nm23-H1基因对BcaCD885细胞侵袭、粘附和运动力影响的研究

目的：通过nm23-H1的转化及导入BcaCD885细胞株，建立稳定、高效、低毒的转染方法，观察nm23-H1对BcaCD885细胞株侵袭转移能力的影响。方法：（1）利用基因转化技术，制备高纯度的nm23-H1真核表达质粒；（2）利用阳离子脂质体介导的转染技术，完成转染方法的建立；（3）利用免疫组化技术，检测转染前后的NDPKA的表达；（4）利用transwell小室和冲刷实验，观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。结果：（1）使用重组的pCMV-N-B 的真核表达载体，将nm23-H1转染口腔癌,细胞并获得稳定表达；（2）发现BcaCD885细胞株nm23-H1基因的转染前后表达水平有明显差异；（3）转染后的BcaCD885细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。结论：nm23-H1对BcaCD885细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。     

nm23-H1基因对Tca8113的转移能力及化疗敏感性影响的实验研究

目的　通过nm2 3-H1的转化及导入Tca81 1 3细胞株 ,建立稳定、高效、低毒的转染方法 ,观察nm2 3-H1对Tca81 1 3细胞株侵袭转移能力的影响。方法　利用基因转化技术 ,制备高纯度的nm2 3-H1真核表达质粒。利用阳离子脂质体介导的转染技术 ,完成转染方法的建立。利用免疫组化技术 ,检测转染前后的nm2 3-H1的蛋白产物核苷二磷酸激酶A (NDPKA)的表达。利用transwell小室和冲刷实验 ,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。MTT法观察nm2 3-H1对Tca81 1 3化疗敏感性影响。结果　使用重组的pCMV-Neo-Bam真核表达载体 ,将nm2 3-H1转染口腔癌细胞 ,并获得稳定表达。Tca81 1 3细胞株nm2 3-H1基因转染前后表达水平有明显差异 ,转染后Tca81 1 3细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低 ,转染前后Tca81 1 3细胞株对阿霉素 (ADM)、5-氟尿嘧啶 (5-FU)、甲氨喋呤 (MTX)的化疗敏感性无显著差异 ,转染后Tca81 1 3细胞株对顺铂 (CDDP)明显增敏。结论　nm2 3-H1对Tca81 1 3细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用 ,nm2 3-H1可能通过特异性地影响细胞内的能量交换过程来达到对CDDP化疗增敏的效果。     

转染Bax基因提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究

目的：探讨Bax基因对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响。方法：采用脂质体Lipofectamine 2000转染人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α于人颊癌细胞株BcaCD885细胞中，再对细胞进行43℃ 40min水浴加温处理，用流式细胞仪检测BcaCD885细胞的凋亡率及Bax蛋白的表达水平；用RT-PCR技术检测BcaCD885细胞的Bax mRNA的表达水平。结果：Lipofectamine 2000能将人Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α导人BcaCD885颊癌细胞中，Bax-α基因重组质粒pORF-hBax-α能在BcaCD885颊癌细胞中表达，提高BcaCD885颊癌细胞内Bax蛋白质及mRNA的水平，促进热诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡的发生。结论：转染Bax基因于BcaCD885颊癌细胞内，能提高细胞对热杀伤的敏感性。     

Tca8113和BcaCD885对口腔癌靶向隐形顺铂聚乳酸纳米粒的敏感性研究

目的：观察口腔鳞癌细胞系（Tca8113和BcaCD885）对口腔癌靶向顺铂聚乳酸聚乙二醇纳米粒（CDDP—PLA—PEG—NP，或称隐形聚乳酸纳米）的敏感性，并与顺铂（CDDP）对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性进行对比观察。方法：用四唑盐显色法（MTr法）检测CDDP—PLA—PEG—NP和CDDP在1～8d内8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性，计算出2种药物在8个时间点对2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果：CDDP—PLA—PEG—NP和CDDP对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用，其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论：经改型后的CDDP—PLA—PEG—NP对口腔鳞癌细胞Tca8113和BcaCD885仍有强大的杀伤作用，为以后进一步的体内实验提供了依据。     

阻断内源性bcl-2蛋白表达提高BcaCD885颊癌细胞热敏感性的研究

目的：探讨与bcl—2翻译起始部位碱基互补的反义bcl—2寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucletide，ODN)对BcaCD885颊癌细胞热敏感性的影响。方法：以脂质体Lepofectin加为载体，转染20μM反义bcl—2 ODN于BcaCD885细胞内，阻断内源性bcl—2蛋白表达，再以43℃40min加热后，以流式细胞术—抗体及DNA分析对bcl—2蛋白、bax蛋白和细胞凋亡进行检测。结果：反义bcl—2 ODN阻断BcaCD885细胞内源性bcl—2蛋白表达后，bax／bcl—2升高，细胞凋亡率明显提高。结论：阻断BcaCD885细胞内源性bcl—2蛋白表达能提高其热敏感性。     

CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响

目的研究CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响,验证CyclinD1在口腔黏膜癌变中的作用。方法采用差示PCR技术检测颊癌细胞株BcaCD885中CyclinD1编码基因的扩增,并以脂质体为载体,将CyclinD1 mRNA的反义寡核苷酸序列转染肿瘤细胞,观察转染前后细胞增殖速度、体外集落形成能力的变化。结果 BcaCD885细胞株中出现CCND1基因扩增,扩增倍率6.9;转染CyclinD1mRNA的反义寡脱氧核苷酸后,细胞增殖速度减慢,体外集落形成能力下降。结论转染CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸,能部分抑制体外培养肿瘤细胞的增殖活性和恶性表型。     

硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响

目的　探讨硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸(AS-sODN)对BcaCD885颊癌细胞凋亡及热敏感性的影响。方法　以脂质体Lipofectin为载体,转染AS-sODN于BcaCD885细胞内,倒置显微镜观察细胞形态学改变,TUNEL原位末端标记检测细胞凋亡,流式细胞技术(FCM)测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达水平;转染AS-sODN于BcaCD885 细胞内,再以43℃,40 min加热细胞,FCM检测细胞凋亡率。结果　AS-sODN转染后,BcaCD885颊癌细胞出现皱缩、呈浮起状,TUNEL原位末端标记阳性,Bcl-xL蛋白表达明显下降(P<0·05),热诱导细胞凋亡率明显提高(P< 0·05)。结论　硫代反义Bcl-xL寡脱氧核苷酸能诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡并能提高其热敏感性。     

CyclinD1mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响

目的 研究CyclinD1 mRNA反义寡脱氧核苷酸导入对颊癌细胞株BcaCD885生物学行为的影响,验证CyclinD1在口腔黏膜癌变中的作用.方法 采用差示PCR技术检测颊癌细胞株BcaCD885中CyclinD1 编码基因的扩增,并以脂质体为载体,将CyclinD1 mRNA的反义寡核苷酸序列转染肿瘤细胞,观察转...     

反义bcl-2寡脱氧核苷酸对BcaCD885细胞凋亡的影响

目的 探讨反义bel-2寡脱氧核苷酸（oligodeoxynucleotide,ODN）对BcaCD885细胞凋亡的影响。方法 以脂质体 Lepofection为载体,一过性转染20μmol/L反义及正义bel-2 ODN于BcaCD885细胞后,通过细胞形态观察及流式细胞术（FCM）分析,从形态学及细胞学水平对凋亡细胞进行检测。结果 20μmol/L反义bel-2 ODN转染组,细胞出现了凋亡形态学改变,FCM检测凋亡率与对照组间存在显著差异（P<0.05）。而 20μmol/L正义bell-2ODN转染组与对照组相似,在形态学上未见明显的凋亡细胞出现,FCM检测两者凋亡率不存在显著差异（P<0.05）。结论 反义 bel-2 ODN能促进 BcaCD885细胞凋亡。     

nm23-H1基因转染前后人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中蛋白激酶C转位的变化

目的 研究nm23-H1基因转染诱导人舌鳞状细胞癌(以下简称舌鳞癌)Tca8113 细胞凋亡过程中蛋白激酶C-θ(PKC-θ)的作用.方法 采用脂质体转染法将真核表达载体pAdEasy-nm23-H1 转染人舌鳞癌Tea8113细胞株.应用PKC-θ活化抑制剂 Calphostin C 和 DMSO 预处理细胞30 min 后,常规培养24 h,倒置显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot分析Tca8113细胞中PKc-θ裂解活化状况;酶标仪(ELISA)检测Caspase-3的相对活性.结果 人舌鳞癌Tea8113 细胞胞浆中及核周存在PKC-θ的表达,nm23-H1基因转染后PKC-θ从胞浆、核周转位到细胞核内表达.nm23-H1基因转染可导致PKC-θ的裂解活化,形成功能性的催化片段,而Calphostin C 抑制转染诱导的PKC-θ裂解活化.nm23-H1基因转染后,Calphostin C 预处理组和DMSO预处理组Tca8113 的凋亡率、Caspase-3的活性增加,两组间有明显差异(P<0.05).结论 nm23-H1诱导细胞凋亡过程中有PKC-θ的裂解活化,PKC-θ是 nm23-H1 诱导舌鳞癌 Tea8113 细胞株凋亡过程中的参与者,PKC-θ激活Caspase-3诱导细胞凋亡是nm23-H1基因诱导肿瘤细胞凋亡机制之一.     

OK-432���˿�ǻ�۰�ϸ��ϵTca8113��BcaCD885ҩ���������о�

??Objective    To study the cytotoxic effects of OK-432 on the two human oral squamous cell carcinoma Tca8113 and BcaCD885 cell lines. Methods    The inhibitory effects and the 50% inhibition concentration values??IC50??of OK-432 against Tca8113 and BcaCD885 with different drug concentration were evaluated by methyl thiazolyl tetrazolium??MTT??. The time-dependent cytotoxic effects of OK-432 were in 1-5 days??and the dose-effect relationship was investigated at the 4th day. Results    OK-432 had high anticancer effects on Tca8113 and BcaCD885??and compared with the control group they were significantly higher??P < 0.05????and the cytotoxic effects were dose-dependent. Conclusion        OK-432 significantly inhibits the proliferation of  Tca8113 and BcaCD885 cell??and the inhibition on Tca8113 is stronger than on BcaCD885.     

