血小板激活因子对内皮细胞形态参数影响的计算机定量分析

利用具有大容量、高运算速度和高分辨率的计算机图像分析系统建立定量分析内皮细胞(endothelial cell,EC)面积、形状因子、细胞间距及细胞间空隙面积占细胞单层面积百分比的软件,并分析血小板激活因子(platelet activating factor,PAF)对EC形态参数的影响。结果表明,对照组EC相互连接紧密,细胞间隙较窄。PAF作用60min,细胞明显回缩,膜表面有很多粗细不等的突起,细胞间隙增大。计算机定量分析表明,PAF(10~-?mol/L)作用10min,就可使细胞间距和细胞间空隙面积占细胞单层面积百分比增大,30min细胞面积减小,形状因子增大,证明细胞发生了回缩,这可能是PAF增加血管壁通透性的重要机制。计算机图像分析有助于迅速、准确地定量测定EC形态变化,为研究EC在血管屏障中的作用提供了新方法。     

微环境对体外间充质干细胞向心肌样细胞分化的作用

目的研究心肌组织中何种细胞对骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞定向分化起决定性作用。方法分离培养骨髓MSCs、心肌细胞(CM)和内皮细胞(EC)。MSCs经BrdU标记后与CM、EC分别共培养和单独培养,通过形态学、免疫细胞化学和双重免疫细胞化学鉴定。结果分离培养的MSCs、CM和EC纯度高于95%。标记MSCs与CM共培养后,细胞具有心肌细胞样形态。4周时,有44%的细胞BrdU与肌动蛋白(sarcomeric actin)或连接蛋白-43(connexin-43)双重免疫细胞化学染色阳性。与EC共培养以及单独培养时,MSCs形态变化不明显,无双染阳性细胞出现。结论CM对骨髓MSCs向心肌样细胞的定向分化具有重要作用。     

热休克蛋白70在人食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达与定位变化

目的 探讨姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用,热休克蛋白70(HSP70)在肿瘤细胞凋亡过程中在核基质上的变化及其与凋亡调控相关蛋白的关系.方法 用细胞计数和流式细胞仪检测姜黄素对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,以光学显微镜和透射电镜观察姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡前后的细胞结构变化,琼脂糖凝胶电泳观察人食管癌EC9706细胞凋亡前后的DNA结构变化.双向凝胶电泳和质谱鉴定分析HSP70在核基质中的存在与变化;并以Western blotting进行确证;激光扫描共焦显微镜观察HSP70在EC9706细胞凋亡过程中的定位及其与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系.结果 姜黄素能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖并诱导人食管癌EC9706细胞凋亡,双向凝胶电泳、质谱鉴定和结果 发现并证实,HSP70在姜黄素处理前后的EC9706细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.激光扫描共焦显微镜观察结果 显示,HSP70在EC9706细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.结论 姜黄素对人食管癌EC9706细胞具有显著的凋亡诱导作用;HSP70作为一种新发现的核基质蛋白,在姜黄素诱导人食管癌EC9706凋亡过程中的表达与分布发生了显著变化.HSP70与凋亡相关基因的关系对EC9706细胞凋亡具有重要影响.     

交联抗DR5单抗YM366EC诱导的Jurkat细胞凋亡机制探讨

为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制。观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化。结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bel-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加。结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9。     

交联抗DR5单抗YM366EO诱导的Jurkat细胞凋亡机制探讨

为探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号转导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制.观察了交联366EC对Jurkat细胞的形态变化,细胞增殖和细胞凋亡率影响.进一步用Western blot法检测YM366EC作用于Jurkat细胞不同时间Bcl-2、Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9的表达变化.结果发现DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,形成凋亡小体,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡.Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的Caspase 3和Caspase 9蛋白的表达增加.结果表明交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、Caspase 3、Caspase 9.     

大肠杆菌DNA诱导全身性炎症反应综合征的作用机制研究

目的: 探讨细菌DNA是否参与全身性炎症反应综合征(SIRS)的发生及其可能机制。方法: 碱裂解法抽提纯化大肠杆菌DNA(EC DNA); 观察EC DNA攻击小鼠的死亡率及大鼠血清TNF-α、IL-6的变化情况; 体外培养小鼠单核细胞株ANA-1细胞, 采用不同终浓度的EC DNA、LPS刺激ANA-1细胞,测定细胞培养上清中TNF-α、IL-6的释放情况, 并检测人单核细胞株THP-1细胞表面Toll样受体9(TLR9)和Toll样受体4(TLR4)表达以及核转录因子κB(NFκB)的活化情况。结果: EC DNA可导致小鼠死亡, 并具有明显的量效关系, 小牛胸腺DNA和DNA酶消化的EC DNA则不能引起小鼠死亡; EC DNA与LPS均可导致大鼠血清TNF-α、IL-6水平升高,变化趋势相似, 但EC DNA所致的TNF-α峰值早于LPS组1 h出现。在体外实验中, 不同浓度的EC DNA、LPS可诱导ANA-1细胞大量释放TNF-α、IL-6, 以及THP-1细胞表面TLR9和TLR4的高表达, 但EC DNA诱导NFκB活化的能力远小于LPS。结论: EC DNA可以和LPS一起参与SIRS的发生, 可能机制与诱导单核细胞TNF-α、IL-6的释放有关, 但EC DNA诱导细胞因子释放的信号转导过程中可能尚有其它途径的存在。     

