孕激素受体和线粒体porin蛋白在子宫肌瘤组织中的表达

目的：检测新型孕激素受体M（PR-M）、PR-A、PR-B和线粒体porin蛋白在子宫肌瘤组织及肌瘤旁正常子宫平滑肌组织中的表达,并探讨3种孕激素受体与porin表达的相关性。方法：采用RT-PCR、Western blot法检测PR.M、PR_A、PR.B和porin在20例子宫肌瘤组织和肌瘤旁正常子宫平滑肌组织中的表达。结果：子宫肌瘤组织中PR-M、PR-A、PR-B和porin的表达水平均显著高于正常子宫平滑肌组织（P〈0.001）。子宫肌瘤组织中PR-M与porin表达呈正相关（mRNA：r=0.562,P=0.010;蛋白：r=0.467,P=0.038）,PR-A、PR-B与porin表达无关（P〉0.05）。正常子宫平滑肌组织中PR.M、PR.A、PR-B与porin均无相关性（P〉0.05）。结论：子宫肌瘤的发生和发展可能与核外PR.M的作用有关,孕激素可能通过基因组和非基因组两种途径参与子宫肌瘤的形成和生长。     

5-氮杂脱氧胞苷联合孕激素对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长的影响

目的:研究5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR,ADC)联合孕激素对孕激素受体B亚型(PR-B)缺失的子宫内膜癌细胞株HEC-1-B增殖、凋亡、细胞周期分布的影响及其机制。方法:5-Aza-CdR、醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate,MPA)单独及联合作用于HEC-1-B细胞后,运用MTT比色法及流式细胞仪分别检测各组细胞的生长、凋亡及细胞周期分布情况;采用RT-PCR技术、甲基化特异性PCR(MSP)分别检测HEC-1-B细胞中PR-B mRNA表达及PR-B基因启动子的甲基化状态。结果:(1)5-Aza-CdR对HEC-1-B细胞的生长抑制作用呈剂量和时间依赖性,联合用药组的抑制作用更为明显(P<0.01),且使细胞阻滞在G1期;(2)5-Aza-CdR以剂量依赖的方式上调PR-B mRNA的表达(P<0.01);(3)5-Aza-CdR可以抑制PR-B基因启动子的甲基化状态。结论:(1)5-Aza-CdR联合孕激素能明显抑制HEC-1-B细胞增殖,促进其凋亡,二者联用可加强MPA对细胞周期的阻滞作用;(2)5-Aza-CdR能逆转PR-B基因甲基化而使其恢复表达,从而增强孕激素的作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡和自噬的作用机制

目的:观察MG132对卵巢癌SKOV3细胞株生长的影响,以及自噬、凋亡相关因子的表达,初步探讨MG132抑制卵巢癌细胞生长的作用机制。方法:以0.5,1.5,2.5,3.5μg/mL浓度MG132作用于SKOV3细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫组织化学(IHC)、蛋白质印迹(Western blotting)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测自噬Beclin1因子、凋亡Caspase-3因子的表达。结果:MG132作用SKOV3细胞后细胞生长受到抑制;MG132的作用随细胞浓度和时间逐渐增加,细胞凋亡率逐渐增加;IHC检测发现Beclin1、Caspase-3阳性表达;Western blotting检测发现Beclin1、Caspase-3、Bim、Bax蛋白表达增加,与MG132浓度的增加呈正相关,Bcl-2蛋白表达减少,与MG132浓度的增加呈负相关;MG132组Caspase-3和Beclin1的mRNA表达量均高于对照组(P0.05)。结论:蛋白酶体抑制剂MG132对卵巢癌SKOV3细胞生长有抑制作用,呈浓度和时间依赖性,其抑制作用与凋亡和自噬有关。     

紫花牡荆素体外抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的:探讨紫花牡荆素(casticin)体外抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖和诱导凋亡的效应及其机制。方法:MTT法检测casticin对人卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制;Hoechest33258染色观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术(FCM)检测casticin处理HO-8910细胞的凋亡率;Western blotting分析caspase-3、CyclinB1、p21蛋白表达变化。结果:casticin对人卵巢癌HO-8910细胞增殖有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。经casticin作用48h后HO-8910细胞表现出典型的凋亡形态特征,并剂量依赖性地增加亚二倍峰,降低CyclinB1蛋白表达,增高caspase-3和p21表达。结论:casticin通过降低CyclinB1表达、活化p21和caspase-3抑制HO-8910细胞增殖并诱导凋亡。     

