黄芪有效成分对H2O2引起PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究黄芪萃取组分对H2O2引起PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法以PC12细胞为模型，用H2O2使PC12细胞氧化损伤，加入不同剂量的黄芪萃取组分(25-200μg／m1)。观察不同组分对PC12细胞氧化损伤的保护作用。结果AS，ASP，ASB，ASW和ASE对H2O2引起PC12细胞氧化损伤保护作用的最佳有效浓度分别为50，100，100，200和100μg／ml。结论不同黄芪萃取组分均对PC12细胞氧化损伤有保护作用。     

高良姜素对PC12细胞氧化损伤的保护作用及其机制研究

目的:探讨高良姜素对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制。方法:用H_2O_2损伤PC12细胞建立氧化应激损伤模型,细胞分为正常对照组、模型对照组、高良姜素(低、中、高浓度)组,并给予相应干预措施。采用MTT法检测细胞生长抑制率,采用Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况,免疫印迹法检测蛋白表达情况。结果:高良姜素预处理可以减少H_2O_2诱导的PC12细胞氧化应激损伤;高良姜素能明显抑制细胞凋亡,且呈剂量依赖性;高良姜素可以增加PI3K/Akt和Bcl-2家族蛋白比例。结论:高良姜素是通过激活PI3K/Akt信号通路发挥对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。     

银杏叶提取物对百草枯致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的探讨百草枯(PQ)对PC12细胞的损伤作用,观测银杏叶提取物(EGB761)对该损伤的保护作用并探讨其作用机制.方法MTT比色试验检测细胞活性;乳酸脱氢酶(LDH)测定细胞损伤程度;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡;caspase-3免疫细胞化学染色观察细胞凋亡.结果40mg/L EGB761对300μmol/LPQ作用于PC12细胞24h,具有一定的保护作用;EGB761可明显抑制PQ诱导的PC12细胞LDH的释放(0.25±0.01)(与PQ组比较,P<0.05);EGB761可降低PC12细胞的凋亡百分率,PQ组凋亡百分率为66.7%,使用EGB761保护后凋亡百分率降为17.1%;并可减少PQ诱导的PC12细胞caspase-3过度表达.结论EGB761可减轻PQ诱导的PC12细胞损伤和凋亡,该作用可能与抑制caspase-3蛋白酶的激活有关.     

硫化氢对MPP+诱导 PC12 细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨硫化氢对MPP＋诱导PC12细胞氧化应激损伤的保护作用。方法以MPP＋损伤PC12细胞作为帕金森病的细胞模型,甲氮甲唑蓝（MTT）法检测细胞存活率;丙酮酸二硝基苯腙比色法检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）漏出量;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）浓度;双氢罗丹明123染色FCM检测细胞内活性氧水平变化;应用硫化氢钠（sodium hydrosulfide,NaHS）作为H2S的供体。结果 200μmol/L和400μmol/L硫氢化钠呈浓度依赖性阻断MPP＋引起PC12细胞存活率的降低;400μmol/L硫氢化钠能明显抑制400μmol/L MPP＋诱导的PC12细胞LDH的漏出,以及抑制MDA和活性氧的产生。结论硫化氢对MPP＋诱导PC12细胞的氧化应激损伤具有保护作用。     

CeO2的制备、表征及对PC12细胞氧化损伤的保护作用

[摘要]　目的　制备纳米氧化铈（nanoceria,CeO2）,初步探讨其对肾上腺嗜铬细胞瘤细胞PC12氧化损伤的保护作用。　方法　采用均相沉淀法制备纳米CeO2,对其晶粒大小和晶粒形貌进行表征。将粗浓度为250 mmol/L的CeO2加入PC12细胞培养液,通过20 μmol/L H2O2诱导细胞损伤,建立PC12细胞的氧化应激损伤模型,采用MTT法检测对照组、CeO2组、CeO2+H2O2组,H2O2组的细胞活性,测定CeO2对PC12细胞的保护作用。　结果　采用均相沉淀的方法合成粒子直径为5~10 nm的CeO2。 MTT实验显示H2O2组细胞存活率为（74.61±3.97）%,CeO2 +H2O2组的细胞存活率为（99.21±4.01）%,明显高于H2O2组（P<0.05）。　结论　CeO2对H2O2造成的氧化损伤细胞具有保护作用。     

