转录因子BATF3通过调控波形蛋白促进肾透明细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的：探讨碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3（BATF3）在肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的表达及其调控ccRCC细胞恶性生物学行为的分子机制。方法：收集2019 年3月至2022 年1月间在中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院手术切除的64例ccRCC组织和相应癌旁组织,qPCR 法检测ccRCC组织、癌旁组织和肾癌ACHN、786-O细胞中BATF3 mRNA的表达,免疫组化检测ccRCC 组织、癌旁组织中BATF3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建BATF3敲减及过表达质粒,分别转染786-O、ACHN 细胞,通过MTS 法、Transwell 实验检测BATF3 对786-O 或ACHN 细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,qPCR 法检测敲减或过表达BATF3 对786-O 或ACHN 细胞EMT 相关基因表达的影响,CHIP、双荧光素酶报告基因实验检测BATF3是否与波形蛋白（VIM）启动子区结合并调控其转录,MTS法、Transwell 实验检测同时过表达BATF3及敲减VIM对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果：与癌旁组织比较,ccRCC 组织中BATF3的mRNA和蛋白均呈高表达(均P<0.01),并且BATF3 mRNA 与ccRCC 的分化程度和TNM分期密切关联（均P<0.01）;与正常肾上皮细胞293T相比,BATF3 在ACHN 及786-O细胞中均呈高表达（均P<0.01）。敲减BATF3 表达均能明显抑制786-O 细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.01),过表达BATF3则均能促进ACHN细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,敲减或过表达BATF3能抑制786-O 细胞或促进ACHN细胞的EMT相关基因的表达（均P<0.01）。BATF3可与VIM启动子区的位点结合,直接调控VIM的转录表达。同时过表达BATF3及敲减VIM可逆转过表达BATF3对786-O 细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结论：BATF3在ccRCC 组织中呈高表达,并与其分化程度和TNM 分期密切关联;BATF3 通过调控VIM 的表达影响ACHN、786-O 细胞的恶性生物学行为,其可作为临床治疗ccRCC的潜在靶点。     

lncRNA NONHSAT113026在肾透明细胞癌中的表达及功能

目的:本研究旨在探讨lncRNA NONHSAT113026（lncRNA 026）在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）组织中的表达及对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）分别在83例肾透明细胞癌和对应癌旁组织、肾癌细胞株786-O及ACHN中检测lncRNA 026的表达水平,并分析其表达水平与患者临床病理参数的相关性。通过慢病毒载体技术构建稳定过表达lncRNA 026的肾癌细胞786-O及ACHN,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖活性,Transwell小室检测细胞转移能力,蛋白印迹法（Western blot）分析PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:与癌旁组织相比,lncRNA 026在ccRCC组织中的表达水平显著下调（P＜0.000 1）;在肾癌细胞786-O和ACHN中过表达lncRNA 026能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭（P＜0.01）;Western blot结果显示,过表达lncRNA 026可下调PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt、GSK-3β的表达（P＜0.01）。结论:lncRNA 026在肾透明细胞癌组织中低表达,并且过表达lncRNA 026能显著降低肾癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。提示lncRNA 026在肾癌中发挥了重要作用,有望成为治疗肾癌的潜在药物作用靶点。     

HOTTIP通过竞争性结合miR-506调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移

目的:探究HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移的作用机制。方法:通过生信分析TCGA数据库中肾透明细胞癌的差异表达miRNA、mRNA、lncRNA。利用miRcode数据库数据对lncRNA-miRNA的结合进行预测,并对miRNA调控的靶基因进行预测。qRT-PCR检测肾透明细胞癌细胞系中HOTTIP、miR-506、Vimentin的表达,RNA pull-down实验检测miR-506和HOTTIP结合,RIP实验检测miR-506与HOTTIP和Vimentin的结合,Transwell和划痕愈合实验检测786-O细胞迁移能力。结果:HOTTIP在肾透明细胞癌中显著上调,并且与患者预后显著相关,其靶miRNA miR-506在肾透明细胞癌中显著下调。miR-506的下游调控基因Vimentin在肾透明细胞癌中显著上调并且与患者预后显著相关。HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达。干扰HOTTIP后,肾透明细胞癌细胞的迁移能力显著降低,而干扰HOTTIP的同时沉默miR-506或过表达...     

