糖肾汤对糖基化蛋白诱导培养下系膜细胞表达金属蛋白酶组织抑制物1、2的影响

目的:研究糖基化蛋白诱导培养下,糖肾汤对大鼠肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物1、2(TIMP1、TIMP2)mRNA的影响。方法:采用血清药理学及体外大鼠肾小球系膜细胞培养方法,用糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA)刺激肾小球系膜细胞,采用RT-PCR法检测系膜细胞TIMP1、TIMP2 mRNA表达。结果:糖基化蛋白可上调TIMP1、TIMP2 mRNA表达,糖肾汤能降低TIMP1、2mRNA表达。结论:糖肾汤对金属蛋白酶系统紊乱有一定的调节作用。     

芪蓟肾康方对AngⅡ所致大鼠肾小球系膜细胞增殖变化中JNK-AP1影响

目的：探讨芪蓟肾康方通过JNK信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增生,给予芪蓟肾康方黄酮干预,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肾小球系膜细胞上清液 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）、活化蛋白1（AP-1）、纤维粘连蛋白（FN）蛋白表达;实时定量 PCR 法检测 JNK、AP-1 mRNA 的表达。结果：与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显升高（P〈0.05或 P〈0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN 蛋白表达明显降低（P〈0.05或 P〈0.01）。与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA 表达明显升高（P〈0.05或 P〈0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中 JNK、AP-1及 FN mRNA明显降低（P〈0.05）。结论：芪蓟肾康方可以通过下调肾小球系膜细胞JNK、AP-1 mRNA及蛋白的表达水平,抑制 JNK 信号转导,降低 AP-1的活性,减少 FN 的增殖,从而减轻 GMC 增生,延缓肾小球的损伤,防止肾小球的硬化。     

芪蓟肾康方对AngII 所致大鼠肾小球系膜细胞增殖变化中JNK-AP1 影响

目的：探讨芪蓟肾康方通过JNK 信号通路对大鼠肾小球系膜细胞的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞,用血管紧张素域刺激系膜细胞增生,给予芪蓟肾康方黄酮干预,用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肾小球系膜细胞上清液c-Jun氨基末端激酶（JNK）、活化蛋白1（AP-1）、纤维粘连蛋白（FN）蛋白表达;实时定量PCR 法检测JNK、AP-1 mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中JNK、AP-1及FN蛋白表达明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中JNK、AP-1及FN蛋白表达明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。与正常组比较,模型组及治疗组大鼠肾小球系膜细胞中JNK、AP-1 及FN mRNA 表达明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,治疗组大鼠肾小球系膜细胞中JNK、AP-1及FN mRNA明显降低（P＜0.05）。结论：芪蓟肾康方可以通过下调肾小球系膜细胞JNK、AP-1 mRNA及蛋白的表达水平,抑制JNK信号转导,降低AP-1的活性,减少FN的增殖,从而减轻GMC增生,延缓肾小球的损伤,防止肾小球的硬化。     

姜黄素对前列腺癌PC-3细胞HSP27 mRNA表达及凋亡的影响

目的：评价姜黄素对前列腺癌PC-3细胞热休克蛋白27（HSP27）mRNA表达及凋亡的影响,探讨其抗前列腺癌的可能作用机制。方法：体外培养人正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌细胞LNCaP、PC-3和DU145。采用RT-PCR检测各细胞HSP27 mRNA的表达情况。PC-3细胞随机分为4组,空白对照组：不给药;高剂量组：给予50 μmol·L-1姜黄素2 μL;低剂量组：给予25 μmol·L-1姜黄素2 μL;另设阴性对照组：给予等体积DMSO。采用RT-PCR检测PC-3细胞HSP27 mRNA的表达情况,采用TUNEL法检测PC-3细胞凋亡情况。结果：LNCaP、PC-3和DU145细胞HSP27 mRNA的表达明显升高,与RWPE-1细胞比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。给药组PC-3细胞HSP27 mRNA的表达明显降低,且呈剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;给药组可见大量PC-3细胞凋亡,且呈剂量依赖性,与空白对照组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：姜黄素抑制HSP27 mRNA的表达和诱导PC-3细胞凋亡,可能是其抗前列腺癌的机制之一。     

肾康注射液对系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)、p27~(KIP1)表达的影响

目的观察肾康注射液对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞肥大及p21~(CIP1/WAF1)(p21)、p27~(KIP1)(p27) mRNA及蛋白质表达的影响。方法将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分为6组,分别为正常组、甘露醇组、高糖组、高糖加肾康注射液高、中、低剂量组,用[~3H]胸腺嘧啶核苷([~3H]TdR)及[~3H]亮氨酸([~3H] Leu)掺入法反应细胞DNA及蛋白质的合成情况,RT-PCR、Western blot检测p21mRNA及p21、p27蛋白质表达情况。结果高糖培养肾小球系膜细胞蛋白质合成增加,DNA合成减少,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达增加；肾康注射液组与高糖组比较,蛋白质合成减少,DNA合成增加,p21mRNA及蛋白质、p27蛋白质表达降低。结论肾康注射液可能部分通过降低p21、p27过表达来阻止高糖诱导肾小球系膜细胞的肥大反应。     