栝楼桂枝汤对谷氨酸所致的PC12细胞损伤的保护作用

目的研究栝楼桂枝汤水提物（Glgzd）对谷氨酸所致的PC12细胞损伤的保护作用。方法采用15 mmol/L谷氨酸诱导PC12细胞损伤,栝楼桂枝汤水提物干预24 h后,采用MTT法检测细胞活力,荧光分光光度计检测细胞内ROS的表达,酶标仪检测细胞内GSH的含量。结果与对照组比较,谷氨酸诱导的PC12细胞存活率下降,ROS DCF荧光强度增强,GSH含量下降。经栝楼桂枝汤干预后,PC12细胞存活率提高,细胞内ROS表达减弱,GSH含量增加。结论栝楼桂枝汤可抑制谷氨酸引起的PC12细胞损伤,其作用机制可能是通过降低细胞内ROS的表达和增加GSH的含量这一途径。     

枸杞多糖对缺氧损伤PC12细胞保护作用

目的：研究枸杞多糖对缺氧损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤株PC12的保护作用。方法：采用氯化钴（CoCl2）建立PC12细胞,通过测定受损细胞给药后的活力、受损细胞LDH泄露量和受损细胞ROS生成量及线粒体膜电位,研究枸杞多糖对受损细胞的保护作用。结果：枸杞多糖能显著增加缺氧模型细胞的活力;降低细胞LDH泄漏量;增强缺氧损害细胞的SOD活性;并增加缺氧损害细胞线粒体膜电位。结论：枸杞多糖对缺氧损伤PC12细胞具有明显的保护作用。     

葛根素对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究葛根素对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤的影响。方法:建立H2O2致PC12细胞损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:100μmol/L H2O2诱导PC12细胞4 h,细胞呈现明显损伤形态,LDH释放量升高(P<0.001),细胞培养液和细胞内MDA含量增加(P<0.001),SOD活性下降(P<0.001)。葛根素可明显改善形态学损伤,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:葛根素对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

硒对微波辐照致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨硒对微波致神经细胞损伤的保护作用.方法以离体培养的PC12细胞为研究对象,采用65 mW/cm2的微波照射20 min进行致伤,以细胞存活率、MDA含量、SOD和GSH-Px活性为实验指标反映Na2SeO3预处理对微波辐照致PC12细胞损伤的影响.结果微波辐照后PC12细胞存活率明显降低,MDA含量增加,SOD、GSH-Px活性降低,而经过Na2SeO3预处理后再接受微波辐照,以上指标的变化明显减轻,并且高剂量Na2SeO3预处理作用更明显.结论硒可以提高PC12细胞的抗氧化能力,保护神经细胞对抗微波辐射导致的细胞损伤.     

红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤的保护作用

目的研究红景天苷（Sal）对Co Cl2诱导PC12细胞低氧损伤的影响。方法用200μM Co Cl2诱导PC12细胞致其损伤,用不同浓度的红景天苷（0.1、1、10μM）作用于PC12细胞,TUNEL染色法观察细胞凋亡情况;RT-q PCR法测定Arc m RNA的表达;Western blot法测定Arc蛋白的表达。结果不同浓度红景天苷能明显抑制Co Cl2诱导的PC12细胞凋亡,并能显著提高PC12细胞中Arc m RNA和蛋白表达水平。结论红景天苷对Co Cl2诱导的PC12细胞低氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与红景天苷抵抗Co Cl2诱导PC12细胞的凋亡,上调PC12细胞Arc m RNA和蛋白表达水平有关。     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组,采用MTT法测定细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤,流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比,H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01）,LDH释放量增多（P〈0．01）,凋亡明显;而与H2O2处理组相比,HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05）,LDH释放量减少（P〈0．05）,且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。     

