抗人结肠癌单克隆抗体SC3A在荷瘤裸鼠体内的放射免疫定位研究

本文用~(131)I标记自制的抗人结肠癌单克隆抗体SC3A,进行荷人结肠癌裸鼠体内生物学分布和肿瘤的放射免疫显像研究。结果在注射~(131)I饲—SC3A后24～120h,肿瘤部位的放射性均显示出选择性浓聚,以72～120h的影像最为清晰;而注射~(131)I—鼠IgG则呈全身均匀性分布,无肿瘤部位选择性波聚影像。在72h,13种器官的T/NT均大于2,肿瘤LI为6.94,与扫描显像结果吻合。这些都表明SC3A在生物体内对结肠癌具有良好的选择性和导向作用,抗体可对其供临床体内进一步应用提供了依据。     

单克隆抗体SC6的免疫放射分析法及其临床意义

本文应用亲和层析法分别纯化了单克隆抗体SC 6及其相应的SC 6抗原。采用氯胺一T和lodogen法以‘2’I标记单克隆抗体SC6,标记率分别为61.2％和91.5％;放化纯度97.5畅.采用双抗体夹心法操作,一抗和“’IMc人b最适工作浓度分别是 20 ＃g/ml     

McAb SC13A ER和PR在乳癌中反应性的观察比较

本文应用单克隆抗体(McAb)SC13A雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)对97例乳癌进行标记研究,McAb SC13A用石蜡切片,免疫组化PAP方法进行。ER、PR检测用冰冻切片亲和组化法进行。结果SC13A在97例乳癌中的阳性反应为85.6％,其中强阳     

抗人结肠癌单克隆抗体CL_3全抗体与F(ab'''')_2片段在荷瘤裸鼠体内动态分布比较

为提高放射免疫显像(RAID)和放射免疫引导下外科手术(RIGS)的效果,用抗人结肠癌单克隆抗体(McAb)CL3,通过Pepsin消化法制备F(ab＇)_2,~(125)I标记,标记率73.1％,放化纯度99.5％,比活度4.7μCi/μg。结合分析法测定的免疫活性为56.8％,亲和常数为3.4×10~9L/mol。~(125)I-CL3全抗体标记率73％,放化纯度99.2％,比活度4.12μCi/μg,免疫活性     

第二抗体对~(131)I标记单抗放射免疫显像的改善作用

~(131)I标记抗体用于肿瘤放射免疫显像的主要问题是本底放射性,特别是血液中本底放射性较高。抗标记抗体的第二抗体可促进未与肿瘤结合的标记抗体加速从体内排出。 用Iodogen法标记抗结肠癌单抗2C_(10),标记抗体放化纯度96％,放射比4.47μCi/μg,     

新生大鼠骨骼肌卫星细胞的原代培养及标记方法

本文用等密度沉降离心法分离出新生大鼠骨骼肌卫星细胞,观察其生长规律,检测分裂指数及生长曲线。用胶体金、DAPI及Brdu标记液分别标记细胞8、24、48h,测标记后细胞的生长曲线及标记率。结果表明分离所得肌卫星细胞纯度95％以上,梭形,培养第5天细胞排列出现方向性,并开始融合成肌管,第3—5天增殖旺盛,5代以内生长较快。三种标记方法对肌卫星细胞有不同程度毒性。胶体金标记法毒性最小,标记率100％;DAPI标记细胞率为100％;Brdu毒性最大且标记率仅为10％。本实验方法简单、快速,所得肌卫星细胞纯度高,性能好。胶体金标记法适合于电镜研究,DAPI标记法适合于光镜研究,Brdu标记法较差。     

乳腺癌SC 13A抗原、雌激素受体和孕激素受体的检测比较

单克隆抗体(MAb)SC 13A为我室自行研制的16种抗人结肠癌相关抗原的MAb中的一种,其识别抗原即SC13A抗原(SC 13A-Ag)是一种与CEA和TAG-72抗原无关的糖蛋白,分子量约为250KD。我们以往的免疫组化研究结果表明,SC 13A除表达在结肠癌组织外,尚在乳腺癌中亦有较好的相关性及较高的表达率,且不存     

兔背根神经节植块法的雪旺氏细胞培养

目的:建立一种新的培养雪旺氏细胞(Schwann cell,SC)的方法,为神经移植研究获取高纯度的细胞奠定基础。方法:采用植块培养的方法,分离新生1～2天兔子的背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG),弃膜,剪碎进行植块的雪旺氏细胞的培养,然后采用阿糖胞苷(cytosine arabinoside,Ara-C)抑制,差速贴壁法、Forskolin的牛垂体提取液(bovine pituitary extract,BPE)刺激进行细胞纯化,最后S-100免疫组织化学染色进行纯度鉴定。结果:本实验采用背根神经节植块及纯化的方法获得雪旺氏细胞的纯度可达95％以上。结论:这种选用DRG组织块培养及纯化SC的方法效率很高而且简单方便,所获SC的纯度高数量大。     

