HCV RNA RT—PCR测定室间质量评价的研究

目的 建立国内ＨＣＶ ＲＮＡ ＲＴ－ＰＣＲ测定的室间质量评价系统。方法：室间质量评价研究工作采用的质控血清盘由１０支冻干质控血清组成，其中包括２份强阳性、２份弱阳性，２份阴性和一个５倍位比稀释系列（４份），将血清盘寄发给各类评实验室并要求各个实验室按照规定时间检测，回报结果，然后对结果进行统计分析。结果 多数参评实验室存在不同程度的假阳性和假阴性的问题。２份强阳性标本检出率均为８７．５％，弱阳性标     

干扰素治疗前丙肝患者血清及外周血单个核细胞中HCV—RNA的检测

本文采用ＲＴ－ＰＣＲ方法对２６例干扰素治疗前丙肝患者血清ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测,并对１４例血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性的标本进行外周血单个核细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测,发现２６例血清标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率为２６．９％,而１４例血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性标本,其ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ有３例阳性,阳性率为２１．１％。因此,ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ是丙肝病毒血症的又一个诊断指标,是否可作为干扰素疗效判断的     

荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清,血浆,淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞,尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％,８０．００％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－Ｐ     

逆转录—半套式—聚合酶链反应单管法检测血清中HCV RNA

目的 探讨建立一种更简便，更特异灵敏的逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）单管法。方法 采用蜡隔将RT和PCR扩增2个独立的反应体系在1个Eppendoff(Ep)管中分隔开来，设计内外引物，优化反应体系及条件，使整个检测反应经高温启动继而连续封闭地完成。结果 在60例血透析患者血清中，33例（55％）抗－HCV－IgG阳性和27例抗－HCV－IgG阴性血清用单管RT－PCR分别检出28例（85％）和3例（9％）HCV RNA阳性，并对3份阳性PCR产物作核酸序列测定。本方法的检测灵敏度为10^2拷贝／ml。结论 RT－PCR单管法在保持高灵敏度的前提下，提高了特异性，具有简单高效，杜绝外源性污染等优点。     

249例抗—HCV与HCV—RNA检测结果的比较和分析

逆转录-多聚酶链反应（RT－PCR）技术现已较多应用于HCV感染的分子生物学诊断。为了解其与ELISA法检测抗一HCVIN的关系，我们对249例患者同时做此两项检测，作回顾性比较和分析。一、材料和方法HCV－RNA、RT－PCR试剂由本院分子生物实验室制备。检测方法为用30VI血清抽提HCV－R     

应用套式RT—PCR方法检测大肠癌患者外周血中的肿瘤细胞

目的：探讨应用套式RT－PCR检测在肠癌患者外周血中的肿瘤细胞的可行性及其临床意义。方法：以CK－20mRNA为靶基因,应用套式RT－PCR方法检测10名健康人,17名非恶性消化系疾病患者,32名大肠癌患者手术前、后3天外周血中的肿瘤细胞,结果：CK－20mRNA在空白对照组中均呈阴性表达,大肠癌患者CK－20表达情况为：2名Duke'sA期患者外周血中未检出CK－20阳性细胞,15名Duke'sB期患者外周血中CK－20mRNA阳性表达4例,10名Duke'sC患者外周血CK－20mRNA阳性表达6例,5名Duke'sD期患者外周血中CK－20mRNA阳性率达4例。32名大肠癌患者术,术前CK－20mRNA阳性总检出率为43．8％;A、B期阳性率为23．5％;C、D期阳性率为66．7％。结论：以CK－20为靶基因,应用套式RT－PCR检测大肠癌患者外周血中的肿瘤细胞是一非损伤性且特异性、敏感性较高的检测方法。它将有助于肿瘤经血液微转移的早期诊断,并将有助于指导辅助化疗和监测其疗效。．     

荧光信号引物PCR定量测定血清HCV—RNA的实验室评价

目的对Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ荧光标记ＨＣＶ定量ＰＣＲ方法进行实验室考核。方法２８例抗ＨＣＶ（＋）、定性ＰＣＲ（＋）的血清标本，用于重复性测定；２０例健康人血清用于正常值测定；５例定性ＰＣＲ（＋）和５例定性ＰＣＲ（－）标本用于Ａｍｐｌｉｓｅｍｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法的比较。结果孔间变异系数（ＣＶ）为 ２０．６％，操作者间ＣＶ为 ４３．８％，批内 ＣＶ为 ６１．９％，批间ＣＶ为８５．１％。２０例健康人血清测定值均小于最小检测浓度，即１０２拷贝／ｍｌ。用Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法对５ 例定性ＰＣＲ（－）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ均为阴性；对５ Ｎ定性ＰＣＲ（＋）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ均为阳性，ＨＣＶ－ＲＮＡ的浓度为 ２． ５ × １０５拷贝 ／ｍｌ～ １． ７ ×１０６拷贝 ／ｍｌ， ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ方法有 ２例未能检出。结论 Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ ＨＣＶ定量 ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均好，可用于临床疾病的研究和抗病毒药物疗效的评估。由于批内、批间变异系数较大，试验与操作均应严格规范。     