LncRNA GATA2-AS1在肾癌组织中的表达及其对肾癌细胞ACHN恶性生物学行为的影响

目的:检测长链非编码RNAs(lncRNAs)GATA2-AS1在肾细胞癌(RCC)组织及肾癌细胞株中的表达,并探讨其表达与患者临床病理资料之间的相关性。研究过表达GATA2-AS1对肾癌ACHN生物学行为及上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:应用实时荧光定量多聚核苷酸酶链式反应(RT-qPCR)检测GATA2-AS1在71例肾细胞癌组织和与其相对应癌旁正常组织以及肾癌细胞株(786-O、ACHN)中的表达。通过建立过表达载体pcDNA3.1-GATA2-AS1并转染ACHN细胞,应用RT-qPCR法检测转染效率。应用细胞增殖实验(MTS)、克隆形成实验检测GATA2-AS1过表达对ACHN细胞体外增殖能力的影响。应用划痕实验、Transwell小室侵袭实验分别检测GATA2-AS1过表达对ACHN细胞体外迁移能力及侵袭能力的影响。应用RT-qPCR法检测GATA2-AS1过表达对EMT进程中相关标志物(E-cadherin、N-cadherin及Vimentin)表达水平的影响。结果:GATA2-AS1在两株肾癌细胞系中相对表达量均明显下调(P<0.01),其中ACHN细胞...     

siRNA干扰FLOT2基因表达对肾细胞癌细胞增殖的影响

目的:探讨FLOT2在肾细胞癌细胞株中的表达,并观察小干扰RNA沉默FLOT2基因对肾细胞癌786-O细胞增殖能力的影响。方法:将化学合成的FLOT2的小干扰siRNA用脂质体 Lipofectamine2000转染至肾细胞癌786-O细胞;分别用RT-PCR、Western blot方法检测细胞转染前后FLOT2以及细胞增殖相关因子CCND1的表达。CCK-8与克隆形成实验检测其增殖情况。结果:转染FLOT2-siRNA的肾细胞癌786-O细胞,RT-PCR、Western blot检测显示FLOT2在基因及蛋白水平明显下调（P<0.05）;与对照组比较786-O细胞增殖能力明显下降（P<0.05）,细胞增殖相关因子CCND1明显下调（P<0.05）。结论:FLOT2在肾细胞癌细胞系中高表达,采用特异性FLOT2-siRNA 能够显著降低FLOT2和CCND1表达。干扰FLOT2表达能显著抑制786-O细胞的增殖,FLOT2基因可能参与了肾细胞癌的生物学行为。     

SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:生信分析SNHG17、E2F1和CENPE在肾透明细胞癌肿瘤组织中的表达,生信分析三者的调控关系。qRT-PCR检测SNHG17、E2F1和CENPE的mRNA水平。Western blot检测E2F1和CENPE的蛋白表达。CCK-8、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。RIP实验验证SNHG17与E2F1的结合关系;ChIP实验检测E2F1与CENPE的结合关系。构建异种瘤模型验证SNHG17对肾透明细胞癌生长的影响。结果:SNHG17和CENPE在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达水平均显著上调。沉默SNHG17转染肾透明细胞后,癌细胞的增殖、迁移和侵袭受到明显抑制。体内实验也验证了沉默SNHG17抑制肾透明细胞癌的生长。此外,RIP实验显示SNHG17能够与转录因子E2F1结合。ChIP实验检测转录因子E2F1与CENPE启动子区的结合,结果表明E2F1能够显著富集在CENPE的启动子区。体外功能实验表明SNHG17通过招募E2F1激活CENPE表达从...     

