RNA干扰CREB对缓激肽作用的胶质瘤细胞IL-1β分泌的影响

目的探讨转录因子cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)的磷酸化是否介导了缓激肽刺激大鼠C6胶质瘤细胞内白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。方法利用RNA干扰(RNAi)技术,以CREB为靶基因,将体外化学合成的CREB序列特异性双链小干扰RNA(siRNA)和无关序列的siRNA分别与Lipofectamine2000结合后转染细胞,用Western blot分析CREB蛋白的表达水平。利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量技术和放射免疫法分别检测CREB siRNA转染前后,缓激肽诱导C6胶质瘤细胞IL-1βmRNA及细胞培养上清液中IL-1β的表达水平。结果CREB序列特异性siRNA转染细胞72h后,可较强的抑制CREB蛋白的表达,而无关序列的siRNA对CREB蛋白表达水平无明显的抑制作用。RT-PCR和放射免疫法结果均显示CREBsiRNA干预C6细胞后,并未改变缓激肽刺激IL-1β表达的能力。结论化学合成的siRNA可有效抑制C6胶质瘤细胞中CREB的表达,CREB可能未参与缓激肽刺激C6细胞IL-1β表达的信号转导过程。     

长基因间非蛋白编码RNA 00707对骨关节炎软骨细胞损伤及炎症因子分泌的影响

背景：长基因间非蛋白编码RNA(long intergenic non-protein coding RNA,LINC RNA) 00707和miR-423-5p均参与了骨关节炎的发生发展过程，Starbase预测LINC00707和miR-423-5p存在互补序列，但二者是否存在相互作用仍需要进一步研究。目的：考察LINC0070是否通过靶向miR-423-5p影响骨关节炎的软骨细胞损伤及炎症因子分泌。方法：将关节软骨细胞分8组培养：(1)空白对照组不进行任何处理；(2)IL-1β组用含10 ng/mL白细胞介素1β的培养基处理48 h；(3)IL-1β+si-NC组将si-NC转染至细胞中，然后用白细胞介素1β处理48 h；(4)IL-1β+si-LINC00707组将si-LINC00707染至细胞中，然后用白细胞介素1β处理48 h；(5)IL-1β+miR-NC组将miR-NC转染至细胞中，然后用白细胞介素1β处理48 h；(6)IL-1β+miR-423-5p组将miR-423-5p模拟物转染至细胞中，然后用白细胞介素1β处理48 h；(7)IL-1β+si-LINC007...     

Circ_0032131靶向miR-502-5p/TLR4调控IL-1β诱导的软骨细胞损伤北大核心CSCD

目的探讨circ_0032131对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的人软骨细胞增殖、凋亡和炎症的影响及其潜在分子机制。方法使用10 ng/ml的IL-1β诱导人软骨细胞C28/I2,模拟骨关节炎的炎症环境;细胞转染建立基因敲低和过表达细胞模型;qRT-PCR检测circ_0032131、miR-502-5p和TLR4 m RNA的表达,Western blot检测TLR4蛋白表达。采用CCK8实验检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,酶联免疫吸附实验测定白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。双荧光素酶实验验证circ_0032131、miR-502-5p和TLR4基因之间的靶向关系。结果IL-1β诱导人软骨细胞中circ_0032131表达升高,miR-502-5p表达降低。IL-1β诱导人软骨细胞增殖活性降低、凋亡增加和炎症,诱导细胞损伤,而敲低circ_0032131能够减轻IL-1β诱导的人软骨细胞损伤。miR-502-5p是circ_0032131的靶向miRNA,敲低circ_0032131明显上调miR-502-5p的表达。功能补救实验表明,抑制miR-502-5p能够逆转circ_0032131敲低对软骨细胞损伤的保护作用。TLR4是miR-502-5p的下游靶基因,miR-502-5p能够负调控TLR4基因表达。过表达miR-502-5p能够减轻IL-1β诱导的人软骨细胞损伤,而过表达TLR4则能逆转miR-502-5p过表达对软骨细胞的保护作用。结论circ_0032131在IL-1β诱导的人软骨细胞中高表达,敲低circ_0032131可能通过靶向调控miR-502-5p/TLR4表达,减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤。     

