芦丁对丙烯酰胺染毒大鼠胼胝体髓鞘蛋白表达的影响

目的探讨芦丁(Rut)对丙烯酰胺(ACR)染毒大鼠胼胝体髓鞘碱性蛋白(MBP)及髓鞘蛋白脂蛋白(PLP)表达的影响。方法成年SD雄性大鼠32只,随机分为4组:对照组、20 mg/kg丙烯酰胺染毒组(ACR)、100mg/kg Rut保护组(R1+ACR)、200 mg/kg Rut保护组(R2+ACR),每组8只,灌胃21 d后取材。每周1次步态评分,观察大鼠的步态变化;免疫组织化学及Western blotting检测各组大鼠MBP及PLP表达量的变化。结果步态评分结果显示,与对照组相比,ACR组步态评分随染毒时间延长而增加,R1+ACR及R2+ACR组与对照组相比步态评分亦呈增加趋势,但与ACR组相比,步态评分明显降低(P<0.05);免疫组织化学及Western blotting结果显示,与对照组相比,ACR组胼胝体MBP及PLP的表达量均明显降低(P<0.01),与ACR组相比,R1+ACR及R2+ACR组MBP及PLP的蛋白表达量增加(P<0.05)。结论芦丁对丙烯酰胺染毒大鼠的髓鞘具有保护作用,这种保护作用可能与Rut抑制ACR染毒引起的胼胝体髓鞘蛋白MBP及PLP的减少有关。     

丙烯酰胺染毒对大鼠坐骨神经MBP和MAG表达的影响

目的:通过检测染毒大鼠坐骨神经中髓鞘碱性蛋白(MBP)和髓磷脂相关糖蛋白(MAG)表达量的变化,探讨丙烯酰胺(ACR)对大鼠周围神经系统的毒性影响。方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分为对照组、9、18、36 mg/kg ACR组,每组8只,灌胃染毒21 d后取材。每周一次步态评分,记录大鼠步态改变;利用HE染色和劳克坚牢蓝染色,观察坐骨神经及其髓鞘的改变;通过免疫组织化学方法检测蛋白MBP和MAG表达量的变化。结果:大鼠步态得分与染毒剂量和染毒时间呈正相关; HE染色显示随染毒剂量增大,坐骨神经神经纤维排列紊乱、髓鞘结构发生改变、轴突数目减少;劳克坚牢蓝染色结果显示与对照组相比,染毒组髓鞘染色较浅、着色不均,髓鞘变细;免疫组化结果显示,MBP和MAG在坐骨神经中的表达量均随染毒剂量增大而下降。结论:ACR染毒对大鼠坐骨神经髓鞘的毒性损伤,可能与MBP和MAG蛋白表达量的下降有关。     

芦丁对丙烯酰胺致大鼠坐骨神经髓鞘损伤的保护作用

目的 通过观察芦丁(Rut)对丙烯酰胺(ACR)染毒大鼠坐骨神经髓鞘结构、髓鞘碱性蛋白(MBP)及髓鞘相关糖蛋白(MAG)表达的变化,探讨Rut对ACR致大鼠坐骨神经髓鞘损伤的保护作用.方法 成年SD雄性大鼠36只,随机分为4组:对照组(control,给予ddH2O)、20 mg/kg ACR染毒组(ACR)、100...     

大鼠坐骨神经髓鞘相关蛋白随年龄的变化

目的:研究大鼠坐骨神经髓鞘相关蛋白随年龄的变化及与髓鞘板层数之间的相互关系.方法:SD大鼠分别于饲养1周、1月、3月、9月、15月和21月后取坐骨神经,利用透射电镜观察计数髓鞘板层;采用免疫印迹检测髓鞘相关蛋白—髓鞘碱性蛋白(MBP)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)和P0蛋白(P0)的表达变化,并分析与板层数之间的相关性;采用荧光免疫组织化学显色观察MBP的表达变化.结果:透射电镜观察显示,大鼠坐骨神经髓鞘板层数从1周到15月逐渐增加,直到21月无显著变化.免疫印迹显示,MBP的表达随年龄增长而增加,21月时达到高峰,与髓鞘板层数呈正性直线相关;MAG在出生后1周表达最高,而P0在1月时达峰值,后皆随年龄增加而下降,MAG与髓鞘板层数呈负性直线相关,而P0与髓鞘板层数之间呈非直线相关.荧光免疫组织化学显色显示,随着年龄增长,MBP在大鼠坐骨神经的髓鞘表达的荧光强度逐渐增强.结论:大鼠坐骨神经髓鞘相关蛋白随年龄改变呈现不同的表达模式,并与髓鞘板层数之间存在一定相关性.     

