部分背根切断对备用背根节和脊髓IGF-Ⅰ表达的影响

目的探讨IGF-Ⅰ在正常猫和部分去背根猫的L6双侧背根节和脊髓Ⅱ板层(L3、L5、L6)与背核(L3)表达及变化, 以了解IGF-Ⅰ与脊髓可塑性的关系.方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7 d组与14 d组,每组5只.用兔抗IGF-Ⅰ(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色.观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中IGF-Ⅰ的分布、含量.结果①IGF-Ⅰ在去部分背根后7 d,术侧背根节阳性细胞数比正常组显著减少(P<0.05),与非术侧比无差异(P>0.05);术后14 d,术侧背根节IGF-Ⅰ阳性神经元数比正常组亦显著减少(P<0.05),与术后7 d组比无差异(P>0.05),较非术侧者明显减少(P<0.01).②各组L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层内IGF-Ⅰ阳性神经元数均无明显差异(P>0.05).L3背核IGF-Ⅰ阳性神经元数在术后两时相则先减少后增加(P<0.05),且在术后14 d时恢复至正常水平(P>0.05).结论部分背根切断导致双侧背根节IGF-Ⅰ表达改变和脊髓背核IGF-Ⅰ表达改变,提示IGF-Ⅰ与脊髓可塑性有关.     

部分背根切断对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的探讨NT-4在正常猫和部分去背根猫的L6背根节(手术侧和非手术侧)和脊髓Ⅱ板层与背核表达的变化。方法成年健康雄猫15只分为正常组、备用根术后7d组和14d组(动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根),采用免疫组化ABC法,观察、计数各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层(L3、L5、L6)和背核(L3)中NT-4的分布及含量。结果①去部分背根后7d,备用背根节(术侧)中NT-4阳性神经元数比正常组显著减少（P＜0．05),但较非术侧明显增多(P＜0．05);至术后14d,术侧备用背根节NT-4阳性神经元比正常组、7d组和非术侧均减少(P＜0．05)。②正常组、术后两时相L3、L5、L6术侧脊髓Ⅱ板层和L3背核内NT-4阳性神经元数均无明显变化。结论去部分背根主要导致备用背根节NT-4的表达发生变化。     

部分背根切断对备用背根节神经元Bax、Bcl-2及Caspase-3表达的影响

目的　研究部分去背根对备用背根节 (DRG)神经元 Bax、Bcl- 2、Caspase- 3表达的影响。方法　制作单侧备用背根模型 ,3d、7d和 14 d后取备用背根节分别用兔抗 Bax、Bcl- 2及 Caspase- 3行免疫组化 ABC法染色 ,同时另设一正常对照组。分别计数单位面积内各组大、中小阳性神经元的数量。结果　正常组 Bax、Bcl- 2、Caspase-3阳性反应物主要分布于背根节的中小神经元和少数大神经元。术后 3d,Bax总阳性神经元数较正常组明显增加(P<0 .0 5 ) ,至术后 14 d Bax总阳性神经元数下降并恢复到正常水平。各时间段 Bcl- 2总阳性神经元数无显著性差异。3d组 Caspase- 3总阳性神经元数与正常组比较显著增加 (P<0 .0 5 ) ;7d组、14 d组与 3d组无显著差异。 Bax、Bcl- 2和 Caspase- 3阳性大神经元数在各时间段均无显著性差异 ,阳性中小神经元数的变化规律与总阳性神经元数的变化规律相同。结论　部分去背根主要对备用 DRG中小神经元 Bax、Bcl- 2、Caspase- 3表达有影响 ,三因子表达高峰可能在术后 3～ 7d。     