Egr-1介导了IL-1β诱导的小鼠软骨细胞凋亡

目的:研究早期生长反应蛋白1(earlygrowthresponseprotein1,Egr-1)在白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞凋亡中的作用。方法:体外分离培养小鼠关节软骨细胞,用IL-1β刺激不同的时间后,用Hoechst33258染色,计算发生核皱缩细胞占全部细胞的比例;采用定量RT-PCR(qRT-PCR)方法检测Egr-1mRNA表达水平;采用Westernblotting方法检测Egr-1及激活型caspase-3蛋白的表达水平;采用LipofectamineRNAiMAX将Egr选择性干扰片段转染软骨细胞,采用qRT-PCR及Westernblotting观察RNA片段的干扰效率。结果:IL-1β刺激体外培养的软骨细胞4h、8h和12h后,分别引起约7%、22%和41%细胞凋亡,同时激活型caspase-3表达上调。IL-1β诱导软骨细胞凋亡的同时,Egr-1mRNA及蛋白质呈时间依赖的表达上调。2个siRNA片段成功干扰Egr-1表达后,细胞12h凋亡率从约40%下降到14%和12%,同时激活型caspase-3的表达被有效抑制。结论:Egr-1介导了IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,可能在骨关节炎的发病过程中发挥重要作用。     

转染survivin反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长和化疗敏感性的影响

目的 研究转染survivin反义mRNA对Jurkat淋巴瘤细胞生长的影响以及转染后淋巴瘤细胞对化疗药物的敏感性。方法 构建survivin反义mRNA真核表达质粒pcDNA3．1-反义（As）survivin;利用脂质体转染法将其转入高表达survivin mRNA T淋巴母细胞淋巴瘤Jurkat细胞系,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫组织化学SP法、Western印迹法检测细胞中survivin表达;用细胞计数、流式细胞术（FCM）检测其细胞生长曲线、细胞凋亡指数,并进行光镜、电镜形态学观察;并对转染pcDNA3．1-Assurvivin前后Jurkat细胞分别加入4-羟基-环磷酰胺（CTX）、甲氨蝶呤（MTX）72h后,常规MTT检测细胞存活率。结果 RT—PCR检测转染pcDNA3．1-Assurvivin后48h、5和6周Jurkat细胞survivin mRNA表达,发现survivin mRNA表达皆低于对照组;转染后survivin蛋白表达也明显降低。转染pcDNA3．1-Assurvivin后Jurkat细胞生长倍增时间（52h）明显延长;用FCM检测细胞凋亡发现,转染pcDNA3．1-Assurvivin后Jurkat细胞凋亡指数[20．2％（48h）]明显高于对照组（转染空质粒和未转染组,2．1％和1．3％）;5和6周为6．2％和6．8％,明显高于未转染细胞（1．3％和1．0％）。光镜、电镜观察见转染细胞出现较多凋亡细胞及一些变性肿胀细胞;MTT检测结果显示Jurkat细胞转染前后,经化疗药物4-羟基-环磷酰胺和甲氨蝶呤作用,转染细胞的抑制率明显大于未转染组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 survivin基因对Jurkat细胞系的生长起着重要的作用,抑制survivin基因表达在T淋巴母细胞淋巴瘤治疗中可能有重要的意义,该基因似可能作为治疗的靶点。     

细胞因子信号传导抑制蛋白-1减轻细胞因子诱导胰岛β细胞促凋亡基因的表达

目的 构建稳定表达细胞因子信号传导抑制蛋白－1（SOCS-1）蛋白的细胞,探讨其在胰岛β细胞凋亡中的保护作用。方法 克隆大鼠SOCS-1基因,构建表达载体pEGFP-C1-SOCS1并转染入大鼠胰岛细胞系RINm5F中,构建稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。分别用细胞因子IL-1β 、TNF-α、IFN-γ 、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激24h,RT-PCR与Western blot检测凋亡相关指标。结果 成功构建了稳定表达SOCS-1蛋白的细胞。用IFN-γ、IL-1β联合IFN-r、IL-1β联合TNF-α及IFN-γ刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞iNOS转录水平显著升高。在用所有细胞因子刺激后,未转染SOCS-1质粒的细胞caspase-3表达及活性均显著升高。 结论 SOCS-1蛋白能减轻多种细胞因子诱导的胰岛β细胞促凋亡基因的表达。     

