大肠杆菌感染对人巨噬细胞系U937凋亡的影响

目的：探讨大肠杆菌（E.coli）感染与人巨噬细胞系U937细胞凋亡的关系.方法：以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测及Hoechst 33258荧光染色,Giemsa染色等细胞形态学观察为指标,研究E.coli感染对U937细胞凋亡的诱导作用.结果：Giemsa染色：E.coli感染10,20 min（U937：E.coli=1：20）后偶见细胞凋亡,感染30,60及90min时可见许多细胞有典型的凋亡形态学改变,并可见凋亡小体;Annexin V FITC/PI双染可见U937细胞凋亡百分率随E.coli感染时间的延长而增高.感染30,60及90min时,细胞凋亡率与对照组相比明显增高,有显著性差异（P＜0.001）.Hoechst 33258荧光染色结果表明当细胞与细菌浓度比较低时（1：10）即可引起部分U937细胞发生凋亡,U937细胞凋亡百分率随E.coli感染剂量的增加而增加,且Hoechst 33258荧光染色及流式细胞仪二种方法所得结果一致.结论：E.coli以时间和剂量依赖方式诱导U937细胞凋亡.     

大肠杆菌感染时U937细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶-3及c-myc的关系

目的 探讨大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)感染时人巨噬细胞系U937细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶-3(caspaseS-3)及c-myc的关系.方法 当U937:E.coli分别为0,1:20,1:40及1:80时用AnnexinVFITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测caspases-3和c-myc的表达.结果 当U937:E.coli分剐为0,1:20,1:40及1:80时,细胞凋亡率分别为(3.05%±0.88%)、(33.34%±4.27%)、(37.67%±5.20%)和(50.18%±4.32%).caspases-3 mRNA和c-mycmRNA随着E.coli浓度增加而表达上调,与细胞凋亡程度基本一致.结论 E.coli可诱导U937细胞凋亡,其机制可能与凋亡调控基因caspases-3和c-myc上调有关.说明多基因调控参与其中.     

干扰素对U937细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的 探讨干扰素α对白血病U937细胞的生长抑制作用及其作用机制。方法 以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的U937细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪及hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR—ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 干扰素α可显的降低U937细胞端粒酶活性，抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论 干扰素α能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡，降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

抗PNAS-2单链抗体对白血病U937细胞凋亡的影响

目的 观察抗PNAS-2单链抗体与PNAS-2抗原特异性结合的能力,并在此基础上探究其对急性单核细胞白血病U937细胞凋亡的影响.方法 运用反转录病毒转染法将抗PNAS-2单链抗体表达载体pMIG-PNAS-2ScFv转入U937细胞(pMIG-PNAS-2ScFv组),同时设转染pMIG空载体(NC组)及未转染载体的U937细胞(U937组)为对照.流式细胞仪检测转染效率;激光共聚焦显微镜观察单链抗体表达情况及与靶抗原特异性结合的能力;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡;Western blotting观察PNAS-2表达及促凋亡因子caspase-3激活情况.结果 成功将抗PNAS-2单链抗体编码序列转入U937细胞,所表达的单链抗体能与PNAS-2抗原特异性结合.与NC组和U937组相比,pMIG-PNAS-2ScFv组细胞凋亡率明显上升(P<0.05),活化型caspase-3表达增加,但PNAS-2含量并无变化.结论 抗PNAS-2单链抗体能有效结合U937细胞内的PNAS-2抗原并有促进U937细胞凋亡的作用,其促凋亡机制可能与PNAS-2功能位点被封闭后功能失活而无法发挥抑凋亡作用有关.     

甲氨喋呤和三磷酸腺苷诱导U937细胞凋亡机制探讨

目的 :探讨甲氨喋吟、三磷酸腺苷诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中P73mRNA的表达变化 ,以进一步了解P73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法 :用上述药物诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量等方法 ;采用半定量逆转录PCR (RT -PCR)检测P73mRNA的表达变化。结果 :甲氨蝶呤、三磷酸腺苷均可诱导U937细胞凋亡。 5 μmol/L的甲氨蝶呤和0 .2 5g/L的三磷酸腺苷分别作用于U937细胞 6h、2 4h ,光镜下见细胞明显聚集、体积缩小 ,Wright’s Giemsa染色见染色质明显浓缩、核碎裂等现象 ,而对照组未出现上述现象 ;DNA片断电泳见清晰的梯形条带 ;流式细胞仪检测 :5 μmol/L的甲氨蝶呤作用于U937细胞 6h、8h、10h ,细胞的凋亡率分别为 :5 .15 %、11.4 3%、14 .7% ,0 .2 5 g/L的三磷酸腺苷作用于U937细胞 2 4h、36h、4 8h细胞的凋亡率分别为 :2 .33%、11.90 %、35 .4 9% ,而对照组的细胞凋亡率分别为 :0 .0 0 %和 1.0 9% ;半定量RT -PCR结果 :与对照组相比 ,仅三磷酸腺苷处理 4 8h组P73mRNA的表达下调。结论 :在U937细胞凋亡过程中P73的mRNA表达差异无统计学意义。     