应用抗体-胶体金技术对鹅肠嗜铬细胞超微结构的研究

本文应用抗体-胶体金技术,观察了鹅肠道嗜铬(EC)细胞的超微结构。EC细胞以含多形分泌颗粒为特征,颗粒电子密度较高,包膜紧裹粒芯,许多颗粒具有一圆形“空洞”。十二指肠的EC细胞可见分泌颗粒大小不同的两类。盲肠的EC细胞分泌颗粒直径大于十二指肠,而且在细胞的基部多见形成“腿-足”样胞质突起。     

血浆非特异性免疫抑制蛋白对大鼠淋巴细胞粘附主动脉内皮细胞的影响

淋巴细胞粘附于血管内皮细胞(EC)是它们从血液迁移进入血管外组织的关键之一。我们利用主动脉内膜制备(Hautchen)技术和免疫荧光标记法初步研究了猪血浆非特异性免疫抑制蛋白(PNIP)对淋巴细胞粘附主动脉EC的影响,结果表明,PNIP不仅能抑制淋巴细胞的丝裂原反应而且也能够显著地抑制血液、胸腺或肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞粘附主动脉EC。研究还发现,粘附细胞中膜表面免疫球蛋白IgG阳性(SmIgG~ )B细胞所占比例明显下降。这些结果提示血浆免疫抑制蛋白能够抑制淋巴细胞对EC的粘附,从而可能影响炎症,动脉粥样硬化和血栓的形成。     

原发性卵巢透明细胞癌30例临床病理分析

目的探讨原发性卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)的临床病理学特点。方法回顾性分析2010年2月～2018年10月安徽省立医院经妇科手术切除的30例OCCC临床病理资料。根据病理形态是否源于内膜样囊肿(endometrioid cyst,EC)分成EC组和非EC组,并对两组及早期和进展期OCCC临床病理特征进行比较分析,并复习相关文献。结果EC组腹水及腹/盆腔转移的发生率比非EC组显著减少(P=0. 003,P=0. 008)。此外,EC组FIGO分期为早期的多于非EC组(P=0. 066)。两组在年龄、单双侧、最大径、CA125、淋巴结转移及存活方面差异无显著性(P 0. 05)。早期OCCC患者腹水、腹/盆腔转移及淋巴结转移发生率明显少于进展期OCCC(P 0. 05),与其他临床病理特征无关。结论早期OCCC预后较好。与非EC组相比,起源于EC组的患者预后相对较好。     

014 TNF-α对内皮细胞粘附分子NFκB表达的影响

目的: 目前认为动脉粥样硬化(AS)是一种炎症性疾病, 其致病因素多种, 细胞因子生长因子等在其发病机制中起着重要的作用. 因而通过TNF-α作用于内皮细胞(EC)后, 观察单核细胞对其粘附的变化, 粘附分子表达以及对调控粘附分子基因的转录因子(NFκB)变化, 以探讨TNF-α在AS发生早期细胞行为中的作用. 方法: 人脐静脉内皮细胞和γTNF-α(5 ng/ml)作用4 h后, 用细胞计数法测U937细胞以EC粘附率, 用ELISA法检测EC膜上粘附分子VCAM-1、 ICAM-1、 P-selectin的表达, 以及采用细胞免疫化学方法测定NFκB核转位百分率. 结果: U937细胞对γTNF-α作用的EC粘附明显增高, 其粘附率为41.30%±1.16%(n=7), 对照组为4.50±1.01%(n=7)(P<0.001), γTNF-α能明显上调EC膜上VCAM-1, ICAM-1及P-selectin表达, 并能明显增加NFκB的核转位其阳性细胞为99.42%±0.84%而对照组为28.93%±14.06%(P<0.001), 当采用银杏提取液事先处理EC而后再用γTNF-α作用, 能抑制U937对EC的粘附百分率, 且有量效依赖关系. 结论: γTNF-α明显促进NFκB核转位, 增强了对粘附分子基因调控, 明显增加EC膜上粘附分子表达粘附分子是细胞粘附分子基础, 增加了单核细胞等对EC粘附, 这为单核细胞迁移到内膜下成为巨噬泡沫细胞提供了前提, 而银杏提取液有明显抑制单核细胞对TNF-α处理的EC粘附作用, 为AS的发病机理和防治提供线索.     