PCR-ELISA法检测HCV-RNA的临床应用

采用 PCR法检测血清中 HCV-RNA是诊断丙型肝炎和观察抗病毒疗效的重要指标。但常规 PCR仍存在产物污染和需使用有毒化合物溴化乙啶等缺点。我们最近采用抗污染 PCR与 ELISA检测相结合的新方法进行了初步临床应用 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1 .1　试剂　由上海复华公司提供成套 PCR-ELISA法试剂盒 ,其中引物对选自 HCV5′非编码区 (5′UTR) ;目的扩增片段长 2 97bp,1 1 5 bp;特异性捕集探针长度为 5 0～ 60bp;第一次扩增反应液中加入适量尿苷酶 (UNG)。抗 -HCVELISA试剂盒、常规 PCR试剂盒购自华美生物工程公司 ,…     

HCV RNA荧光定量PCR在抗HCV阳性者中的应用

本研究通过实时荧光定量PCR技术对抗HCV阳性者血清中HCV　RNA的测定，以确定抗HCV的感染状况，进一步探讨抗HCV与HCV　RNA检测之间的关系。     

荧光定量两探针法检测HCV RNA的研究

目的 建立荧光定量两探针检测HCV RNA方法.方法 对105例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本,用荧光定量两探针法和2种商品荧光定量试剂进行检测,并对检测结果进行比较.结果 荧光定量两探针法阳性率分别为89.5%（94/105）和2.3%（5/220）.两种商品荧光定量试剂阳性率分别为71.4%（75/105）和0.45%（1/220）;69.5%（73/105）和1.8%（4/220）.结论 荧光定量两探针法检测HCV RNA有较高的敏感性和特异性.     

一种竞争性RT-PCR测定HCV RNA方法的建立及其应用

目的　建立检测丙型肝炎病人血清HCVRNA水平的竞争性逆转录 聚合酶链式反应定量方法。方法　采用含HCV 5 非编码区 ( 5 NCR)缺失突变的重组质粒 5T1d ,将其目的基因亚克隆到体外转录载体pCDNAⅠ多克隆位点上 ,获得转录重组体 5T1d 。将其线性化后用SP6RNA聚合酶体外转录竞争性缺失突变模板RNA ,该模板定量后与血清HCVRNA一起作逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR) ,建立检测血清HCVRNA水平的竞争性定量方法。结果　检测 15例丙肝病人 2 0份血清 ,滴度为 6.6× 10 2 ～ 6.6× 10 6copies/ml。 结论　各类丙型肝炎患者血清病毒滴度均较高 ,经干扰素治疗后病毒水平下降 1～ 5个Log ,年龄小于 2 0岁者干扰素治疗效果较好。     

HCVRNA定量及HCV核心抗原和丙氨酸氨基转移酶结果分析

目的分析丙型肝炎病毒(HCV)RNA定量检测结果与HCV核心抗原及丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测结果的相关性。方法收集涪陵监狱卫生所94例住院和门诊患者血清,采用逆转录聚合酶链反应荧光探针法定量检测标本中的HCV RNA,同时采用酶联免疫吸附试验检测HCV核心抗原,采用全自动生化分析仪检测ALT水平。结果 94例样本中HCV RNA阳性率为56.4%(53/94),HCV核心抗原阳性率为53.2%(50/94),经统计学分析,两种方法的阳性率差异无统计学意义(P>0.05),符合率为84.9%(45/53);ALT异常率为62.3%(33/53),随着HCV RNA含量的升高而增加。结论 HCV RNA定量检测结合HCV核心抗原及ALT检测,可帮助临床了解HCV在体内的复制水平及肝脏的炎性反应状态,以指导临床用药及疗效观察。     

Performance comparison of new generation HCV core antigen test versus HCV RNA test in management of hepatitis C virus infection

