YB-1抑制三氧化二砷诱导的胃癌细胞自噬机制

目的研究YB-1抑制三氧化二砷(As2O3)诱导人胃癌BGC-823细胞自噬的机制。方法采用脂质体转染siRNA干扰YB-1和腺病毒转染pAd1Easy/YB-1过表达YB-1;实时荧光定量PCR检测Bcl-2和Beclin1基因转录;Western blot检测YB-1、Bcl-2、Beclin1、P62和LC3Ⅱ蛋白的表达;MDC染色、荧光显微镜观察自噬泡。结果与空病毒(AdGFP)组相比,pAd1Easy/YB-1(AdYB-1)组Bcl-2基因表达增高,而干扰质粒(siYB-1)组Bcl-2基因表达水平较空质粒(HK)组降低(P均<0.05),各组Beclin1基因表达比较无统计学差异。与AdGFP和HK组相比,AdYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白减少,Bcl-2和P62蛋白增加(P均<0.01),siYB-1组Beclin1和LC3Ⅱ蛋白增加,Bcl-2和P62蛋白减少(P均<0.01)。与AdGFP组相比,AdYB-1组自噬泡聚集减少,加入Bcl-2抑制剂HA14-1后自噬泡重新聚集,Beclin1蛋白恢复表达,P62降解增加,LC3Ⅱ升高。结论 YB-1可能通过上调Bcl-2、抑制Bec-lin1,实现对As2O3诱导的BGC-823细胞自噬的抑制。     

丹参酮IIA通过调控自噬抑制乏氧诱导的肝内胆管细胞癌侵袭能力的研究

目的:探讨在乏氧状态下,丹参酮ⅡA对肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)自噬的调控,以及对侵袭能力的影响及其机制。方法:通过1%O_2培养建立肝内胆管细胞癌ICC-9810细胞乏氧状态,应用丹参酮ⅡA干预细胞后,通过划痕试验检测ICC-9810细胞迁移能力,趋化试验及侵袭试验检测细胞的趋化与侵袭能力;转染p GFP-LC3质粒后,应用荧光显微镜观察LC3融合蛋白及自噬小体在ICC-9810细胞中的表达情况,蛋白质印迹法检测ICC-9810细胞中的HIF-1α、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/I和Beclin1表达差异。结果:在乏氧环境下,ICC-9810细胞运动能力增强(1.75±0.3)倍,趋化能力增加79.6%,侵袭力增强1.36倍,细胞自噬水平明显升高,丹参酮ⅡA干预后ICC-9810细胞自噬水平下调,HIF-1α、LC3Ⅱ/I和Beclin1蛋白表达水平分别降低3.9倍,2.4倍和1.1倍,侵袭能力下降4.7倍。结论:丹参酮ⅡA可以通过下调自噬,抑制肝内胆管癌细胞在乏氧条件下异常增高的侵袭力。     

microRNA调节细胞自噬影响动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(As)是心脑血管疾病主要的病理因素。关于动脉粥样硬化发生发展的病理机制迄今为止尚未完全阐明。自噬是一种普遍存在于真核细胞中高度保守的生物学过程。正常水平的自噬抑制动脉粥样硬化的发生发展,而自噬缺陷或自噬过度则会加速斑块的破裂,导致心脑血管意外的发生。研究表明,microRNA通过参与动脉粥样硬化相关细胞自噬的调节影响动脉粥样硬化进程。文章主要就microRNA调节内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞自噬水平在动脉粥样硬化中的作用进行综述。     

细胞自噬对衰老的调节

细胞内损伤物质的积累是所有衰老细胞的普遍特征,能导致生命有机体生存能力降低.细胞自噬能够降解受损蛋白质和衰老或损伤细胞器等细胞结构,是细胞内主要的异化途径,参与衰老以及与衰老相关的各种病理过程.近年来研究发现,衰老进程中,细胞自噬活动下调,而对各种长寿突变体的研究表明自噬活动是寿命延长所必需的,多种自噬相关基因或蛋白直接受长寿途径的调节[1~5],这些发现都支持细胞自噬是各种真核生物衰老非常重要的调节机制.     