HSP70通过抑制NF-κB信号通路促进大肠杆菌诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡

目的 探讨大肠杆菌(E.coli)感染与人巨噬细胞系U937细胞凋亡的关系及热休克蛋白70(HSP70)、核因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达的变化.方法 以Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测为指标,研究E.coli感染对人巨噬细胞系U937细胞凋亡的诱导作用;用Western blot方法检测HSP70和NF-κ B的表达.结果 Annexin V FITC/PI双染结果发现,U937细胞凋亡百分率随E.coli浓度的增加而增加,HSP70的表达随着E.coli浓度的增加逐渐升高,而NF-κ B的表达逐渐降低.结论 E.coli诱导U937细胞凋亡过程可能与HSP70表达的升高和NF-κB表达的降低有关.     

苦参碱诱导U937细胞凋亡及其对Bcl-2表达的影响

目的:探讨苦参碱(Mat)抑制人淋巴瘤细胞(U937)增殖及诱导其凋亡的机制.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察Mat对U937细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化;Annexin V双标记染色结合FCM检测凋亡率;RT-PCR方法检测Bcl-2 mRNA表达.结果:Mat(0.2～0.5 g/L)作用24,48,72 h后对U937细胞均有增殖抑制作用(P<0.05或P<0.01),在该浓度范围内呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50>)为0.4 g/L;Mat 0.2～0.5 g/L组作用U937细胞72 h后,s期细胞比例均增加,细胞发生S期阻滞(P<0.01);细胞凋亡率分别为3.25%,5.32%,8.17%,11.20%,与U937细胞对照组(1.84%)及Mat 0.1 g/L组(1.95%)相比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).RT-PCR显示Bcl-2 mRNA表达明显减弱,且随剂量增加越明显.结论:Mat在一定浓度和时间对U937细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是使细胞发生S期阻滞;Mat可以下调U937细胞Bcl-2表达,促进细胞凋亡.     

TSA促U937细胞凋亡机理的初步研究

目的研究组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）抑制剂曲古菌素A（trichostatin A,TSA）诱导白血病细胞株U937细胞凋亡的规律及初步研究其作用的分子机理。方法应用细胞培养、Annexin V/PI双标流式细胞术观察TSA对U937细胞诱导细胞凋亡的效应及规律,用Western blot检测TSA作用U937细胞一定时间后蛋白表达的变化。结果TSA能以时间、剂量依赖性方式诱导U937细胞凋亡。400nmol/L的TSA处理24h后,U937细胞Bcl-2蛋白表达开始下降。TSA作用48h后,该蛋白表达下降更明显。这与TSA诱导U937细胞凋亡的时间规律相一致。结论TSA能诱导U937细胞凋亡。TSA对U937细胞的杀伤机制可能与抗凋亡蛋白Bcl-2的下调有关。     

刺梨汁促人急性单核细胞白血病U937细胞凋亡作用的研究

目的：探讨刺梨汁（RRTJ）促U937细胞凋亡作用和可能的机制。方法：不同浓度RRTJ在体外作用于人急性单核细胞白血病U937细胞株。应用光学显微镜观察细胞形态变化；细胞计数测定细胞生长情况；流式细胞仪分析细胞生长周期的变化；逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）观察凋亡相关基因bcl-2、bax表达的变化；硝酸还原酶法测定细胞一氧化氮（NO）分泌量；并通过测定细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）活性分析RRTJ对细胞的毒性作用。结果：刺梨汁显著抑制U937细胞生长，并表现出剂量依赖性。随RRTJ浓度增加，U937细胞凋亡率增高，baxmRNA表达量上升，而bcl-2mRNA表达水平明显下降。U937细胞NO释放量也随RRTJ浓度增加而增加。结论：RRTJ可能是通过影响细胞生长周期、降低bcl-2／bax比值，同时诱导NO分泌，促进U937细胞凋亡。     

