肿瘤坏死因子对创伤后牙髓组织修复的调节作用

目的:研究肿瘤坏死因子(TNF-α)在颌面部火器伤间接损伤牙髓中的表达情况,探讨TNF-α在此损伤炎症中的作用,为火器伤牙髓间接损伤的临床诊治提供理论依据。方法:采用直径5.80mm制式枪弹致伤狗下颌部的模型,并利用免疫组化染色及定量分析方法检测颌面部火器伤后不同时间、下颌不同牙齿的牙髓组织中TNF-α的动态变化。结果:TNF-α在伤后牙髓组织中有阳性表达,并随时间的改变,呈动态变化过程。结论:TNF-α参与火器性牙髓炎症发生、发展,并与牙髓组织损伤与修复有关。     

狗牙髓血管内皮细胞白细胞介素-8的免疫组化表达在自身修复过程中的可能意义

目的：研究白细胞介素-8(IL-8)在狗颌面部火器伤间接损伤牙髓中的表达情况。方法：采用直径5．80mm制式枪弹致伤狗下颌部的模型，并利用免疫组化染色及定量分析方法检测颌面部火器伤后不同时间、下颌不同牙齿的牙髓组织中IL-8的动态变化。结果：IL-8在伤后牙髓组织中有阳性表达，并随时间的改变，呈动态变化过程。结论：狗牙髓的血管内皮细胞能分泌合成IL-8，可能参与火器性牙髓炎症发生、发展，并与牙髓损伤、修复有关。     

狗牙髓血管内皮细胞白细胞介素-8的免疫组化表达在自身修复过程中的可能意义

目的:研究白细胞介素-8(IL-8)在狗颌面部火器伤间接损伤牙髓中的表达情况。方法:采用直径5.80mm制式枪弹致伤狗下颌部的模型,并利用免疫组化染色及定量分析方法检测颌面部火器伤后不同时间、下颌不同牙齿的牙髓组织中IL-8的动态变化。结果:IL-8在伤后牙髓组织中有阳性表达,并随时间的改变,呈动态变化过程。结论:狗牙髓的血管内皮细胞能分泌合成IL-8,可能参与火器性牙髓炎症发生、发展,并与牙髓损伤、修复有关。     

颌面部火器伤损伤组织中Cmyc原癌基因的表达

目的：探讨Ｃ－ｍｙｃ原癌基因在颌面部火器伤损伤组织中的表达和定位。方法：应用免疫组织化学、斑点杂交和原位杂交方法对颌面部火器伤损伤组织中Ｃ－ｍｙｃ的动态变化进行了分析。结果：创伤组织中炎性细胞、内皮细胞和成纤维细胞等多种细胞均可表达Ｃ－ｍｙｃ,Ｃ－ｍｙｃ产生水平不仅与组织损伤反应程度密切相关,而且与Ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ转录表现一致。结论：Ｃ－ｍｙｃ在颌面部火器伤组织损伤反应中起重要的调节作用,是控     

诱导内皮细胞E-选择素表达方法的建立及标准化

目的：应用肿瘤坏死因子－alpha(TNF-α）这一典型的炎症介质，寻找使人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表面表达E－选择素（E－selectin）达峰值时所需TNF－alpha的最佳浓度与最佳作用时间，制备炎症模型。方法：体外培养HUVEC，经TNF－α刺激后，采用间接流式细胞术进行细胞表面E－selectin的检测。结果：脐静脉内皮细胞经TNF－alpha 5ng/ml刺激后3－6小时，E-selectin表达至峰值。结论：TNF－α刺激时间及用量的定量化，检测方法标准化，为进一步的炎症实验提供了必要的基础。     