MicroRNA通过自噬调节心肌肥大的最新进展

【摘要】心肌肥大是心肌的一种代偿形式,这种代偿不是无限度的,如病因长期存在,肥大的心肌将不能维持正常功能,最终发展成心力衰竭。自噬是溶酶体降解功能不全的细胞器和蛋白的过程,其产物通过循环利用来满足代谢需求。MicroRNA(miRNA,miR)是一类非编码小单链RNA,可转录后抑制蛋白表达。本文将概述miRNA通过自噬调节心肌肥大的最新进展。     

泮托拉唑通过抑制自噬提高人胃腺癌细胞对顺铂的敏感性

背景：肿瘤细胞对化疗药物不敏感／耐药是肿瘤治疗的主要障碍之一．应用高效低毒性化疗增敏剂可优化化疗方案,提高疗效。前期研究显示质子泵抑制剂泮托拉唑（PPZ）预处理可抑制空泡型质子泵V-H＋-ATP酶,逆转细胞内外pH梯度．提高人胃腺癌细胞的化疗敏感性。目的：探讨PPZ能否通过抑制自噬提高人胃腺癌细胞对顺铂（DDP）的敏感性及其可能机制。方法：以免疫荧光法和（或）蛋白质印迹法观察经PPZ或DDP处理或ATG7siRNA干扰,或先予PPZ预处理或ATG7siRNA干扰再予DDP处理的人胃腺癌细胞株SGC7901的自噬体以及自噬特异性标记物LC3、p62、自噬相关蛋白ATG7、自噬调节关键分子mTOR表达,以CCK-8实验检测各组SGC7901细胞增殖率的变化。结果：DDP能诱导SGC7901细胞自噬,PPZ能抑制SGC7901细胞自噬。PPZ预处理能增强DDP对SGC7901细胞的生长抑制作用．并上调mTOR蛋白表达．其作用与ATG7基因干扰一致。结论：PPZ预处理可通过抑制自噬提高人胃腺癌细胞对DDP的敏感性．其机制可能与激活mTOR有关。     

MACC1调节肝星状细胞表达MMP-2、MMP-9对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨结肠癌相关转移基因(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)表达基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的调节作用,及对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法利用携带MACC1基因的重组慢病毒颗粒(LV-MACC1-GFP)、空载体慢病毒颗粒(LVGFP)感染HSC分别作为实验组、阴性对照组,未转染处理的HSC作为空白对照组,以上三组细胞按照常规培养,应用RT-PCR和Western blotting技术检测细胞中MMP-2、MMP-9 m RNA和蛋白表达。以上三组细胞分别与胃癌细胞MKN45体外共培养,Transwell实验观察三组不同培养条件下对胃癌细胞MKN45迁移侵袭能力的影响。结果与阴性对照组和空白对照组比较,实验组HSC MMP-2、MMP-9 m RNA和蛋白表达水平均明显上调(P0.01)。Transwell实验中与实验组共培养的胃癌细胞MKN45迁移和侵袭能力较其他两组明显升高(P0.01)。结论 MACC1可能通过调节HSC MMP-2、MMP-9的表达,促进胃癌细胞的迁移和侵袭。     

Fas信号通路通过诱导EMT促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨Fas信号通路促进胃癌细胞侵袭转移的可能相关机制。方法以低浓度FasL处理胃癌细胞株AGS,免疫印迹及ELISA检测上皮间质转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)的分子生物学标记改变;稳定沉默Snail及Twist转录因子,transwell小室侵袭实验检测FasL处理后胃癌细胞的侵袭能力;免疫印迹检测信号通路激活状态及相应的抑制效应。结果 FasL可以诱导AGS细胞株出现EMT表型,并可促进胃癌细胞的侵袭转移能力。同时该过程中出现ERK1/2信号通路的激活,而抑制ERK1/2信号通路,可以抑制FasL诱导EMT及提高肿瘤侵袭能力的作用。胃癌组织中相应分子生物学标记的表达变化符合EMT的发生。结论 Fas信号通路能够激活ERK1/2通路诱导EMT的发生,并且能通过该机制增强胃癌细胞AGS的活动能力。     