微小RNA-7抑制人卵巢癌细胞株增殖及侵袭能力的研究

目的:探讨微小RNA-7(miR-7)对低转移人卵巢癌细胞株HO-8910、高转移人卵巢癌细胞株HO-8910pm增殖及侵袭转移能力的影响。方法:检测两种细胞株的miR-7表达情况,构建miR-7质粒,通过lipofectmin 2000瞬时转染miR-7低表达的细胞株,通过实时PCR检测转染前后细胞株miR-7以及EGFR mRNA表达情况,Western blot法检测EGFR蛋白表达。细胞划痕实验、transwell实验检测细胞体外迁移及侵袭能力;CCK-8检测增殖能力变化。结果:HO-8910细胞miR-7表达为HO-8910pm的(2.517±0.508)倍;转染后HO-8910pm的miR-7表达提高了(8.015±0.1805)倍,同时抑制EGFRmRNA及蛋白表达,抑制侵袭、迁移、增殖能力(P<0.05);而miR-7表达相对高的HO-8910体外迁移、侵袭及增殖能力均低于HO-8910pm。结论:miR-7可通过调控EGFR的表达抑制HO-8910、HO-8910pm的增殖及侵袭转移能力,miR-7可能为临床治疗卵巢癌提供新靶标。     

孕激素受体基因多态性研究进展

孕激素受体(PR)有3种同型体:PR-A,PR-B和PR-C,由一个PR基因通过选用不同的启动子序列和改变翻译起始位点而形成。PR介导孕激素(P)的多种生理效应,PR基因多态性引起PR-A和PR-B的表达异常,导致一系列激素依赖性疾病的发生,包括各种良性和恶性妇科疾病、重复性流产、不明原因不孕以及体外助孕种植失败等。     

乙二醛酶Ⅰ介导孕激素对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡活性的调控

目的:探讨孕激素是否通过其受体调控乙二醛酶Ⅰ(GloⅠ)的表达,进而调控子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡活性。方法:应用Westen blot检测孕激素对GloⅠ,Caspase3,Cyclin D1表达的影响;经孕激素受体(PR)特异性抑制剂RU-486处理后,用Westen blot检测PR介导的GloⅠ,Caspase3,Cyclin D1分子的表达;应用siRNA干扰技术敲除GloⅠ表达后,检测GloⅠ对caspase3和Cyclin D1表达的影响,并分别应用MTT和TUNEL检测孕激素通过GloⅠ介导对细胞增殖和凋亡的影响。结果:(1)孕激素呈剂量依赖效应地下调GloⅠ、Cyclin D1的表达、上调Caspase3的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);(2)MPA+RU-486组GloⅠ,Cyclin D1的蛋白水平比RU-486组、MPA处理组增加,Caspase3的表达下降,差异有统计学意义(P<0.05);(3)siGloⅠ干扰组GloⅠ蛋白表达水平比阴性对照组明显降低,干扰效率达50%(P<0.05),GloⅠ被干扰后,加入孕激素细胞的增殖活性明显受到抑制,凋亡活性增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:孕激素可通过PR调控GloⅠ介导的子宫内膜癌细胞增殖和凋亡活性。     

GOLPH3通过PI3K/Akt信号通路调控上皮性卵巢癌细胞增殖与凋亡的研究

目的:探讨GOLPH3基因对上皮性卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响及作用机制。方法:siRNA干扰技术沉默SKOV3细胞株中GOLPH3基因表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PI3K/Akt信号通路相关基因Akt、p-Akt 473、p-Akt 308及Bcl-2表达。PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002处理卵巢癌SKOV3细胞后,检测SKOV3细胞的增殖能力及凋亡情况。结果:siRNA干扰SKOV3细胞株中GOLPH3基因,GOLPH3表达下调,细胞增殖减少,凋亡增多;PI3K/Akt信号通路相关基因p-Akt 473、p-Akt 308、抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达水平均下降,Akt蛋白水平表达无显著变化。LY294002处理SKOV3细胞后,细胞增殖率降低,凋亡率升高。结论:GOLPH3基因可能通过激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌细胞增殖,并抑制其凋亡的作用。     