抗PNAS-2单链抗体对白血病U937细胞凋亡的影响

目的观察抗PNAS-2单链抗体与PNAS-2抗原特异性结合的能力,并在此基础上探究其对急性单核细胞白血病U937细胞凋亡的影响。方法运用反转录病毒转染法将抗PNAS-2单链抗体表达载体pMIG-PNAS-2ScFv转入U937细胞(pMIG-PNAS-2ScFv组),同时设转染pMIG空载体(NC组)及未转染载体的U937细胞(U937组)为对照。流式细胞仪检测转染效率;激光共聚焦显微镜观察单链抗体表达情况及与靶抗原特异性结合的能力;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡;Western blotting观察PNAS-2表达及促凋亡因子caspase-3激活情况。结果成功将抗PNAS-2单链抗体编码序列转入U937细胞,所表达的单链抗体能与PNAS-2抗原特异性结合。与NC组和U937组相比,pMIG-PNAS-2ScFv组细胞凋亡率明显上升(P<0.05),活化型caspase-3表达增加,但PNAS-2含量并无变化。结论抗PNAS-2单链抗体能有效结合U937细胞内的PNAS-2抗原并有促进U937细胞凋亡的作用,其促凋亡机制可能与PNAS-2功能位点被封闭后功能失活而无法发挥抑凋亡作用有关。     

磷酸化JNK介导大肠杆菌诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡

目的研究大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡的机制以及特异性c-jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125的保护作用。方法分别用台盼蓝染色和P1标记流式细胞仪检测E.coli感染不同时间后U937细胞的死亡率及凋亡率；Western blot方法分析JNK信号转导通路的激活情况。结果E.coli可诱导U937细胞凋亡，并且具有时间依赖性，此凋亡过程可被JNK的阻断剂SP600125阻断；在此过程中，JNK在E.coli感染10min和20min时被激活并磷酸化。结论E.coli诱导的U937细胞凋亡依赖JNK信号转导通路；SP600125通过特异性地抑制JNK活性降低E.coli诱导的U937细胞凋亡率。     

半胱氨酸蛋白酶-3/-9在大肠埃希菌诱导的人巨噬细胞系U937细胞凋亡中的作用

目的探讨大肠埃希菌(E.coli)感染时人巨噬细胞系U937细胞凋亡与半胱氨酸蛋白酶-3/-9(caspase-3/-9)的关系。方法以流式细胞仪检测为指标,研究E.coli感染对U937细胞凋亡的诱导作用。ELISA方法检测caspase-3/-9蛋白酶活性。结果当U937细胞∶E.coli为1∶20时,E.coli感染U937细胞0,10,20,30,60,90min时细胞凋亡百分率分别为(3.02±0.78)%,(6.67±1.34)%,(10.56±1.02)%,(33.92±2.66)%,(46.98±3.12)%和(69.02±4.69)%,呈时间依赖性。感染30,60,90min时,细胞凋亡率与对照组相比明显增高(P<0.01)。caspase-3/-9蛋白酶活性随着培养时间延长也逐渐增高,与细胞凋亡程度基本一致。caspase-3/-9蛋白酶的抑制剂Z-DEVD-FMK和Z-LEHD-FMK能够抑制E.coli诱导的U937细胞凋亡。结论人巨噬细胞系U937细胞在E.coli感染过程中存在凋亡,caspase-3/-9参与了该凋亡过程并发挥了重要的作用。     

INVOLVEMENT OF p38 MITOGEN-ACTIVATED PROTEIN KINASE IN E.Coli-INDUCED U937 APOPTOSIS

APOPTOSIS is a highly regulated and orderedprocess that plays a central role in elim inatingunnecessary cells in normal development andhomeostasis·1Increasing numbers of pathogens, includingE·coli, have been found to modulate host cell apoptosisand ther…     