炎症因子在脊髓损伤SD大鼠脑脊液和血液中表达的比较研究

目的探讨脊髓损伤后脑脊液和外周血中TNF-α、IL-6和IL-10的表达水平及其动态变化。方法采用成年SD大鼠重击法脊髓损伤模型,用ELISA方法测定脊髓损伤急性期内炎症因子在脑脊液和血液中相对含量和动态变化;同时用免疫组织化学方法,观察炎症因子在脊髓神经细胞和胶质细胞表达情况。结果ELISA测定结果显示炎症因子TNF-α、IL-6和IL-10在脊髓损伤大鼠脑脊液内有较强表达,而在血液中表达很低。免疫组织化学染色显示脊髓组织中神经细胞和神经胶质细胞大量表达炎症因子。结论脊髓损伤的急性期内,神经细胞和神经胶质细胞是脊髓损伤急性期内炎症因子的主要来源,神经细胞和胶质细胞直接参与了损伤局部组织的固有免疫反应。     

已酮可可碱对内毒素血症大鼠肝损伤的保护作用

目的探讨已酮可可碱（PTX）对内毒素血症大鼠肝损伤的保护作用。方法Wistar大鼠18只随机分成三组：假手术组、内毒素组和PTX治疗组，每组6只。测定各组动物血清TNF—α、IL-1β水平，肝组织ICAM-1蛋白表达。结果内毒素组血清TNF—α和IL-1β水平与假手术组比较明显增强（P〈0．01），肝组织ICAM-1蛋白表达与假手术组比较也明显增强（P〈0．01）。PTX治疗后，血清TNF—α、IL-1β水平和肝组织ICAM-1蛋白表达与内毒素组比较明显减弱（P〈0．01）。结论TNF-α，IL-1β和肝组织ICAM-1在内毒素急性肝损伤发病机制中起重要作用，PTX可以作用于TNF-α、IL-1β和肝ICAM-1，下调其表达，减轻内毒素对肝组织造成的损伤，保护肝组织。     

心肺复苏大鼠脑TNF—α、IL一1、IL一6和MMP9的表达及意义

目的探讨心肺复苏早期大鼠脑组织TNF-α、IL-1、IL-6和MMP9的表达及意义。方法将动物分为假手术组和复苏组,在即刻及3、9、24h和48h时间点分5个时间点处死大鼠后,取样,测定脑组织TNF-α、IL一1、IL-6和MMP9的表达,使用电镜观察脑组织的超微结构。结果假手术组心肺复苏后脑组织TNF—α、IL一1、IL-6、MMP9含量无明显变化,电镜观察脑组织超微结构也无明显变化。复苏组心肺复苏后脑脑组织TNF—α、IL一1、IL-6、MMP9含量明显升高,电镜超微结构观察均发生改变。结论心肺复苏后大鼠脑组织TNF-α、IL-1、IL-6和MMP9动态变化,血脑屏障的损伤与MMP9相关。     

TNF-α为中心的肝细胞凋亡与LPS所致小鼠肝损伤的关系

【目的】探讨TNF—α为中心的肝细胞凋亡途径在脂多糖（LPS）所致小鼠肝损伤中的地位。【方法】小鼠腹腔注射LPS后不同时间点分离血浆检测谷丙转氨酶（ALT）活性．取肝脏组织切片,HE染色观察病理改变．末端脱氧核糖核酸转移酶地高辛标记方法检测肝细胞凋亡,免疫组化检测肝组织TNF-α表达。【结果】腹腔注射LPS后3h血浆ALT活性明显升高．肝细胞凋亡率明显增加,TNF—α阳性数明显增多：6h血浆ALT活性、肝细胞凋亡率、TNF-α阳性数达到高峰;12h血浆ALT活性明显回落,肝细胞凋亡率、TNF-α阳性数显著减小;24h、30h血浆ALT活性、肝细胞凋亡率基本恢复到对照组水平,肝组织TNF—α阳性数达到较低水平。【结论】小鼠腹腔注射LPS后,先天免疫系统可能在早期启动TNF-α为中心的肝细胞凋亡．引起肝损伤。     