乙二醛酶 I 过表达对孕激素调控子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖和凋亡活性的影响

目的:探讨乙二醛酶I( GLO-I)过表达对孕激素调控子宫内膜癌细胞增殖和凋亡活性的影响. 方法:采用脂质体将GLO-I基因真核表达载体pcDNA GLO-I及空白载体pcDNA转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,G418 筛选获得抗性亚克隆细胞株. RT-PCR和Western blot法检测子宫内膜癌细胞中GLO-I表达,Western blot法检测未转染组、转染pcDNA-GLO-I组及转染pcDNA组的caspase 3、cyclin D1凋亡和增殖分子的表达. 用DM-SO和10μmol/L甲羟孕酮( MPA)分别刺激转染pcDNA-GLO-I组和未转染Ishikawa细胞, Western blot法检测增殖和凋亡分子表达. 结果:转染pcDNA-GLO-I组细胞中GLO-I mR-NA、蛋白水平均显著高于未转染组( P<0 . 01 ). 与未转染组和转染pcDNA组比较,转染pcDNA-GLO-I组细胞的增殖分子cyclinD1表达增加,凋亡分子caspase 3表达相对减少( P<0 . 05 ). 经MPA刺激后,未转染组Ishikawa细胞的增殖分子cyclinD1表达量明显降低,而凋亡分子caspase 3表达量明显升高( P<0 . 05 ) ,而转染pcDNA-GLO-I组细胞增殖分子和凋亡分子表达均无明显变化( P>0 . 05 ). 结论:GLO-I高表达影响子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡,并影响孕激素对肿瘤细胞的增殖和调控.     

乙二醛酶Ⅰ过表达对孕激素调控子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖和凋亡活性的影响

目的:探讨乙二醛酶I(GLO-I)过表达对孕激素调控子宫内膜癌细胞增殖和凋亡活性的影响。方法:采用脂质体将GLO-I基因真核表达载体pc DNA GLO-I及空白载体pc DNA转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株。RT-PCR和Western blot法检测子宫内膜癌细胞中GLO-I表达,Western blot法检测未转染组、转染pc DNA-GLO-I组及转染pc DNA组的caspase 3、cyclin D1凋亡和增殖分子的表达。用DMSO和10μmol/L甲羟孕酮(MPA)分别刺激转染pc DNA-GLO-I组和未转染Ishikawa细胞,Western blot法检测增殖和凋亡分子表达。结果:转染pc DNA-GLO-I组细胞中GLO-I mRNA、蛋白水平均显著高于未转染组(P0.01)。与未转染组和转染pc DNA组比较,转染pc DNA-GLO-I组细胞的增殖分子cyclin D1表达增加,凋亡分子caspase 3表达相对减少(P0.05)。经MPA刺激后,未转染组Ishikawa细胞的增殖分子cyclin D1表达量明显降低,而凋亡分子caspase 3表达量明显升高(P0.05),而转染pc DNA-GLO-I组细胞增殖分子和凋亡分子表达均无明显变化(P0.05)。结论:GLO-I高表达影响子宫内膜癌细胞的增殖和凋亡,并影响孕激素对肿瘤细胞的增殖和调控。     

CircWHSC1调节miR-107/CLOCK轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡和顺铂耐药性的影响

目的:探讨环状RNA(circRNA)WHSC1调节miR-107/生物钟循环输出蛋白(CLOCK)轴对卵巢癌(OC)细胞增殖、凋亡和顺铂(DDP)耐药性的影响。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot法检测人正常卵巢上皮细胞IOSE80、卵巢癌细胞(SKOV3、HO-8910、A2780)及卵巢癌DDP耐药株SKOV3/DDP中CircWHSC1、miR-107表达及CLOCK蛋白表达。将SKOV3细胞分为Ct组、si-NC组、si-CircWHSC1组、mimic NC组、miR-107 mimic组、si-CircWHSC1+inhibitor NC组、si-CircWHSC1+miR-107 inhibitor组；将SKOV3/DDP分为DDP组、DDP+si-NC组、DDP+si-CircWHSC1组、DDP+mimic NC组、DDP+miR-107 mimic组、DDP+si-CircWHSC1+inhibitor NC组、DDP+si-CircWHSC1+miR-107 inhibitor组。qRT-PCR检测SKOV3细胞和SKOV3/DD...     

