高温对小鼠睾丸生精细胞凋亡影响的实验研究

目的　研究高温对睾丸生精细胞凋亡的影响。方法　选用昆明系雄性小鼠 2 0只 ,随机分为高温组和对照组 ,采用核固红 -结晶紫染色法 ,观察睾丸生精细胞凋亡数目的变化。结果　高温组睾丸生精细胞凋亡的数目 (2 8.2± 3.0 3No ./10个曲细精管切面 )较对照组的凋亡细胞数目 (6 .38± 1.4 1No ./10个曲细精管切面 )明显增多 (P <0 .0 1)。结论　高温可触发生精细胞的细胞凋亡数目增加 ,造成生精能力丧失。     

缺锌对大鼠睾丸细胞凋亡的影响

目的:了解缺锌对海马发育影响的机制,通过原位缺口平移(ISNT)标记,观察缺锌对睾丸生精细胞凋亡的影响。方法:选用Wistar雄性大鼠16只,均分为对照组(ZC)和缺锌组(ZD)。喂养四周后,采用原子吸收分光光度法,测定血清和睾丸锌的含量;采用原位缺口平移技术观察睾丸曲细精管中细胞凋亡数目的变化。结果:在ZD组大鼠血清锌明显降低的情况下,ZD大鼠睾丸内锌含量明显降低,睾丸曲细精管生精细胞凋亡的数目明显增多。结论:锌是睾丸发育所必需的营养素,缺锌可诱发睾丸生精细胞凋亡。     

谷氨酸对大鼠胶质细胞细胞周期和凋亡及坏死的影响

关于缺血期间胶质细胞的功能状态、细胞周期的变化以及胶质细胞的死亡形式研究较少。谷氨酸(Ｇｌｕ)作为脑内主要的兴奋性神经递质,与癫痫的发生以及神经元的损伤有密切联系[1],我们观察了离体培养的大鼠皮层胶质细胞经不同浓度的谷氨酸刺激后胶质细胞细胞周期的改变和细胞凋亡及坏死的比例,以期明确脑缺血病理损害介质Ｇｌｕ对胶质细胞功能状态的影响,为探讨缺血性神经细胞的生存与死亡机制提供理论依据。一、材料与方法1胶质细胞培养:(1)神经细胞原代培养:参照Ｍａｎｔｈｒｏｐｅ等[2]的方法,取孕18ｄＳＤ大鼠鼠脑皮质,用完全培养基37℃,…     

胸腺细胞体外培养对细胞凋亡和细胞周期进程的影响

本文采用流式的细胞仪研究了小鼠胸腺细胞体外培养对细胞内ＤＮＡ合成、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果表明：胸腺细胞体外培养引起的ＤＮＡ合成抑制，细胞有丝分裂延迟，体外培养后４小时即表现出明显的ＤＮＡ合成抑制。８－１２ｈ抑制深，２４ｈ蛋白质的合成开始恢复，细胞凋亡则表现时间依赖性增高。     

棉酚对小鼠睾丸生精细胞凋亡影响的实验研究

目的　研究棉酚对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。方法　选昆明种雄性小鼠 2 0只 ,随机分成对照组和服棉酚组 ,采用核固红—结晶紫染色法 ,对比观察小鼠睾丸生精细胞凋亡数目的变化。结果　服棉酚组小鼠睾丸生精细胞凋亡的数目 (3 0 .5 7± 3 .0 3 )较对照组 (6.3 8± 1 .41 )明显增多 (P <0 .0 1 )。结论　棉酚可促使小鼠睾丸生精细胞的凋亡数目增加 ,造成睾丸生精功能受损     

