补中益气汤含药血清等对大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合作用的影响

目的 :观察补中益气汤含药血清等 8种制剂体外给药对大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合作用的影响。方法 :放射配基受体结合法。结果 :补中益气汤含药血清、参麦注射液、黄芪多糖能抑制大鼠胃壁细胞胃泌素受体与12 5I 胃泌素的特异性结合。结论 :补中益气汤含药血清等对大鼠胃壁细胞胃泌素受体的结合作用有一定影响 ,补中益气汤调节胃泌素受体复健脾虚证的机理可能在于与胃泌素受体竞争性结合。     

"脾虚"大鼠胃壁细胞胃泌素受体变化及补中益气汤的作用

目的：研究“脾虚”和经补中益气汤治疗后的大鼠胃壁细胞胃泌素受体的变化。方法：放射配基受体结合分析法。结果：虽然“脾虚”大鼠胃壁细胞胃泌素受体的结合位点数低于正常大鼠，但其亲和力高于正常大鼠。经补中益气汤治疗后对其具有复健作用。结论：胃泌素受体的结合位点数显减少，可能导致脾虚大鼠胃黏膜的防御性下降；而亲和力显增高可能是黏膜对攻击因子的敏感性增强的机制之一。补中益气汤通过调节胃泌素受体对脾虚具有复健作用。     

补中益气汤含药血清等对大鼠胃臂细胞胃泌素受体结合作用的影响

目的：观察补中益气汤含药血清等8种制剂体外给药对大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合作用的影响。方法：放射配基受体结合法。结果：补中益气汤含药血清、参麦注射液、黄芪多糖能抑制大鼠胃壁细胞胃泌素受体^125I-胃泌素的特异性结合。结论：补中益气汤含药血清等对大鼠胃壁细胞胃泌素受体的结合作用有一定影响，补中益气汤调节胃泌素受体复健脾虚证的机理可能在于与胃泌素受体竞争性结合。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达的变化及补中益气汤对其的影响,并探讨相关机制。方法:SD大鼠称重随机分组,分为设空白对照组、脾虚损伤组、补中益气汤组、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天,第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天,第18天,除空白对照组外的另外三组均灌服消炎痛造成胃粘膜损伤。采用免疫组化法检测EGFR蛋白表达的变化。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达明显下调;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜EGFR蛋白表达明显升高。结论:补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后EGFR蛋白表达,促进受损胃粘膜的修复,该方对脾虚大鼠胃粘膜易损性复健作用的机制可能与此有关。     

脾虚大鼠经胃泌素刺激胃酸分泌的敏感性及补中益气汤的作用

目的 :研究“脾虚”大鼠经胃泌素刺激后胃酸分泌的敏感性及补中益气汤的作用。方法 :观察了正常、大黄“脾虚”模型、“脾虚”后经补中益气汤治疗三组动物在未经刺激及经胃泌素刺激后的胃液总酸度变化。结果 :未经刺激时三组动物的胃液总酸度无显著差异 ;“脾虚”大鼠经刺激后显著升高 ,补中益气汤对其有复健作用。结论 :补中益气汤能降低“脾虚”大鼠经胃泌素刺激后胃酸分泌的敏感性。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜MEK/ERKmRNA表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜MEK、ERKmRNA表达变化及补中益气汤对其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法:SD大鼠随机分为设空白对照组、脾虚损伤组、补中益气汤组、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天。第11天开始,补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天。第18天,除空白对照组外的另外三组均灌服消炎痛造成胃粘膜损伤,采用荧光定量PCR(SYBR Green I)检测MEKmRNA、ERKmRNA。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜MEKmRNA明显下降;与脾虚损伤组比较,补中益气汤20g/kg大鼠胃粘膜MEKmRNA表达明显上调,ERKmRNA显著升高。结论:补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜MEKmRNA、ERKmRNA表达水平,提示该方的胃粘膜保护、降低胃粘膜易损性等作用可能与激活MEK/ERK信号转导途径有关。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜TFF1mRNA与蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜TFF1mRNA与蛋白表达变化及补中益气汤对其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照、脾虚损伤、补中益气汤、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天。第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天。第18天,除空白对照组外,另三组灌服消炎痛溶液造成胃粘膜损伤,采用逆转录PCR(RT-PCR)检测TFF1mRNA,采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测TFF1蛋白表达的变化。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜TFF1mRNA、TFF1蛋白表达明显降低;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜TFF1mRNA、蛋白明显上调。结论:脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜TFF1mRNA、蛋白表达显著下调,提示脾虚大鼠胃粘膜防御能力减弱,补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜TFF1mRNA与蛋白的表达,这可能是补中益气汤保护胃粘膜,降低脾虚大鼠胃粘膜易损性的机理之一。     

