抗人精子外套抗原单抗的纯化及相应抗原的提纯和鉴定

目的：研究人类精浆中一类特异性的抗原成份（精子外套抗原sperm－coatingantigens，SCA）。方法：本实验用已制备得的一株抗人精浆来源的精子外套抗原单克隆杂交瘤细胞株D1．在小鼠腹腔增殖生产大量腹水单克隆抗体，通过快速蛋白液相层析仪（FPLC）系统的羟基磷灰石柱，一次性从小鼠腹水中纯化此抗体，并制备免疫亲和层析柱，从精浆中分离到相应的抗原成份。结果：经鉴定该抗原成份分子量为20kD，来源于精囊腺，具有器官特异性。结论：该SCA的提纯，为抗精子避孕疫苗的研制提供了基础实验材料，并且有助于进一步研究其在生殖活动和免疫不孕病因中的作用。     

抗人精子单克隆抗体的制备及特性研究

用杂交瘤技术制备了两株分泌抗人精子单克隆抗体的细胞株，经酶联免疫吸附试验证明两株细胞株所分泌的单克隆抗体均能与人精子产生特异反应，并有明显的精子凝集和制动作用     

抗人精子外套抗原单抗的纯化及相应抗原的提纯和鉴定

目的：研究人类精浆中一类特异性的抗原成份（精子外套抗原ｓｐｅｒｍ－ｃｏａｔｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎｓ，ＳＣＡ）。方法：本实验用已制备得的一株抗人精浆来源的精子外套抗原单克隆杂交瘤细胞株Ｄ１，在小鼠腹腔增殖生产大量腹水单克隆抗体，通过快速蛋白液相层析仪（ＦＰＬＣ）系统的羟基磷灰石柱，一次性从小鼠腹水中纯化此抗体。并制备免疫亲和层析柱，从精浆中分离到相应的抗原成份。结果：经鉴定该抗原成份分子量为２０ｋＤ     

抗人精子单克隆抗体的制备和特性鉴定

用杂交瘤技术制备了12株稳定地分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用间接免疫荧光法观察这些抗体分别结合到精子不同部位,有7个抗体使精子产生头—头凝集或尾—尾凝集,有4个抗体使精子制动,只有1个抗体与淋巴细胞有交叉反应。测定了10个单克隆抗体的免疫球蛋白亚类,7个属于IgG,13个属于IgM。     

抗人成骨肉瘤单克隆抗体的制备及其特性

目的：制备抗人成骨肉瘤单克隆抗体并探讨其特性。方法：用人骨肉瘤细胞系OS-732免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞系NS-1融合,经酶联免疫吸附试验及补体依赖细胞毒实验筛选,获3株分泌抗人成骨肉瘤单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞。将手术切取经病理证实的骨肉瘤、软骨肉瘤、骨巨细胞瘤、滑膜肉瘤、平滑肌肉瘤、非骨化性纤维瘤、骨软骨瘤和正常肌、骨组织冰冻切片后,应用间接免疫荧光抗体实验检测。 结果：3株McAb均与骨肉瘤组织呈阳性反应,其中二株亦与软骨肉瘤呈阳性反应,与正常组织及其他肿瘤组织呈阴性反应。3株McAb分别与骨肉瘤相关抗原不同的抗原决定簇结合。 结论：抗人成骨肉瘤单克隆抗体具有较高的特异性。     

抗人γ—精浆蛋白VH单域抗体基因的构建表达及空间构象分析

目的 扩增出抗人γ－精浆蛋白（γ－Sm）单克隆抗体（mAb）的重链可变区（VH）单域抗体基因,并进行原核表达及空间构象分析。方法 从分泌抗γ－Sm mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA,经RT－PCR扩增VH单域抗体基因,将其克隆到融合蛋白表达载体pGEX－4T－1中进行表达,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果 VH单域抗体基因全长363bp,含起始码和终止码。将其克隆到pGEX－4T－1内,转化大肠杆菌DH5α,获得高效表达,表达量占全菌总蛋白质的38％,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后,用谷胱甘肽（GST）亲和色谱纯化,再经凝血酶水解获得抗γ－SmVH单域抗体。竞争结合抑制实验证明,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论 构建成功抗γ－Sm的VH单域抗体,为进一步临床应用奠定基础。     