部分背根切断对备用背根节GDNF、FGF-2表达的影响

目的 探讨部分背根切断后不同时相备用背根节(DRG)中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、成纤维细胞神经生长因子(FGF-2)的表达变化。方法 15只猫分正常组、单侧部分背根切断7d及14d组,每组5只。分别于术后7d、14d处死动物,取正常组一侧、模型组手术侧L6DRG,用兔抗GDNF、FGF-2抗体行免疫组化ABC法染色,计数DRG内两因子阳性总细胞及阳性大、中小细胞的数量。结果 GDNF在正常猫DRG大、中小细胞均有分布;去部分背根后,两时相备用DRG GDNF阳性神经元总数均有下降且呈进行性递减。DRG阳性中小细胞数亦为术后两时相进行性下降,DRG阳性大神经元术后两时相均较正常组显著减少,但术后14d与术后7d组无显著性差异。FGF-2在脊髓DRG大、中小细胞亦有分布;去部分背根后7d,FGF-2阳性神经元总数下降,14d时又恢复至正常,中小细胞亦表现为先减少后上升的趋势,而大细胞则术后两时相与正常组间无显著差异。结论 去部分背根手术可致备用DRG中GDNF阳性神经元总数进行性下降,FGF-2表现为术后7d下降,14d时恢复。     

部分背根切断及针刺促进备用背根节c-jun的表达

目的 探讨部分背根切断术及针刺对背根节（DRG）c-jun表达的影响。方法 针成年雄猫15只，分假手术组，手术组和术后针刺组，每组5只。手术组动物行单侧备用根术，术后针刺组动物经单侧备用根术后，针刺后肢手术侧L6脊神经分布区中的两组穴位，足三里和悬中：伏兔和三阴交，每天一次，每次30min，连续针刺7d，通过免疫组化ABC法，用c-jun特异抗体（1:1000,Santa Cruz)对切片进行染色，DAB呈色。观察并测量DRG中c-jun阳性神经元的分布，数量及反应强度。结果 在假手术组DRG中，只有部分神经元染色。手术组c-jun阳性神经元的数值较假手术组显著增多（P＜0．05），其免疫反应水平较假手术组，显著上升（P＜0．05）。术后针刺组较手术组的c-jun免疫反应强度增强，而阳性神经元的数量没有显著差异。结论 部分背根切断后备用DRG神经元中c-jun的表达增加，针刺促使c-jun的表达进一步上调。     

针刺对备用背根节和脊髓NT-4表达的影响

目的 观察NT-4在针刺部分去背根猫的L6背根节（手术侧和非手术侧）和脊髓表达的时空变化,以了解NT-4与针刺促进脊髓可塑性的关系。方法 25只成年健康雄猫随机分为5组：即正常组,备用根术（动物行单侧部分去背根手术,即切除一侧L1-L5、L7-S2背根节,保留L6为备用根）后7d组与14d组、针刺备用根术（动物行单侧部分去背根术后针刺）后7d组与14d组。动物处死后,取L6背根节及L3、L5、L6节段脊髓,用兔抗NT-4（1：200）抗体行免疫组化ABC法染色。观察、计数并比较各组背根节、脊髓实验侧Ⅱ板层（L3、L5、L6）和背核（L3）中NT-4的分布及含量。结果 针刺备用根7d组,针刺侧DRG内NT-4阳性神经元数较正常组和术后7d组减少（P＜0．05）,较相应非针刺侧多（P＜0．05）;针刺14d组,针刺侧DRG阳性神经元数比针刺7d组术后14d和同组非针刺侧增高（P＜0．05）,且恢复至正常水平。针刺7d,针刺侧脊髓L6Ⅱ板层NT-4阳性神经元数较术后7d组及正常组增加（P＜0．01）。针刺14d时,L5、L6Ⅱ板层阳性神经元数较正常组及术后14d组相应节段均增加（P＜0．01）。针刺后L3背核NT-4阳性神经元数无明显变化（P＞0．05）。L5Ⅱ板层NT-4阳性神经元在针刺后14d时比针刺后7d时增多（P＜0．05）。结论 以上结果提示NT-4与针刺促进脊髓可塑性有关;针刺备用背根对非针刺侧DRG NT-4的表达亦有影响,提示非针刺侧背根节NT-4亦可能参与了脊髓可塑性和针刺促进脊髓可塑性。     