人白细胞介素1β通过线粒体途径激活caspase-3诱导A375-S2细胞凋亡

目的研究人白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)体外诱导人黑色素瘤A375-S2细胞凋亡的机制。方法通过Hoechst33258荧光染色,观察A375-S2细胞在IL-1β作用下的形态学变化。使用琼脂糖凝胶电泳法检测IL-1β对细胞DNA降解的影响。应用caspase活力测定法检测IL-1β对caspase-3活力的影响。利用Westernblot方法检测IL-1β对caspase-3底物的降解以及对细胞内Bcl-2家族和AIF蛋白表达的调节作用。结果IL-1β(1nmol/L)能够诱导A375-S2细胞凋亡,72h时细胞体变小,细胞核呈现固缩、断裂,并出现因凋亡引起的DNA梯状条带。IL-1β诱导细胞凋亡过程中,caspase-3的活力升高,其两种底物PARP和ICAD均发生降解,线粒体中抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表达减少,促凋亡蛋白Bax的表达增加。凋亡诱导因子AIF蛋白的表达也有所增加。结论IL-1β通过激活caspase-3降解其底物,激活AIF,并上调线粒体内Bax/Bcl-2和Bax/Bcl-xL的表达比例诱导A375-S2细胞凋亡。     

撤除粒-巨噬细胞集落刺激因子对TF-1细胞生长的影响

采用MTT实验测定撤除细胞因子后TF—1细胞的增殖活性，经流式细胞仪、透射电镜观察撤除细胞因子对TF—1细胞凋亡的作用及其形态学变化。采用荧光微孔板读数仪测定调亡过程中Caspase—3活性的改变。结果发现，撤除细胞因子后48h，细胞存活率为正常培养时的48．8％；电镜显示TF—1细胞出现了凋亡典型的变化。细胞凋亡率在撤除因子后24h、48h时分别为21．23％和71．36％，TF—1细胞被阻滞在G0／G1期。细胞内Caspase-3活性在撤除因子后12h、36h时明显升高，荧光度分别为6321和17823。结果表明，撤除因子后可导致TF—1细胞凋亡，Caspase-3活化参与了此凋亡过程。另外通过MTT实验观察到一种新型造血刺激因子粒—巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)／白细胞介素3(IL-3)融合蛋白可维持TF-1细胞生长。     

白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α对脑损伤后胶质细胞c-fos mRNA表达的影响

本研究用分子杂交技术观察了白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α对脑损伤后及培养的胶质细胞c-fosmRNA表达的影响。结果发现：脑损伤后损伤周围组织c-fosmRNA表达圣动态变化：1h后增加170％．12h后增加30％，24h后增加130％。发现白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α能显著增加脑损伤后12h及24hc-fosmRNA的表达；当培养的胶质细胞中加入此二者后1hc-fosmRNA表达明显增加，12h后有所下降。又发现同时加入此二者时，c-fosRNA表达增加更加显著。以上结果提示；白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α能影响脑损伤后胶质细胞c－fosmRNA的表达，它们对胶质细胞的作用可能与c-fos基因有关。     