睫状神经营养因子对大鼠脑缺血后髓鞘再生的影响

目的:研究睫状神经营养因子(CTNF)对脑缺血大鼠胼胝体髓鞘再生的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、双侧颈总动脉结扎(2-VO)组和CTNF治疗组(CTNF)。利用2-VO法制备大鼠脑缺血损伤模型,在术后24 h内用0. 4μg/kg的CTNF或生理盐水分别给予CTNF治疗组、2-VO组和Sham组大鼠尾静脉注射。给药7 d后通过神经缺损功能评分(NSS)和转棒实验(Rota-Rod)检测各组大鼠神经功能,电镜观察胼胝体内髓鞘超微结构的变化,通过免疫荧光染色观察少突胶质细胞转录因子2(Olig-2)的表达,Western Blot检测髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达。结果:与Sham组相比,2-VO组大鼠神经功能显著受损(P 0. 05);电镜下可观察到大鼠胼胝体髓鞘变薄、完整性差;胼胝体部位Olig-2表达显著减少; MBP表达显著下降(P 0. 05)。经CTNF治疗后7 d的大鼠出现神经功能明显改善(P 0. 05),胼胝体髓鞘结构明显恢复,Olig-2表达明显增加,MBP表达明显增加(P 0. 05)。结论:CTNF处理能够改善脑缺血大鼠神经功能,促进髓鞘再生。     

母源性丙烯酰胺暴露对断乳期大鼠额叶皮质GAP-43和BDNF表达的影响

目的:探讨母源性丙烯酰胺(acrylamide,ACR)暴露对断乳期大鼠额叶皮质生长相关蛋白(GAP-43)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响。方法:SD孕鼠随机分为4组,怀孕第6 d起对照组和实验组分别给予双蒸水和50,100,200μg/ml ACR饮水,直至仔鼠出生21 d,染毒结束时对断乳期大鼠称重。免疫组织化学检测额叶皮质GAP-43和BDNF的表达。结果:与对照组相比,实验各组断乳期大鼠体重呈浓度依赖性下降,且组间差异明显(P0.05)。与对照组相比,ACR实验各组GAP-43表达显著降低(P0.05),而低、中剂量组之间差异不显著(P0.05),高剂量组与低、中剂量组相比,表达显著减少(P0.05);与对照组相比,ACR实验组各组BDNF表达显著减少(P0.05),中、高剂量组与低剂量组相比,BDNF表达减少(P0.05),而中、高剂量组之间差异不显著(P0.05)。结论:母源性ACR染毒可能通过下调额叶皮质神经元GAP-43和BD)NF表达,抑制轴突延伸或扰乱神经元发育的内环境稳态,进而影响额叶皮质的发育。     

胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血损伤后髓鞘碱性蛋白表达的影响*

 目的： 用正交试验法验证胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血损伤的神经保护作用并优化其最佳治疗剂量及时间窗。方法: 应用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠前脑缺血模型,按照正交试验设计分组,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ干预治疗。固绿髓鞘染色法观察神经纤维髓鞘变化;免疫组织化学法和Western blotting定性、定量检测髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达;RT-PCR检测MBP mRNA水平。结果: 胡黄连苷Ⅱ可上调大鼠脑缺血损伤后MBP表达,减少脱髓鞘;其最佳治疗时间和剂量,根据固绿髓鞘染色显示为脑缺血2.0 h腹腔注射胡黄连苷Ⅱ 10 mg/kg;免疫组织化学法分析为脑缺血2.0 h腹腔注射10 mg/kg;Western blotting分析为脑缺血2.0 h给予10 mg/kg;RT-PCR显示为脑缺血1.5 h给予20 mg/kg。结论: 根据用药剂量最小化和治疗时间窗最大化的原则综合评价,胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血损伤的最佳治疗时间窗为脑缺血1.5～2.0 h,最佳治疗剂量为腹腔注射10～20 mg/kg。     

