安徽省114株EHECO157∶H7菌株毒力因子基因的初步分析

目的　对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHECO157∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O157∶H7的毒力特征和致病特性。方法　采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO157∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论　检测结果显示 ,有 63.2%的EHECO157∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33.3% ,说明分离的EHECO157∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中,有 14.0%的菌株在 24h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18.8% ,显著低于不发酵菌株的 70.4% ,显示出山梨醇发酵特性变异与毒力因子基因缺失之间具有一定的关联性。     

我国大肠埃希菌O157:H7分离株大质粒pO157变异性研究

目的 分析我国分离的大肠埃希菌O157:H7菌株中大质粒pO157的变异情况。 方法 采用限制性内切酶酶切法分析质粒酶切图谱,而后采用嵌套引物进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,并用Southern blot进行验证,最后测序。 结果 根据酶切图谱将60株大肠埃希菌O157:H7分为A~E 5个群,而进一步研究表明造成A群与C群HindⅢ 酶切图谱的不同是由C群中的一个小质粒造成的。PCR结果显示A群与C群中的引物对5和25,B群中的引物对25得到的PCR条带与pO157出发菌株不同,其他均相同。测序结果显示造成引物对25在A~C群中与致病性大质粒pO157不同的原因是IS1310序列的插入。 结论 我国大肠埃希菌O157:H7分离株致病性大质粒pO157相对保守,部分菌株中存在插入序列如IS1310,这也是造成我国大肠埃希菌O157:H7 pO157质粒变异的主要原因。     

espP基因在O157∶H7大肠埃希菌分离株中的分布

目的了解espP基因在中国部分地区产志贺毒素O157大肠埃希菌分离株中的分布情况及特点。方法根据O157∶H7的溶血素基因hlyA和细胞外分泌蛋白基因espP设计特异性引物,对113株O157大肠埃希菌分离株进行PCR检测。结果 hlyA的阳性率为99.1%,espP的阳性率为72.5%,且只在有大质粒pO157的菌株中检测到espP。结论 espP存在于携带pO157大质粒的O157∶H7大肠埃希菌中,其分布与菌株来源、志贺毒素携带情况等没有相关性。     

2008-2010年浙江省衢州市动物粪便O157∶H7监测及其意义

目的 动态了解浙江省衢州市家禽、家畜肠出血性大肠埃希菌O157∶H7带菌情况和菌型分布特征,以制定相应的防制对策。 方法 6、7月肠道传染病高发季节,采集动物粪便标本,对O157∶H7菌株进行分离培养,并用PCR方法检测其毒力基因。 结果 共采集动物粪便标本914份,检出O157∶H7菌2株,总带菌率为0.22%,其中羊、牛各检出1株,带菌率分别为0.62%和0.71%。经PCR检测,其中1株携带stx2+ hly+ eaeA毒力因子,1株hly+eaeA阳性,stx1均为阴性。 结论 衢州市再次分离到带有毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7,对人群健康构成了威胁,应加强O157∶H7的综合监测。     

一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株的鉴定

目的 对一株不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株进行血清生化特征及毒力基因鉴定.方法 对154菌株进行常规血清生化鉴定,使用聚合酶链反应(PCR)方法检测该菌的志贺毒素基因及其他毒力因子,同时以southern杂交、Hela细胞毒实验进行证实.结果 菌株154的志贺毒素PCR检测、shouthern杂交为阴性,Hela细胞毒定量结果显示该菌株不产生志贺毒素,毒力因子eae,hly检测为阳性.结论 菌株154是不产志贺毒素的肠出血性大肠杆菌O157:H7菌株,且具有O157:H7菌株特异性的毒力因子.     