PC12细胞应激损伤中能量限制的效应及SIRT3的表达

目的 研究H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤中,能量限制(CR)及SIRT3参与的调控效应.方法 实验分4组:H2O2组,H2O2+CR组,CR组和正常对照组;MTT法检测不同浓度H2O2作用下CR对细胞生存率的影响;TUNEL染色法检测过氧化氢作用后CR对细胞的凋亡的影响;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT3的表达定位;RT-PCR及Western印迹检测SIRT3、Caspase-3的表达变化.结果 60μmol/L H2O2作用6 h后,H2O2组细胞生存率(74.01±2.21)%可维持在70%以上,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);120μmol/L H2O2作用下,H2O2组的细胞活力显著下降(38.22±3.34)%,后续研究选取60μmol/L H2O2浓度作为应激源;60μmol/L H2O2作用6 h后H2O2组细胞生存率(74.01±2.21)%与CR+H2O2组(97.26±1.92)%间比较差异有统计学意义(P＜0.05).TUNEL凋亡检测H2O2+CR组凋亡率较H2O2组显著降低.免疫荧光双染色证实PC12细胞中SIRT3为一种线粒体蛋白.Western印迹显示与正常对照组(5256±144)比较,CR组中SIRT3表达升高(6857±157),差异有统计学意义(P＜0.05)、H2O2组中表达降低(3786±160),差异有统计学意义(P＜0.05).与H2O2组(3786±160)比较,CR+H2O2组中SIRT3表达上升(5056±121),差异有统计学意义(P＜0.05).与正常对照组比较(5342±420),H2O2组中Caspase-3表达升高(8499±426),差异有统计学意义(P＜0.001).CR+H2O2组(5750±438)中Caspase-3表达较H2O2组表达下降(8499±426),差异有统计学意义(P＜0.001).RT-PCR显示与正常对照组(6204±134)比较,CR组(7214±148)中SIRT3表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05)、H2O2组中表达降低(4807±143),差异有统计学意义(P＜0.05).与H2O2组(4807±143)比较,CR+H2O2组中SIRT3表达上升(6195±166),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PC12细胞中,CR具有抗氧化应激损伤及凋亡的效应;CR可上调PC12细胞中SIRT3的表达,在H2O2诱导的PC12应激损伤中CR-SIRT3的调控具有保护效应,SIRT3是否具有延缓神经元衰老作用值得进一步研究.

Abstract：

Objective To study the regulation effects of CR (caloric restriction) and SIRT3 in the H2O2-induced oxidative stress injury of PC12 cell. Methods The cells were divided into four groups:H2O2, H2O2+CR, CR and control (high glucose). For control and H2O2 group, cells were cultured in DMEM containing 0.45% glucose; for group in CR condition, cells were treated with the medium containing 0.1% glucose. For groups with H2O2, the H2O2 was diluted in EMEM medium to obtain the final concentration containing 60 μmol/L. Viability of PC12 cells were measured by MTT assay. The medium was refreshed with different concentration of H2O2 (from 10 to 120 μmol/L). The absorbance of the samples was measured at 492 nm using a microtiter plate reader. We detected TUNEL-positive cells using the In Situ Cell Apoptosis Detection kit pretreated with CR and H2O2. Immunofluorescence double staining detected the expression and localization of SIRT3. RT-PCR and Western-blot mehtods detected the expression of SIRT3,Caspase-3. Results After pretreating with 60 μmol/L H2O2 for 6 h, the viability of PC12 cells in H2O2 group (74.01±2.21)% retained above 70%, and have statistical significance contrasted with control group (P＜0.05); After pretreating with 120μmol/L H2O2, the viability of PC12 cells declined significantly (38.22±3.34)%. So 60μmol/L H2O2 is our experiment concentration . The viability of H2O2 group (74.01±2.21)% was much lower than CR + H2O2 group (97.26±1.92)% (P＜0.05). After pretreating with H2O2, TUNEL staining showed the apoptosis cells of CR+H2O2 group decreased significantly contrasted with H2O2 group. The immunofluorescence double staining results showed that SIRT3was a mitochondria protein. Western-blot showed the expression of SIRT3 in CR group (6857±157) (P＜0.05) increased and decreased in H2O2 group (3786±160) (P＜0.05) contrasted with control group (5256±143). The expression of SIRT3 in CR + H2O2 group(5056±121)(P＜0.05)increased contrasted with H2O2 group(3786±160). We also detected that Caspase-3 in H2O2 group(8499±426)(P＜0.001 )was much higher than control group than (5342±420), but in the CR + H2O2 group (5750±438 ) theexpression of Caspase-3 was much lower than H2O2 group(8499±426) (P＜0.001). RT-PCR also showed that the expression of SIRT3 in CR group (7214±148) increased and decreased in H2O2 group (4807±143 ) (P＜0.05) contrasted with control group (6204 ± 134 ). The expression of SIRT3 in CR + H2O2 group (6195 ± 166) increased contrasted with H2O2 group (4807 ± 143 ) ( P＜0.05). Conclusion CR causes anti-oxidative injury and has apoptotic effects in PC12 cell. It up-regulates the expression of SIRT3 and the effects of CR-SIRT3 can prevent PC12 cell from H2O2-induced apoptosis. And SIRT3 may be a novel molecule of regulating target in the delay of neuronal senescence.     