HAI-1对肾细胞癌细胞自噬及凋亡调控的初步研究

摘 要：［目的］ 研究肝细胞生长因子激活因子1型抑制因子（hepatocyte growth factor activator inhibitor type 1,HAI-1）对肾细胞癌细胞自噬和凋亡的影响,探讨其发挥作用的可能机制。［方法］ QRT-PCR检测HAI-1在肾细胞癌组织和细胞系中的表达水平,选择低表达的肾细胞癌细胞系进行HAI-1过表达质粒的转染,分为对照组（NC组）和过表达质粒组（OE-HAI-1组）。QRT-PCR检测NC组和OE-HAI-1组细胞中HAI-1的表达水平;MTS实验检测NC组和OE-HAI-1组细胞的增殖率;Western blot法检测HAI-1对肾细胞癌细胞中自噬相关蛋白表达水平的影响;流式细胞仪检测NC组和OE-HAI-1组细胞凋亡率;Western blot法检测NC组和OE-HAI-1组细胞中caspase3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。［结果］ QRT-PCR结果显示HAI-1在肾细胞癌组织中的表达低于其在癌旁组织中的表达,HAI-1在肾细胞癌细胞系ACHN、786-O和A-498中的表达低于其在肾小管上皮细胞HK-2中的表达（P＜0.05）。选择HAI-1表达最低的肾细胞癌细胞系786-O转染HAI-1过表达质粒,qRT-PCR结果显示OE-HAI-1组细胞中HAI-1的表达增加（P＜0.05）;与NC组相比,OE-HAI-1组786-O细胞增殖能力下降。与NC组比较,OE-HAI-1组和加入自噬激活剂Rapamycin的OE-HAI-1+Rapamycin组细胞中Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达降低,LC3-Ⅰ蛋白表达增加。与OE-HAI-1组相比,OE-HAI-1+Rapamycin组Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达增加,LC3-Ⅰ蛋白表达降低。与NC组相比,OE-HAI组细胞凋亡增加,细胞中caspase3和Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白的表达降低。［结论］ HAI-1在肾细胞癌组织和细胞系中表达降低,并促进肾细胞癌细胞自噬和凋亡的发生。HAI-1可能是治疗肾细胞癌的候选分子靶标。     

HIF-1α通过调控脂代谢关键基因促进肾癌细胞的侵袭

目的:脂肪代谢在肾癌的发生、发展过程中至关重要.缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)被认为是肾癌发生发展过程中关键的基因之一,其参与调控肾癌的侵袭转移过程.本研究探讨肾癌细胞侵袭过程中HIF-1α与脂肪代谢相关基因的关系.方法:采用免疫组织化学法检测人肾癌组织内HIF-1α、SCD1及FASN的表达,分析各基因之间的相关性.采用HIF-1 α过表达质粒或敲除shRNA沉默正常肾脏细胞HK-2及肾癌细胞ACHN内HIF-1α后,运用real-time PCR及Western blot技术检测脂肪代谢相关基因SCD1及FASN的表达改变情况.采用Transwell实验检测细胞体外侵袭能力,并运用SCD1及FASN的siRNA行基因沉默后,检测此两种基因对细胞侵袭能力的影响.结果:免疫组织化学结果显示SCD1及FASN在肾癌组织中的表达与HIF-1α呈显著正相关.HIF-1α过表达质粒能明显上调SCD1和FASN mRNA及蛋白的表达水平,反之,HIF-1α shRNA则明显抑制两种基因的表达.HIF-1α促进肾癌细胞ACHN的体外侵袭能力,而同时转染SCD1及FASN siRNA沉默基因表达后,细胞的侵袭能力减弱.结论:调控肾癌脂肪代谢的基因SCD1及FASN在HIF-1α所调控的肾癌细胞的侵袭过程中发挥重要作用.     

IGF-1R表达下调抑制肾癌786-0细胞的增殖、迁移、侵袭和细胞周期G1/S期转变

目的:观察小干扰RNA (siRNA)介导的胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因沉默对肾癌细胞786-0增殖、迁移、侵袭和细胞周期的影响.方法:采用实时定量PCR(real-time PCR)和蛋白印迹法(West-ern blot)测定转染后肾癌细胞IGF-lR及下游相关产物的表达;采用Cell counting kit-8(CCK-8)检测细胞增殖能力;Transwell实验及划痕实验检测细胞迁移及侵袭能力;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变.结果:IGF-1R基因的siRNA可有效抑制IGF-1R mRNA及蛋白的表达(P＜0.01);细胞增殖实验结果显示IGF-1R-siRNA转染组增殖能力显著减弱(P＜0.01);Transwell实验及划痕实验结果显示IGF-1R-siRNA转染组侵袭及迁移能力明显降低(P＜0.01);流式细胞术检测到转染后细胞G1期细胞数明显升高,发生G1/S期阻滞(P＜0.05);IGF-1R下游蛋白p-IRS1、p-IRS2、p-SHC水平显著降低.结论:IGF-1R表达下调可以抑制肾癌786-0细胞的生长、增殖、迁移和侵袭的能力,并可以使肾癌786-0细胞G1/S期细胞周期停滞.     