第二抗体对~(131)I标记单抗放射免疫显像的改善作用

本文用Iodogen法标记抗结肠癌单抗2C_(10),标记抗体放化纯度96％,放射比4.47μCi/μg,仍保持较高的免疫活性。动力学分布实验:带人结肠癌裸鼠20只,随机分为二组。经腹腔注射~(131)I-2C_(10) 5μCi/只,其中一组12小时后注射纯化兔抗鼠IgG抗体100μg。注射后1～5天每日每组处死2只动物,测脏器比放射性。计算出T/N比值和每克组织计数占注射总计数     

~(111)In标记单抗对移植人结肠癌裸鼠的放射免疫显像研究

本文用双功能螯合剂DT PA将~(111)In标记于单抗2C_(10)。标记率100％,放化纯度97％,免疫荧光法检测免疫活性保持80％。~(111)In-2C_(10)以10μCi/只的剂量经腹腔注射带入结肠癌裸鼠体内,对照组动物接受同样剂量的~(111)In-正常BALB/c小鼠IgG。给药后12、24、48、72、96小时各组处死2只动物,测组织化放射性,计算T/N化值和定位指数。实验组各脏器T/N     

雪旺细胞分步消化培养及其纯化实验研究

目的：探讨双酶分步消化法从乳兔周围神经中分离培养雪旺细胞，以及纯化获得高纯度的雪旺细胞的方法。方法：采用出生1周内乳兔的坐骨神经，先用胰蛋白酶消化分离出一部分细胞，移出后，再予胶原酶消化分离其余的细胞，计算上两步消化后的活细胞的百分率，另外采用：(1)无任何处理；(2)单纯双30min差速贴壁；(3)Ara—c；(4)Geniticin纯化法，以及后3种方法联合应用进行纯化，计算雪旺细胞的纯度。结果：采用分步消化法所得到的活细胞百分率分别为96．5％以上和95％以上，无任何处理的雪旺细胞纯度为85％，单纯双30min差速贴壁纯度为90％，Ara—c纯化的纯度为91％，Geniticin纯化的纯度为95％，(2)、(3)、(4)方法的联合应用纯化的纯度为98％。结论：双酶消化法和联合应用双30min差速贴壁、Ara—c、Geniticin纯化是获取高纯度雪旺细胞的理想方法。     

新生大鼠大脑皮层少突胶质细胞/Ⅱ型星形胶质祖细胞原代培养及形态

目的:研究不同诱导条件对大鼠大脑皮层O2A祖细胞生长活性的影响。方法:采用两次恒温摇床振荡培养法,倒置显微镜结合免疫荧光染色法鉴定细胞种类并判断纯度,透射电镜观察细胞超微结构。结果:O2A祖细胞胞体呈圆形,常有单极或双极突起.形成克隆球,A285标记阳性,免疫荧光鉴定细胞纯度可达90%以上。O2A祖细胞具有双向分化的能力,在不同诱导条件下可分化为星形胶质细胞或少突胶质细胞。电镜观察O2A祖细胞呈圆形或椭圆形,核仁可见,胞质内细胞器少,核周见成束胞质丝。结论:选择合适的培养基对O2A祖细胞纯化培养及诱导分化极其重要。     

同一癌组织的三种不同切片与单克隆抗体反应性的比较

应用本实验室制备的抗人结肠癌McAbsSC6,SC11和SC12对多种癌和正常组织的反应性观察结果表明,这些McAbs所识别的抗原为肿瘤相关抗原,在多种癌组织内广泛存在,但表达程度有所不同。此3个McAbs所对应的抗原在大肠癌和胰腺癌中占明显优势,阳性率分别为95％～98％和80～90％。除SC11和SC12与正常食管的管腔上皮和(或)分泌物及某些单个核细胞有轻微交叉反应外,与其他二十余种正常组织均无交叉反应。此外在抗肿瘤McAb的筛选和鉴定时     

单克隆抗体SC13A和SC3A在乳腺疾病中的免疫组化研究

本文以免疫组化法分别研究了McAb SC 13A和SC 3A与134例12种不同组织学类型乳腺疾病的反应性。结果显示,这2株McAb与乳腺癌的阳性反应率分别为89.5％和94.7％,其中强阳性各占68.5％和76.3％;反应范围>50％的分别为52.6％和72.3％。这2株McAb的反应结果相似(P>0.05)。在乳腺良性病变中,其阳性率分别为22.4％和48.3％,后者明显高于前者,与乳腺癌比较的差异均有非常显著意义(P<0.01)。表明这2株McAb识别的抗原在乳腺癌中均有较高的表达,但在良性病变中亦有一定的表达,为其进一步深入研究提供了一种新而有用的标志物。     