补中益气汤对脾气虚证大鼠胃泌素基因表达的影响

目的:探讨补中益气汤不同浓度、不同时间对脾气虚证大鼠胃泌素(gastrin,GAS)基因表达的影响。方法:以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合的方法复制脾气虚证大鼠模型,造模大鼠随机分成模型组、补中益气汤低、中、高剂量组,在干预后不同时间(7d,14d,21d),用逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测补中益气汤对胃窦GAS mRNA表达的影响。结果:与模型组比较,补中益气汤中、高剂量组血清GAS水平升高(P<0.05,P<0.01)、胃窦GAS mRNA表达上调(P<0.05,P<0.01);中、高剂量组比较,差异有显著性意义(P<0.05),以中剂量组为佳。结论:补中益气汤能上调GAS mRNA表达可能是其治疗脾气虚证的机制之一。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜MUC5ACmRNA与蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜MUC5ACmRNA与蛋白表达的变化及补中益气汤对其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法:SD大鼠称重随机分为空白对照组、脾虚损伤组、补中益气汤组、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天。第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天,第18天,除空白对照组外的另外三组均灌服消炎痛造成胃粘膜损伤。采用逆转录PCR(RT-PCR)检测MUC5ACmRNA,用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测MUC5AC蛋白。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜MUC5AmRNA、蛋白表达有所下降,但无统计学意义;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜MUC5AC蛋白表达显著升高。结论:脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜MUC5AC蛋白表达显著下调,提示脾虚时胃粘液凝胶层防御能力下降,补中益气汤可提高脾虚大鼠MUC5AC蛋白的表达,提示该方可通过粘液蛋白MUC5AC促进胃粘液凝胶层的形成,增加胃粘液屏障防护功能,并与TFF1发挥协同增效作用,这可能是补中益气汤胃粘膜保护的机制之一。     

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体及细胞内[Ca2+]i作用的观察

目的:观察脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体及受体后信号细胞内钙离子的变化,并观察补脾方药党参、白术、补中益气汤对其的影响。方法:大鼠壁细胞采用EDTA-Pronase酶法消化而来。胃泌素受体检测采用放射配基结合实验,壁细胞内[Ca2 ]i变化测定采用双波长荧光法。结果:大黄脾虚模型大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数有显著降低,经补脾方药治疗后有所恢复;同时脾虚模型壁细胞内静息钙离子浓度明显低于正常组,经胃泌素刺激后壁细胞内[Ca2 ]i有所升高,且脾虚模型升高幅度明显高于正常组,经治疗后此状态有所恢复,但无统计学意义。结论:脾虚证可能与胃泌素受体低表达相关,且壁细胞内钙离子处于低代谢状态,但对于胃泌素刺激的反应性增强,进而可能导致酸分泌敏感性相对增高,胃黏膜易损性增强。补脾方药对其有一定的调节作用。     

脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体研究及黄芪作用观察

目的 :观察脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数的变化以及中药黄芪注射液对其的调控作用。方法 :脾虚模型采用利血平方法 ,治疗组给予黄芪注射液 ;大鼠胃黏膜壁细胞分离与纯化采用Lewin胃袋法及Percoll密度梯度纯化 ;壁细胞胃泌素受体结合位点数 (sites cell)的检测采用放射配基结合方法。结果 :利血平脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合位点数为 2 71 2± 91 8,明显低于正常组 (6 19 1± 30 4 5 ,P <0 0 5 )。中药黄芪注射液对其有显著上调作用 (5 45 2± 2 0 5 3,P<0 0 1)。结论 :利血平脾虚大鼠胃壁细胞胃泌素受体结合位点数下降 ,中药黄芪注射液对其有明显上调作用 ,胃泌素受体与脾虚证关系密切。     

补中益气汤配伍对脾气虚大鼠胃泌素及其基因表达的影响

目的研究补中益气汤及其配伍对脾气虚大鼠胃泌素(GAS)及GAS mRNA表达的影响,并探讨相关作用机制。方法以大黄、游泳力竭、饥饿三因素复合方法复制脾气虚大鼠模型,造模成功后,将SD大鼠随机分为正常对照组、脾气虚模型组、补中益气汤组、黄芪-升麻、柴胡配伍组和减方组(原方去"黄芪-升麻、柴胡"配伍组),给药14 d后测定大鼠血清GAS含量和GAS mRNA。结果与脾气虚模型组比较,补中益气汤组能有效升高脾气虚大鼠GAS含量(P<0.01)并增强GAS mRNA的表达(P<0.01),而黄芪-升麻、柴胡配伍组和减方组对脾气虚大鼠GAS含量及GAS mRNA的表达影响不大(P>0.05)。结论补中益气汤能显著提高GAS及GAS mRNA的表达来改善脾气虚,推测是其治疗脾气虚证的机制之一,"黄芪-升麻、柴胡"配伍是方中不可或缺的重要组成部分。     