部分背根切断对备用背根节trkC表达的影响

为探讨去部份背根（切除一侧L1－L5, L7－S2背根节,保留L6背根为备用根）猫备用L6背根节（DRG）trkC表达的变化,用特异的trkC兔抗血清以免疫组织化学方法染片,观察trkC在DRG的分布。计数正常组一侧,术后3天及10天组手术侧L6 DRG大、小神经元trkC的阳性细胞数,结果用q检验进行统计分析。结果：trkC的免疫阳性反应（trkC－IR）主要分布于DRG的大细胞及少数小神经元胞浆内。部分去背根后3天, L6 DRG大、小 trkC－IR阳性神经元数与正常组者比较无显著变化（P＞0.05）。但10天组者,trkC阳性大神经元的数量明显减少,而小神经元数则明显增多（P＜0.05）,表明部分背根切断使备用DRG trkC的表达在大神经元减少,而小神经元则增加。以上提示,备用DRG trkC的表达变化可能与脊髓可塑性有关系。     

部分背根切断对备用背根节trkC表达的影响

为探讨去部份背根（切除一侧Ｌ１－Ｌ５,Ｌ７－Ｓ２背根节,保留Ｌ６背根为备用根）猫备用Ｌ６背根节（ＤＲＧ）ｔｒｋＣ表达的变化,用特异的ｔｒｋＣ兔抗血清以免疫组织化学方法染片,观察ｔｒｋＣ在ＤＲＧ的分布。计数正常组一侧,术后３天及１０天组手术侧Ｌ６ＤＲＧ大、小神经元ｔｒｋＣ的阳性细胞数,结果用ｑ检验进行统计分析,结果：ｔｒｋＣ的免疫阳性反应（ｔｒｋＣ－ＩＲ）主要分布于ＤＲＧ的大细胞及少数小神经元胞浆内     

部分背根神经切断对脊髓Ⅱ板层GDNF表达的影响

目的：为探讨胶质源性神经营养因子（GDNF）与脊髓Ⅱ板层可塑性的关系。方法：将成年雄猫5只行单侧部分背根切断术（切除一侧的L1-L5，L7-S2DRG，保留L6DRG为备用根）。术后动物存活10d，取L3脊髓制作20цm厚冰冻切片。用GDNF抗体（1：1500）按常规ABC法染色，观察GDNF样免疫反应在脊髓的分布，计数Ⅱ板层GDNF阳性神经膨体密度。测定Ⅱ板层GDNF的平均灰度值以间接反映其相对含量。结果：正常侧，GDNF的免疫阳性反应物主要分布在脊髓灰质神经元，胞浆染色，Ⅱ板层亦见少量GDNF阳性神经膨体，白质胶质细胞亦有GDNF阳性反应，部分去背根后10d，L3平面手术侧Ⅱ板层GDNF含量及神经膨体密度均明显较非手术侧减少。结论：部分背根切断后，手术侧Ⅱ板层GDNF的含量减少提示GDNF不仅与脊髓的生理功能有关，且可能在脊髓Ⅱ板层可塑性中发挥作用。     

部分背根切断对备用背根节神经元EGF表达的影响

目的研究部分去背根对备用背根节神经元表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法制作猫备用背根模型,在3d、7d及14d时取备用背根节用EGF抗血清(1∶200)行免疫组织化学ABC法染色。分别计数各组大、中小及总阳性神经元的数量。结果EGF在备用背根节的大、中小神经元均有表达。EGF总、大、中小阳性神经元数3d时较正常均明显减少(P<0.05),7d时,总阳性神经元与正常相比无差异,大阳性神经元较正常明显增加(P<0.05),而中小阳性神经元较正常继续减少(P<0.05),14d时均又与正常无差异。结论部分背根切断对备用背根节神经元EGF总、大及中小阳性神经元的表达有不同的影响。但都经历了3d时较正常减少,14d恢复至正常水平的变化趋势。     

The expression of trkC in spared dorsal root ganglion following unilateral dorsal root rhizotomy]