安徽省114株EHECO_(157)∶H_7菌株毒力因子基因的初步分析

目的　对安徽省近几年分离的肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7(EHECO1 57∶H7)菌株的毒力因子基因进行实验室检测 ,以分析和研究肠出血性大肠杆菌O1 57∶H7的毒力特征和致病特性。方法　采用聚合酶链反应(PCR)检测EHECO1 57∶H7的两种重要的毒力因子志贺样毒素 (SLT)和溶血素 (hly)的特异性基因片段 ,并辅以血清学试验、生化试验进行菌株的生物学特性鉴定。结果和结论　检测结果显示 ,有 6 3 2 %的EHECO1 57∶H7菌株携带SLT、hly基因 ,动物源的菌株以家禽较高 ,家畜次之 ,3株源自腹泻病人的菌株毒力因子基因携带率为33 3% ,说明分离的EHECO1 57∶H7菌株具有较强的致病性 ;114株菌株中 ,有 14 0 %的菌株在 2 4h内发酵山梨醇 ,发酵山梨醇菌株的毒力因子基因携带率 18 8% ,显著低于不发酵菌株的 70 4 % ,显示出山梨醇发酵特性变异与毒力因子基因缺失之间具有一定的关联性     

浙江省衢州市柯城区检出带毒力基因的肠出血性大肠埃希菌O157∶H7

目的　了解浙江省衢州市柯城区肠出血性大肠埃希菌O157∶H7人的感染、食品污染以及动物和媒介昆虫带菌情况。方法　采集腹泻患者粪便、动物粪便以及各类食品、蝇类等标本，MEC肉汤增菌后，用特异性免疫磁珠集菌，以科玛嘉显色平板分离，纯化的菌株经生化鉴定、血清分型及毒力基因检测。结果　2007年采集动物粪便标本300份，共检出O157∶H7菌16株，总带菌率为5.33%，其中牛、羊、猪带菌率较高，分别为20.83%、12.70%和3.61%，腹泻患者、食品和媒介昆虫中均未检出。毒力基因检测所有分离株Istx/I2、hly、eaeA 3种毒力基因均呈阳性，而stx1均呈阴性。结论　衢州市柯城区部分动物中存在O157∶H7感染，且为产毒株，应加强O157∶H7的综合监测。     

O157大肠杆菌生物学特性及分离鉴定技术研究

目的　研究肠出血性大肠杆菌 (EnterohemorrhagicEscherichiacoli)O15 7:H7和其他O15 7大肠杆菌 (以下简称O15 7:非H7)的生物学特性 ,制定高效、实用的O15 7:H7分离程序及鉴定指标。方法　生化试验和玻片凝集试验分别检测菌株的生化特性和菌体抗原 ;穿刺法接种抗 -H7抗血清琼脂检测H7鞭毛抗原 ,试管凝集试验检测其它鞭毛抗原。聚合酶链反应 (PCR)分别检测特异性基因和毒力基因。结果　 194株O15 7:H7与10 1株O15 7:非H7在山梨醇、蔗糖、赖氨酸和鸟氨酸等生化反应中有差异。 194株O15 7:H7中 192株(98 97% )携带O15 7特异性基因 ,189株 (97 4 2 % )菌体抗原表型阳性 ;10 1株O15 7:非H7均携带O15 7特异性基因同时表型亦为阳性。 194株O15 7:H7均携带H7特异性基因 ,186株 (95 88% )鞭毛抗原表型阳性。 194株O15 7:H7中除 1株 (0 5 2 % )四种毒力基因检测均为阴性外 ,其余 193株 (99 4 8% )均携带 2种及其以上毒力基因 ;10 1株O157:非H7四种毒力基因检测均为阴性。结论 O157:H7特征性生化反应、O157和H7特异性基因检测及其携带毒力基因的特性,在区分不同类型的0157方面有重要意义,据此可以制定针对性强的O157:H7分离鉴定程序。     

不同来源STECO157:H7生物学特性研究

目的 探讨浙江省产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株PFGE分型及携带毒力基因以及耐药情况.方法 菌株生化、血清鉴定按API 20E鉴定系统;大肠杆菌O157:H7诊断血清凝集试验;采用聚合酶链反应(PCR)法检测O、H抗原及毒力基因SLT1、SLT2、Hly、eaeA;STEC O157:H7分型用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行;14种抗生素进行药敏试验采用K-B法.结果 5株可疑菌株经生化和血清鉴定符合O157:H7特性;毒力基因检测所有分离株SLT2、Hly、eaeA三种毒力基因均阳性而SLT1均阴性;脉冲场凝胶电泳分型结果显示,有2株菌PFGE电泳条带完全相同,其余3株菌电泳条带不同,5株菌共分为4个带型;经耐药性分析,菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星100%敏感;对复方新诺明、氨苄西林100%耐药.结论 STEC O157:H7菌株在浙江省一些地区存在,并且携带SLT2毒力基因,PFGE型别较多,同时也有人间感染病例的出现,提示应加强O157:H7监测力度,防止该菌在人间的感染和流行.     