靶向TNF-α基因shRNA干扰片段的筛选和重组体的构建

本研究利用RNA干扰技术，筛选出可以高效、特异性抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的小发夹状RNA（shRNA）片段，设计并构建重组质粒，进行序列分析，为探索TNF-α相关疾病的基因治疗提供新途径。取原代培养小鼠腹腔巨噬细胞，置于15％ DMEM中，调细胞浓度为2×10^7／L，接种于6孔板，3ml／well；细胞用脂多糖（LPS）激活，ELISA法测不同时间培养上清中TNF—α的浓度；将针对TNF-α基因的5段shRNA干扰片段的表达框经PCR扩增、纯化后，与转染试剂混合转染入巨噬细胞，细胞用LPS激活24小时后用ELISA法测培养上清中TNF-α的浓度，RT—PCR法测细胞TNF-α mRNA的表达；将最有效抑制TNF-α表达的干扰片段插入质粒载体，转化Ecoli DH5α感受态菌株，提取质粒，进行测序分析。结果表明：LPS刺激巨噬细胞24小时后，细胞分泌TNF—α达高峰；转染了干扰序列1的细胞培养上清中TNF—α浓度与对照组相比下降最明显（P〈0．05），达59．46％，TNF—α mRNA的表达被抑制了61．2％；将干扰序列1DNA序列克隆到载体上，经测序鉴定确实为所需序列。结论：成功筛选出靶向TNF-α基因的shRNA干扰片段并构建重组质粒，可进一步利用克隆所得到的shRNA干扰TNF-α mRNA的表达，为TNF—α相关疾病的基因治疗提供新手段。     

全脑缺血／再灌注大鼠海马核转录因子-κB的表达及其在神经元损伤中的作用

目的探讨核转录因子-κB（NF—κB）在缺血致神经元损伤中的作用。方法建立Wistar大鼠全脑缺血／再灌注模型。研究脑缺血10min后不同再灌注时间内海马组织NF—κB的活性，TNF—α含量变化，脑组织含水量的变化，同时观察用PDTC治疗后对上述指标的影响。结果随再灌注时间的延长，脑海马组织中NF—κB活性、TNF—α含量，脑组织水含量显著升高（P〈0．05和P〈0．01）。使用NF-κB特异性抑制剂PDTC治疗后，上述各指标的异常变化明显减轻，与损伤组比有显著性差异（P〈0．05和P〈0．01）。结论全脑缺血／再灌注后，海马出现NF—κB的表达且活性增高，同时伴有炎性细胞因子TNF-α含量增加，脑水含量增加，提示NF-κB的活化参与了脑缺血神经元的损伤，应用NF—κB特异性抑制剂能减轻脑缺血神经元的损伤。     

经皮电刺激对大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1α、肿瘤坏死因子-α表达变化的影响

摘要 目的：探究经皮电刺激对大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1α( IL-1α) 、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 表达变化的影响及意义。 方法：48只SD大鼠,随机分为对照组、电刺激组,采用改良Allen脊髓损伤打击模型,术后不同时间点采用BBB评分进行行为功能评估,用病理学和免疫组织化学方法定位、定性的检测对照组、电刺激组的损伤段脊髓组织中IL-1α、TNF-α的变化情况。 结果：BBB评分显示,术后第1—3天,对照组及电刺激组BBB评分值均为0—1分,电刺激组在损伤后第5天及第7天时BBB评分值与对照组相应时间点比较,组间差异明显(P<0.05);免疫组织化学显示,损伤后第1—7天,两组IL-1α、TNF-α免疫反应阳性神经元数目和平均积分光密度值强度呈递增趋势,且于第7天时达峰值,进一步分析得出,电刺激组IL-1α、TNF-α免疫反应阳性神经元数目及平均积分光密度值强度均明显低于对照组(P<0.05)。 结论：经皮电刺激可抑制脊髓损伤后IL-1α、TNF-α表达,减轻脊髓继发性炎症反应,促进功能恢复。     

大鼠颅脑损伤后脑NF-κB的活性和NF-κB mRNA表达的变化及意义

目的 观察颅脑损伤后不同阶段脑NF-κB的活性和NF-κB mRNA表达的变化,探讨其在颅脑损伤后继发性损伤中意义及相关机制.方法 建立颅脑损伤模型,通过光镜观察颅脑损伤后病灶周围脑组织变化,采用免疫组化方法检测脑组织中NF-κB及TNF-α的表达情况,RT-PCR检测NF-κB mRNA表达情况.结果 颅脑损伤后不同阶段NF-κB蛋白表达及mRNA表达明显高于对照组（P＜0.05）,并且NF-κB表达水平与TNF-α呈正相关关系（r=0.519,P＜0.05）,且与组织炎症损伤程度一致.结论 颅脑损伤后各时间点脑NF-κB呈过度激活状态,与TNF-α水平的变化一致,且病理上颅脑损伤炎症损害严重程度相平行,这可能是颅脑损伤后继发性损伤发生的一个机制.     