下调TPD52基因表达通过Wnt信号通路对子宫肌瘤细胞活力、凋亡及TNF-α和IL-6表达的影响

目的:探讨下调肿瘤蛋白D52(TPD52)基因表达通过Wnt信号通路对子宫肌瘤细胞活力、凋亡及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法:将针对TPD52的特异性si RNA(si-TPD52)及其阴性对照转染原代培养的子宫肌瘤细胞,并加入Dickkopf-1(DKK1)作为Wnt信号通路抑制剂,转染48 h后,用Western blot检测TPD52及Wnt信号通路关键分子β-catenin和相关靶蛋白cyclin D1和survivin的蛋白表达; MTT及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率的变化; RT-qPCR检测TNF-α和IL-6的m RNA表达。结果:TPD52在转染si-TPD52的子宫肌瘤细胞的表达显著低于空白对照组和阴性对照组(P 0. 05);与阴性对照组比较,si-TPD52组细胞活力明显受到抑制,凋亡率增加,TNF-α的m RNA表达降低,IL-6的m RNA表达升高,β-catenin、cyclin D1和survivin的蛋白表达降低(P 0. 05);加入DKK1后si-TPD52对细胞活力和凋亡的影响更明显。结论:下调TPD52基因表达可通过Wnt信号通路抑制子宫肌瘤细胞生长和诱导凋亡,同时下调TNF-α和上调IL-6表达。     

新型细胞因子IL-24真核表达载体的构建、表达及其对肿瘤的抑制作用

目的：构建IL-24真核表达质粒，并研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法：采用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-C1-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体外转染HIC细胞，再经激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察其表达，用MTT法检测HIC细胞的体外增殖能力，用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。小鼠皮下接种转染IL-24真核表达质粒或空载的B16细胞观察其体内致瘤性的变化。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用。结果：pEGF-C1-IL-24转染HIC细胞后，LSCM可观察到其表达。IL-24基因转染的HIC细胞体外增殖能力明显受到抑制．G2-M期细胞比例增高，细胞被阻滞在G2-M期。转染IL-24的B16细胞体外致瘤率降低。与对照组相比．IL-24基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制（P〈0.05）。结论：IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。瘤内注射pEGFP-C1-IL-24可抑制肿瘤生长，具有明显的抗肿瘤作用。     

广西壮族人群白细胞介素-1α与β的基因多态性分布

目的：了解白细胞介素-1α（IL-1α）基因-889位点和IL-1β基因-511位点多态性在广西壮族健康人群中的分布。方法：采用PCR-RFLP方法,对上述两位点进行了检测,计算其基因型和等位基因频率。结果：II-1α（-889）和IL-1β（-511）等位基因C、T频率在壮族正常人群中分别为93．9％、6．1％和53．4％、46．6％;与奥地利、非洲黑人、非洲白人健康人群相比,IL-1α（-889）基因型分布及等位基因频率均存在高度显著性差异;与奥地利、非洲白人健康人群相比,IL-1β（-511）基因型分布及等位基因频率存在显著性差异。结论：广西壮族健康人群IL-1α（-889）基因多态性分布与奥地利、非洲黑人、非洲白人不同;IL-1β（-511）基因多态性分布与奥地利、非洲白人不同。     

创伤性脑损伤后白细胞介素1β在星形胶质细胞中的表达

目的:探究创伤性脑损伤后白细胞介素1β(IL-1β)在星形胶质细胞中的表达。方法:采用免疫印迹半定量检测创伤性脑损伤后IL-1β、星形胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,免疫荧光双重染色检测IL-1β在星形胶质细胞中的定位表达。结果:IL-1β表达在损伤后8 h就有增高,1 d时最高,4 d时有所降低,且1 d和4 d时可定位表达在星形胶质细胞中。结论:损伤后增高的IL-1β表达可能对促进星形胶质细胞的活化具有重要的调节作用。     