沉默EMMPRIN对肾透明细胞癌增殖的影响

目的:探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）在肾透明细胞癌增殖中的作用。方法:利用免疫组化、实时定量PCR(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)等方法检测肾癌组织与肾透明细胞癌细胞株中EMMPRIN的表达情况。通过小分子干扰核糖核酸（siRNA）EMMPRIN在786-O细胞中的表达,研究EMMPRIN下调后对786-O肾癌细胞株生物学功能的影响。结果:EMMPRIN在肾癌组织中高表达,肾癌细胞系中EMMPRIN的表达高于正常的肾小管上皮细胞。通过小干扰RNA来敲除EMMPRIN的表达,并影响肾透明细胞癌的增殖。结论:EMMPRIN在肾肿瘤组织和肾癌细胞株中皆呈现出过表达的状态。下调其表达可以降低肾细胞癌的增殖水平,表明EMMPRIN的高表达可能是肾细胞癌患者预后较差的指标,可被视为肾癌治疗的潜在靶点。     

小分子RNA干扰Notch1基因对肾癌Caki-1细胞增殖的影响

目的：探讨Notch1在肾透明细胞癌株中的表达,采用短片段RNA（small interferhtg RNA,siRNA）干扰技术沉默肾透明细胞癌中Notch1的表达,并观察其对Caki-1增殖的影响。方法：体外培养人正常肾小管上皮细胞HK-2及人肾癌细胞786—0和Caki-1。实时荧光定量PCR（RT—PCR）检测Notch1 mRNA的表达,蛋白印迹法检测Notch1蛋白的含量。特异性Notch1 siRNA干扰肾癌Caki-1细胞,用Lipofectamine2000转染48h后,实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分别检测其中Notch1 mRNA、蛋白的表达变化,CCK-8与克隆形成实验检测其增殖情况。结果：Notch1在肾癌细胞株中的表达要明显高于正常肾小管上皮细胞,差异具有统计学意义（P〈0.05）。siRNA—Notch1干扰以后可以明显降低Caki-1细胞中Notch1 mRNA和蛋白的表达,差异具有统计学意义（P〈0.05）,同时检测Caki-1细胞增殖能力也随之下降（P〈0.05）。结论：Notch1在肾癌透明细胞癌中高表达,下调Notch1信号通路可以抑制肾细胞癌Caki—1的增殖,调节肾癌的生长。     

shRNA表达载体介导的细胞周期蛋白E1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用

背景与目的: 肾细胞癌中细胞周期蛋白E1(eyclinE1)的过表达与预后密切相关.为进一步验证其作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性,本研究探讨shRNA表达载体介导的cycl inE1基因沉默对肾癌ACHN细胞生长的抑制作用.方法:针对cyclinE1基因设计并合成特定的RNA干扰模板片段,连接到pGenesil-1-U6载体上构建shRNA真核表达载体;将上述重组载体经脂质体转入ACHN肾癌细胞株.RT-PCR、Western印迹分析cyclinE1基因mRNA及蛋白表达抑制率;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期和凋亡细胞比率;Transwell小室体外侵袭实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力.结果: shRNA重组载体介导肾癌ACHNcyclihE1抑制效果显著(0.09±0.05),显著低于空载体对照组(0.884±0,04)及未转染组(0.904±0.03)(P<0.05).经流式细胞术测得转染重组质粒组细胞生长停滞于G1期且凋亡比率显著升高(11.154±4.00)%(P<0.05).生长曲线结果显示重组载体转染组细胞生长明显缓慢(P<0.05).Transwell及迁移实验结果提示,转染重组质粒组细胞侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05). 结论: 肾癌cycl inE1的表达可被载体介导诱发的RNA干扰所成功抑制,进而导致细胞生长、增殖以及侵袭能力受抑并诱导凋亡;本研究为探讨肾癌的RNAi治疗提供了初步实验依据.     

KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路对肾癌调控机制的研究

目的:检测KAI1/CD82和p-catenin在肾癌组织及细胞中的表达情况,探讨KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路对肾癌的调控机制.方法:通过Western blotting检测我院近2年收集的30例肾癌及癌旁组织中CD82及β-catenin的表达;构建KAI1/CD82低表达质粒,转染肾透明细胞癌细胞系786-0和OSRC,划痕实验检测细胞迁移能力;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blotting检测β-catenin、Axin2、GSK-3β的表达.结果:肾癌组织中CD82表达低于癌旁组织,β-catenin的表达高于癌旁组织.PLTHR-SHKAI1质粒转染786-0和OSRC后,肾癌细胞的迁移、增殖、侵袭能力增强,β-catenin表达增高,Axin2、GSK-3β表达降低.结论:KAI1/CD82和β-catenin在肾癌组织中表达负相关,KAI1抑制肾癌细胞的迁移、增殖、侵袭能力;KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路相关上游蛋白调控肾癌的发生、发展和转移.     

Fascin在肾癌细胞系侵袭转移中的作用

目的:研究肌成束蛋白（Fascin）在肾癌细胞(ACHN,769-P)侵袭转移中的作用。方法:利用siRNA沉默Fascin基因在肾癌细胞中的表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测Fascin基因的沉默效率。划痕实验和Transwell实验测定细胞的迁移侵袭能力变化。结果:RT-PCR及Western blot检测发现实验组Fascin基因的表达量明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。划痕实验和Transwell实验发现实验组细胞的迁移侵袭能力明显低于空白对照组和阴性对照组（P<0.05）。 结论:沉默肾癌细胞中的Fascin表达后,细胞的迁移侵袭能力明显减弱。     

反义survivin基因对786-O细胞的体外作用及其对表阿霉素诱导细胞凋亡作用的观察

的研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）转染对肾透明细胞癌786-O细胞的survivin蛋白表达、细胞凋亡、增殖的影响,及其对表阿霉素诱导细胞凋亡的作用。方法设计并合成特异性靶向survivjn的ASODN及正义寡核苷酸（SODN）,将其转入786-O细胞。设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和600nmol／L ASODN组,处理24h后收获各组细胞。透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数。结果ASODN组的细胞呈典型凋亡的形态学改变,而对照组细胞生长良好;ASODN组细胞survivin表达减弱,凋亡指数明显升高（P〈0．05）;转染ASODN 24h后,表阿霉素诱导786-O细胞凋亡的作用明显增强。结论survivin ASODN能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786-O细胞凋亡,抑制786-O细胞增殖,并增强表阿霉素诱导的细胞凋亡。     

SKA1对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制研究

目的 研究SKA1在肾细胞癌中的表达情况,探讨其表达对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集肾细胞癌数据集,分析SKA1在肾细胞癌组织和正常肾组织中的表达差异及其与临床病理特征的关系和对预后的影响。收集2016年1月—2018年9月在新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的72例肾透明细胞癌患者切除的肿瘤组织及癌旁组织,利用实时荧光定量PCR法检测SKA1的表达水平。体外培养的人肾细胞癌细胞系786-O和ACHN分别用shSKA1干扰慢病毒和对照病毒载体感染。CCK-8法检测细胞增殖活性;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;Annexin V-FITC检测细胞凋亡率。运用IPA@在线生物信息学软件,对基因表达谱芯片检测的差异基因进行信号传导通路及生物学功能分析。Western blot法检测各组细胞TNF-α、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9、p-Akt、p-mTOR蛋白水平变化。结果 在各病理亚型肾细胞癌组织中SKA1的表达水平明显高于正常肾组织(P＜0.01),与肾透明细胞癌和肾乳头状细胞癌患者的T、N、M(TNM)及AJCC分期有关(P＜0.01)。SKA1高表达患者总生存期明显短于低表达患者(P＜0.001)。组织样本研究结果证实,SKA1在肾透明细胞癌组织中表达水平高于癌旁组织,与TCGA数据库分析结果一致。与对照组相比,感染shSKA1慢病毒的肾细胞癌细胞增殖能力明显下降,凋亡细胞比例增加(P＜0.01)。IPA@分析发现,生物功能富集排名第一的是细胞生长与增殖,TNF被强烈激活,PI3K/Akt/mTOR通路信号分子被显著抑制。Western blot实验结果证实,SKA1干扰组中TNF-α、Caspase 3和Caspase 9表达水平显著上升,而与细胞增殖相关的通路信号分子Akt和mTOR的磷酸化表达水平显著下调,与富集分析结果相一致。结论 SKA1是肾细胞癌预后不良因素。降低肾细胞癌中SKA1表达能减弱肾细胞癌细胞增殖,同时促进凋亡,其机制可能与TNF-α激活和PI3K/Akt/mTOR通路分子磷酸化水平抑制有关。     