糖肾汤对高糖下肾小球系膜细胞TGF-β1表达影响的实验研究

目的：观察高糖对肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响，以及糖肾汤的干预作用。方法：分别用低糖、高糖以及高糖下糖肾汤不同剂量培养肾小球系膜细胞，采用ELISA法测定TGF-β1蛋白含量，逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-β1ImRNA表达，并以开博通作为阳性药对照。结果：高糖可刺激肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA的表达，糖肾汤具有对抗高糖刺激作用，且呈现一定的量效关系。结论：糖肾汤对高糖对肾小球系膜细胞的影响具有干预作用。     

葛根素对大鼠肾小球系膜细胞体外增殖抑制作用及其机制

 目的 探讨不同浓度葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其作用机制。方法 采用体外细胞培养技术,采用MTT检测不同浓度葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖的量效和时效关系。分别采用RT-PCR和ELISA,检测不同浓度葛根素作用大鼠肾小球系膜细胞后,结缔组织生长因子mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 葛根素可抑制大鼠GMCs增殖（P<0.05）,该增殖抑制作用呈浓度依赖模式。不同浓度葛根素作用于大鼠GMCs后,结缔组织生长因子mRNA和蛋白表达水平均随药物浓度增加而逐渐减弱（P<0.05）。结论 葛根素对大鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制作用,其作用机制可能与下调结缔组织生长因子基因转录和表达水平有关。     

肾衰颗粒对大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制剂及基质金属蛋白酶2表达作用的探讨

目的：探讨肾衰颗粒对肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制剂（PM—1）及基质金属蛋白酶2（MMP～2）表达的影响。方法：培养大鼠系膜细胞随机分为5组每组8-10孔，空白组、模型组、对照组、肾衰颗粒高剂量组、肾衰颗粒低荆量组，经处理后用酶联免疫吸附双抗夹心法定量测定PAI-1和MMP-2的表达。结果：肾衰颗粒对大鼠肾小球系膜细胞PAI—1的表达有明显抑制作用（P〈0．05），对MMP-2的表达有上调的作用（P〈0．05）。结论：肾衰颗粒可能通过下调肾小球系膜细胞PAI-1的表达和上调MMP-2的表达而延缓慢性肾裹患者肾纤堆化的进展。     

两色金鸡菊提取物对大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达的影响

目的:本研究通过高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞建立糖尿病肾病的体外模型,观察两色金鸡菊乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Coreopsis tinctoria,AC)对模型中细胞增殖及纤维化因子表达的影响。方法:采用AC对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞进行干预,将细胞分为正常组,模组组,AC不同质量浓度(25,50,100,150 mg·L~(-1))组。采用噻唑蓝(MTT)比色法,细胞增殖与活性检测(CCK8)法检测AC不同质量浓度对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步观察AC不同质量浓度对肾脏纤维化蛋白转化生长因子-β_1(TGF-β_1),胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ),纤维连接蛋白(FN)表达的影响。结果:AC 50,100,150 mg·L~(-1)组均能抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的增殖(P0.01);AC 25,100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著降低细胞中TGF-β_1的mRNA与蛋白表达水平(P0.01);AC 100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著抑制细胞中CollagenⅣmRNA与蛋白的表达水平(P0.01);AC 50,100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著抑制细胞中FN mRNA与蛋白的表达水平(P0.01)。结论:两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达发挥其对糖尿病肾病肾脏保护作用。     

茶多酚对氧化低密度脂蛋白诱导系膜细胞TGF-β1mRNA表达的影响

目的：观察茶多酚对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1mRNA表达的影响。方法：以ox-LDL刺激体外培养的大鼠系膜细胞，不同浓度的茶多酚干预后，检查系膜细胞内总胆固醇(TC)含量，用原位杂交法测TGF-β1mRNA的表达。结果：ox-LDL与系膜细胞共同孵育后细胞内TC含量、TGF-β1mRNA表达与细胞对照比较，均明显增高；茶多酚干预后系膜细胞中TC含量下降，TGF-β1mRNA的表达下降。结论：茶多酚可抑制系膜细胞摄取氧化低密度脂蛋白和TGF-β1mRNA的表达。     

姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法 将HepG2细胞分3组：正常对照组、氯化钴（CoCl2）组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子－1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白（epithelial-cadherin,E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。     