低剂量阿司匹林对大鼠慢性脑缺血诱导的脑白质损伤保护作用的研究

目的:探讨低剂量阿司匹林对慢性脑缺血诱导的大鼠脑白质损伤(white matter lesion,WML)的保护作用。方法:成年雄性SD大鼠20只,随机分为正常组、WML模型对照组、1 mg/kg/d阿司匹林处理组(ASA1)、10 mg/kg/d阿司匹林处理组(ASA10),每组5只。以双侧永久性颈总动脉结扎造成大鼠慢性脑缺血脑白质损伤。阿司匹林处理组腹腔注射不同剂量阿司匹林,连续30 d。采用卢卡斯快蓝(LFB)染色法检测胼胝体白质的形态,DiI示踪法检测轴突的损伤程度,Western Blot法检测胼胝体部位的髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)和环核苷酸磷酸二酯酶(2’,3’-cyclic nucleotid3 phosphodiesterase,CNPase)的表达变化。结果:LFB染色显示:与正常组相比,WML对照组胼胝体髓鞘变稀疏,LFB染色变浅(P<0.05)。DiI染色显示:胼胝体轴突损伤明显,轴突延伸变短(P<0.05)。Western Blot显示:模型对照组胼胝体部位MBP和CNPase的表达显著降低(P<0.05)。然而,低剂量阿司匹林(1 mg/kg/d和10 mg/kg/d)可明显降低髓鞘损伤以及升高MBP和CNPase的表达(P<0.05)。但两个剂量组间差异无统计学意义。结论:大鼠脑白质损伤后给予低剂量的阿司匹林具有髓鞘保护的作用。     

阿司匹林通过抑制EphA4通路保护缺血造成的脑白质损伤

目的:我们前期研究发现阿司匹林具有脑白质保护作用,但其机制尚不清楚。有研究报道Eph信号与白质损伤密切相关,为此本研究拟探讨大鼠脑白质损伤后阿司匹林对Eph受体表达变化的影响。方法:成年雄性SD大鼠利用双侧永久性颈总动脉结扎模型造成脑白质损伤(WML)。随机分为正常组、WML组和阿司匹林处理组(每日100 mg/kg,ip,30d),每组15只。采用Real-time PCR法检测正常组胼胝体内8种Eph受体的表达情况;免疫荧光染色检测Eph受体是否表达在少突胶质细胞中;Western Blot检测各组Eph受体和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达变化及相互关系。结果:Real-time PCR结果:8种Eph受体中,EphA4的mRNA表达水平最高。EphA4与CNPase的免疫荧光染色示:EphA4表达于胼胝体内的少突胶质细胞。与正常组相比,WML组中EphA4~+细胞数量增多(P0.05),阿司匹林处理后EphA4~+细胞数量减少(P0.05)。Western Blot结果显示:与正常组比较,WML组胼胝体部EphA4表达升高(P0.05),但MBP蛋白表达下降(P0.05);阿司匹林处理后,可下调EphA4(P0.05)、上调MBP的表达水平(P0.05),二者呈显著负相关。结论:阿司匹林可能通过抑制EphA4通路保护缺血造成的脑白质损伤。     

一重和多重脑震荡大鼠前额叶髓鞘脂蛋白(PLP)的变化

目的:为探索一重(pure cerebral concussion,PCC)和多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)后大鼠前额叶中隔断面髓鞘脂蛋白(myelin protein lipoprotein,PLP)分布与表达变化规律。方法:采用自制单摆式机械打击装置复制PCC和MCC大鼠模型,伤后随机分为PCC中1、2、4、8、16和24 d组(n=6),MCC中1、2、4、8、16和24 d组(n=6),另设正常对照组(n=6)。用小鼠抗-PLP单克隆抗体免疫组织化学SP法染色,观察致伤后大鼠中隔断面区PLP表达的动态变化。结果:正常状态下,PLP主要表达于皮质分子层和颗粒层的白质纤维;中隔区核团包括前脑内侧束(Mfb)、斜角带垂直支(VDB)、外侧隔核中间部(LSI)和杏仁核(amygdaloid nucle-us,AN);胼胝体(cc)、纹状体(CPu)和前联合(an)。PCC后多数脑区PLP表达变化无差异;MCC后皮质前额叶分子层、斜角带垂直臂核和纹状体脑区的PLP表达明显下调(P<0.05)。结论:结果提示MCC可能存在损伤累积效应,加重了中隔断面区神经纤维的损伤。     