抑制细胞周期素依赖性蛋白激酶5对小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)在高糖刺激体外培养小鼠足细胞中的表达及抑制Cdk5表达对高糖诱导足细胞凋亡的影响。方法 (1)体外培养条件性小鼠足细胞,分为正常糖组、甘露醇组、高糖组,高糖组按不同刺激时间分为0、6、12、24、48h5组,应用蛋白质印迹(Western blot)法检测足细胞中Cdk5蛋白表达水平。(2)应用Cdk5miRNA干扰质粒抑制足细胞中Cdk5基因的表达水平。分别设立:NG组(正常糖);HG组(高糖);HG+S组(高糖+Scrambled阴性质粒);HG+C组(高糖+Cdk5miRNA质粒)。以上各组细胞培养48h后,应用流式细胞术和末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)法检测足细胞凋亡水平,Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和分裂型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的蛋白表达水平。结果与正常糖组相比,高糖刺激后,足细胞中Cdk5的蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。Cdk5miRNA干扰质粒能显著抑制足细胞中Cdk5的表达水平。与HG组和HG+S组相比,HG+C组足细胞凋亡率显著降低(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2蛋白表达比率也有明显降低(P<0.05)。结论高糖刺激可以增加足细胞中Cdk5蛋白的表达水平;抑制Cdk5表达可以降低高糖刺激诱导的足细胞凋亡。     

一侧睾丸损伤后对侧睾丸细胞凋亡的实验研究

目的探讨一侧睾丸损伤后对侧睾丸细胞凋亡的影响。方法SD雄性成年大鼠44只，分为对照组（12只），挫伤组（16只）和裂伤组（16只），分别于伤后24h和伤后6d快速处死大鼠提取对侧睾丸，应用原位末端标志技术（TUNEL）检测各组细胞凋亡情况。结果挫伤组及裂伤组伤后24h及伤后6d凋亡细胞均较对照组明显增多（P〈0．05）。细胞凋亡多发生在精母细胞，Leydig细胞也有不同程度的凋亡。结论单侧睾丸损伤可引起对侧睾丸的细胞凋亡增加，且凋亡细胞的多少与损伤程度有关。     

褪黑素对离体培养的小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的影响

目的:研究褪黑素对体外培养的小鼠胸腺细胞凋亡及细胞周期进程的影响. 方法:小鼠胸腺细胞体外培养前预先加入不同浓度褪黑素,培养4 h后,应用流式细胞术检测其凋亡小体百分率和细胞周期各时相细胞百分率的变化. 结果:小鼠胸腺细胞培养后其凋亡小体百分率明显升高,为培养前的6.9倍(P<0.001);G0/G1和S期细胞百分率与培养前相比未见明显变化,G2+M期细胞百分率呈增高趋势.预先加入2.0 mmol*L-1 褪黑素可使凋亡小体百分率明显降低(P<0.01),G2+M期细胞百分率明显增高(P<0.05). 结论:褪黑素可以减轻体外培养的小鼠胸腺细胞凋亡,并可诱导细胞发生G2阻滞.     

一种特异性检测细胞凋亡和细胞周期的新方法

目的 应用流式细胞技术，建立一种特异性的同时检测细胞凋亡和细胞G0／G1期、S期以及G2／M期各时相百分比的快速测定方法。方法采用Annexin V—FITC/PI双标记染色凋亡细胞，再在该染色样品基础上，进一步地打孔，同时加入高剂量的DNA染色试剂进行活细胞DNA饱和染色，流式细胞仪检测分析。结果 可在同一份细胞样品上获得特异性较强的细胞凋亡、细胞坏死和细胞周期各时相的百分数变化。结论 该方法测量结果准确，检测时间短，人为影响因素少，节约细胞样品用量，为细胞生物学、肿瘤学研究，尤其是细胞动力学研究提供了一种新的、更为实用的分析方法。     

当归多糖对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞细胞周期及细胞凋亡的影响

目的:探讨当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BMNCs)细胞周期及细胞凋亡的影响,旨在阐明APS防护辐射性造血损伤的分子机制.方法:BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组、生理盐水(NS)组和A...     