The study has evaluated the performance of HCV core antigen (Cag) test by comparing HCV RNA PCR assay which is considered the gold standard for management of HCV infection.Totally, 132 samples sent for HCV RNA (real-time PCR) test were included in the study. Anti-HCV antibody test and HCV Cag test were performed by chemiluminescent enzyme immunoassay (CMEI).Anti-HCV test was positive in all samples. HCV RNA was detected in 112/132 (84.8%) samples, and HCV Cag in 105/132 (79.5%). The most common HCV genotype was genotype 1 (86%). Considering the HCV RNA test as gold standard; the sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and accuracy of Cag test were found to be 93.75%, 100%, 100%, 74.07% and 94.69%, respectively, and paired test results were detected as highly concordant. A high level of correlation was seen between HCV RNA and Cag tests, however, the concordance between the two tests appeared to be disrupted at viral loads lower than 10³ IU/mL. On the contrary, the correlation reached significance for the values higher than 10³ IU/mL. Viral loads were in the 17–2500 IU/mL range for the negative results for Cag test. Pearson's correlation coefficient revealed a considerably high correlation.The concordance between HCV RNA and Cag tests was disrupted under a viral load lower than 10³ IU/mL. Therefore, it would be appropriate to consider cost effectiveness, advantages and limitations of the HCV RNA and Cag tests during the decision on which method to use for patient management.     

HCV感染的献血者血清中病毒量的检测及分析

选取１６名经血清ＨＣＶ－ＲＮＡＰＣＲ测定为阳性的ＨＣＶ感染的献血者进行血清病毒含量的检测。这些献血者发生ＨＣＶ感染的期限约２年，其ＨＣＶＲＮＡ含量在１０３．５～１０５．５拷贝／ｍｌ，随着血清中ＨＣＶＲＮＡ含量的增加，ＡＬＴ水平异常者的数量似亦相应增加。由于这些ＨＣＶ感染的献血者均未经过任何与肝炎有关的治疗，所以继续追踪观察的结果将有助于评价血清中病毒含量与ＨＣＶ致病及预后的关系。     

丙型肝炎病毒抗体联合核酸定量检测对丙型肝炎患者的早期诊断价值研究

目的：探讨在丙型肝炎患者早期诊断中丙型肝炎病毒抗体联合丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）检测的临床价值。方法对116例鼓楼医院住院及门诊丙型肝炎患者采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）测定HCV RNA、酶联免疫吸附试验（ELISA）和金标法测 HCV抗体、速率法测丙氨酸氨基转移酶（ALT ）。结果116例丙型肝炎患者中,ELISA HCV抗体阳性97例（占83．6％）,HCV RNA阳性85例（占73．3％）,HCV 金标阳性77例（占66．4％）,ALT阳性69例（占59．5％）,HCV抗体和 HCV RNA联合检测总阳性率（指任-指标阳性即为阳性）为100．0％。结论 HCV抗体和HCV RNA联合检测扩大了丙型肝炎检测范围,降低了丙型肝炎的漏诊率,有利于丙型肝炎的早期诊断。     

双探针实时荧光定量检测HCV RNA的研究

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,探讨解决HCV RNA定量灵敏度和特异性问题。方法对89例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行检测。结果双探针荧光定量法阳性率分别为91.0%(81例)和2.72%(6例)。两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为82.0%(73例)和0.9%(2例);79.7%(71例)和2.27%(5例)。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性。     

丙肝患者治疗前后HCV RNA与抗-HCV及丙氨酸氨基转移酶水平的分析

目的分析丙型肝炎患者治疗前血清HCV RNA、抗-HCV和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及治疗后HCV RNA和ALT水平的变化规律。方法对87例丙型肝炎患者血清进行实时荧光定量法(PCR)检测HCV RNA、ELISA法检测抗-HCV和酶速率法检测ALT浓度水平,并对所得数据进行统计学分析。结果丙型肝炎患者血清抗-HCV抗体滴度显著高于健康对照组,大部分患者的ALT水平均有显著性升高;HCV RNA含量与ALT水平具有显著相关性(r=0.673,P0.01),而与抗-HCV的S/OD值无显著相关性(r=0.122,P0.05);在治疗早期,患者HCV RNA含量在第2天显著性下降,而ALT浓度呈一过性上升。结论在HCV诊断与疗效观察中,血清HCV-RNA、抗-HCV和ALT指标各有利弊,3者有机结合在正确诊断和预测肝脏损伤及早期疗效观察中具有重要的临床意义。     

应用NASBA技术对献血者血浆/血清进行HCVRNA检测

目的　探讨对献血者混合血浆标本检测HCVRNA的必要性和可行性。方法　每 5 0份血浆混合为一组 ,用NucliSensExtractor提取核酸 ,以NASBA技术扩增HCVRNA和用ECL检测扩增产物。标本贮存 ,核酸提取、扩增、检测过程设立系统对照和阳性对照。结果　在抗 HCVELISA阴性的献血者 10 0 0 0人中发现 2例HCVRNA阳性。结论　用NASBA技术对混合血浆进行HCVRNA检测可有效控制输血后丙型肝炎的发生。