IL-1β对脓毒症新生幼鼠胼胝体内少突胶质细胞前体细胞分化成熟的影响

目的:探讨IL-1β对少突胶质细胞前体细胞(OPCs)分化成熟及轴突髓鞘化的影响。方法:将出生1 d的SD幼鼠96只随机分为2组:对照组和脂多糖(LPS)组各48只。LPS组给予腹腔注射1mg/kg LPS,对照组腹腔注射等体积PBS。根据注射后时间分为3 h、24 h、3 d、7 d、14 d、28 d 6个亚组,应用双标免疫组化及Western blotting的方法观察3 h、24 h、3 d、7 d时IL-1β及IL-1受体1(IL-1R1)的表达和14 d、28 d时髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达。进行原代OPCs培养将其分为对照组、IL-1β组、IL-1β+IL-1受体拮抗剂(IL-1Ra)组及IL-1Ra组。将其诱导分化3 d后利用免疫荧光及Western blotting比较4组间MBP的表达。结果:与对照组相比,LPS注射后3 h、24h、3 d、7 d幼鼠胼胝体小胶质细胞表达IL-1β明显增加,其受体在OPCs表达增加。LPS注射后14 d、28 d,MBP在胼胝体的表达下降。细胞实验显示原代OPCs培养诱导分化3 d后IL-1β可以抑制MBP的表达,并且可以被IL-1Ra逆转。IL-1β可抑制磷酸化ERK的表达,ERK过表达可逆转IL-1β对MBP的抑制作用。结论:在脓毒症新生幼鼠胼胝体内IL-1β有可能通过抑制ERK通路来抑制OPCs成熟,从而导致脑白质轴突低髓鞘化。     

雌激素替代治疗对中年卵巢切除大鼠大脑白质、海马内髓鞘及Lingo-1蛋白的影响

目的检测经短期雌激素替代治疗(ERT)后中年卵巢切除大鼠大脑白质及海马内髓鞘相关指标及Lingo-1的表达,探讨雌激素对髓鞘作用的可能机制。方法 24只中年雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术(OVX)后,随机分为安慰剂治疗组(OVX+Veh组)和雌激素替代治疗组(OVX+E组)。ERT 1个月后,Morris水迷宫检测大鼠空间学习和记忆能力;从各组大鼠随机选取10只,透射电子显微镜观察大脑白质及海马内髓鞘的超微结构;Western blot检测大脑白质及海马内髓磷脂碱性蛋白(MBP)及Lingo-1的含量;免疫组化方法检测Lingo-1在大脑白质及海马的分布。结果 OVX+E组大鼠在定位航行实验中的潜伏期显著短于OVX+Veh组大鼠(P0.05);OVX+Veh组大鼠大脑白质和海马存在显著的髓鞘结构变性;OVX+E组大鼠大脑白质和海马中MBP的含量均显著高于OVX+Veh组(P0.05),而OVX+E组大鼠大脑白质和海马中Lingo-1的含量及分布均显著低于OVX+Veh组(P0.05)。结论1个月的ERT对中年卵巢切除大鼠的认知功能及大脑白质和海马内的髓鞘具有明显的保护作用,这种保护作用可能与雌激素下调大脑白质和海马内Lingo-1蛋白的表达有关。     

多发性硬化患者T淋巴细胞对不同浓度神经髓鞘及其成分的增殖反应性关系探讨

为比较不同浓度神经髓鞘组织、神经髓鞘蛋白及其合成多肽作为抗原对多发性硬化 (MS )和正常人的淋巴细胞诱发增殖反应的量效关系。用HLA DR15亚型MS和正常对照外周血单个核细胞 ,体外培养并检测对不同浓度的人神经髓鞘、脱脂神经髓鞘、蛋白脂蛋白 (PLP )、碱性髓鞘蛋白 (MBP )、PLP178 191和MBP87 10 6多肽 6种抗原的T淋巴细胞增殖反应性。结果发现神经髓鞘或脱脂神经髓鞘作为抗原刺激T淋巴细胞增殖反应的最佳浓度为 5 0～ 15 0 μg/ml,PLP或MBP最佳浓度为 2 5～ 10 0 μg/ml,多肽最佳浓度为 2 0～ 5 0 μg/ml。神经髓鞘抗原刺激T淋巴细胞增殖反应大于单一蛋白分子 ,后者又大于多肽。MS的T细胞对神经髓鞘类抗原有特异性异常增殖反应。     