来自腹泻合并急性肾衰病人疫区的99株E.coli O157∶H7的鉴定结果分析

目的调查研究河南省2000年3月17日-7月6日发生的腹泻合并急性肾衰病人的致病菌。方法采集病人、外环境、家畜和家禽标本620份,采用免疫磁珠集菌法、CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基分离及营养肉汤增菌、rfbO157、rfbO111引物多重PCR扩增等方法进行病原菌的检测。结果分离出99份E.coli O157∶H7菌株,其中rfbO157、志贺氏样毒素2(stx2)、溶血素(hlyA)、肠上皮细胞纤毛消除素(eaeA)基因和vero细胞毒性试验均阳性的有56株,其它基因组合7株,36株无毒力基因。结论99株E.coli O157∶H7在CHROMAGAR-O157∶H7显色培养基生长形态、颜色,生化反应及毒力基因表现等方面出现多样化,对于今后在制定对该菌的诊断标准、传染源的控制及细菌毒力学等方面的研究提供了依据。     

上海地区家畜、家禽及肉制品大肠杆菌O157∶H7监测

目的　了解掌握本市家禽、家畜及肉制品大肠杆菌O157∶H7污染状况。方法2000年、2001年分别在流行季节在设置的监测点与超市采集家禽、家畜粪便、肉类制品 ,应用常规培养法与免疫磁珠法进行监测。结果两年间本市家禽、家畜及肉类制品O157∶H7阳性检出率 3.90% ,阳性率最高为肉类制品 4.87% ,2001年阳性率较 2000年明显提高 (P <0.01) ,16种抗生素耐药性监测 ,不同来源菌株对 13种抗生素存在不同耐药率。结论本市家禽、家畜及肉制品存在大肠杆菌O157∶H7污染状况 ,其中肉类制品高于家禽、家畜;免疫磁珠法阳性检出率高于常规培养法。     

河南省出血性大肠杆菌O157:H7监测研究

目的　为了解河南省E .coliO15 7∶H7感染性腹泻的分布特征、临床特点以及在家畜、家禽中的带菌状况和食物污染程度。方法　采用O15 7特异性筛查方法进行病原体分离培养 ,应用分子生物学、微生物学、生物化学技术进行病人、家畜、家禽的病原菌分离、培养、毒素因子测定。结果　 2 0 0 0 - 2 0 0 2年从 384 0份标本中检出E coliO15 7∶H72 2 0株 ,其中 77株具有毒素基因 ;显示有 5个毒素因子组合型。结论　病例有明显的时间、职业分布 ,发病以 6 0岁以上年龄组为主。最佳采样时间应在感染后 5天内。E coliO15 7∶H7感染性腹泻的发病与家畜家禽的带菌呈正相关。     

福州市畜禽肉类O157大肠杆菌调查

为查明福州市畜禽肉类中O15 7大肠杆菌的存在情况 ,1999年 4- 6月采集福州市菜市场家畜家禽5种肉类标本共 2 0 1份检测O15 7大肠杆菌 ,并对检出菌株进行生物活性影响因素实验。结果从 138份猪肉标本中检出 3株O15 7大肠杆菌 ,其中 2株 (P - 99,P - 12 8)属O15 7∶H7,1株 (P - 94)属O15 7∶NM。检出菌株EHEC -PCR -SLTPCR -Hly基因检测阴性 ,但都可使小鼠出现肠积液而发病死亡 ,可能存在新的致病因子。结果表明 ,福州地区猪肉中存在两类O15 7大肠杆菌 ,但这两类菌株在毒力因子上与国内外流行株有别。本文同时对 3株检出菌的耐热性、耐盐性及耐酸性等进行了实验和讨论。     