细胞自噬与结肠癌Lovo细胞迁移和侵袭的相关性研究

目的探讨不同自噬状态对结直肠癌Lovo细胞迁移和侵袭能力的影响。 方法将Lovo细胞分为自噬增强组、正常细胞组和3-甲基嘌呤自噬抑制组。用激光共聚焦显微镜观察绿色荧光颗粒,用Q-PCR检测Beclin1 mRNA表达水平,透射电镜观察自噬溶酶体,Transwell实验评价Lovo细胞迁移与侵袭能力。 结果绿色荧光颗粒数以自噬增强组最多,其次为正常细胞组,而自噬抑制组最少。Beclin1 mRNA表达量自噬增强组为(1.23±0.12)个,正常细胞组为(1±0.13)个,自噬抑制组为(0.98±0.1)个。自噬增强组可见大量的自噬溶酶体,明显多于正常细胞组和自噬抑制组。迁移实验细胞计数：自噬增强组高于正常细胞组(138.0±16.7与90.7±12.9,P＝0.026)和自噬抑制组(138.0±16.7与92.7±26.7,P＝0.030)。侵袭实验细胞计数：自噬增强组高于正常细胞组(147.0±13.0与99.0±20.5,P＝0.028)和自噬抑制组(147.0±13.0与95.7±25.6,P＝0.021)。 结论结肠癌Lovo细胞自噬增强促进肿瘤细胞迁移和浸润,可能是局部浸润和远处转移的机制之一。     

转胶蛋白通过阻断丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路抑制人甲状腺癌细胞的增殖和侵袭

目的:探究转胶蛋白(transgelin, TAGLN)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)发生发展中的作用及其可能的信号通路。方法:收集100例PTC组织及对应100例癌旁正常甲状腺组织,分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术、Western印迹法和免疫组化分...     

miRNA-182通过调节EMT相关分子ZEB2而抑制肺癌细胞转移和侵袭

目的探讨微小RNA(miRNA)-182对肺癌细胞转移和侵袭的影响及其相关机制。方法采用荧光定量PCR方法检测肺癌细胞系和组织标本中miRNA-182表达情况;对miRNA-182表达情况与肺癌临床病理特征关系进行分析;通过Boyden小室分析和伤口愈合实验检测miRNA-182对肺癌细胞转移和侵袭能力的影响;生物信息学方法预测miRNA-182可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的靶基因E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)是miRNA-182的靶基因;Western印迹方法检测ZEB2、E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达情况。结果四种肺癌细胞系miRNA-182mRNA的表达情况为高转移能力的肺癌细胞系95D和L9981其miRNA-182 mRNA表达显著低于转移能力较弱的肺癌细胞系NL9980或95C(P0.05),且同原发性肺癌组织相比,淋巴结转移癌组织中miRNA-182表达亦显著下调(P0.05);临床病理特征关系分析结果显示,miRNA-182表达仅与是否存在淋巴结转移相关。转染miRNA-182可显著抑制肺癌细胞系95D和L9981的转移(P0.05),同时,转染miRNA-182可显著抑制肺癌细胞系95D和L9981的侵袭能力(P0.05),而转染miRNA-182抑制剂可增加肺癌细胞系95D和L9981的侵袭能力(P0.05)。生物信息学预测显示ZEB2为miRNA-182的功能性靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miRNA-182可显著抑制肺癌细胞系95D和L9981中ZEB2和波形蛋白的表达,上调E-钙黏蛋白的表达。结论 miRNA-182可通过调节ZEB2、E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达,进而抑制肺癌细胞的转移和侵袭。     