β-榄香烯通过抑制HIF-1α表达促进人肺癌细胞凋亡

目的探讨β-榄香烯是否通过抑制肺癌细胞中HIF-1α的高表达促进肺癌细胞的凋亡及相关机制。方法常规培养人肺癌A549细胞,实验分为对照组、乏氧组、β-榄香烯组、不同浓度β-榄香烯/乏氧处理组;通过转染含有HIF-1α基因的质粒过表达HIF-1α基因。应用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒及流式细胞仪、TUNEL检测细胞凋亡。并采用免疫荧光检测HIF-1α蛋白的活化、Westen blot方法检测Bax、caspase-3及Bclx L蛋白表达及转染效率。结果β-榄香烯能够抑制肺癌A549细胞的增殖力,呈时间和浓度依赖性,能够诱导乏氧状态下的肺癌A549细胞凋亡。β-榄香烯可通过上调A549细胞的Bax、caspase-3蛋白表达,降低Bcl-xL表达来诱导乏氧状态下肺癌A549的凋亡。此外,β-榄香烯可有效降低乏氧状态下HIF-1α蛋白的高表达。通过转染过表达HIF-1α基因,大大降低了β-榄香烯的诱导凋亡作用。结论β-榄香烯可以上调乏氧状态下A549细胞凋亡,可能与抑制HIF-1α的高表达相关。     

玻璃酸钠对膝骨关节炎的治疗作用及其与相关细胞因子表达的关系

目的 观察玻璃酸钠治疗膝骨关节炎的临床疗效及对关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响.方法 30例健康人群为对照组,30例轻、中度膝骨关节炎患者观察组;观察组患者给予膝关节腔内注射玻璃酸钠2 mL,每周一次,5周为一个疗程.评估观察组一个疗程后临床症状的改善及治疗前后两组关节滑液中细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α水平变化.结果 一个疗程后,观察组患者膝关节在疼痛及关节功能方面改善,与治疗前相比P＜0.01;临床总有效率为90％;观察组治疗前关节滑液中细胞因子水平为IL-1β[(85.63 ±18.94) ng/L]、IL-6[(234.06 ±46.11) pg/mL]、TNF-α[(209.87±48.72) ng/mL]与对照组IL-1β[(21.13±7.54)ng/L]、IL-6[(45.78±17.09) pg/mL]、TNF-α[(59.87±16.01)ng/mL]相比浓度明显升高(P＜0.01);一个疗程后与治疗前相比三种细胞因子浓度均明显降低[分别为(44.69±15.68) ng/L,(92.18±34.76) pg/mL,(118.63±40.97) ng/mL,P＜0.01].结论 玻璃酸钠治疗膝骨关节炎短期临床疗效确切,其抑制了细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α的表达,降低了膝关节软骨的损害.     

IL-1β和IL-6对椎间盘髓核细胞NGF表达的影响

目的:研究白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6对体外培养的椎间盘髓核细胞神经生长因子(NGF)表达的影响。方法:分离培养人腰椎间盘髓核细胞,经过7d的预培养后,实验组分别加IL-1β(10μg/L,50μg/L)和IL-6(10μg/L,50μg/L)进行刺激,对照组加0.3%FBS,48h后应用免疫组织化学法、RT-PCR和Western blotting检测NGF的表达。结果:培养的椎间盘髓核细胞经鉴定为类软骨细胞。对照组髓核细胞很少表现NGF免疫活性,IL-1β和IL-6刺激组明显上调了髓核细胞NGF mRNA及蛋白质的表达,在相同的浓度下IL-6的上调作用更明显。结论:正常情况下NGF在椎间盘髓核细胞呈低表达状态,IL-1β和IL-6能促进髓核细胞NGF的表达,相同浓度下IL-6刺激髓核细胞分泌NGF的作用更强。     

TNF-α及IL-1β促进肝癌细胞系SMMC-7721乙酰肝素酶表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)对人肝癌细胞系乙酰肝素酶(HPA)表达的影响。方法将肝癌细胞系SMMC-7721分为对照组和试验组。对照组细胞常规培养,试验组细胞分别施加TNF-α、IL-1β干预,设浓度梯度和时间梯度。RT-PCR半定量法测定细胞HPAmRNA含量,Western blot法测定细胞胞质HPA蛋白含量。结果不同浓度的TNF-α和IL-1β作用不同时间后,SMMC-7721细胞HPAmRNA表达较对照组逐渐增高,且在TNF-α浓度为104~106U/L、IL-1β浓度为0.5~5.0μg/L范围内存在浓度依赖性(P<0.05),无时间依赖性。不同浓度的TNF-α、IL-1β作用不同时间对SMMC-7721细胞胞质HPA蛋白表达亦有促进作用,其随药物浓度变化的趋势与HPAmRNA的表达结果一致,且该促进作用存在时间性差异(P<0.05)。结论TNF-α及IL-1β能够在核酸和蛋白水平上促进肝癌细胞HPA的表达。     

