能用于治疗胃癌的新型治疗策略。     

奥曲肽诱导体外培养人胃癌细胞MGC-803凋亡的研究

目的研究不同浓度，不同作用时间奥曲肽（Oct）对体外培养胃癌细胞MGC-803的作用及可能机制．方法采用MTT比色法检测Oct对体外培养胃癌细胞生长的抑制作用．用DNA断片法和流式细胞仪观察了Oct对胃癌细胞凋亡的影响，扫描电镜和透射电镜同时显示了凋亡细胞的形态学特征．结果MTT比色法测得Oct对胃癌细胞增殖有明显的抑制作用，呈剂量相关性Oct能有效地诱导人胃癌细胞MGC-803凋亡．经Oct处理12h～48h的胃癌细胞，DNA琼脂糖电泳呈现典型的梯形条带（Ladder），电镜和流式细胞仪（FcM）检测出现典型凋亡特征结论Oct对胃癌MGC-803细胞生长增殖有抑制作用；能有效地诱导人胃癌细胞MGC－803凋亡；是潜在的抗癌剂     

塞来昔布对胃癌MGC-803细胞RECK、MMP-2、MMP-9基因表达的影响

目的:研究非甾体类抗炎药(NSAID)塞来昔布对胃癌细胞MGC-803的抑制作用和对RECK、MMP-2、MMP-9基因表达的影响,以探讨塞来昔布的抗肿瘤机制.方法:培养胃癌MGC-803细胞,实验用不同浓度的塞来昔布(25、50、100μg/L)分别处理MGC-803细胞不同时间(12、24 h、48 h),无血清培养基饥饿24 h达同步化后,MTT(噻唑蓝比色法)观察MGC-803细胞增殖;RT-PCR法检测细胞周期调控因子MMP-9、MMP-2、RECK mRNA的表达;Western blot法检测MMP-9、MMP-2、RECK mRNA蛋白的表达.结果:M T T法显示塞来昔布能抑制胃癌MGC-803细胞增殖,作用12 h时,随着塞来昔布处理浓度的增高,其抑制作用不明显,组间比较差异不显著(P>0.05),在作用24、48 h时呈浓度依赖性(25-100μg/L),在25、50、100μg/L作用浓度呈时间依赖性(24-48 h).塞来昔布在100μg/L浓度作用细胞48 h时抑制.RT-PCR法检测结果显示,在12 h的作用时间点,随着塞来昔布处理浓度的增高,RECK基因及MMP-2、MMP-9 mRNA变化不是很明显,组间比较无显著差异(P>0.05),在12 h后,塞来昔布能增加胃癌细胞RECK mRNA和蛋白表达,作用呈浓度(25-100μg/L)和时间依赖性(24-48h),MMP-2、MMP-9表达则下降.Western blot法检测结果显示,作用12 h时,随着塞来昔布处理浓度的增高,其RECK蛋白及MMP-2,MMP-9蛋白改变不明显,组间比较差异不显著(P>0.05),在12 h以后,塞来昔布能增加RECKmRNA和蛋白表达并减少MMP-2、MMP-9表达,且作用呈浓度依赖性和时间依赖.结论:塞来昔布可抑制人胃癌MGC-803细胞增殖与转移;其可能是通过上调RECK基因,进而下调MMP-2、MMP-9来抑制胃癌细胞MGC-803的增殖与转移.     

胃安宁含药血清对人胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响

[目的]研究胃安宁颗粒含药血清体外对人胃癌MGC-803细胞株增殖、凋亡的影响.[方法]采用MTT比色法检测不同剂量胃安宁颗粒含药血清作用12 h、24 h、48 h后对MGC-803细胞生长增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率.[结果]随着胃安宁颗粒含药血清浓度逐渐增加,细胞增殖率逐渐降低,细胞抑制率、凋亡率逐渐升高,且以早期凋亡为主.[结论]胃安宁颗粒能够抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖,对MGC-803细胞有诱导其早期凋亡作用.     