母源性丙烯酰胺暴露对子代鼠皮质神经元MAP-2与氧化应激的影响

目的:探讨母源性丙烯酰胺(acrylamide,ACR)暴露对子代鼠大脑皮质神经元MAP-2与氧化应激的影响。方法:SD孕鼠随机分为4组,自怀孕第6 d至怀孕第19 d起对照组和实验组分别灌胃给药给予双蒸水和每日8,16和24 mg/kg ACR溶液。HE和尼氏染色观察子代鼠皮质神经元形态学改变,免疫组织化学和Western Blot检测子代鼠皮质神经元MAP-2的表达,应用试剂盒检测大脑皮质组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、还原谷胱甘肽(GSH)。结果:(1)MAP-2表达:与对照组相比,实验组中、高剂量组MAP-2表达下降,差异有统计学意义(P0.05),而低剂量组则差异不显著(P0.05)。(2)氧化应激指标变化:与对照组相比,实验组中、高剂量组子代鼠大脑皮质组织中MDA含量显著升高,而T-SOD活力和GSH含量显著下降,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:丙烯酰胺致子代鼠神经元损伤的机制可能与其诱导氧化应激损伤有关。     

米诺环素对糖尿病大鼠脊髓小胶质细胞极化的影响

目的:研究米诺环素对糖尿病大鼠脊髓小胶质细胞极化的影响。方法:27只成年雄性SD大鼠分为对照组(control)、糖尿病组(DM)、米诺环素处理组(minocyline),利用腹腔注射链脲菌素(STZ)方法制备糖尿病大鼠模型,检测大鼠的血糖及体重变化,免疫荧光染色检测大鼠脊髓Iba-1的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脊髓肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子β(TGF-β)和白细胞介素10(IL-10)的水平变化,Western Blot检测大鼠脊髓CD68、精氨酸酶-1(Arg-1)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达变化。结果:STZ注射成功制备了糖尿病大鼠模型;免疫组化染色显示糖尿病模型大鼠脊髓Iba-1阳性细胞增多;ELISA检测结果显示糖尿病组大鼠脊髓组织中M1型小胶质细胞特异性细胞因子(TNF-α和IL-6)水平增加,米诺环素处理组大鼠脊髓组织中M2型小胶质细胞特异性细胞因子(TGF-β和IL-10)水平增加;Western Blot结果显示STZ组大鼠脊髓CD68表达上调,MAG和MBP表达降低,而米诺环素治疗组Arg-1、MAG和MBP表达均增加。结论:糖尿病大鼠脊髓小胶质细胞被激活,米诺环素处理可促使小胶质细胞向M2表型转化并促进髓鞘再生。     

二乙基二硫化氨基甲酸盐对大鼠外侧嗅束髓鞘碱性蛋白表达的影响

目的:检测二乙基二硫化氨基甲酸盐(DDTC)干预后大鼠外侧嗅束髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的变化.方法:成年SD大鼠分为DDTC干预组、溶媒对照组和空白对照组,实验动物分别存活3、7、14和28 d,免疫组织化学和免疫印迹检测大鼠外侧嗅束MBP的表达变化.结果:正常大鼠和溶媒对照组大鼠外侧嗅束MBP免疫组织化学显色均匀,呈点状分布特征,免疫印迹主要显示相对分子质量为21 500、18 000、17 000和14 000等阳性条带.模型组大鼠外侧嗅束MBP的免疫组织化学显色和免疫印迹条带分布末见明显变化,但其表达在3 d和7 d时逐渐下调,14 d和28 d表达逐渐上调.结论:DDTC处理后早期大鼠外侧嗅束町能出现脱髓鞘化,晚期可能出现再髓鞘化.