氧疗对缺血缺氧家兔细胞因子TNF-α和IL-6mRNA表达的影响

目的探讨氧疗对缺血缺氧家免炎症细胞因子TNF-α和IL-6mRNA表达的影响。方法将15只家兔随机分为实验组与对照组，放入模拟海拔4000m高原低压舱内，复制失血性休克模型。对照组只给予扩容治疗，实验组在扩容的同时给予氧疗，于不同时相点进行指标检测。结果休克时，外周血WBC中TNF-α和IL-6 mRNA表达均增高，分别于治疗后1、4h达高峰，但实验组表达增加的幅度小于对照组，与血浆内毒素（LPS）水平厦丙二醛（MDA）含量变化相似；同时实验组的肠黏膜损傀程度轻于对照组。结论缺血缺氧后体内炎症细胞因子表达增加，氧疗可以使TNF—α和IL-6 mRNA的表达降低，有利于减轻全身炎症反应和组织器官损害。     

肿瘤坏死因子-α在大鼠移植肾缺血预适应中的表达及意义

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在大鼠移植肾缺血预适应（IPC）中表达及作用。方法：36只成年Sprague-Dawley（SD）大鼠为供受体，并随机分为以下3组：假手术组，剖腹探查后关腹；普通移植组，同种原位肾移植；缺血预适应组，供肾15min缺血10min灌注预处理肾移植。术后24h，应用生化和组织学指标检测各组肾脏功能与肾组织损伤程度，分别用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）技术和酶联免疫吸附法（ELISA）检测肾组织及血清中TNF-α转录与表达水平。结果：肾移植后24h与普通移植组组相比，缺血预适应组肾小管损伤程度明显减轻（肾小管损伤指数P〈0．01），TNF—α转录与表达亦明显减弱（P〈0．01）；普通移植组和缺血预适应组Scr、BUN水平较假手术组明显升高，但两组间未有明显差异（P〉0．05）。结论：用15min／10min缺血预适应能够改善大鼠移植肾早期缺血再灌注损伤，TNF-α表达被抑制可能在预缺血再灌注保护中起着关键性作用。     

肿瘤坏死因子α（TNF—α）在急性颅脑损伤时的表达及意义

目的：测定急性颅脑损伤后在鼠血浆肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达，及TNF-α对急性颅脑损伤程度的评判和预后。方法：设立大鼠脑挫伤模型,处死前测其血浆TNF-α，急性处死后用伊氏蓝（EB）蓝染范围测定血脑屏障（BBB）通透性，干湿法测定脑水肿程度。结果：大鼠急性颅脑损伤后血浆TNF-α含量显高于对照组，并与脑创伤性水肿及BBB通透性相关（P＞0．05）。TNF参与急性颅脑损伤的病理过程，血浆TNF-α是判断颅脑伤的重要指标。结论：测定血浆TNF-α值有助于了解急性颅脑损伤程度及预后。     