3，4，5-三羟基苯甲酸对肿瘤细胞凋亡及细胞周期进程的影响

目的：观察不同剂量3,4,5-三羟基苯甲酸（TAD）对体外人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及细胞周期进程的影响，探讨其对肿瘤生长抑制的可能机制。方法：实验分0、3.125、6.250、12.500和25.000 μg TAD处理组，应用透射电镜观察肿瘤细胞凋亡，流式细胞术检测TAD处理后肿瘤细胞凋亡及细胞周期进程的变化。结果：电镜证实，25.000 μg TAD组肿瘤细胞呈典型凋亡特征，即核呈碎裂状，线粒体嵴断裂，胞核及细胞质呈空泡化改变；流式细胞仪检测,不同剂量TAD分别处理细胞后其凋亡百分数均高于对照组（P< 0.01）；与对照组比较，随TAD剂量的增加G₀/G₁期细胞百分数增加，其中25.000 μg TAD组发生明显G₁阻滞（P< 0.01）；S期细胞百分数逐渐降低，其中 25.000 μg TAD组明显低于对照组（P< 0.05）。结论：TAD可使肝癌SMMC-7721细胞凋亡和G₁期阻滞，其对肿瘤生长的抑制作用可能通过G₁期阻滞引起细胞凋亡实现的。     

2-DG对体外培养人食管癌细胞周期及凋亡的影响

目的:研究2-脱氧葡萄糖(2-Deoxy-D-glucose,2-DG)对体外培养人食管癌Eca109细胞周期及凋亡的影响。方法:建立体外低氧模型,实验分常氧组和低氧组,利用体外细胞培养及流式细胞分析术等方法,测定不同浓度的2-DG对Eca109细胞周期、凋亡和增殖指数(PI)的影响。结果:常氧条件下2-DG浓度为0 mmol/L、80 mmol/L作用食管癌细胞24 h后,G1期细胞的比例分别为(44.87±0.99)%、(64.60±2.17)%,凋亡细胞的比例分别为(3.90±1.61)%、(7.23±1.43)%;低氧条件下G1期细胞的比例分别为(54.23±1.42)%、(87.74±2.19)%,凋亡细胞的比例分别为(38.02±1.42)%、(68.72±1.47)%,两组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论:2-DG能剂量依赖性地导致细胞周期阻滞及细胞凋亡,使G1期细胞增多,同时伴有S期、G2/M期细胞比例的相应减少,且在低氧条件下作用更加明显。     

SiRNA干扰DLL4表达对A549细胞周期和凋亡的影响

目的 筛选DLL4基因的特异性小干扰RNA(small interference RNA,siRNA),探讨DLL4对A549 细胞增殖、周期、凋亡的影响.方法 设计、合成并筛选针对DLL4的siRNA,转染A549细胞后,以RT-PCR和Western blot检测DLL4 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞凋亡变化,流式细胞仪检测细胞周期改变.结果 DLL4 siRNA能够明显下调A549细胞中DLL4 mRNA和蛋白的表达.并能抑制细胞的增殖(抑制率为43.85％);促进细胞凋亡(P＜0.05),G2/M期细胞比例明显增加(P＜0.05).结论 DLL4在肺癌细胞中也有表达,下调其表达后,能够抑制肿瘤细胞增殖、促进其凋亡.     

Effect of Trichosanthin on Cell Cycle and Apoptosis of Murine Melanoma Cells

Aplantprotein,calledTrichosanthin(TCS),extractedfromtherootsofTrichosantheskirilowiigrowinginChina.Trichosanthinhasattractedtheattentionofmanyinvestigatorswithitsactivityonfouraspects:theinfluenceonimmunesystem,theinductionoflaborandtheinhibitionofHIVreplicationaswellasthesuppressionoftumorgrowth('--').Inordertoestimatetheprospectoftrichosanthinontumortherapy,theeffectoftrichosanthinonmurinemelanomacellswasstudiedandcomparedamongthedifferentcomPOnentsoftrichosanthinextractedbyourlaboratory…     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

丁酸钠对Hep-2细胞生长、凋亡及细胞周期的影响

目的:观察丁酸钠(SB)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用,探讨其对细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以MTT法检测0.625～10.000 mmol/L SB对Hep-2细胞生长的抑制作用;以TUNEL法检测1.250～5.000 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞凋亡情况;以琼脂糖凝胶电泳法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞DNA片段;应用流式细胞仪分析1.250 mmol/L、2.500 mmol/L、5.000 mmol/L SB作用24 h后细胞凋亡率和细胞周期变化;采用免疫组织化学SP法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后细胞抗凋亡蛋白Survivin表达的变化.结果:SB对Hep-2细胞的生长抑制作用具有时间和剂量关系(不同时间组、不同剂量组间比较,P均＜0.01);细胞凋亡指数随SB剂量升高、作用时间延长而增加(P均＜0.01);琼脂糖凝胶电泳可见特征性的凋亡细胞DNA梯状条带;流式细胞术显示细胞凋亡率随SB剂量升高而增加(P＜0.01),细胞周期阻滞于G0/G1期;2.500 mmol/L SB作用72 h,Survivin表达阳性细胞的光密度值由作用前的0.164±0.009下降至0.045±0.006(P＜0.01).结论:SB能有效抑制 Hep-2细胞的生长,其机制可能与抑制细胞Survivin蛋白表达进而诱导细胞凋亡以及参与细胞周期调控有关.     