This study sought to explore the expression of trkC in spared dorsal root ganglion(DRG) following unilateral dorsal root rhizotomy. 15 cats were divided into three groups: the intact group, the 3-day and 10-day groups after operation (unilaterral L1-L5 DRG and L7-S2 DRG were sectioned, but L6 DRG was spared). The animals were sacrificed on the 3rd day and 10th day after operation, respectively. The L6 DRG from the three groups were taken and cut into frozen sections (20 microns). The sections were stained using specific antiserum for trkC by the immunohistochemical ABC method. The numbers of large sized neurons (> 57 microns) and small sized neurons (< 42 microns) for trkC-IR were counted respectively. The results showed that the number of positive large sized neurons for trkC of the 10-day group after operation decreased significantly than that of the intact group and the 3-day group after operation, while the number of positive small sized neurons for trkC of the 10-day group increased apparently than that of the intact group and the 3-day group after operation (P < 0.05). This experiment demonstrated that unilateral partial dorsal root rhizotomy could change the expression of trkC might in large neurons and small sized neurons, and the results suggested that trkC might involve in the spinal cord plasticity following partial dorsal root rhizotomy.     

The spatiotemporal change of neurotrophin family and their mRNA expression in spinal cord of cats after partial rhizotomy]

OBJECTIVE: To investigate the spatiotemporal change rule of NGF, BDNF, NT-3 and their mRNA expression in spinal cord of cats after partial dorsal rhizotomy. METHODS: Rhizotomy of unilateral L1-L5, L7-S2 dorsal roots of cats was performed, leaving L6 as a spared dorsal root. By using ABC immunohistochemistry and in situ hybridization techniques, the dynamic changes of the above three factors and their mRNA in spinal lamina II of different segments were analysed. RESULTS: 1. In normal cat, NGF and it's mRNA were detected in part of neurons; BDNF, in nerve fiber terminals, varicosities and neurons; NT-3, in part of neurons, neuroglias and few nerve fiber terminals and varicosities. The mRNAs of the later two were negative. 2. The population of NGF and NGGmRNA positive neurons, NT-3 positive neurons and neuroglias increased significantly 3d-5d after rhizotomy. However, the quantity and density of positive varicosity of BDNF decreased. At 10-11d, the population of NGF and NGF mRNA positive neurons was still on the high level as that at 3-5d, and that of NT-3 began to decrease; the quantity of BDNF recovered to normal except for L, segment, but the density of positive varicosity of BDNF did not yet. The mRNAs of BDNF and NT-3 were still negative. 3. The change of each factor varied with the segments. The highest level time of NGF was earlier in L5, L6 than in L3; the recovery of the quantity of BDNF was the latest in L7; the change of NT-3 positive neuroglia was the same at each segment, but the number of NT-3 positive neuron in L5, L7 returned to normal at 10-11d, and that of L3 did not. CONCLUSION: The three factors all play roles in spinal plasticity after partial rhizotomy, but they function at different time phase and last different time length.     