食管癌细胞放射诱导前后化疗敏感性变化及相关机制研究

目的： 探讨食管癌细胞放射诱导前后对化疗药物敏感性及耐药基因ERCC1表达的变化，分析ERCC1的表达与化疗敏感性变化的关系。方法: 采用［60Co］-γ射线反复多次照射食管癌细胞株EC9706，建立放射抗拒食管癌细胞株EC9706-R。MTT法测定EC9706和EC9706-R对顺铂的IC₅₀,计算耐药指数。免疫细胞化学(SP)和RT-PCR法测定ERCC1蛋白和mRNA在2种细胞中的表达。结果: EC9706细胞对顺铂的IC50是(1.480±0.012) mg/L，EC9706-R细胞的IC₅₀是1.836±0.008 mg/L(P<0.05)，耐药指数为：1.240±0.015；ERCC1蛋白在2种细胞中染色强度指数分别为2.838±0.055和2.898±0.039，两者无统计学差异(P>0.05)。ERCC1在这2种细胞中mRNA表达的特异性基因条带与β-actin基因条带的密度比值分别为：1.168±0.068和1.143±0.089（P>0.05）。结论: 诱导建立的食管癌放射抗拒细胞较亲本细胞的化疗敏感性下降,而耐药基因ERCC1的表达水平不随细胞对放化疗敏感性的变化而变化。     

抑制Hedgehog信号通路对食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养食管癌EC9706细胞,以10、50、100μmol/Lol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对EC9706细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对EC9706细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(86.11±2.61)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(77.81±3.13)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(70.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(16.22±0.21)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(25.87±0.24)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(32.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.76±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.58±0.06)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(0.40±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.93±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.48±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.75±0.11)%降低(P0.05)。结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制食管癌EC9706细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

CNTN-1促进人食管癌EC9706细胞侵袭和迁移

目的探讨接触蛋白-1(CNTN-1)在食管癌转移中的作用。方法 q PCR和Western blot检测食管癌细胞系EC9706中CNTN-1的表达;RNA干扰和CNTN-1过表达质粒转染调整EC9706细胞CNTN-1的表达,并将细胞分为空白对照组、scrambled siRNA组、CNTN-1 siRNA组、pcDNA3.1-vector组和pcDNA3.1-CNTN-1组;Brd U和Transwell实验分别检测EC9706细胞增殖、侵袭和迁移能力;qPCR和Western blot检测基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达。结果 CNTN-1在食管癌细胞EC9706中mRNA和蛋白水平较与正常食管上皮细胞显著上调(P0.05);转染CNTN-1siRNA后,EC9706细胞CNTN-1表达水平显著降低(P0.05),细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降(P0.05),同时细胞中侵袭转移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下降(P0.05);CNTN-1过表达质粒转染细胞后,EC9706细胞内CNTN-1表达水平上调(P0.05),细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高,同时MMP-2和MMP-9表达明显升高(P0.05)。结论 CNTN-1可能通过调节MMP-2和MMP-9表达促进食管癌细胞的侵袭转移。     

粘附蛋白在环氧交联牛心包材料体外内皮化中作用的实验研究

为研究生物材料体外内皮化的最佳条件 ,我们作了血管内皮细胞 (EC)在PC牛心包材料上生长特性的研究。方法为环氧交联 (PC)牛心包材料 ,漂洗后用 3种不同的粘附蛋白预衣被 ,种植犬的血管EC ,未衣被组作为对照。结果表明 :Fibronectin(FN)及Laminin(La)组 ,经 710d培养 ,片上EC形成单层 ,而未衣被组及CollagenI(CL I)组PC心包片上无细胞生长。结论 :(1)PC牛心包材料的确具有细胞毒性 ;(2 )La及FN具有拮抗PC细胞毒性的作用 ;3)经La及FN的衣被 ,PC牛心包生物材料达到了体外内皮化的要求 ,其中以La效果最佳 ,与FN相比 ,两者有显著性差异 (P <0 0 5 )。粘附蛋白CL I在本实验中没有发挥其促EC粘附及生长作用。     

人胎小肠内胰岛淀粉样多肽及5-羟色胺免疫反应细胞的个体发生

目的 探讨胰岛淀粉样多肽免疫反应(IAPP-IR)细胞和5-羟色胺(5-HT)免疫反应细胞(EC细胞)在人胎小肠中的个体发生及IAPP与5-HT的关系。方法 免疫组织化学技术。结果 胎期小肠内IAPP-IR细胞仅见于十二指肠。16周开始，在十二指肠绒毛上皮细胞间可见单个散在的IAPP-IR细胞；22～27周，其细胞数量则逐渐增多，主要分布于肠腺中。EC细胞可见于胎期小肠各段，并随着胎龄增长，其细胞密度大小依次为十二指肠、空肠、回肠。11周，在小肠3段绒毛上皮和尚未分化完全的肠腺细胞间已可见该种细胞；17～21周，数量达最多，主要分布于绒毛根部和肠腺的上皮细胞问；22周后，EC细胞呈渐少趋势。免疫组织化学邻片单染比较，未见IAPP和5-HT在同一细胞内有共存现象。结论 IAPP、5-HT在人胎小肠的内分泌细胞中已有表达。IAPP-IR细胞及EC细胞随着胎儿的发育而发生不同变化。     