脂肪细胞因子抵抗素对卵巢癌细胞增殖影响及其机制研究

目的探讨脂肪细胞因子抵抗素(resistin)对卵巢癌细胞系HO-8910细胞增殖的影响及初步表达机制。方法 2011年5-10月于中国医科大学中心实验室分别采用噻唑蓝(MTT)比色法,检测不同浓度的抵抗素对卵巢癌HO-8910细胞增殖能力的影响;利用si RNA敲除脂肪细胞中的抵抗素,转移条件培养基培养卵巢癌细胞HO-8910,通过MTT法检测细胞增殖情况;利用免疫印迹法(western blot)检测抵抗素作用于HO-8910细胞后m TOR及其下游靶蛋白S6总蛋白的磷酸化蛋白量的变化。结果抵抗素可以呈时间、剂量依赖性地促进HO-8910细胞的增殖,30~100μg/L抵抗素作用24h即可以显著促进HO-8910细胞的增殖,48h的作用更为明显(P0.05);脂肪细胞条件培养基可显著促进HO-8910细胞的增殖,如果在脂肪细胞培养过程中给予特异性敲低抵抗素,则作用反之;抵抗素作用卵巢癌HO-8910细胞24h后m TOR及其下游靶蛋白S6的磷酸化水平显著增加。结论抵抗素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞的增殖能力有明显的促进作用,该作用机制可能与m TOR信号通路有关,可为诊治卵巢癌提供新的靶点。     

米非司酮对不同种类人卵巢癌细胞株细胞体外作用的研究

目的:研究米非司酮对不同种类人卵巢上皮癌细胞株细胞体外生长的作用。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度米非司酮作用不同时间对人卵巢上皮癌细胞株3AO、OVCAR3和SKOV3细胞生长的抑制作用,以流式细胞间接荧光技术检测肿瘤细胞ER、PR蛋白表达率。结果:米非司酮以剂量和时间依赖方式抑制3AO和OVCAR3细胞体外增殖活性(均P<0.05),而对SKOV3细胞生长增殖无显著影响(P>0.05)。米非司酮和地塞米松联合应用与相同浓度的米非司酮单独应用比较,3AO和OVCAR3细胞增殖抑制率无统计学意义(P>0.05)。米非司酮浓度为10μmol/L,培养48小时,3AO细胞PR表达率为12.7±1.4%,明显低于对照组44.9±1.4%(P<0.05);OVCAR3细胞PR表达率为23.5±2.1%,明显低于对照组53.4±1.9%(P<0.05);3AO、OVCAR3和SKOV3细胞ER表达率与对照组比较,均无统计学意义(均P>0.05)。结论:米非司酮以剂量和时间依赖方式抑制PR表达阳性人卵巢上皮癌3AO、OVCAR3细胞体外增殖活性,其抑制作用与PR变化相关。     

CTHRC1对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及机制研究

目的:探究胶原三股螺旋重复蛋白1(CTHRC1)对卵巢癌细胞顺铂耐药的作用及其相关机制。方法:Western blot法检测卵巢癌细胞株A2780、SKOV3及顺铂耐药细胞株A2780/DDP、SKOV3/DDP中CTHRC1蛋白表达水平。慢病毒lenti-sh CTHRC1转染SKOV3/DDP细胞,下调CTHRC1表达水平。CCK-8法检测沉默CTHRC1后SKOV3/DDP细胞增殖情况及顺铂半数抑制浓度(IC_(50))的变化。Western blot法检测转染后SKOV3/DDP细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况及Akt、STAT3的磷酸化水平。结果:与A2780和SKOV3细胞相比,顺铂耐药细胞株A2780/DDP和SKOV3/DDP细胞中CTHRC1蛋白表达水平相对较高(P0.05)。靶向下调CTHRC1表达后,SKOV3/DDP-sh CTHRC1细胞的增殖能力无明显变化,但顺铂的IC_(50)显著降低(P0.01),Akt、STAT3磷酸化水平受到抑制,Bcl-2表达水平降低(P0.05)。结论:CTHRC1可能通过Akt、STAT3信号通路,调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,继而影响卵巢癌细胞对顺铂的敏感度。     