人精浆中γ－精浆蛋白的分离纯化研究

通过离心，透析分离正常人精浆，再经二次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析，成功的纯化了γ－精浆蛋白。等电聚焦电冰法测其等电点约为ｐＩ６．５，凝胶过滤层析法测其分子量约为２８０００。免疫电泳结果证明其纯度较高，并与人血清、唾液、初乳等无交叉抗原。在法医物征实践及临床诊断方面均具有重要意义。     

抗乙型肝炎病毒免疫核糖核酸的制备及方法学研究

病毒性肝炎在临床上较为常见。但是在这几型肝炎中尤以乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）发病率最高，在体内存留时间过长，传染性强，治愈率低而倍受临床医生的重视。调查证实在我国ＨＢＶ的携带者约占正常人群的１２．５％左右。随着社会的发展和科技的进步，乙肝疫苗的出现对于早...     

重组人巨噬细胞集落刺激因子受体胞外区蛋白的纯化及单抗的制备

目的 重组人巨噬细胞集落刺激因子受体（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ,Ｍ－ＣＳＦＲ）胞外区蛋白的分离纯化及单抗的制备。方法 用ｐＥＴ２８（＋）ａ构建的ｃ－ｆｍｓ重组体转化大肠杆菌,ＩＰＴＧ诱导其表达,采用亲和层析进行复性纯化目的蛋白,利用细胞融合技术制备并筛选Ｍ－ＣＳＦＲ细胞区蛋白的单克隆抗体。结果 经转化的大肠杆菌ＩＰＴＧ诱导后可大量表     

抗蝮蛇毒磷酸二酯酶单克隆抗体的制备及鉴定

从蝮蛇毒中提取磷酸二酯酶,用此酶免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Fo融合,以间接ELISA检测杂交瘤细胞培养上清液和小鼠腹水中的特异性抗体,其效价分别为1∶128和1∶51 200.抗原阻断试验结果表明,此抗体对蛇毒磷酸二酯酶具有特异性.该杂交瘤细胞株定为G_8,该株单抗属鼠IgG_(2a)亚型,经体外持续培养6个月,其分泌抗体性能稳定.     

抗人TPO单克隆抗体的制备

目的：制备抗人血小板生成素（hTPO）单克隆抗体，用于建立ELISA方法和检测TPO的表达。方法：用基因重组的hTPO免疫Balb／c小鼠，常规法做细胞融合，用ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株。结果：获得一杂交瘤细胞株（46-6），其免疫球蛋白亚类为IgG1经ELISA和免疫印迹技术证明，此单抗能特异识别TPO。结论：46－6单克隆抗体（McAb）特异性强。用其建立的夹心ELISA检测TPO的方法线性好，灵敏度可达50ng／L。     

B细胞系特异性单克隆抗体ZCH－4－2E8的制备鉴定及其初步应用

本文报告一种识别Ｂ细胞系白血病相关抗原的鼠单克隆抗体ＺＣＨ－４２Ｅ８（ＩｇＧ１），免疫印迹试验示其所识别的抗原分子量为２４５ｋｄ。经多种细胞系、正常外周血细胞成分、骨髓单个核细胞、胚胎肝、脾、胸腺和１３８例急、慢性白血病细胞的鉴定结果表明，２Ｅ８为Ｂ细胞系特异性单抗，其反应谱与ＣＤ１９类似，但其尚能识别早至１８周龄的胚胎脾（Ｂ）细胞，阳性率为３１．９％（ＣＤ１９为０％）。作者认为：２Ｅ８是一种能用于分化早期Ｂ细胞系急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的诊断和急性未分化型白血病（ＡＵＬ）鉴别诊断的Ｂ细胞系特异性单抗。     