肾透明细胞癌组织SMO表达与肾癌细胞增殖和凋亡的相关性

目的 Hedgehog信号通路参与了肿瘤的发生发展,本研究探讨该通路关键信号分子Smoothened(SMO)在肾透明细胞癌中的表达及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 选取2012-01-01-2013-06-30青岛大学附属医院泌尿外科,行手术治疗的80例肾透明细胞癌患者的临床及病理资料,采用免疫组织化学方法检测SMO在肾透明细胞癌组织中的表达并分析其与临床病理特征间的关系.采用小干扰RNA下调SMO在人肾癌细胞786-O中的表达,分别应用CCK-8法、流式细胞术及蛋白质印迹法检测下调SMO表达对细胞增殖、凋亡及Gli1和Gli2表达的影响.结果 SMO在73例(91.25％)肾透明细胞癌组织中有表达,其在高级别肾癌中表达(80.49％)较低级别(56.41％)显著升高,x2 =5.39,P=0.02.RT-PCR 检测结果显示,SMO在人肾癌细胞系786-O中表达量为0.704±0.059;蛋白质印迹结果显示,SMO在786-O中表达量为0.651±0.074.在786-O细胞中应用小干扰RNA沉默SMO表达后,实验组细胞相较于对照组其活力百分比在48、72和96 h分别为92.7％、80.9％和79.9％,3个时间点差异有统计学意义(P=0.003),细胞凋亡显著增加,t=-29.2,P＜0.001;与空白对照组和阴性对照组相比,其下游分子Gli1和Gli2蛋白表达明显减少(Gli1:3.2 vs 2.9 vs1;Gli2:2.5 vs 2.1vs 1).结论 SMO可能通过调控细胞增殖和凋亡,以及调节Gli蛋白表达参与了肾癌的发生发展.     

miR-141靶向YAP1抑制肝癌细胞HCC-LM3增殖、迁移和侵袭

目的:探究microRNA-141（miR-141）对肝癌细胞HCC-LM3增殖、迁移、侵袭的影响。方法:通过荧光定量PCR（qPCR）检测肝癌细胞系（HepG2、Huh7、HCC-LM3）与肝上皮细胞THLE-3中miR-141的表达量；免疫印迹试验（Western blot）分析Yes相关蛋白1（YAP1）的表达量。采用噻唑蓝（MTT）实验分析过表达miR-141或沉默YAP1对HCC-LM3细胞增殖的影响，Transwell实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-141的靶基因。功能性实验检测过表达YAP1对miR-141调控的HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭作用的影响。结果:qPCR和Western blot的结果表明，肝癌细胞系（HepG2、Huh7、HCC-LM3）中miR-141的表达量下调，YAP1的表达量上调；过表达miR-141和沉默YAP1可以抑制HCC-LM3细胞增殖、侵袭、迁移；生物信息学预测YAP1可能是miR-141的靶基因，双荧光素酶报告基因证实YAP1是miR-141的靶基因；过表达YAP1逆转miR-141对HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:miR-141直接靶向YAP1抑制肝癌HCC-LM3细胞增殖、迁移、侵袭。     

下调Ets2表达对肾癌786-0细胞迁移及侵袭的影响

目的:探讨E26转录因子2（E-twenty six 2,Ets2）对肾癌细胞786-0迁移、侵袭的影响及其机制。方法:设计并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达;并利用划痕实验及Transwell实验检测其迁移及侵袭能力的变化;通过Western blot检测下调Ets2表达后基质金属蛋白酶2（MMP-2）及MMP-9表达水平变化。结果:siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达。细胞划痕实验结果显示下调Ets2表达后,细胞迁移能力减弱（P＜0.01）;Transwell实验中NC组穿膜细胞数为（43.80±3.99）个,而siRNA1组为（23.30±4.24）个(P＜0.01), siRNA2组为（24.20±3.29）个（P＜0.01）,细胞侵袭能力减弱。Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞中MMP-2及MMP-9的表达的同时上调了基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP1）和TIMP2的表达。结论:Ets2可通过调节MMPs及TIMPs的表达影响肾癌细胞的迁移及侵袭能力。