不同时间针刺足三里穴对炎性大鼠脊髓、背根神经节中TRPV4蛋白表达的影响

目的研究不同时间针刺足三里穴对炎性大鼠脊髓及背根神经节中香草酸瞬时电位受体4(TRPV4)蛋白表达的影响。方法将54只清洁级的雄性SD大鼠驯化7 d后,进行基础痛阈筛选,然后按痛阈结果随机分组为造模组36只、空白组18只,造模组在右足足垫部皮内注射完全弗氏佐剂0.1 mL,空白对照组注射0.1 mL生理盐水。造模成功的大鼠又按照基础痛阈随机分为模型组18只和针刺组18只,每组按照不同的处理时间又分为ZT8(15:00)、ZT16(23:00)2个时间亚组,每组9只。在2个时间点进行处理,针刺组在相应时间点手针针刺患侧足三里30 min,其间每5 min捻转1 min,频率为120次/min,模型组、空白组捆绑固定30 min,不做其他处理,1次/d,共治疗7 d。在第7天治理结束后检测相应时间点大鼠的痛阈,痛阈检测后取材,提取大鼠腰椎4～6的脊髓及背根神经节,采用免疫组化的方法检测大鼠背根神经节以及脊髓中TRPV4的表达。结果①在ZT8时间点:模型组大鼠与空白组相比,背根神经节中TRPV4表达量显著增加(P<0.01);脊髓组织TRPV4蛋白表达量明显上调(P<0.05)。针刺组大鼠与模型组相比,针刺组背根神经节TRPV4表达量显著下降(P<0.01),脊髓组织TRPV4蛋白表达量无明显差异(P>0.05)。②在ZT16时间点:与空白组相比,模型组大鼠背根神经节TRPV4表达量明显增加(P<0.05),脊髓组织TRPV4蛋白表达量明显上调(P<0.01)。与模型组相比,针刺组大鼠背根神经节TRPV4表达量无明显差异(P>0.05),脊髓组织TRPV4蛋白表达量降低(P<0.05)。结论炎性痛能够诱发大鼠脊髓和背根局部神经节TRPV4蛋白表达的上调;针刺足三里穴能够调节炎性痛大鼠脊髓与背根神经节TRPV4的蛋白含量。     

大鼠脊神经后根中枢突切断对脊神经节卫星细胞表达Slit1的影响

目的:观察大鼠脊神经后根中枢突切断后相应背根神经节(DRG)卫星细胞(SGCs) Slit1的表达变化.方法:24只成年SD大鼠随机分为1、3、7d和14 d组(n=6),脊神经L5、6左侧后根中枢突切断后,应用免疫组织化学方法检测各组相应DRG内卫星细胞Slit1表达变化.结果:DRG中枢突切断后1d组表达slit1阳性卫星细胞围绕的神经元比例开始增加,7d达到高峰,14d后逐渐下降,各组与对照组(右侧)比较有明显差异(P＜0.01),各对照组间无明显差异(P＞0.05).对照组少量神经元slit1弱表达,1、3d组Slit1阳性的神经元比例分别为40.12％和59.45％,7、14 d组神经元表达Slit1显著减少.结论:成年大鼠脊神经中枢突切断后,Slit1在SGCs和感觉神经元表达上调,SGCs源性Slit1可能参与了感觉神经损伤后修复过程.     

糖尿病早期大鼠背根神经节IGF-I与GAP-43 mRNA的表达

目的:观察糖尿病早期(2周)大鼠背根神经节中胰岛素样生长因子-I(IGF-I)与生长相关蛋白-43(GAP-43)基因的表达变化以及胰岛素对其的影响。方法:按60mg/kg予SD大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素制备胰岛素依赖性糖尿病大鼠模型,然后将造模成功的大鼠随机分成模型组与治疗组,治疗组于造模成功后第2天开始皮下注射胰岛素进行治疗,qd。2周后取各组大鼠背根神经节(DRG),Trizol法提取总RNA,应用RT-PCR法测定IGF-I与GAP-43 mRNA的表达。结果:在糖尿病早期大鼠DRG中,IGF-I,GAP-43 mRNA的表达显著下调,胰岛素能明显上调IGF-I mRNA的表达,对GAP-43 mRNA的表达有上调趋势。结论:在早期糖尿病DRG中IGF-I,GAP-43 mRNA表达下调,参与了糖尿病外周神经病变的发生发展。     

Edaravone对脊髓神经细胞体外存活的作用

目的探讨Edaravone对脊髓神经细胞体外存活的作用和对谷氨酸兴奋性神经细胞毒性的影响。方法分离培养脊髓背根神经节(DRG),加入谷氨酸并使用Edaravone进行干预,倒置显微镜下观测细胞在不同培养条件下存活;流式细胞仪观测分析神经细胞凋亡。结果谷氨酸可诱导体外培养的DRG细胞凋亡,Edaravone抑制谷氨酸的神经细胞损伤作用,且浓度更高作用明显。结论Edaravone对谷氨酸的兴奋性神经细胞毒性具有浓度依赖性保护作用,其作用机制可能与其抗自由基导致的细胞凋亡有关。     