银杏叶提取物对6-OHDA诱导PC12细胞氧化应激的影响

目的探讨银杏叶提取物（Ginkgo bilobaextract,GBE）对6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OH-DA）诱导的PC12细胞氧化应激的保护作用及其机制。方法经不同剂量GBE预处理体外培养的PC12细胞后,加入6-OHDA诱导多巴胺能神经元损伤模型。用MTT法检测PC12细胞活力;分光光度法测定细胞过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）的活性和总抗氧化能力（T-AOC）的水平;硫代巴比妥法测定细胞丙二醛（MDA）含量。结果100μmol/L的6-OHDA处理PC12细胞24 h,细胞活力较正常对照组明显降低（P〈0.01）,CAT、GSH-Px、T-SOD的活性和T-AOC的水平明显降低（P〈0.05）,MDA含量明显升高（P〈0.05）;与模型组比较,不同剂量GBE预处理组的PC12细胞活力逐渐升高,CAT、GSH-Px、T-SOD的活性和T-AOC的水平明显升高（P〈0.05）,MDA含量明显减少（P〈0.05）。结论GBE对6-OHDA诱导的PC12细胞氧化应激具有抑制作用,提高CAT、GSH-Px、T-SOD的活性和T-AOC的水平可能是其抗氧化作用的机制之一。     

异丙酚对肠上皮细胞氧化应激损伤的影响

目的:探讨异丙酚对大鼠肠上皮细胞(intestinal epithelia cell,IEC)氧化应激损伤的影响。方法:利用H2O2产生.OH攻击制备IEC氧化损伤模型。实验设对照组、H2O2组(2.5 mmol/L)、异丙酚组(异丙酚100μmol/L)。用四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测IEC的存活率,测定上清测乳酸脱氢酶(LDH)和细胞中丙二醛(MDA)含量。结果:与对照组相比,H2O2组LDH、MDA水平明显增高,细胞生存率减少(P<0.01)。异丙酚组与H2O2组相比,LDH漏出显著减少,MDA形成减少,并能提高细胞的细胞生存率(P<0.01)。结论:异丙酚对大鼠IEC氧化损伤具有保护作用。     

表没食子儿茶素对缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的研究表没食子儿茶素(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对化学缺氧损伤PC12细胞的保护作用。方法建立氯化钴(Co Cl2)诱导PC12细胞化学缺氧损伤模型,实验分为对照组、EGCG组、缺氧组和联合组,通过测定细胞活力、细胞凋亡率、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、细胞上清液中乳酸脱氢酶(lacticdehydrogenase,LDH)含量及Bcl-2、Akt蛋白表达,探讨EGCG对受损细胞的保护作用。结果氯化钴作用后,缺氧组细胞存活率较对照组降低(P0.05),联合组细胞存活率较缺氧组升高(P0.05);缺氧组细胞凋亡增加至34.2%,EGCG干预后,细胞凋亡率降至23.5%;缺氧组细胞SOD活性较对照组降低(P0.05),EGCG干预后可提高氯化钴诱导的细胞SOD活性降低,差异具有统计学意义(P0.05)。缺氧组细胞上清液中的LDH活力增高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);EGCG处理后能降低氯化钴引起的上清液中LDH活力增加(P0.05)。缺氧组细胞Bcl-2表达降低(P0.05),EGCG处理后能抑制氯化钴诱导的Bcl-2表达降低(与缺氧组比较P0.05),并提高细胞p-Akt的表达(与缺氧组比较P0.05),各组总的Akt表达量均无改变。结论本缺氧模型可诱导PC12细胞凋亡,EGCG对缺氧损伤PC12细胞具有明显的保护作用。     