大肠杆菌O157∶H7抗菌药物敏感性研究

为了解E .ColiO15 7∶H7对抗菌药物的敏感性及其耐药谱的差异 ,我们选择了常见的 19种抗生素 ,对 1999年分离到的 89株O15 7∶H7进行药敏试验。结果显示O15 7∶H7对氨基甙类、头孢类、喹诺酮类、呋喃类的实验药物、多肽类的多粘菌素B以及氯霉素的敏感率高 ,基本在 90 %以上。在宿主动物中家禽类的菌株耐药率大于家畜类 ,家畜类宿主中猪的菌株耐药率大于牛、羊。无毒力基因菌株对抗生素的耐药率高于有毒力基因的菌株 (P <0 0 5 )。样本来源不同和基因型别不同的耐药结果均显示菌株对抗生素的耐药情况与其是否携带有毒力基因有关。     

江苏省徐州市出血性大肠埃希菌O157∶H7 感染性腹泻的监测研究

目的 系统监测肠出血性大肠埃希菌O157∶H7(O157∶H7)感染并发肾衰(HUS)、腹泻患者、宿主动物、蝇类、食品携带O157∶H7的状况,为预警监测体系建立提供参考依据。 方法 采集徐州市疫情暴发点和监测点腹泻患者粪便、蝇类和食品标本分离菌株。应用PCR技术检测志贺毒素基因stx。 结果 1999-2011年徐州市累计报告O157∶H7引起的感染性腹泻并发HUS 132例。腹泻患者带菌率1.2%、蝇类带菌率0.5%、食品带菌率1.0%、宿主动物带菌率3.1%。菌株带毒由stx1和stx2共存发展为以不带毒为主。 结论 江苏省徐州市O157∶H7感染自1999年、2000年暴发流行后,该市疫情一直稳定。腹泻患者带菌率、宿主动物带菌率、蝇类带菌率、食品带菌率及菌株带毒情况发生了改变。     

大肠杆菌O157:H7对消毒剂抗力与质粒pO157关系的研究

用高温-SDS法消除大肠杆菌O157:H7的质粒pO157,并将质粒pO157转化到大肠杆菌JM109,对比质粒pO157消除和转化前后试验菌对4种消毒剂的抵抗力。结果,质粒pO157消除后,试验菌对季铵盐的抵抗力有明显降低,对碘伏的抵抗力有明显的增强,对二氯异氰尿酸钠、醋酸氯己定的抵抗力无变化;将pO157转化到大肠杆菌JM109后,阳性转化菌对4种消毒剂的抵抗力均有不同程度增强,其中对季铵盐的抵抗力增加近60倍。结果提示,质粒pO157上可能带有抵抗季铵盐的基因而未携带抗碘伏的基因;消除质粒pO157后的试验菌对碘伏的抗性增加却说明pO157与试验菌对碘伏的抵抗力有间接关系。     

昆明市首次检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7

为了解昆明市是否存在肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7及流行情况 ,了解蔬菜、食物、水等的污染情况 ,2 0 0 1年 10月采集昆明市鸡、鸭、牛 3个养殖场、西式快餐店 2个和市区 9个农贸市场的鸡、鸭、牛粪 ,生牛奶 ,生、熟肉馅 ,生蔬菜 ,生、熟猪、牛肉 ,海产品 ,以及猪、鱼、鸡内脏等 14种共 15 5份样品。按照大肠杆菌O15 7∶H7的常规分离鉴定方法和分子生物学和血清学试验鉴定 ,结果共发现 19株大肠杆菌O15 7∶H7,并且 19株菌株均含有志贺样毒素VT2的致病基因。其中从蔬菜 (33份 )分离到 9株、鸡内脏 (9份 )分离到 3株、生猪肠 (17份 )和卤猪肉 (12份 )各分离到 2株 ,发干菜 (6份 )、鱼内脏 (6份 )、海产品 (6份 )各分离到 1株大肠杆菌O15 7∶H7。食品中检出阳性菌株数之多在全国尚属少见。特别是蔬菜 ,其检出O15 7∶H7大肠杆菌阳性数 ,占总检出数的 4 3 37% ,与国内其它地区有所不同。昆明市存在发生肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7感染暴发或流行的潜在危险.