胸腺细胞体外培养对细胞凋亡和细胞周期进程的影响

本文采用流式的细胞仪研究了小鼠胸腺细胞体外培养对细胞内ＤＮＡ合成、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果表明：胸腺细胞体外培养引起ＤＮＡ合成抑制，细胞有丝分裂延迟，体外培养后４小时即表现出明显的ＤＮＡ合成抑制。８～１２ｈ抑制最深，２４ｈ蛋白质的合成开始恢复，细胞凋亡则表现时间依赖性增高。     

三羟基苯甲酸纯化物及其化合物对Jurkat细胞周期进程及凋亡的影响

目的： 研究不同浓度菱角三羟基苯甲酸（TBA）纯化物及其化合物对人 T淋巴细胞白血病Jurkat细胞周期进程及凋亡的影响,并探讨2种不同来源TBA对肿瘤生长抑制的可能机制。方法： 2种不同来源TBA分别作用于对数生长期的Jurkat 细胞,每种TBA分为5组（0、3.125、6.250、12.500和25.000 mg/L）,作用于Jurkat 细胞30 h后,经流式细胞仪分别检测不同浓度菱角TBA纯化物及其化合物处理的Jurkat 细胞周期各时相及其凋亡率变化。 结果： Jurkat细胞分别经过不同浓度菱角TBA纯化物处理后,细胞凋亡率明显高于0 mg/L组（P<0.05或P<0.01）;与对照组比较,3.125 mg/L组变化无差异;6.250、12.500和25.000 mg?L-1组变化有差异（P<0.05或P<0.01）。Jurkat细胞分别经过不同浓度TBA化合物处理后,与对照组比较,细胞凋亡率在3.125 mg?L-1组时即存在差异（P<0.05）,随其剂量增加而增加（P<0.05 或P<0.01),各用药组间变化无差异。经TBA纯化物作用后,G1期细胞百分数明显高于对照组（P<0.01）,并随TBA剂量增加而增加,在6.250 ~ 25.000 mg/L浓度下S期细胞百分数明显低于对照组（P<0.05或P<0.01）,G2期无显著变化。经TBA化合物作用后在6.250 ~ 25.000 mg/L浓度下G1期百分数明显高于对照组（P<0.05 或P<0.01）,S期细胞百分数明显低于对照组（P<0.05 ）,G2期无显著变化。各用药组间变化无差异。结论： 2种不同来源TBA均能够诱导细胞凋亡;均能够阻止人 T淋巴细胞白血病细胞的 G1期细胞向S期进程,其抑制作用可能通过G0/G1期阻滞引起。     

壳寡糖对S180肉瘤细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响

目的探讨壳寡糖对S180肉瘤细胞的生物学效应，为其治疗肿瘤提供新的理论基础。方法体外实验：用流式细胞仪测壳寡糖作用下S180肉瘤细胞周期、细胞凋亡情况。体内实验：建立S180肉瘤小鼠皮下移植瘤模型，给予壳寡糖后，测瘤体积，并用免疫组化法测瘤组织Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果体外实验：高浓度壳寡糖作用后S180肉瘤细胞阻滞于G0/G1期，同时S180肉瘤细胞凋亡增加。体内实验：壳寡糖对小鼠S180肉瘤有明显的抑制作用并能提高促凋亡基因Bax的表达，降低抑凋亡基因Bcl-2的表达。结论壳寡糖可抑制S180肉瘤细胞的生长，使S180细胞阻滞于G0／G1期并诱导其发生凋亡，其机制可能与Bcl-2蛋白下调而Bax蛋白上调有关。