二氢青蒿素体外抑制胃癌细胞的黏附、迁移和侵袭

目的 探讨二氢青蒿素(DHA)对人胃癌SGC7901细胞体外黏附、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法 1.25、2.5、5、10、20 μmoL/LDHA作用体外培养的人胃癌SGC7901细胞24 h后,MTT法检测细胞活力;1.25、2.5、5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h后,细胞黏附分析检测细胞黏附率;细胞划痕实验观察其对细胞迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验观察其对细胞侵袭能力的影响;RT-PCR和Western印迹分别检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,1.25、2.5、5μmoL/L DHA对SGC7901细胞增殖没有影响,但显著抑制SGC7901细胞黏附、迁移和侵袭能力,且抑制作用具有剂量依赖性.RT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组相比,5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h,细胞内ICAM-1、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),TIMP-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 DHA可体外抑制胃癌SGC7901细胞的黏附、迁移和侵袭能力,其机制可能与上调TIMP-2的表达,下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达有关.     

miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的探讨miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制。方法通过RT-PCR检测miR-215在高转移胃癌细胞株NCIN87,BGC-823,RF-48及低转移细胞株HGC-27及MKN-28中的表达;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-215抑制剂对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测miR-215抑制剂对胃癌细胞活化白细胞黏附分子(ALCAM),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附素(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)表达量的影响。结果 RT-PCR结果证实miR-215在高转移胃癌细胞株中的表达高于低转移胃癌细胞中的表达,且miR-215在BGC-823细胞中的表达最高,因此选用BGC-823作为后续实验细胞株。miR-215抑制剂转染BGC-823细胞48 h后,发现下调miR-215表达能显著抑制BGC-823细胞迁移及侵袭能力,并能下调ALCAM,MMP-2,MMP-9及Vimentin表达,上调E-cadherin表达。结论miR-215低表达能显著抑制胃癌细胞BGC-823侵袭及转移能力,与下调MMPs及抑制EMT生成有关。     

白藜芦醇通过调节自噬延缓ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化进展

目的 探讨白藜芦醇在动脉粥样硬化（AS）进展中的作用和机制。 方法 ApoE-/-小鼠60只随机分为4组（每组15只）:对照组、高脂喂养组、白藜芦醇组、高脂喂养+白藜芦醇组。HE染色法观察主动脉斑块病理学改变,生化分析仪检测血脂变化,蛋白质免疫印迹方法（Western blot）测定血管组织微管相关蛋白1轻链3（LC3）以及自噬相关蛋白p62变化。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,随机分为4组:对照组、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤组、白藜芦醇组、ox-LDL损伤+白藜芦醇组。TUNEL法检测细胞凋亡,蛋白质Western blot测定自噬相关蛋白LC3Ⅱ、p62的表达。 结果 与高脂喂养组比较,白藜芦醇干预后,AS斑块面积减少（P<0.05）,LC3Ⅱ水平上调（P<0.05）,p62水平下降（P<0.05）,表明白藜芦醇可以诱导自噬;同样,与ox-LDL损伤组比较,白藜芦醇干预后,损伤的巨噬细胞中凋亡水平下降（P<0.05）,LC3Ⅱ水平升高（P<0.05）,p62水平下降（P<0.05）。 结论 AS进展中会伴随自噬水平的下降,给予白藜芦醇处理后,能够延缓AS进展,其机制可能与白藜芦醇调节自噬能力有关。     