OK-432对人口腔鳞癌细胞系Tca8113和BcaCD885药物敏感性研究

目的    探讨OK-432对人口腔鳞癌细胞系Tca8113和BcaCD885的药物敏感性。方法    采用四基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同剂量OK-432在5个时间点（1、2、3、4、5 d）对Tca8113和BcaCD885的生长抑制作用,计算不同时间点OK-432的半数抑癌率（IC50）和生长抑制率,选择药物作用后第4天观察量效关系。结果    OK-432 能明显抑制Tca8113和BcaCD885细胞的增殖生长,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,其抑制效应随药物浓度升高而增高。结论    OK-432能显著抑制Tca8113和BcaCD885增殖,对Tca8113的敏感性比BcaCD885强。     

平阳霉素-活性炭纳米微粒对口腔鳞癌细胞系Tca8113和BcaCD885细胞体外的杀伤作用

目的探讨平阳霉素-活性炭纳米微粒（PYM-CH-NP）对人舌鳞癌细胞系Tca8113和颊鳞癌细胞系Bca-CD885的药物敏感性。方法采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测不同剂量的PYM-CH-NP和平阳霉素（PYM）在7个时间点（1～7 d）对Tca8113和BcaCD885的杀伤效应,计算各时间点2种剂型的半数抑癌率浓度值（IC50）、抑癌率和药物抗肿瘤作用强度的相对值（RAA）,选择药物作用后第5天观察量效关系。结果PYM-CH-NP和PYM对Tca8113和BcaCD885均有较强的抑癌作用,其抗癌效应与药物浓度和作用时间相关。结论改型后的PYM-CH-NP保留了PYM的抗癌活性,且具有缓释性,作用于肿瘤时可以维持周围有效的浓度和作用时间,有效地杀伤肿瘤细胞。     

肽段连接的近红外荧光量子点对人颊鳞癌BcaCD885细胞侵袭和转移能力的影响

目的 研究肽段连接的近红外荧光量子点(QDs)对人颊鳞癌BcaCD885细胞的生长、侵袭、黏附和趋化运动能力的影响.方法:1)用表面连接穿膜肽段最大发射波长为800nm的近红外荧光量子点(QD800)标记BcaCD885细胞(BcaCD885/QD800),用流式细胞仪检测QD800对BeaCD885细胞的标记率,用激...     

人颊癌BcaCD885细胞Fas表达水平与移植瘤形成和增殖的关系

目的 :研究Fas表达水平与人颊癌BcaCD885细胞移植瘤形成、增殖及凋亡的关系 ,探讨其相关机制。方法 :用脂质体将真核表达重组质粒pBK -Fas导入人颊癌BcaCD885细胞。转染 72h后 ,收集转染及未转染细胞 ,每组细胞分别接种 10只裸鼠。观察移植瘤形成及增殖状况 ,绘制肿瘤生长曲线。实验结束采集肿瘤标本 ,称重 ,计算肿瘤生长抑制率。同时以RT -PCR检测两组移植瘤细胞FasmRNA表达 ,流式细胞仪检测移植瘤细胞凋亡、增殖和Fas蛋白表达。结果 :Fas转染组移植瘤形成时间平均延长 3 .4d ,各观察点移植瘤体积均小于未转染组 ,二者差异有显著性 (P <0 .0 1)。RT -PCR和流式细胞术检测显示 ,Fas转染上调FasmRNA表达 ,提高Fas蛋白阳性表达率、阳性表达强度和细胞凋亡指数 ,但不影响肿瘤细胞增殖指数。结论 :Fas基因转染抑制移植瘤形成和增殖与提高Fas表达、增加肿瘤细胞凋亡有关。     

人口腔鳞癌细胞系对淋巴靶向葫芦素BE聚乳酸纳米微粒的敏感性研究

目的:探讨人口腔鳞癌细胞系(Tca8113和BcaCD885)对颈淋巴结靶向性葫芦素BE聚乳酸纳米微粒(CuBE- PLA-NP)的敏感性。方法:用四唑盐显色法(MTT法)检测用不同剂量的CuBE-PLA-NP和CuBE在1~8 d内8个时间点对Tca8113和BcaCD885的抗癌活性,计算出2种药物在8个时间点对2种癌细胞的抑癌率和药物的半数抑癌率浓度。结果:CuBE-PLA-NP和CuBE对Tca8113和BcaCD885均有强的杀伤作用,其杀伤效应均呈时间依赖性和剂量依赖性。结论:经改型后的淋巴靶向CuBE-PLA-NP没有降低CuBE成份的抗癌活性,同时,由于CuBE-PLA-NP具有淋巴靶向性,更有利于杀灭口腔癌颈淋巴结转移灶内的癌细胞。