活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的 研究活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（RMCs）增殖及纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 以大鼠RMCs为研究对象,用高糖和不同浓度的中药处理RMCs,分别作用24、48 h后,用噻唑蓝（MTT）法检测RMCs的增殖情况,实时定量PCR法检测FN mRNA表达,ELISA法检测FN蛋白表达。结果 处理24 h和48 h,与对照组比较,单纯高糖组细胞增殖明显升高（P<0.01, P<0.01）;FN mRNA表达及蛋白表达也明显升高（P<0.01）;与高糖组比较, 24 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）;48 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达较高糖组明显下降（P<0.01, P<0.01）。结论 高糖能够刺激RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达,中药处理24 h对高糖刺激的RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达的作用不明显,中药处理48 h能够逆转高糖刺激下RMCs的增殖及降低FN 蛋白及mRNA 的表达。     

糖肾清2号提取物调控AMPK信号通路对高糖环境下肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响

目的:观察糖肾清2号提取物对高糖环境下的小鼠肾小球系膜细胞株AMPK-α1、IκBα、TLR-4mRNA转录和蛋白表达的影响,探讨该方抑制高糖环境下肾小球系膜细胞株免疫炎性病理损伤的分子机制。方法:采用小鼠肾小球系膜细胞株SV40 MES 13,在5%CO_2、37℃恒温培养箱常规培养。实验分组:空白对照组(D-葡萄糖5.6 mmol/L)、高糖组(D-葡萄糖30 mmol/L)、中药低浓度组(高糖+糖肾清2号提取物5μmol/L)、中药中浓度组(高糖+糖肾清2号提取物10μmol/L)、中药高浓度组(高糖+糖肾清2号提取物20μmol/L),共同孵育12、24、36 h进行指标检测。采用RT-PCR技术检测肾小球系膜细胞AMPKα1、IκBα、TLR4 mRNA转录水平;Western-blot技术检测肾小球系膜细胞AMPKα1、IκBα、TLR4的蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,高糖组AMPKα1、IκBαmRNA转录水平及蛋白表达下调(P0.05),TLR4 mRNA转录水平及蛋白表达水平上调(P0.01),差异有统计学意义。与高糖组比较,中药各浓度组AMPKα1、IκBα蛋白表达水平上调(P0.05),中药高、低浓度组AMPKα1、IκBαmRNA转录水平上调(P0.05)。中药各浓度组TLR4mRNA转录水平下调(P0.01),中、高浓度组TLR4蛋白表达水平下调(P0.01)。结论:糖肾清2号抑制高糖环境下肾小球系膜细胞免疫炎性代谢性损伤,此分子机制可能与调节AMPK信号通路相关。     

常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞VEGF表达的影响

目的探讨常氧条件下姜黄素对肝癌Hep1细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 将肝癌Hep1细胞用不同浓度的姜黄素(终浓度分别为0,5,10,15,20 μmol/L)处理,置于常氧环境中培养24h.RT - PCR检测Hep1细胞中VEGF mRNA表达水平的变化,Western - blot检测Hep1细胞VEGF蛋白表达的变化.结果 姜黄素10,15,20 μmol/L组VEGF mRNA的表达与空白对照组相比均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,且呈浓度依赖性.姜黄素0,5μmol/L组VEGFmRNA的表达与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05);姜黄素5,10,15,20 μmol/L组VEGF蛋白的表达与空白对照组相比均明显升高(P＜0.01),且呈浓度依赖性.姜黄素0 μmol/L组VEGF蛋白的表达与空白对照组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 常氧条件下,姜黄素呈浓度依赖性方式上调肝癌Hep1细胞VEGF的表达.     

姜黄素调控结肠癌SW480细胞skp2-p27kip通路的研究

目的：探讨姜黄素抑制结肠癌细胞增殖并促进其凋亡的分子机制。方法：通过MTT检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60μmol/L）处理结肠癌细胞SW480后凋亡情况;通过蛋白免疫印迹方法检测不同浓度姜黄素（0,7.5,15,30,60μmol/L）处理结肠癌细胞后细胞中skp2、p27kip蛋白表达情况。结果：姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480增殖并促进其凋亡,有浓度和时间依赖;姜黄素降低了结肠癌细胞SW480中skp2蛋白的表达（P〈0.05）,而促进了p27kip蛋白的表达,有时间和剂量依赖,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：姜黄素能抑制结肠癌细胞SW480的增殖并促进其凋亡,有时间和剂量依赖,这种抗癌效应可能与干扰skp2-p27kip通路有关。     