补中益气汤、党参、白术含药血清对离体脾虚大鼠壁细胞内[Ca2+]i的影响

目的:探讨脾虚大鼠的微观病理状态及补脾方药血清对其的调节作用.方法:采用血清药理学方法,以第三代荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,用共聚焦显微镜观察大鼠单个壁细胞胃泌素刺激后[Ca2 ]i的动态变化.结果:睥虚大鼠壁细胞胃泌素刺激后[Ca2 ]i升高幅度明显高于正常大鼠,达峰时间也有缩短趋势;补脾方药血清治疗后各组中的各项指标介于两者之间.结论:壁细胞胞内[Ca2 ]i的异常变化可能是脾虚证的微观病理机制之一,Ca2 的异常介导可能参与了脾虚证的病理形成;补脾方药血清可不同程度恢复和逆转睥虚状态下的微观病理变化.     

补中益气汤、党参、白术含药血清对脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2+/CaM活性的影响

目的:检测脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2 /CaM活性并探讨补脾方药血清对其的作用.方法:大鼠壁细胞的分离与纯化采用我室建立的常规方法,Ca2 /CaM活性检测采用环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)法.结果:脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2 /CaM活性明显高于正常大鼠;补脾方药血清作用后脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2 /CaM活性均有不同程度的下降.结论:壁细胞胞内Ca2 /CaM活性的增高可能是脾虚大鼠的深层次病理机制之一;补脾方药血清可不同程度逆转和恢复脾虚大鼠这一微观病理趋势.     

补中益气汤、党参、白术含药血清对离体脾虚大鼠壁细胞胞内[Ca^2＋]i的影响

目的：探讨脾虚大鼠的微观病理状态及补脾方药血清对其的调节作用。方法：采用血清药理学方法，以第三代荧光指示剂Fluo-3／AM负载细胞，用共聚焦显微镜观察大鼠单个壁细胞胃泌素刺激后[Ca^2＋]i的动态变化。结果：睥虚大鼠壁细胞胃泌素刺激后[Ca^2＋]i升高幅度明显高于正常大鼠，达峰时间也有缩短趋势；补脾方药血清治疗后各组中的各项指标介于两者之间。结论：壁细胞胞内[Ca^2＋]i的异常变化可能是脾虚证的微观病理机制之一，Ca^2＋的异常介导可能参与了脾虚证的病理形成；补脾方药血清可不同程度恢复和逆转睥虚状态下的微观病理变化。     

补中益气汤、党参、白术含药血清对离体脾虚大鼠壁细胞胞内[Ca~(2+)]i的影响

目的:探讨脾虚大鼠的微观病理状态及补脾方药血清对其的调节作用。方法:采用血清药理学方法,以第三代荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,用共聚焦显微镜观察大鼠单个壁细胞胃泌素刺激后[Ca2+]i的动态变化。结果:睥虚大鼠壁细胞胃泌素刺激后[Ca2+]i升高幅度明显高于正常大鼠,达峰时间也有缩短趋势;补脾方药血清治疗后各组中的各项指标介于两者之间。结论:壁细胞胞内[Ca2+]i的异常变化可能是脾虚证的微观病理机制之一,Ca2+的异常介导可能参与了脾虚证的病理形成;补脾方药血清可不同程度恢复和逆转睥虚状态下的微观病理变化。     

补中益气汤“要药”配伍的关键性增效作用对脾虚小鼠的影响

目的:研究补中益气汤"要药"升麻、柴胡的配伍对脾虚小鼠的影响,验证方剂中"要药"的客观存在及其关键性的增效作用。方法:90只小鼠随机分为正常组,脾虚模型组,莫沙必利组(1.93×10-3g·kg-1),补中益气汤组(8.58g·kg-1),原方去当归陈皮汤组(7.41g·kg-1),原方去升麻柴胡汤组(7.02g·kg-1),升麻柴胡汤组(1.56g·kg-1),原方去升柴加羌独防汤组(10.53g·kg-1)、原方去升柴加葛根汤组(8.32g·kg-1),每组10只;除正常组外,其余各组均采用大黄法、游泳力竭法、饥饿法3个因素复合的方法复制脾虚小鼠模型。各组分别ig给药7d后,进行抗疲劳机能试验,并观察不同药物对脾虚小鼠免疫器官脾脏、胸腺的脏器指数及小肠炭末推进率的影响。结果:模型组小鼠的游泳时间、脾脏和胸腺质量及小肠推进率均明显低于正常组(P<0.01);升麻、柴胡汤组小鼠的游泳时间、胸腺质量及小肠推进率与模型组比较差异不显著,但其余各给药组游泳时间和小肠推进率均高于模型组(P<0.01);补中益气汤组小鼠的游泳时间明显长于莫沙必利组(P<0.05),但脾脏和胸腺质量及小肠推进率差异不显著;各加减方组小鼠的游泳时间、脾脏和胸腺质量及小肠推进率均明显低于补中益气汤组(P<0.01);补中益气去升柴汤组小鼠的游泳时间及小肠推进率均明显低于补中益气去归陈组(P<0.01,P<0.05)。结论:补中益气汤的"要药"升麻、柴胡较其他佐药对全方的抗疲劳作用、改善免疫功能作用以及胃肠推进作用的贡献度大,证明了"要药"的关键性增效作用;补中益气汤的"要药"升麻、柴胡不能被羌活、独活和防风等升阳药物及升举脾胃清阳的葛根所替代,证明了"要药"的最佳性配伍;本文从实验研究角度验证了方剂"要药"是客观存在的。     