毒素清对肺炎克雷伯杆菌肺炎老龄大鼠心肌损伤中炎症细胞因子表达的影响

目的从心肌组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、巨噬细胞炎症蛋白-2（MIP-2）蛋白表达和MIP-2 mRNA表达变化揭示中药毒素清对老年肺炎心肌损伤的保护作用机制。方法将老龄大鼠随机分为对照组、模型组、毒素清组和左氧氟沙星组，制备肺炎克雷伯杆菌肺炎模型。计数外周血和支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞（WBC）计数和中性粒细胞（PMN）计数，采用放射免疫法测定外周血IL-1、TNF—α水平，采用免疫组化方法和原位杂交方法结合图像分析技术测定心肌组织MIP-2、IL-1、TNF-α蛋白表达及MIP-2 mRNA表达。结果与对照组比较，模型组外周血和BALF中WBC、PMN明显升高，血清和心肌组织IL-1、TNF-α水平明显增加，MIP-2的蛋白和mRNA表达明显增强（P〈0．05或P〈0．01）；与模型组比较，左氧氟沙星组和毒素清组外周血和BALF中WBC、PMN明显减少，血清和心肌组织IL-1、TNF-α水平降低，MIP-2的蛋白和mRNA表达明显减弱（P均〈0．01）。结论细胞因子TNF-α、IL-1、MIP-2紊乱参与老年肺炎导致心肌损伤的发生发展。阻抑TNF-α、IL-1、MIP-2介导的损伤可能是毒素清保护老年肺炎时心肌损伤的主要途径。     

核因子-κB活化在急性肺损伤发病中的作用

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)活化在炎症反应及其内毒素致伤大鼠急性肺损伤(acute lung injury，ALI)发病中的作用，为临床ALI防治提供理论依据。方法 观察内毒素(LPS)对大鼠血气分析和肺组织损伤的影响，采用凝胶电泳迁移率改变(EMSA)法检测肺组织核蛋白提取物中NF-κB活性及其特异性；并应用ELISA法检测肺组织匀浆TNFα含量的改变。结果 LPS静注可致大鼠急性肺损伤，肺组织核蛋白的NF-κB活性显著增强，肺组织匀浆TNFα含量显著升高。结论 LPS激活NF-κB启动TNFα表达，释放的TNFα与LPS进一步共同激活效应细胞的NF-κB活化，进而启动一系列参与炎症反应的炎症分子表达而参与大鼠急性肺损伤的发生。     

热矿泥浴对大鼠佐剂性关节炎的作用及机制

目的：观察热矿泥浴对大鼠佐剂性关节炎(AIA)的治疗效果及作用机制。方法：Wistar大鼠按AIA造模后，随机分为3组，分别给予热矿泥浴、普通黄泥浴共19d，空白对照组则不予处理。连续观察关节炎症积分，第30天取标本，检测血清肿瘤坏死因子(TNF—α)含量，关节的组织病理学改变，原位杂交法观察基质金属蛋白酶—1(MMP—1)和细胞间黏附分子(ICAM—1)mRNA在关节滑膜和软骨中的表达。结果：热矿泥浴能显著降低AIA的关节炎症程度，包括炎症积分，以及组织切片的滑膜细胞增生和软骨侵袭。热矿泥浴还能显著降低血液中的TNF—α含量，抑制滑膜和软骨细胞的MMP—1 mRNA以及软骨细胞ICAM—1 mRNA的表达。普通黄泥浴也能抑制软骨细胞的：ICAM—1 mRNA的表达。结论：热矿泥浴能显著抑制大鼠AIA的关节炎症，其机制与抑制TNF—α的产生以及MMP-1和ICAM—1在滑膜和软骨中的表达有关，且这种作用不单纯是泥浴的物理作用，可能主要是热矿泥浴的化学和生物学作用所致。     

川芎嗪抗大鼠内毒素休克性肝损伤作用机理的研究

目的：探讨川芎嗪抗大鼠内毒素休克性肝损伤的作用机理。方法：将健康成年wistar大鼠60只随机分为正常对照组、内毒素休克组、内毒素 川芎嗪预处理组，以内毒素注射后2h及内毒素休克组大鼠临终时为时点采集肝脏，采用western斑点印迹法及ELISA双抗体夹心法检测肝组织中HSP70及TNF-α含量。结果：内毒素休克组大鼠较对照组肝组织HSP70及TNF—α含量显著升高，与川芎嗪预处理组大鼠相比，后者肝HSP70含量明显增加，TNF-α含量显著减少，动物存活时间延长，存活率显著提高；相关分析表明肝HSP70与TNF-α含量呈显著负相关。结论：川芎嗪能显著提高内毒素休克大鼠肝脏HSP70含量，抑制肝TNF—α释放，并减轻内毒素诱导的肝损伤。