灯盏花对成骨细胞及破骨前体细胞OPG/RANKL/RANK表达的影响

目的 研究不同浓度和不同作用时间的灯盏花对体外培养的成骨细胞和破骨前体细胞中OPG/RANKL/RANK mRNA及蛋白表达的影响,初步探讨灯盏花对骨改建的作用及其机制。方法 体外培养人MG63细胞和小鼠RAW264.7细胞,分别取第三代细胞分为对照组和不同的实验组,分别应用不同浓度的灯盏花（0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL）干预48 h后提取总RNA和蛋白质,同时单独对0、1 mg组设12、24、48 h时间点提取蛋白质,采用半定量RT PCR方法检测MG63细胞OPG mRNA和RANKL mRNA的表达以及RAW264.7细胞RANK mRNA的表达,采用Western blot法检测MG63细胞OPG蛋白和RANKL蛋白的表达以及RAW264.7细胞RANK蛋白的表达。结果 灯盏花随浓度（0、0.001、0.01、0.1、1 mg/mL）增高,干预48 h后MG63细胞OPG mRNA和蛋白表达逐步降低（P〈0.05）;MG63细胞RANKL mRNA和蛋白表达逐步增加（P〈0.05）;RAW264.7细胞RANK mRNA表达增加（P〈0.05）,但0.1 mg/mL组较0.01 mg/mL组 mRNA表达稍降低,RANK蛋白表达逐步增加（P〈0.05）。1 mg/mL灯盏花干预12、24、48 h后MG63细胞OPG蛋白表达随时间逐步降低（P〈0.05）、RANKL蛋白表达随时间逐步增加（P〈0.05）;RAW264.7细胞RANK蛋白表达随时间逐步增加（P〈0.05）。结论 灯盏花大致上呈剂量和时间依赖性抑制成骨细胞OPG表达,促进成骨细胞RANKL的表达和破骨前体细胞RANK的表达,灯盏花可能有促进骨吸收的作用。     

姜黄素联合表柔比星对HepG2细胞TIPE2及Foxp3 mRNA表达的影响

目的探讨姜黄素联合表柔比星对HepG2肝癌细胞增殖及TIPE2和Foxp3 mRNA表达的影响。方法培养HepG2肝癌细胞,分别应用不同浓度姜黄素、表柔比星、姜黄素联合表柔比星进行干预,应用MTT法检测肝癌细胞抑制率,RT-PCR法检测TIPE2和Foxp3 mRNA表达水平。结果姜黄素和表柔比星均可抑制HepG2细胞增殖,且呈时间和剂量的依赖性;姜黄素联合表柔比星可增强对HepG2细胞的生长抑制作用;而且表柔比星可上调肝癌细胞内TIPE2 mRNA表达并且下调Foxp3 mRNA表达,将表柔比星与姜黄素联合应用后其上调TIPE2 mRNA表达及下调Foxp3 mRNA表达作用较单独应用明显增强。结论姜黄素可增强表柔比星对HepG2肝癌细胞生长的抑制作用及对TIPE2和Foxp3 mRNA的调控。     

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞podocin表达的影响

目的观察柴芩肾安方对IgA肾病（IgAN）大鼠肾小球足细胞podoc in表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组,通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）建立大鼠IgAN模型,分别进行药物干预。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量（Upr）,观察肾小球病理变化,并采用免疫组化和实时定量PCR检测足细胞podo-c in蛋白及mRNA的表达。结果与正常组比较,IgAN组大鼠Upr、肾小球系膜细胞、系膜基质相对含量均显著升高（P〈0.01）,大部分足突融合,足细胞podoc in蛋白及mRNA表达均明显下调（P〈0.01）。柴芩肾安方组上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异显著（P〈0.01）,且其podoc in蛋白表达高于氯沙坦组（P〈0.01）。结论柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复足细胞podoc in表达有关。     

特女贞苷对高糖刺激的肾小球系膜细胞凋亡的保护作用

目的: 研究特女贞苷对高糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞凋亡的保护作用。方法: 体外培养小鼠肾小球系膜细胞,采用MTT法观察特女贞苷对细胞活力的影响(n=6),选择安全浓度。高糖刺激肾小球系膜细胞模拟糖尿病肾病模型,以100,50,25 μmol·L^-1特女贞苷对肾小球系膜细胞作用48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率(n=10),以Western blot法进一步考察特女贞苷对肾小球系膜细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3),B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响(n=3)。结果: 高糖刺激肾小球系膜细胞凋亡率明显增加,蛋白水平caspase 3表达上调,Bcl-2/Bax明显下降(P<0.05)。100,50,25 μmol·L^-1特女贞苷均能显著抑制高糖刺激的肾小球系膜细胞凋亡和下调cleaved-caspase 3蛋白表达,明显上调Bcl-2/Bax(P<0.01,P<0.05),作用呈浓度依赖。结论: 特女贞苷对高糖刺激的肾小球系膜细胞凋亡具有明显的保护作用,这可能与其上调Bcl-2/Bax和抑制caspase 3激活有关。