补脾方药对脾虚大鼠壁细胞超微结构的影响

目的:观察补脾方药对脾虚模型大鼠胃壁细胞超微结构的影响。方法:脾虚模型采用大黄泻下方法、酶法(Pronase-EDTA)消化分离及离心纯化大鼠胃壁细胞,透射电镜观察壁细胞的超微结构变化。结果:正常组大鼠壁细胞可见胞质内大量的线粒体和散在的囊泡结构;脾虚组大鼠胃壁细胞电镜下可见明显扩张的分泌小管,小管内可见增长密集的微绒毛,囊泡状结构少见,未见线粒体结构异常。党参、白术、补中益气汤治疗组大鼠壁细胞呈现分泌恢复状态:分泌小管塌陷,其膜被吸收和内胞饮,表面的微绒毛密集、盘绕、重叠,形成几层膜结构而被吞入胞浆。在分泌小管相邻的胞浆内出现高电子密度的图像,为马蹄形、椭圆形或圆形的多层膜结构。结论:大黄脾虚模型大鼠胃壁细胞超微结构呈应激状态,可能致其自身对攻击因子敏感性增高,进而导致胃黏膜的易损性增强。补脾方药对其超微结构的异常改变有恢复作用。     

补中益气汤、党参、白术含药血清对脾虚大鼠壁细胞胞内Ca~(2+)/CaM活性的影响

目的检测脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2+/CaM活性并探讨补脾方药血清对其的作用。方法大鼠壁细胞的分离与纯化采用我室建立的常规方法,Ca2+/CaM活性检测采用环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)法。结果脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2+/CaM活性明显高于正常大鼠;补脾方药血清作用后脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2+/CaM活性均有不同程度的下降。结论壁细胞胞内Ca2+/CaM活性的增高可能是脾虚大鼠的深层次病理机制之一;补脾方药血清可不同程度逆转和恢复脾虚大鼠这一微观病理趋势。     

补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路影响的研究

目的：探讨补中益气汤对脾虚泄泻大鼠SGLT1/NHE3通路的影响。方法：以“大黄 利血平 控制饮食”多因素法建立脾虚泄泻大鼠模型,随机分为补中益气汤低、中、高剂量组和脾虚泄泻模型组,观察大鼠造模及给药后泄泻指数及肠粘膜Na -K ATP酶的变化,采用western blot法检测钠依赖性葡萄糖转运体(SGLT1)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、钠氢交换体3（NHE3）、P38MAPK、p- P38MAPK、MAPKAPK2、p-MAPKAPK2、AKT2、p-AKT2、EZRIN、p-EZRIN蛋白的表达。结果：补中益气汤给药后腹泻指数有不同程度的的下降,以补中益气汤中、高剂量组较为明显（P<0.01或P<0.05）,脾虚泄泻大鼠小肠粘膜Na -K ATP酶活性与正常对照组比较显著降低（P<0.01）,而补中益气汤有提高Na -K ATP酶活性的作用。脾虚泄泻大鼠小肠黏膜中SGLT1、GLUT2、NHE3、 P- P38MAPK、P-MAPKAPK2、P-Akt2、P-Ezrin蛋白表达量较正常组减低（P<0.01）,经补中益气汤治疗后SGLT1、GLUT2、NHE3及P- P38MAPK、P-MAPKAPK2、P-Akt2、P-Ezrin蛋白表达量均有所提高（P<0.01或P<0.05）。结论：补中益气汤可能通过提高SGLT1蛋白的表达,促进P38 MAPK/Ezrin通路中蛋白的磷酸化,进而促进包浆内NHE3募集到顶端膜,从而增加水钠的吸收,这可能是补中益气汤治疗腹泻的机理之一。