miR-425对胶质瘤细胞迁移与侵袭的影响

目的探讨miR-425对人胶质细胞瘤U87细胞迁移与侵袭能力的影响。方法利用Lipo2000转染试剂体外瞬时转染人胶质细胞瘤U87,将细胞分为实验组(转染miR-425 mimics)、抑制组(转染miR-425 inhibitors)、空白组(无转染)。Real-time PCR检测细胞中miR-425表达;划痕实验检测细胞的迁移距离,Transwell实验检测细胞的迁移以及侵袭能力,Western印迹检测基质金属蛋白(MMP)2、MMP9的表达水平。结果与空白组相比,miR-425 mimics组miR-425表达明显上调,约为空白组的8倍,细胞侵袭与迁移能力下降,MMP2、MMP9表达下降,miR-425 inhibitors组miR-425表达明显下调,约为空白组的0.14倍,细胞侵袭与迁移能力显著增强,MMP2、MMP9表达增强。结论 miR-425的表达水平与胶质瘤U87细胞的迁移与侵袭能力密切相关。     

安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制

目的 探究安罗替尼对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响及机制。方法 体外培养人胃癌AGS细胞,取第3代对数生长期AGS细胞,分为对照组(不做干预)、实验组(2μmol/L安罗替尼组、4μmol/L安罗替尼组、8μmol/L安罗替尼组)和抑制剂组[4μmol/L安罗替尼+10μmol/L转化生长因子-β₁(TGF-β₁)/Smads信号通路抑制剂LY2109761],干预24 h。为避免细胞死亡太多干扰实验,抑制剂组选取4μmol/L安罗替尼作为最适浓度加入10μmol/L TGF-β₁/Smads通路抑制剂LY2109761进行后续实验。用CCK-8法、倒置显微镜、Transwell小室及Western blotting法对细胞活力、细胞形态、迁移、侵袭能力及上皮间质转化(EMT)、TGF-β₁/Smads信号通路相关蛋白表达进行检测。结果 与对照组相比,4、8μmol/L安罗替尼组细胞活力降低(P均<0.05)。实验组人胃癌AGS细胞生长受到抑制,迁移、侵袭能力及TGF-β₁、...     

Caveolin-1对胃癌细胞系MGC803细胞生长的影响

目的:研究Caveolin-1对胃癌细胞增殖、分化的影响,以探讨Caveolin-1作为基因治疗的候选基因的可能性．方法:运用基因重组技术,将人全长 Caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系MGC803．建立能稳定表达Caveolin-1的胃癌细胞系．同时建立空载体转染的MGC803细胞系作为空白对照,另用PD98059处理48 h作为阳性对照．以重组细胞系作为研究模型,通过免疫细胞化学及Western blot确认Caveolin-1蛋白在被转染细胞中的稳定表达．运用光学显微镜观察转染前后MGC803细胞形态的变化;另运用细胞计数检测了Caveolin-1对MGC803细胞生长的影响,流式细胞术分析了Caveolin-1对MGC803 细胞周期分布的影响．结果:Western blot结果显示,基因转染组及阳性对照组细胞中Vaveolin-1表达比未处理组细胞中明显增强(P<0．001,q值分别为23．067 与13.3376),且基因转染组中Caveolin-1表达比阳性对照组更强(P<0．00l,q=9．7294);基因转染后的MGC803细胞形态发生明显变化,由异形性明显、核大、胞质很少、核分裂明显变得形态较一致、胞质丰富、核／质比明显变小、核分裂相很少见;基因转染后细胞的群体倍增时间明显延长,由46．67 h延长至65．46 h,差异有统计学意义(P<0．05,q =4．8695):基因转染后细胞周期分布发生了明显变化,G0／G1期细胞数明显增多(P<0．01, q=9．1824),S期细胞数明显减少(P<0．01,q= 7．827),G2／M期细胞数无明显变化(P>0．05), Caveolin-1基因转染组与阳性对照组间细胞周期分布的变化也有明显差异性(其中G0／G1期 P<0．01,q=4．9323;S期P<0．05,q=3．3295)．结论:Caveolin-1既能诱导MGC803细胞分化又能将其阻滞于G0/G1期,通过延长细胞群体倍增时间而抑制胃癌细胞的体外增殖．