大肠埃希菌感染对U937细胞凋亡的影响及机制探讨

目的探讨大肠埃希菌(E.coli)感染对人巨噬细胞系U937细胞的促凋亡作用及其机制。方法调整U937细胞与E.coli浓度比为120时,放入培养基中培养0、10、20、30、60和90 min,获得感染的U937细胞。采用流式细胞仪检测不同感染时间U937细胞的细胞凋亡率,Western blot法检测U937细胞胞浆内第2线粒体激活剂(Smac)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)的表达水平。在E.coli感染前60 min用浓度0、10、20和40μmol.L-1的Em-belin预处理U937细胞,然后在E.coli诱导U937细胞凋亡30 min后收集细胞,用Annexin V FITC/PI双染后用流式细胞仪分析U937细胞的凋亡情况。结果当U937细胞E.coli浓度比为120时,感染0、10、20、30、60和90 min时U937细胞凋亡率分别为(3.02±0.78)%、(6.67±1.34)%、(10.56±1.02)%、(33.92±2.66)%、(46.98±3.12)%和(69.02±4.69)%,呈时间依赖性。U937细胞感染E.coli后发生凋亡,并且凋亡率随着E.coli感染时间的延长而升高。Smac的表达随着E.coli感染时间的延长逐渐升高,XIAP的表达则随着感染时间的延长而逐渐降低,而且不同感染时间组比较差别有统计学意义(P<0.05)。加入XIAP的抑制剂Embelin后,U937细胞的凋亡率随着Embelin的浓度增加而逐渐升高(P<0.05)。结论人巨噬细胞系U937细胞感染E.coli后发生凋亡,其凋亡的发生与影响Smac和XIAP的表达有关。Embelin通过特异性地抑制XIAP表达,增加E.coli诱导的U937细胞凋亡率。     

不同血液透析液对U937细胞凋亡和PKCδ表达的影响

目的 研究不同血液透析液对U937细胞蛋白激酶C-δ（PKCδ）表达及细胞凋亡的影响。方法 在对数生长期人单核细胞株U937细胞培养液中添加不同血液透析液进行干预,分为A液＋B液组（血液透析液A液＋B液组合）、A液＋B液+PKCδ特异性抑制剂（rottlerin）组、A液＋B粉组（血液透析液A液＋B粉组合）、A液＋B粉+ rottlerin组,同时设立空白对照和正常对照组。分组干预后24 h和48 h分别收集细胞,Hoechst33258染色后荧光显微镜观察细胞形态学改变;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR和Western blotting 检测PKCδ mRNA和蛋白表达。结果 A液+B粉组凋亡细胞明显增多,呈凋亡典型形态学改变,分组干预24 h和48 h的细胞凋亡率分别为（34.99±3.54）%和（46.35±4.22）%,明显高于相应时间点空白对照组的（7.40±1.33）%和（7.62±0.95）%、正常对照组的（5.37±0.29）%和（6.46±1.02）%和A液＋B粉+rottlerin组的（23.58±4.12）%和（33.70±4.50）%（P<0.05）;同时与两对照组和A液＋B粉+rottlerin组比较,A液＋B粉组U937细胞PKCδ mRNA和蛋白表达均明显上调（P<0.05）。A液＋B液组细胞凋亡率及PKCδ mRNA和蛋白表达与两对照组和A液＋B液+rottlerin组比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 血液透析液A液＋B粉组合对U937细胞有明显促凋亡作用,其机制可能与上调细胞PKCδ表达有关;与A液＋B粉组合比较,选择A液＋B液组合作为血液透析液可降低患者外周血单核细胞的细胞凋亡率。     

金黄色葡萄球菌对U937细胞HSP90蛋白表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡以及热休克蛋白90（HSP90）在这一过程中的作用。方法当U937：金葡菌分别为0,1∶5,1∶10,1∶20,1∶50和1∶100时,培养30min;当U937：金葡菌为1∶20时,分别培养0,15,30,60和90min。采用Annexin V FITC/PI双染流式细胞仪检测U937细胞凋亡率;采用Western blot方法检测HSP90蛋白的表达。结果U937细胞凋亡率随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐增高;HSP90的表达随着金葡菌浓度的增加及感染时间的延长而逐渐升高。结论金葡菌诱导的U937的凋亡可能与HSP90蛋白表达的改变有关,并且具有感染时间及细菌浓度依赖性。     

金葡菌对人巨噬细胞系U937细胞Fas/FasL表达的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）诱导人巨噬细胞系U937细胞凋亡时Fas/FasL蛋白的表达及意义。方法当细胞∶细菌为1∶20时分别培养0,15,30,60和90min,采用Western blotting检测Fas/FasL蛋白的表达情况,应用SPSS10.0软件包对结果进行统计学分析。结果Fas/FasL蛋白的表达随着金葡菌感染时间的延长而增高。结论金葡菌能够上调Fas/FasL蛋白的表达,从而可以诱导U937细胞的凋亡。