顺铂对沉默β-catenin的卵巢癌SKOV3增殖、凋亡的影响

目的:通过沉默Wnt/β-catenin信号转导通路的核心蛋白β-catenin,探讨顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的影响,为卵巢癌的耐药逆转提供新思路。方法:用包含β-catenin基因特异RNA序列的慢病毒转染人卵巢癌SKOV3细胞,沉默β-catenin蛋白表达。分组:SKOV3组、SKOV3-neg组(转染空载体)、SKOV3-RNAi组(转染β-catenin-RNAi慢病毒)。Western blot法检测转染前后SKOV3细胞中β-catenin蛋白的表达。12.5μg/ml顺铂作用48h后,用MTT法检测顺铂对各组SKOV3细胞增殖抑制率的影响;流式细胞术检测各组中SKOV3细胞的凋亡率。结果:(1)Western blot结果显示,SKOV3-RNAi组中β-catenin蛋白表达水平显著低于SKOV3-neg和SKOV3组(P<0.05)。(2)相同浓度顺铂作用下,SKOV3-RNAi组的增殖抑制率显著高于SKOV3组及SKOV3-neg组(P<0.05),而后两组的增殖抑制率无显著差异(P>0.05)。(3)流式细胞术检测结果显示,SKOV3-RNAi、SKOV3-neg和SKOV3组的细胞凋亡率分别为(18.8±4.3)%、(1.8±0.3)%、(1.9±0.3)%,SKOV3-RNAi组凋亡率显著高于其余两组(P=0.008<0.05)。顺铂作用后,SKOV3-RNAi、SKOV3-neg和SKOV3组的细胞凋亡率分别为(67.7±2.5)%、(33.3±2.6)%、(32.3±2.1)%;顺铂作用后,各组凋亡率均显著升高(P均<0.05),且SK-OV3-RNAi组凋亡率显著高于其余两组(P=0.000<0.05)。结论:沉默β-catenin蛋白能有效增强SKOV3对cDDP的敏感性,β-catenin有可能成为逆转卵巢癌化疗耐药的治疗靶点。     

BRD4抑制剂JQ1联合醋酸甲羟孕酮对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨BRD4抑制剂JQ1与醋酸甲羟孕酮(MPA)单独或联合作用对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:JQ1与MPA单独或联合作用于孕激素敏感的子宫内膜癌Ishikawa细胞和孕激素不敏感的子宫内膜癌HEC-1A细胞。MTT法和流式细胞仪检测药物对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用和凋亡作用。Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase 3、PARP、cleaved PARP及mTOR/Akt通路等相关蛋白的表达。利用siRNA沉默BRD4后,MTT法检测BRD4 siRNA与MPA联用对子宫内膜癌细胞的生长抑制作用。结果:在孕激素敏感的Ishikawa细胞中,与对照组比较,JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中JQ1+MPA组的细胞增殖率最低,析因分析提示JQ1与MPA有交互作用(P<0.05);JQ1组、MPA组、JQ1+MPA组的细胞凋亡率显著增加(P均<0.05),凋亡相关蛋白变化明显,其中JQ1+MPA组的细胞凋亡率增加最为显著(P<0.05),凋亡相关蛋白变化最大。利用siRNA沉默BRD4后观察联合MPA的作用显示,与对照组比较,BRD4 siRNA组、MPA组、BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率显著降低(P均<0.05),其中BRD4 siRNA+MPA组的细胞增殖率最低。结论:BRD4抑制剂JQ1联合MPA对孕激素敏感的子宫内膜癌细胞有较好的增殖抑制及凋亡作用,其可能机制与抑制mTOR/AKT通路有关。     

siRNA LSINCT5联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默LSINCT5联合顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响。方法:选取SKOV3细胞株,采用小干扰技术将LSINCT5基因片段转入卵巢癌SKOV3细胞中,同时联合顺铂作用于卵巢癌细胞。按不同处理因素将SKOV3细胞分为5组:对照组、NC-siRNA组、顺铂组、LSINCT5-siRNA+顺铂组和LSINCT5-siRNA组。CCK-8检测转染后SKOV3细胞对顺铂的敏感性。显微镜下观察细胞的生长状况及形态变化。Western blot和RT-PCR法分别检测与凋亡相关的Caspase 3蛋白和基因表达水平。结果:CCK-8显示,3μg/ml顺铂作用于卵巢癌细胞的抑制率较为适中,故作为后续实验的处理浓度。沉默LSINCT5能显著提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。LSINCT5-siRNA+顺铂组中Caspase 3蛋白和mRNA相对表达量均明显高于其他各组(P0.05)。结论:沉默LSINCT5提高了卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。沉默LSINCT5联合顺铂能明显抑制卵巢癌细胞的增殖,促进卵巢癌细胞凋亡。     