利用pTet-Off系统研究NAIF1对食管癌细胞系EC9706生物学行为的影响

目的:利用pTet-off可诱导表达系统将NAIF1重组质粒导入食管癌EC9706中进行生物学行为影响研究。方法:构建pTRE2-NAIF1质粒,与PTK-Hyg质粒共转染入可诱导表达细胞系TF93(由EC9706构建而得),经筛选并鉴定获得稳定可诱导表达克隆。以此克隆采用MTT法检测细胞增殖、流式细胞术(FCM)检测细胞周期、Transwell小室法检测细胞迁移和检测细胞黏附能力的改变。结果:经筛选并鉴定获得了稳定的可诱导表达TF93-pTRE2-NAIF1克隆。NAIF1在体外可以抑制EC9706细胞增殖、导致G0/G1期细胞阻滞、抑制其迁移和黏附能力。结论:NAIF1能抑制食管癌细胞系EC9706的恶性生物学行为,为食管癌的基因治疗提供了可能的新靶点。     

鼠胚胎癌细胞的诱导分化和间隙连接形成

在原有研究的基础上,本文进一步证实鼠胚胎癌细胞系P_(19)的突变型αaS1可以被维生素A酸(RA)诱导分化,但对DMSO不敏感。在被一定浓度的RA诱导分化时,αaS1细胞同样出现了增生和分化间呈动态平衡的平稳阶段。与其他突变型相比,αaS1,细胞形成间隙连接的能力较差,这表明EC细胞突变型的某一种间隙连接型可能会出现缺陷。P_(19)和RAJH_6的混合细胞集合物在含RA的培养液中,只有前者被不断诱导分化,但经6-TG处理后,存活的RAJH_6细胞的分数基本平稳。此项结果提示,正在分化的EC细胞和未分化的EC细胞之间可形成代谢偶联。我们的工作有助于进一步了解细胞分化、先天畸形和肿瘤逆转。     

内皮细胞在植入犬股动脉的e-PTFE人工血管中生长良好

据FieldsC[JBiomaterAppl,2 0 0 2 ,17( 2 ) :13 5 - 15 2 ]报道 ,植在犬股动脉的小管径聚四氟乙烯 (e-PTFE)人工血管 ,静电种植内皮细胞 (EC)可延伸生长为血管新内膜 ,且血栓发生率低。中期平滑肌细胞 (SMC)游走测定表明静电EC种植可促进血管愈合。实验采集犬颈静脉内皮细胞、静电种植EC到e-PTFE血管内 ( 4mm ,GORE -TEX ,长 =6cm) ,移植到犬股动脉 6周时 ,评价细胞的生长情况。结果表明 ,静电EC生长对形成血管新内膜 (P <0 .0 1)和减少血栓形成均有明显影响 (P <0 .0 1)内皮细胞在植入犬股动脉的e-PTFE人工血管中生长良好…     

西拉普利对缺氧大鼠肺血管内皮功能失调的改善作用

目的:进一步了解西拉普利(cilazapril)对缺氧大鼠肺血管内皮(EC)功能失调的改善作用。方法:采用生化、放射免疫、透射电镜和血流动力学技术研究缺氧肺血管EC结构和功能状况。结果:(1)缺氧大鼠肺血管EC超微结构发生变化, 细胞受损。(2)血管EC内皮依赖性舒缩功能失调, 表现为血浆NO、SOD和肺组织eNOS显著降低, 血浆ET－1、ACE和MDA显著增加, 这些舒缩因子与肺动脉平均压(mPAP)呈显著正相关或负相关。(3)cilazapril显著降低ET－1水平和ACE活性, 同时增加NO水平和eNOS及SOD活性, 减轻EC结构受损。结论:缺氧大鼠存在肺血管EC结构受损和功能失调是参与缺氧性肺动脉高压(PH)发病机理之一。Cilazapril能够减轻EC的损伤, 改善EC的分泌功能, 对PH防治有一定作用。     

糖尿病大鼠红细胞在脑微血管的粘附

红细胞(red blood cell, RBC)是血液中极其重要的细胞成分,糖尿病时红细胞可以与血管内皮细胞(endothelial cell, EC)粘附,RBC对EC的粘附增强与糖尿病血管并发症严重程度有关.