大鼠脊髓灰质向上丘和束旁核的直接投射及其相互联系——HRP逆行标记法

在大白鼠束旁核(PF)和上丘(SC)深部(中、深层)微电泳导入HRP溶液,用逆行标记法证明脊髓灰质全长有脊髓—PF投射和脊髓—SC深部投射。两种投射的标记细胞主要分布在脊髓Rexed第Ⅳ、Ⅴ及Ⅰ、Ⅱ层,前角偶有少量标记细胞。脊髓—PF为双侧投射,脊髓—SC深部主要为对侧投射。PF和SC之间有SC—PF单向投射,未见有PF—SC直接投射。     

抗ProGRP(31-98) scFv的131I标记及生物分布研究

目的 研究抗胃泌素释放前体（ProGRP（31-98）单链抗体（scFv）的131I标记方法,并对其标记后的稳定性、免疫活性及生物分布进行分析.方法 采用氯胺T法碘化标记制备131I-anti-ProGRP（31-98）scFv,凝胶柱层析法分离纯化标记产物,利用纸层析法测定标记物的标记率、放化纯度和稳定性,采用细胞结合分析法比较131I-anti-ProGRP（31-98）scFv对小细胞肺癌细胞株NCI-H446和肺腺癌细胞株A549的免疫结合率.将131I-ProGRP（31-98）scFv注射入动物体内,研究其在实验动物体内的分布情况.结果 131I-anti-ProGRP（31-98）标记率为（93.35±0.67）％,标记产物纯化后即刻放化纯度为（98.49±1.21）％.131I-anti-ProGRP（31-98）scFv对人小细胞肺癌NCI-H446和肺腺癌A549细胞株的免疫结合率分别为（85.36±1.45）％和（21.02±2.16）％,且差异有统计学意义（P＜0.05）.131I-anti-ProGRP（31-98）scFv在实验动物体内主要通过肾脏和肝脏代谢,血液清除快.结论 131I-anti-ProGRP（31-98） scFv的标记率高,且有良好的稳定性和免疫活性,在实验动物体内主要通过肝脏和肾脏代谢,血液清除快.     

R-Sak在动物体内药代动力学研究

为研究γ-SaK的药代动力学规律,采用同位素标记法和生物测定法进行体液和组织中药物浓度测定。用氯胺T法标记~(125)I-γ-SaK,放化纯度>98％,给大鼠静注三种剂量后进行药代动力学试验。数据采用3P87程序按二室模型计算药代参数。结果1/2α约为0.913-1.336分钟,T1/2β约为22.51-23.89分钟,5分钟后各组织有较高放射量。尿胆汁在3小时内可显     

高效的雪旺细胞体外培养方法

目的 介绍有效地获得大量高纯度、高活性的雪旺细胞培养纯化方法。方法 选用2～3天的SD大鼠双侧臂丛神经和坐骨神经，在解剖镜下剥离除去神经外膜，剪碎后采用高浓度酶消化法种植培养。随后阿糖胞苷连续作用3天去除成纤维细胞，同时逐渐降低培液中胎牛血清浓度。并使用超低酶浓度消化传代。结果本方法可从新生鼠获取近4×10^6雪旺细胞，成活率为98％；S-100免疫荧光法鉴定雪旺细胞纯度达96％以上。传统方法获得约3×10^6雪旺细胞，成活率为92％；雪旺细胞纯度为90％。结论 本方法可以获得大量纯度高、活性好的雪旺细胞，值得进一步推广。     

放射性3,3’-二碘甲腺氨酸（（131）I-T2）的合成

目的：获得放射性3,3’-二碘甲腺氨酸（131I-T2）,为下一步硫酸化得到3,3’-二碘甲腺氨酸硫酸化物（131I-T2S）作准备。方法：采用氯胺T法以131I标记3-单碘甲腺氨酸（3-T1）,凝胶柱层析法及纸层析法分离、纯化。测定标记率、放射化学纯度和标记物稳定性,并鉴定标记物的免疫活性。结果：131I标记率为65.1%±4.5%（n=5）,标记物的放化纯度为96.5%±1.1%（n=5）。经-20℃储存10d后放化纯度仍〉90%。结论：氯胺T法可获得较高碘标记率及较稳定的标记物。     

153Sm标记DTPA-抗CEA单抗的放射化学纯度的分析

目的：应用纸层析法,建立^153Sm通过DTPA环酐（cDTPAa)标记抗CEA单抗的放射化学纯度分析方法。方法：在多种纸层析系统中,经实验确定最佳纸层分离条件,并将测定结果与SephadexG-50凝胶柱层析法进行比较,结果：最佳分离条件为：展形剂组分比为磷酸三丁酯：丁酮：乙酸乙酯＝4：10：3,支持物为30％硝酸铵处理的新华Ⅰ号滤纸。其标记率测定结果与柱层析法结果一致。结论：结果表明该法设备简单,方便快速。