Nanog介导FSH诱导卵巢癌转移和侵袭的研究

目的:探讨Nanog在FSH诱导的卵巢癌转移和侵袭中的作用。方法:采用Western blot法检测永生化卵巢上皮细胞Moody,良性卵巢肿瘤细胞Mcv152和卵巢癌细胞Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达。使用FSH以浓度梯度和时间梯度的方式处理SKOV3细胞,Western blot法检测Nanog蛋白表达。使用FSH处理si-Con或si-Nanog转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分组:0.1%DMSO+转染空白干扰RNA组(Con+si-Con)、FSH+转染空白干扰RNA组(FSH+si-Con)、0.1%DMSO+转染Nanog干扰RNA组(Con+siNanog)和FSH+转染Nanog干扰RNA组(FSH+si-Nanog)。使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测4组细胞的转移和侵袭能力,Western blot法分析4组细胞中Nanog蛋白表达。应用免疫组化法检测卵巢癌组织中Nanog蛋白表达情况。结果:卵巢癌细胞系Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达明显高于永生化和良性卵巢上皮细胞系(P0.05)。FSH上调Nanog表达以浓度和时间依赖的方式。对照组(Con+si-Con,Con+si-Nanog)的迁移和侵袭能力明显低于实验组(FSH+si-Con,FSH+si-Nanog)(P0.05)。卵巢癌组织中Nanog表达水平明显高于正常卵巢组织(P0.05),Nanog蛋白表达与卵巢癌转移相关。结论:Nanog是FSH重要的下游靶基因,介导FSH诱导的卵巢癌转移作用。     

卵泡刺激素对上皮性卵巢癌细胞株的增殖及E-钙粘素表达的影响

目的 :研究在上皮性卵巢癌细胞株中卵泡刺激素 (FSH)受体的不同表达并通过不同浓度的FSH作用 ,观察FSH刺激后各卵巢癌细胞株的增殖与上皮钙粘素 (E -cadherin)在各细胞株中的表达情况。方法 :应用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)及免疫细胞化学方法研究体外培养上皮性卵巢癌细胞株HO - 8910、HO - 8910PM及SKOV3中FSH受体表达 ,免疫组化半定量研究各细胞株中E -cadherin表达及其在FSH作用后的表达情况 ,噻唑蓝染色法了解FSH作用后各细胞株的细胞增殖程度。结果 :在卵巢癌细胞株HO - 8910及HO - 8910PM中存在着FSH受体 ,SKOV3细胞株中的FSH受体表达阴性。用不同浓度FSH培养 4 8小时后 ,HO - 8910及HO - 8910PM的细胞增殖指数高于SKOV3。当FSH浓度为 4 0U/L时细胞增殖指数最高 (P <0 .0 5 )。E -cadherin在 3株细胞中的表达随试验中细胞株转移程度的不同而具有差异 ,FSH培养后 ,FSH受体阳性细胞株HO - 8910及HO - 8910PM的E -cadherin表达均减弱。结论 :FSH是FSH受体阳性卵巢癌细胞增长的促进因素并可引起受体阳性肿瘤细胞E -cadherin表达的下调 ,从而增强卵巢癌细胞的转移能力。     

TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其机制的研究

目的:研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机制。方法:水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力的影响,细胞黏附和移动实验检测TWEAK对细胞体外黏附和移动力的影响,细胞侵袭重建基底膜实验检测TWEAK组细胞体外侵袭力的变化。采用Western blot法检测TWEAK对细胞IκB-α、NF-κB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。通过应用NF-κB拮抗剂PDTC,观察阻断NF-κB通路后VEGF蛋白表达的变化。结果:TWEAK组在24、48h和72h时细胞增殖率无明显变化(P>0.05)。TWEAK组细胞黏附力提高23.67%(P<0.01);TWEAK可增强细胞体外的移动和侵袭力,其趋化指数和侵袭指数分别为1.9±0.3和1.7±0.3(P<0.01)。TWEAK能显著下调IκB-α蛋白表达,上调NF-κB(P65)蛋白在核内的表达,并使VEGF蛋白表达量显著增加。用NF-κB拮抗剂PDTC阻断NF-κB通路,能有效抑制VEGF蛋白的表达。结论:TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力无明显影响。TWEAK能促进HO-8910PM细胞移动、黏附和侵袭力。TWEAK促肿瘤侵袭转移的机制之一可能是通过激活NF-κB通路上调VEGF蛋白表达。