白细胞介素10通过促进线粒体自噬调节心肌细胞生物氧化

目的探讨白细胞介素10(IL-10)对心肌细胞葡萄糖代谢的影响及其可能机制。方法使用棕榈酸干预复制心肌脂毒性和葡萄糖利用减少细胞模型,外源性IL-10干预后,以荧光标记的2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)摄入法检测心肌细胞的葡萄糖摄取,检测乳酸及体外氧化磷酸分别代表葡萄糖无氧酵解及有氧氧化水平;使用免疫荧光检测线粒体自噬;使用Real-Time PCR及Western Blot检测线粒体自噬关键基因PINK1表达。结果与对照组比较,IL-10处理后,心肌细胞摄入2-NBDG量约增加1倍;细胞培养上清乳酸含量减少近80%;细胞内乳酸含量亦显著减少。IL-10促进微管相关蛋白1轻链3-绿色荧光蛋白(LC3-GFP)在心肌细胞线粒体聚集,促进线粒体自噬,并上调PTEN诱导假定激酶1 (PINK1)表达。结论 IL-10通过促进葡萄糖转入及氧化磷酸化恢复心肌细胞供能物质组成;其对氧化磷酸化的作用可能是通过上调PINK1进而促进线粒体自噬实现的。     

miR-539通过靶向调控DCLK1抑制非小细胞肺癌的侵袭能力

目的 探讨非小细胞肺癌组织中miR-539的表达水平及其抑制肺癌细胞侵袭的作用机制.方法 通过基因表达数据库dbDEMC分析miR-539在非小细胞肺癌组织及正常肺组织中的表达量差异.根据235例miR-539高表达的非小细胞肺癌患者和102例miR-539低表达的非小细胞肺癌患者随访资料,分析miR-539与非小细胞...     

细胞自噬与病毒感染

细胞自噬又称自食过程,构成的降解途径对于维持细胞内环境的稳定是不可或缺的。细胞自噬水平在细胞应激反应时显著增强。大量研究表明自噬在癌症、自身免疫紊乱等人类疾病中具有重要作用。自噬是把双刃剑,可能具有抗病毒作用,也可能会被病毒利用,为病毒服务,这取决于病毒种类、细胞种类以及细胞应激反应。本文旨在概括目前自噬和病毒之间的关系,总结自噬在病毒感染中扮演的角色。     

活化的肝星状细胞通过CCL22/CCR4轴促进肝癌细胞侵袭能力

目的探讨肝星状细胞通过CCL22/CCR4轴促进肝癌细胞侵袭的作用和可能机制。方法 TGF-β1(10 ng/ml)处理肝星状细胞LX-2不同时间,Western印迹检测处理前后肝星状细胞的活化标志物desmin及α-SMA的表达变化以及肝星状细胞LX-2和不同肝癌细胞系CCL22、CCR4表达。Transwell实验检测星状细胞LX-2或CCL22基因沉默后的MHCC-LM3侵袭的影响,Westem印迹检测上皮标志E-cadherin和间质标志N-cadherin及Vimentin的表达变化。结果肝星状细胞LX-2能被TGF-β1(10 ng/ml)活化,其活化的标志物desmin(24h:2.038±0.341;36h:2.562±0.248,相对于0h:1.329±0.172,P=0.008及P0.001)和α-SMA(24h:2.741±0.439;36h:3.126±0.521,相对于0h:1.271±0.182,P0.001)在处理24、36h后显著升高,星状细胞的趋化因子CCL22也随之高表达(24h:1.523±0.263;36h:1.836±0.319,相对于0h:3.126±0.634,P0.001),3株人肝细胞癌细胞系均有CCR4的表达,其中MHCC-LM3细胞表达最强。肝星状细胞LX-2活化后与肝癌细胞MHCC-LM3共培养能诱导其上皮间质分化,活化24h和36h后上皮标志物Ecadherin表达明显下降(24h:1.273±0.207;36h:1.405±0.141,相对于0h:3.126±0.634,P0.001),间质化指标Ncadherin(24h:2.516±0.384;36h:2.392±0.416,相对于0h:1.058±0.021,P0.001)和Vimentin(24h:2.875±0.437;36h:2.924±0.353,相对于0h:1.452±0.121,P0.001)表达则升高,并促进其侵袭。通过RNA干扰技术靶向沉默肝星状细胞CCL22则不能增强肝癌细胞侵袭能力,也不能诱导肝癌细胞MHCC-LM3发生上皮间质分化。结论肝星状细胞通过趋化因子CCL22/CCR4轴促进肝癌细胞侵袭,其机制可能与诱导肝癌上皮间质化有关。