背根节脉冲射频对坐骨神经缩窄模型大鼠脊髓背角小胶质细胞活化的影响

[目的]探讨背根节脉冲射频对坐骨神经缩窄模型大鼠脊髓背角小胶质细胞活化的影响.[方法]取清洁级雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、模型对照组和治疗组,治疗组给予背根节脉冲射频,参数为温度42℃,脉宽20ms,频率2Hz,时间240s.采用免疫组织化学方法检测术后1周各组大鼠脊髓背角小胶质细胞活化标志物OX-42的表达情况.[结果]模型对照组和治疗组OX-42阳性细胞数明显高于正常对照组(P<0.05),治疗组OX-42阳性细胞数明显低于模型对照组(P<0.05).[结论]背根节脉冲射频对坐骨神经缩窄模型大鼠脊髓背角小胶质细胞活化具有抑制作用.     

隐神经部分结扎大鼠背根神经节P2X3受体表达的变化

目的观察隐神经部分结扎（saphenous partial ligation,SPL）大鼠背根神经节P2X3受体表达的改变。方法麻醉下。制备大鼠SPL模型;测定SPL大鼠机械异常性疼痛和热痛敏的变化;应用免疫组化技术观察SPL大鼠损伤相应节段（L3、L4）的背根神经节P2X3受体表达的变化。结果SPL大鼠可产生热痛敏和机械异常性疼痛;SPL术后第7、14d,损伤同侧的L3、L4节段背根节P2X3免疫阳性神经元数量明显增加。结论SPL是一种适合于病理性神经痛机制研究的模型,SPL可导致损伤同侧相应节段的背根节神经元P2X,受体表达增加。     

外周支及中枢支切断对背根节BDNF和NT—3表达的影响

OBJECTIVE: To explore the expression of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and neurotrophin-3(NT-3) in dorsal root ganglion (DRG) following peripheral and central axotomy. METHODS: Fifteen male adult cats were divided into intact group, peripheral axotomy group and central axotomy group. The ten cats of the latter two groups were subjected to unilateral peripheral cut and central processes cut respectively. The animals were allowed to survive 4 days long; L5 DRG was taken from each animal and made into frozen sections 20 microns thick. The sections were stained using antisera of BDNF and NT-3 respectively by immunohistchemical ABC method. The neuronal numbers of BDNF and NT-3 of the three groups were counted and compared. RESULTS: The positive products of BDNF were mainly distributed in small to medium sized neurons (13-57 microns) while those of NT-3 were mainly in large sized neurons (57-100 microns). The neuronal numbers of BDNF and NT-3 in peripheral and central axotomy groups (24.1 +/- 3.5, 29.4 +/- 5.2; 19.4 +/- 2.4, 20.2 +/- 1.9) increased significantly than those of intact group (12.1 +/- 2.2, 13.3 +/- 2.9), P < 0.01. And the neuronal numbers of BDNF and NT-3 in peripheral axotomy groups were more than those of central axotomy group(P < 0.05). CONCLUSION: The results indicate that peripheral axotomy and central axotomy lead to the increase of the expression of BDNF and NT-3 in DRG neurons. And the effect of peripheral axotomy is greater than that of central axotomy.     

坐骨神经损伤后肝细胞生长因子受体c-Met在脊髓和背根节的表达及其意义

目的 观察坐骨神经损伤后肝细胞生长因子受体c-Met在脊髓和背根节(dorsal root ganglion, DRG)的表达. 方法采用免疫组织化学方法结合图像分析技术检测大鼠坐骨神经结扎后1、3、5、7、14、21和28 d c-Met在脊髓和DRG内的表达变化情况.结果 术后5 d DRG c-Met表达开始增加,7～14 d达高峰,之后渐恢复正常;损伤后脊髓前角c-Met免疫阳性产物未见明显变化,但脊髓后角免疫阳性面积5 d表达开始增加,7～14 d达高峰,之后恢复正常.结论 c-Met可能参与了神经损伤后的再生过程.