炎性因子IL-1β对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响

目的:本研究应用原代培养星形胶质细胞,探讨炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)对星形胶质细胞抗氧化应激能力的影响。方法:在原代星形胶质细胞培养中分别加入1 ng/ml IL-1β,流式细胞仪检测不同作用时间(0、24、48、72 h)细胞线粒体膜电位改变,激光共聚焦显微镜观察活性氧(ROS)生成,分光光度法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)含量,RT-PCR、Western Blot检测星形胶质细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的表达变化。结果:1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24~72 h,细胞线粒体膜电位无明显改变,细胞未出现明显损伤。IL-1β孵育24 h,细胞内ROS生成减少,GSH生成增加;48 h细胞内ROS生成增加,GSH较24 h组减低(P0.05);72 h,原代培养星形胶质细胞内ROS生成明显增加,GSH较0 h组降低(P0.05)。1 ng/ml IL-1β处理原代培养星形胶质细胞24 h,细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平较0 h组升高(P0.05);但仅是一过性反应,IL-1β孵育72 h后,原代培养星形胶质细胞内GSH-Px mRNA及蛋白水平均较0 h组降低(P0.05)。结论:持续炎性因子刺激下,星形胶质细胞抗氧化应激能力呈现动态改变,并且细胞内抗氧化物参与此变化过程。     

IL—10抑制人肾系膜细胞环氧化酶—2及其介导的前列腺素E2的释放

目的观察白细胞介素-10(IL-10)对IL-1β诱导的人系膜细胞(HMC)前列腺素E2(PGE2)释放及环氧化酶-2(COX-2)基因和蛋白表达的影响.方法应用放射免疫测定法检测HMC培养上清中PGE2,应用RT-PCR和westernblot检测COX-2mRNA和蛋白水平.结果①IL-1β显著上调PGE2释放及COX-2基因和蛋白的表达(P均＜0.01);②IL-10对基础状态下PGE2释放及COX-2基因和蛋白表达无明显影响(P＞0.05);③IL-10可呈剂量依赖性地下调IL-1β诱导的PGE2释放及COX-2mRNA和蛋白表达(P＜0.01).结论IL-10抑制IL-1β诱导的HMCPGE2释放及COX-2表达,提示IL-10对HMC具有多方面抗炎作用.     

TCR Vβ7.1基因对IL-12基因修饰乳腺癌细胞的识别和杀伤作用

目的：探讨ICR Vβ7．1基因与IL-12基因在乳腺癌细胞株MCF—7／S识别和杀伤中的效应机制和相互作用。方法：用脂质分别包裹TCR Vβ7．1基因和IL-12基因并转染健康人PBMC和乳腺癌细胞株MCF—7／S，流式细胞仪检测TCR Vβ7．1基因表达，ELISA法检测IL-l2基因在MCF—7／S中的表达及淋巴细胞-肿瘤细胞共培养上清中IFN—γ和IL-4水平，改良MTT法检测TCR Vβ7．1基因修饰PBMC对IL-12基因转染前后MCF—7／S的杀伤活性。结果：TCR Vβ7．1基因和IL-l2基因在PBMC和乳腺癌细胞MCF—7／S中稳定表达；ELISA法检测提示IL-12基因修饰前后肿瘤细胞。淋巴细胞共培养上清中IFN—γ和IL-4水平有显著性差异；细胞毒活性检测表明IL-12基因修饰可明显增强TCR Vβ7．1基因对乳腺癌细胞株MCF-7／S的杀伤作用。结论：TCR Vβ7．1基因修饰CTL及IL-l2基因修饰乳腺癌细胞株共培养，提高了CTL的杀伤作用，说明TCR识别基因与杀伤基因在抗肿瘤效应中具有协同作用。