基于凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤的模型研究

目的：探索凝血酶合并缺氧对PC12细胞损伤的最佳反应时间点,为进一步研究凝血酶在缺血性脑损伤中的意义提供实验方法。方法建立体外缺氧合并凝血酶诱导的PC12细胞损伤模型。按照常规细胞培养方法,采用三气培养箱（1％ O2,5％ CO2,94％ N2）和无糖DM EM培养液造成细胞缺氧模拟缺血,并同时加入不同浓度的凝血酶（0、50、100、150和200 U／mL ）,再将每组都作用于1、6、12、24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）分析细胞的存活率、TUNEL法检测细胞的凋亡程度。结果随着缺氧时间的延长和凝血酶浓度的增加,细胞存活率逐渐下降,TUNEL细胞阳性率和凋亡率逐渐升高。低浓度凝血酶（50 U／mL）在缺氧1 h后,与对照组（0 U／mL）相比细胞存活率有所升高,提示低凝血酶可能有保护作用。尤以缺氧12 h后开始细胞损伤更为明显,150 U／m L凝血酶组作用12 h后与对照组相比细胞存活率显著下降（ P＜0．01）,凋亡率显著增加（ P＜0．05）;且200 U／mL凝血酶作用12 h和150、200 U／mL 凝血酶组作用24 h后细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义（ P＜0．05）。结论150 U／mL凝血酶在缺氧作用12 h后为研究凝血酶合并缺氧对PC12细胞损伤的最佳模型条件。     

高热预处理对大鼠嗜铬细胞瘤株细胞高温损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理(HPC)对大鼠嗜铬细胞瘤株(PC12)细胞高温损伤的影响.方法 体外培养PC12细胞,分为四组,每组6株.正常对照组常规(37 ℃)培养;单纯高热预处理组(HPC组)将细胞置于42 ℃培养箱中1 h后常规培养;严重高温损伤组(LH组)将细胞置于46 ℃培养箱中2 h后常规培养2 h;高热预处理 严重高温损伤组(HPC LH组),细胞置于42 ℃培养箱1 h,恢复常规培养18 h,再于46 ℃下作用2 h后常规培养2 h.处理完毕后观察细胞形态学变化,MTT法测定细胞活力,测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,了解细胞损伤.结果 HPC LH组形态明显优于LH组,MTT值极显著高于LH组(P＜0.01),LDH释放量极显著少于LH组(P＜0.01).结论 高热预处理对PC12细胞高温损伤产生保护作用.     

低氧环境下丙泊酚可增加PC12细胞的凋亡

目的 探讨低氧环境下丙泊酚对PC12细胞株凋亡的影响及机制.方法 将PC12细胞接种于培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为6组:低氧对照组(CH组)、空气对照组(CA组)和氧气对照组(CO组),对照组加入脂肪乳浓度10 μmol/L.丙泊酚低氧组(PH组)、丙泊酚空气组(PA组)和丙泊酚氧气组(PO组),丙泊酚浓度为10 μmol/L.药物处理完毕后分别放人低氧(5％O2),空气和氧气(35％ O2)环境的细胞培养箱培养,8h后流式检测细胞凋亡情况,检测细胞内ROS水平和细胞SOD酶活力.结果 与CA组比较,PA组细胞凋亡增加,活性氧簇(ROS)升高,超氧化物歧化酶(SOD)活力增强;与CH组比较,PH组细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;与CO组比较,PO组细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;与PA组比较,PH细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;CO组、CA组和CH组上述各指标差异无统计学意义.结论 低氧环境下丙泊酚可通过氧化应激损伤导致PC12细胞凋亡增加.