抗人tPA单克隆抗体的制备

目的：制备抗ｔＰＡ单克隆抗体，用于建立ＥＬＩＳＡ方法和研究ｔＰＡ与肿瘤转移的关系。方法：用基因重组的组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔＰＡ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，按常规法作细胞融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选出阳性反应的杂交瘤细胞克隆。结果：获得一株杂交瘤细胞株（２Ｂ７）；其免疫球蛋白亚类为ＩｇＧ１；经ＥＬＩＳＡ法和免疫印迹技术证明，此单抗能特异性识别ｔＰＡ。结论：用２Ｂ７ＭｃＡｂ特异性强，用其建立的夹心ＥＬＩＳＡ检测ｔＰＡ的方法线性较好，灵敏度可达１ｎｇ／ｍｌ。２Ｂ７ＭｃＡｂ可望用于ｔＰＡ与肿瘤转移关系及导向溶栓的研究。     

识别人脊神经感觉特异蛋白单克隆抗体的制备及临床应用

观察快速免疫染色法鉴别人周围神经束性质的临床应用可行性。从新鲜人尸脊神经后根中分离、提取了脊神经节感觉神经元特异蛋白，将该蛋白作为抗原以杂交瘤技术制备了识别感觉神经元特异蛋白的单克隆抗体。用食用亮蓝标记该单抗后，直接为临床６例周围神经损伤患者术中染色。经３０分钟能清晰分辨出感觉及运动束，取得了预期效果。采用此技术染色步骤简单，能在肉眼和手术显微镜下观察，对周围神经断伤能够快速、准确、特异性的鉴别出功能神经束，提高了手术效果     

周围神经43kD蛋白单克隆抗体的制备

目的：制备周围神经43kD蛋白单克隆抗体。方法：通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶系统,从周围神经组织中分离回收43kD蛋白作为抗原,免疫BALB／C小鼠,通过杂交瘤技术,点膜印迹法检测,获得相应的分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并以Western blot方法检测抗体的特异性。结果：阳性克隆可持续稳定分泌抗43kD蛋白抗体,Western Blot显示在43kD处出现特异的阳性反应条带。结论：建立了分泌抗43kD蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,获得了43kD蛋白单克隆抗体。     

PREPARATION AND CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODY AGAINST HUMAN TELOME RASE REVERSE TRANSCRIPTASE

INTRODUCTIONTelomerasemaycontributetocellreplicationbymaintainingthelengthofcellulartelomeres.Normaltelomeraseactivityisrequiredtomaintainprolifera-tionofgermlineandstemcells,lackingofwhichisimportanttothesenescenceandagingofmostsomat-iccells.Reactivationoftelomeraseisessentialforcelltransformation.Telomeraseactivityhasbeende-tectedinmosthumancancers,whileinhibitionoftelomeraseactivityincancercellsleadstocancersuppression(1,2).Consequentlytelomerasemaybeanewdiagnosticmarkeroftumorsandtarg…     

抑制夏氏疟原虫无性体及蚊媒传播的单克隆抗体

以夏氏疟原虫(Plasmodium chabaudi chabaudi)AS株配子体免疫小鼠后,制备了两种单克隆抗体,McAb5E(5E)及McAb5F(5F);5E既有阻断疟疾传播的活性又有对抗红细胞内期无性体的保护作用。通过间接免疫荧光试验,5E可与各无性阶段、配子体及小配子起反应,而5F则仅与环状体、配子体及小配子起作用。这种抗无性体及阻断传播的活性是由于无性体与配子体有共同的表位,还是由于交叉反应所致,尚待进一步研究。     

甲状腺微粒体过氧化物酶及其单克隆抗体的制备

本工作共分３部分：①取健康人甲状腺组织，经匀浆、超声波处理及不同速度离心去除其中细胞碎片，胞核和线粒体，再经超速离心沉淀和即获得粗提的甲状腺微粒体过氧化物酶（ＴＰＯ）。②以此粗提ＴＰＯ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞杂交，获得分泌抗ＴＰＯ单抗的杂交瘤细胞系多株，经组化染色证明这些单抗能与人甲状腺微粒体结合。②用这些单抗与活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ偶联，将粗提ＴＰＯ作亲和层析，获